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Cloning, sequencing and analyzing of the heavy chain V region genes of human polyreactive antibodies
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作者 ZHANGJINSONG MINGYEH 《Cell Research》 SCIE CAS CSCD 1994年第1期31-46,共16页
The heavy chain variable region genes of 5 human polyreactive mAbs generated in our laboratory have been cloned and sequenced using polymerase chain reaction (PCR) technique. We found that 2 and 3 mAbs utilized genes ... The heavy chain variable region genes of 5 human polyreactive mAbs generated in our laboratory have been cloned and sequenced using polymerase chain reaction (PCR) technique. We found that 2 and 3 mAbs utilized genes of the VHIV and VHIII families, respectively. The former 2 VH segments were in germline configuration. A common VH segment, with the best similarity of 90.1 % to the published VHIII germline genes, was utilized by 2 different rearranged genes encoding the V regions of other 3 mAbs. This strongly suggests that the common VH segment is a unmutated copy of an unidentified germline VHIII gene. All these polyreactive mAbs displayed a large NDN region (VH-D-JH junction). The entire H chain V regions of these polyreactive mAbs are unusually basic. The analysis of the charge properties of these mAbs as well as those of other poly- and mono- reactive mAbs from literatures prompts us to propose that the charged amino acids with a particular distribution along the H chain V region,especially the binding sites (CDRs), may be an important structural feature involved in antibody polyreactivity. 展开更多
关键词 human polyreactive antibody heavy chain variable region gene gene cloning and sequencing polymerase chain reaction (PCR)
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A study of Hodgkin/Reed-Sternberg cells using single cell polymerase chain reaction
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作者 邓飞 廖黎明 +2 位作者 吕广能 李甘地 杨光华 《Chinese Medical Journal》 SCIE CAS CSCD 2000年第1期65-69,共5页
OBJECTIVE: To investigate the characteristics of Hodgkin/Reed-Stemberg (H/R-S) cells found in patients with various types of Hodgkin's disease (HD). METHODS: H/R-S cells were micropicked from frozen sections of ti... OBJECTIVE: To investigate the characteristics of Hodgkin/Reed-Stemberg (H/R-S) cells found in patients with various types of Hodgkin's disease (HD). METHODS: H/R-S cells were micropicked from frozen sections of tissues affected by HD. The DNA from these cells was amplified by polymerase chain reaction (PCR) using immunoglobulin heavy chain gene FR III a/JH primers and light chain gene family-specific primers. RESULTS: A total of 52/135 (35.8%) isolated cells showed the specific products in the reactions. IgH and V kappa 4 rearrangements were repeatedly found in many cells from a lymphocyte predominance type sample; repeated V kappa 4 and individual IgH/V kappa 2,4 rearrangements and individual IgH, V lambda 3/ V kappa 4 rearrangements were found in two different cases of the nodular sclerosis type; repeated IgH/ V lambda 3 and individual V lambda 2,4 rearrangements, repeated V kappa 2,4 rearrangements, repeated V kappa 4 and individual IgH/ V kappa 3 rearrangements, repeated IgH and individual V kappa 3/ V lambda 4 rearrangements were detected in 3 cases of the mixed cellularity type. Repeated and individual IgH rearrangements were found in other 2 cases. CONCLUSION: The H/R-S cells isolated from the lymphocyte predominance subtypes of HD have IgH and V lambda 4 gene rearrangements. This suggests that the lymphocyte predominance type is a proliferation of neoplastic B cells. The cells isolated from the mixed cellularity and nodular sclerosis types derive from B lineage cells at various stages of differentiation because of the presence of their IgH, kappa and/or lambda gene rearrangements. To our knowledge, this is the first time that the lambda gene rearrangement was detected in H/R-S cells. 展开更多
关键词 Gene Rearrangement Genes Immunoglobulin Hodgkin Disease Humans Immunoglobulin heavy chains Immunoglobulin variable region Immunoglobulin kappa-chains Immunoglobulin lambda-chains polymerase chain reaction Reed-Sternberg Cells
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抗端粒酶蛋白hTERT重链可变区基因的克隆和表达 被引量:2
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作者 张徽 张波 韩继生 《生物医学工程学杂志》 EI CAS CSCD 2002年第3期435-439,共5页
利用噬菌体表面展示技术制备端粒酶蛋白 h TERT抗体。从重组的 h TERT免疫的小鼠脾淋巴细胞中提取总 RNA,逆转录成 c DNA;以逆转录合成的 c DNA第一条链为模板 ,用 VHback和 VHfor引物 ,通过 PCR扩增出约 35 0 bp大小的抗 h TERT重链可... 利用噬菌体表面展示技术制备端粒酶蛋白 h TERT抗体。从重组的 h TERT免疫的小鼠脾淋巴细胞中提取总 RNA,逆转录成 c DNA;以逆转录合成的 c DNA第一条链为模板 ,用 VHback和 VHfor引物 ,通过 PCR扩增出约 35 0 bp大小的抗 h TERT重链可变区基因 ,将其克隆到噬菌粒载体 PCANTAB 5 E中 ,转化入 E.coli TG1宿主菌后 ,在 M13K0 7辅助噬菌体帮助下 ,将 VH与 g3蛋白形成的复合物展示于噬菌体表面。我们利用 Dot Blot检测方法筛选出 h TERT具有亲和性的 VH单功能区抗体。结果提示噬菌体展示技术是制备抗体的一种有效的新途径。抗h TERT VH基因克隆成功 ,为进一步构建单链抗体 Sc 展开更多
关键词 端粒酶 重链可变区 噬菌体表面展示技术 基因克隆 基因表达 hTERT抗体
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PCR-DGGE技术在乳酸菌检测中的条件研究 被引量:6
4
作者 马俊孝 孔健 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2008年第4期225-229,共5页
变性梯度凝胶电泳技术广泛应用于微生物生态学的研究,最近也渗透到食品微生物学领域。为了检测发酵乳制品中乳酸菌的组成及动态变化,本实验对PCR-DGGE技术在乳酸菌检测中所需要的条件如变性剂梯度、电泳时间进行研究。结果表明,变性剂... 变性梯度凝胶电泳技术广泛应用于微生物生态学的研究,最近也渗透到食品微生物学领域。为了检测发酵乳制品中乳酸菌的组成及动态变化,本实验对PCR-DGGE技术在乳酸菌检测中所需要的条件如变性剂梯度、电泳时间进行研究。结果表明,变性剂梯度在30%~55%,电泳时间为200min时,能够有效分离乳酸菌的16SrRNA基因的V3区域。在此基础上,就PCR技术对染色体DNA混合模板的扩增效率进行分析,结果发现,常规PCR技术与降落PCR技术对乳酸菌16SrRNA基因V3区域的扩增没有差异,而细菌通用引物对乳酸菌模板DNA的识别和扩增具有优先和偏爱性,预示PCR-DGGE技术用于微生物群体检测时还应选用乳酸菌引物进行佐证。 展开更多
关键词 变性梯度凝胶电泳 聚合酶链式反应 乳酸菌 V3可变区域
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鸡源Bursin-ScFv噬菌体展示文库的构建及初步筛选 被引量:1
5
作者 邬向东 曲悦 +2 位作者 谌南辉 王萍 何后军 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期488-493,共6页
本研究利用抗三肽囊素(Bursin)单克隆抗体免疫SPF来航鸡,获得产生抗独特型抗体的脾细胞,从中提取总RNA,经反转录合成cDNA第一链。以cDNA第一链为模板,根据来航鸡IgG抗体重链(VH)、轻链(VL)可变区基因FR设计引物,进行PCR扩增。在体外扩... 本研究利用抗三肽囊素(Bursin)单克隆抗体免疫SPF来航鸡,获得产生抗独特型抗体的脾细胞,从中提取总RNA,经反转录合成cDNA第一链。以cDNA第一链为模板,根据来航鸡IgG抗体重链(VH)、轻链(VL)可变区基因FR设计引物,进行PCR扩增。在体外扩增出该抗体的可变区VH和VL基因(大小分别约为370和320 bp)。通过重叠延伸反应(SOE),以(Gly4Ser)3为连接肽,将VH和VL基因连接成为VH-Linker-VLScFv,将ScFv DNA与噬菌粒载体pHEN1的连接产物转化于大肠杆菌TG1,经辅助噬菌体M13K07感染后,获得重组的鸡源抗三肽囊素独特型抗体全套单链噬菌体抗体库。并测得该库容量约为5×105,噬菌体中ScFv基因的插入率为80%,用辅助噬菌体援救后,得到滴度为1011PFU/mL的初级噬菌体抗体库。用抗Bursin单克隆抗体(2F9-4/HU2)进行4轮"吸附-洗脱-扩增"的淘筛,出现特异性富集。经ELISA、动物试验表明所筛选的5个阳性克隆可与抗Bursin单克隆抗体(2F9-4/HU2)特异性结合,并能促进抗体的生产。 展开更多
关键词 三肽囊素 抗独特型抗体 可变区 重链 轻链 单链抗体 单克隆抗体 噬菌体抗体库
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三肽囊素抗独特型ScFv噬菌体展示文库的构建 被引量:1
6
作者 邬向东 谌南辉 +3 位作者 李麟 何后军 袁汉英 王萍 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期482-485,共4页
利用在体外构建的三肽囊素抗独特型抗体可变区VH和VL基因,通过重叠延伸反应(SOE),以(Gly4Ser)3为连接肽,将VH和VL基因连接成为VH-Linker-VLScFv,且ScFvDNA与噬菌粒载体pHEN1的连接产物转化于大肠杆菌TG1,经辅助噬菌体M13K07感染后,获得... 利用在体外构建的三肽囊素抗独特型抗体可变区VH和VL基因,通过重叠延伸反应(SOE),以(Gly4Ser)3为连接肽,将VH和VL基因连接成为VH-Linker-VLScFv,且ScFvDNA与噬菌粒载体pHEN1的连接产物转化于大肠杆菌TG1,经辅助噬菌体M13K07感染后,获得重组的鸡源抗三肽囊素抗独特型抗体全套单链噬菌体抗体库,并将该抗体库展示在噬菌体表面,以利用噬菌体展示技术的强大筛选能力筛选出与三肽囊素同功能单链抗体(Bursin-ScFv)。 展开更多
关键词 三肽囊素 抗独特型抗体 可变区重链和轻链基因 单链抗体 噬菌体抗体库
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抗血管内皮生长因子165抗体轻重链可变区基因的克隆与序列分析 被引量:1
7
作者 冉宇靓 杨治华 +1 位作者 王贵齐 董志伟 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第6期423-427,共5页
目的  获得抗血管内皮生长因子 1 6 5 ( VEGF1 65)抗体的轻重链可变区基因。 方法  从分泌具有中和抗血管内皮生长因子 1 6 5活性的单抗杂交瘤细胞株Vm D1 1中提取总 RNA,经 RT- PCR扩增并克隆该单抗的轻、重链可变区基因并进行序列... 目的  获得抗血管内皮生长因子 1 6 5 ( VEGF1 65)抗体的轻重链可变区基因。 方法  从分泌具有中和抗血管内皮生长因子 1 6 5活性的单抗杂交瘤细胞株Vm D1 1中提取总 RNA,经 RT- PCR扩增并克隆该单抗的轻、重链可变区基因并进行序列分析。结果  抗体的轻链可变区基因 32 1 bp,属于小鼠第 亚群 ;重链可变区基因 35 4bp,属于小鼠第 ( B)亚群。结论  所克隆的基因经核苷酸序列分析分别为抗体的轻、重链可变区基因。 展开更多
关键词 VEGF165 抗体 RT-PR 克隆 可变区基因 序列分析
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抗人小细胞肺癌单克隆抗体的重链变区基因的体外扩增、克隆和序列分析 被引量:2
8
作者 刘健 吴文书 +4 位作者 王斌 潘志美 田培坤 黄震宇 洪锦心 《生物化学杂志》 CSCD 1993年第1期70-75,共6页
本文从抗人小细胞肺癌单克隆抗体杂交瘤细胞中抽提总RNA,合成第一链cDNA,直接用PCR技术(polymerase chain reaction)扩增出351bp的重链变区基因(V_H),克隆至pUCV_(NP)-PCR载体上,经筛选得一批插入片段为351bp的阳性克隆,经核苷酸序列分... 本文从抗人小细胞肺癌单克隆抗体杂交瘤细胞中抽提总RNA,合成第一链cDNA,直接用PCR技术(polymerase chain reaction)扩增出351bp的重链变区基因(V_H),克隆至pUCV_(NP)-PCR载体上,经筛选得一批插入片段为351bp的阳性克隆,经核苷酸序列分析研究,证实已获得了该单克隆抗体的重链可变区基因。 展开更多
关键词 聚合酶链反应 重链变区 嵌合抗体
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抗人血管内皮生长因子(VEGF)单克隆抗体轻链可变区基因的克隆和序列分析 被引量:1
9
作者 杨西川 王大章 +3 位作者 郑光勇 程云 李伯安 李静 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1998年第3期195-197,I011,共3页
为构建和表达抗人血管内皮生长因子(VEGF)工程抗体奠定基础,从分泌抗人VEGF抗体的杂交瘤细胞株中提取总RNA,利用反转录-聚合酶链反应方法,克隆抗人VEGF单克隆抗体轻链可变区基因,将其重组入pEGMR-TVec... 为构建和表达抗人血管内皮生长因子(VEGF)工程抗体奠定基础,从分泌抗人VEGF抗体的杂交瘤细胞株中提取总RNA,利用反转录-聚合酶链反应方法,克隆抗人VEGF单克隆抗体轻链可变区基因,将其重组入pEGMR-TVector测序载体测序。结果表明轻链可变区序列全长333bp,编码111个氨基酸,通过国际联机检索及Kabat库扫描证实,该轻链可变区符合小鼠免疫球蛋白轻链可变区基因特征,同源性高达89.3%,归属小鼠轻链可变区基因第Ⅲ亚组。 展开更多
关键词 血管 内皮生长因子 单克隆抗体 轻链可变区
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抗癌胚抗原单区抗体的质粒构建及表达 被引量:1
10
作者 李彪 朱承谟 吴祥甫 《上海第二医科大学学报》 CSCD 1999年第2期99-102,109,共5页
目的对抗癌胚抗原单区抗体进行表达研究。方法采用PCR技术将已获得的抗癌胚抗原(CEA)鼠源单克隆抗体E7B10重、轻链可变区基因(VH、VK)进行改造后分别克隆进大肠杆菌表达质粒pET-24α(+)中,并进行表达。结果显示重、轻链可变区... 目的对抗癌胚抗原单区抗体进行表达研究。方法采用PCR技术将已获得的抗癌胚抗原(CEA)鼠源单克隆抗体E7B10重、轻链可变区基因(VH、VK)进行改造后分别克隆进大肠杆菌表达质粒pET-24α(+)中,并进行表达。结果显示重、轻链可变区在大肠杆菌中获得了高效表达,其表达量达到菌体总蛋白的20%与25%,SDS-PAGE和Westernblot图谱显示表达产物分子量为13KD、12KD,与其基因编码蛋白的理论推算值相符。表达产物在胞内主要以不溶性包含体存在。结论经变性和复性处理后,RIA表明重链可变区基因表达产物具有结合其特异性抗原CEA的能力。 展开更多
关键词 癌胚抗原 PCR 基因表达 肿瘤 诊断 治疗 抗体
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免疫球蛋白变区基因的体外扩增及人-鼠嵌合抗体的表达 被引量:2
11
作者 刘健 潘志美 +2 位作者 郭虹汾 王斌 田培坤 《生物化学杂志》 CSCD 1994年第3期264-269,共6页
应用聚合酶链反应法体外扩增抗人小细胞肺癌单克隆抗体的变区基因,经核苷酸序列分析,轻链变区基因为324bp,编码108个氨基酸;重链变区基因为351bp,编码117个氨基酸。将重链变区基因克隆至pSV_2△HgptHuγ... 应用聚合酶链反应法体外扩增抗人小细胞肺癌单克隆抗体的变区基因,经核苷酸序列分析,轻链变区基因为324bp,编码108个氨基酸;重链变区基因为351bp,编码117个氨基酸。将重链变区基因克隆至pSV_2△HgptHuγ_3质粒,经一系列克隆、筛选,得一插入方向正确的表达人-鼠嵌合重链抗体的载体-pSV_2△Hgpt2F7VHHuγ_3。用电穿孔方法将该质粒导入鼠源骨髓瘤细胞J558L,用霉酚酸进行初步筛选,最终用兔抗人免疫球蛋白IgGFc片段的抗体筛选得七株阳性克隆,免疫印迹法结果表明在与人IgG相同位置上有一阳性条带。 展开更多
关键词 免疫球蛋白 变区基因 人鼠嵌合抗体
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抗人CD3单抗重、轻链可变区基因的体外扩增、克隆和序列分析 被引量:1
12
作者 杨安钢 许辉 +4 位作者 吉昌华 韩骅 杨立宏 金伯泉 苏成芝 《生物化学杂志》 CSCD 1994年第2期213-217,共5页
根据免疫球蛋白重链和轻链可变区基因5’端序列和J区序列,化学合成适合于体外扩增抗体重、轻链可变区基因的二对引物。从体外培养的OKT3杂交瘤细胞中提取总RNA,反转录生成cDNA,以cDNA为模板,分别加入合成的重、轻... 根据免疫球蛋白重链和轻链可变区基因5’端序列和J区序列,化学合成适合于体外扩增抗体重、轻链可变区基因的二对引物。从体外培养的OKT3杂交瘤细胞中提取总RNA,反转录生成cDNA,以cDNA为模板,分别加入合成的重、轻链可变区引物进行PCR,扩增出抗体重、轻链可变区基因片段。将扩增产物分别插入pUC19质粒,筛选出阳性克隆,用链终止法进行DNA序列测定。所测重链可变区基因全长357bp,编码119个氨基酸,轻链可变区基因全长321bp,编码107个氨基酸。 展开更多
关键词 免疫球蛋白 可变区 基因 序列分析
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用聚合酶链反应制备抗端粒酶蛋白重链和轻链可变区基因
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作者 张徽 张波 +1 位作者 韩继生 侯琳 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2001年第2期132-134,138,共4页
目的:为了制备抗端粒酶蛋白hTERT可变区基因。方法:采用Ni-NTA树脂层析法从PBKTRT转染的 E.coli JM109阳性菌中分离纯化端粒酶蛋白hTERT,并免疫小鼠。从免疫的小鼠脾脏中提取淋巴细胞中总RNA,逆转录成cDNA,以逆转录合成的cDNA第一... 目的:为了制备抗端粒酶蛋白hTERT可变区基因。方法:采用Ni-NTA树脂层析法从PBKTRT转染的 E.coli JM109阳性菌中分离纯化端粒酶蛋白hTERT,并免疫小鼠。从免疫的小鼠脾脏中提取淋巴细胞中总RNA,逆转录成cDNA,以逆转录合成的cDNA第一条链为模板,分别用VH和VL引物,通过PCR进行扩增。结果:PCR扩增反应产生350bp大小的抗hTERT重链和轻链可变区基因。VH和VL基因片段的获得为进一步制备抗hTERT单功能区抗体(dABs)和单链抗体ScFv奠定了实验基础。结论:提示该方法具有稳定性好,易于重复,扩增后VH和VL量较高的优点。 展开更多
关键词 端粒酶 重链可变区 轻链可变区 聚合酶链反应
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抗BAFF单克隆抗体轻链和重链可变区基因的克隆及鉴定
14
作者 肖黎明 龚玖瑜 +4 位作者 王畅 陈恒悦 栗向东 金伯泉 陈丽华 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期49-52,共4页
目的:在本实验室成功制备小鼠抗人BAFF单克隆抗体的基础上,通过分子克隆方法获得该抗体可变区基因序列。方法:从1株小鼠抗人BAFF单克隆抗体杂交瘤细胞FMMUB4中提取总RNA,以此为模版反转录成cDNA,用针对小鼠单克隆抗体重链和轻链可变区... 目的:在本实验室成功制备小鼠抗人BAFF单克隆抗体的基础上,通过分子克隆方法获得该抗体可变区基因序列。方法:从1株小鼠抗人BAFF单克隆抗体杂交瘤细胞FMMUB4中提取总RNA,以此为模版反转录成cDNA,用针对小鼠单克隆抗体重链和轻链可变区基因序列的特异性引物分别进行PCR反应,PCR产物连接入载体,经筛选阳性克隆、酶切鉴定后送测序,测序结果进行生物信息学分析。结果:成功克隆了抗BAFF单克隆抗体FMMUB4重链和轻链可变区基因,测序结果证实序列正确。结论:获得了抗BAFF单克隆抗体FMMUB4重链和轻链可变区基因序列,为下一步构建相关基因工程抗体打下良好基础。 展开更多
关键词 BAFF 单克隆抗体 重链可变区基因 基因克隆
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聚合酶链反应法扩增免疫球蛋白变区基因
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作者 刘健 王斌 +2 位作者 潘志美 田培坤 张文祥 《江西科学》 1993年第3期137-141,共5页
用异硫氰酸胍抽提抗人小细胞肺癌单克隆抗体杂交瘤细胞株2F7的总RNA,用逆转录酶合成第一链cDNA,用PCR技术扩增出351 bp的重链变区基因(V_H)和324bp轻链变区基因(V_L),分别克隆至pUCV_(NP)-PCR和pWR13载体上,经筛选和DNA序列分析研究,证... 用异硫氰酸胍抽提抗人小细胞肺癌单克隆抗体杂交瘤细胞株2F7的总RNA,用逆转录酶合成第一链cDNA,用PCR技术扩增出351 bp的重链变区基因(V_H)和324bp轻链变区基因(V_L),分别克隆至pUCV_(NP)-PCR和pWR13载体上,经筛选和DNA序列分析研究,证实已获得了该单克隆抗体的变区基因. 展开更多
关键词 聚合酶链反应 免疫球蛋白 杂交瘤
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细胞内RT-PCR扩增免疫球蛋白重链可变区基因 被引量:1
16
作者 李昌龙 赵满仓 +2 位作者 王抒 蒋雷 李健斋 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1995年第4期380-382,共3页
通常,逆转录PCR(RT-PCR)需要高质量的mRNA,操作过程复杂,效率低且易受到RNase的破坏,为了简化操作,提高效率,用10%甲醛盐溶液固定杂交瘤细胞,以Np-40渗透化处理细胞后做RT-PCR,获得了大约3... 通常,逆转录PCR(RT-PCR)需要高质量的mRNA,操作过程复杂,效率低且易受到RNase的破坏,为了简化操作,提高效率,用10%甲醛盐溶液固定杂交瘤细胞,以Np-40渗透化处理细胞后做RT-PCR,获得了大约350bp的特异性免疫球蛋白重链可变区基因片段,与用同一对引物得到的常规RT-PCR扩增产物一致.这项技术可用于获得特定结构基因片段,连结并扩增嵌合蛋白基因及构建多克隆免疫球蛋白文库等. 展开更多
关键词 细胞 RT-PCR 重链可变区基因 免疫球蛋白
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抗黄曲霉毒素B1单链抗体基因克隆及其结构分析
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作者 马兰 刘爱平 +1 位作者 王佳 王小红 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第11期2064-2070,共7页
【目的】克隆构建黄曲霉毒素B1(AFB1)单链抗体(scFv)基因,并对其编码蛋白序列和结构进行分析预测,为scFv分子修饰改造及在免疫学检测中的应用提供参考依据。【方法】以抗AFB1单克隆抗体杂交瘤细胞株为原料,通过PCR扩增重链可变区(VH)和... 【目的】克隆构建黄曲霉毒素B1(AFB1)单链抗体(scFv)基因,并对其编码蛋白序列和结构进行分析预测,为scFv分子修饰改造及在免疫学检测中的应用提供参考依据。【方法】以抗AFB1单克隆抗体杂交瘤细胞株为原料,通过PCR扩增重链可变区(VH)和轻链可变区(VL),以(Gly4Ser)3为柔性接头(Linker)拼接构建抗AFB1 scFv基因,并采用在线生物信息学分析软件对其氨基酸序列、理化性质及蛋白结构进行分析预测。【结果】抗AFB1 scFv基因全长744 bp,编码248个氨基酸,分子量为26312.05 Da,理论等电点(pI)5.70,其二级结构中含有35个α-螺旋(占14.11%)、28个β-折叠(占11.29%)、85个延伸链(占34.28%)和100个随机卷曲(占40.32%),在三级结构中连接肽卷曲将VH和VL区域牵拉而相互靠近,形成典型的抗体结构——沟槽结构,是scFv的抗原结合区域。【结论】构建的抗AFB1 scFv其VH含有117个氨基酸、VL含有116个氨基酸,具备典型抗体结构——沟槽结构,能与抗原特异性结合。 展开更多
关键词 黄曲霉毒素B1(AFB1) 单链抗体(scFv) 重链可变区(VH) 轻链可变区(VL) 沟槽结构
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抗肠炎沙门氏菌单链抗体制备及其特异性分析 被引量:2
18
作者 王报贵 武晓丽 +5 位作者 董素琴 甘敏 陈星星 陈飞 明星 徐锋 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期62-67,共6页
目的:利用基因工程技术制备抗肠炎沙门氏菌的单链抗体。方法:从抗肠炎沙门氏菌单克隆抗体的杂交瘤细胞中纯化RNA,反转录后扩增出抗体的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)基因片段,采用重叠延伸的方法,用柔性多肽Linker接头(Gly4Ser)3按VL-... 目的:利用基因工程技术制备抗肠炎沙门氏菌的单链抗体。方法:从抗肠炎沙门氏菌单克隆抗体的杂交瘤细胞中纯化RNA,反转录后扩增出抗体的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)基因片段,采用重叠延伸的方法,用柔性多肽Linker接头(Gly4Ser)3按VL-Linker-VH方式将VH基因和VL基因拼接成单链抗体基因片段后,连接到pGEX-4T-1载体上,进行重组转化。挑取阳性克隆,经IPTG诱导后,通过GST柱进行亲和层析,最后利用ELISA检测抗体的活性。结果:成功构建了表达抗肠炎沙门氏菌单链抗体的基因工程菌株,经SDS-PAGE和ELISA检测结果表明,诱导表达的单链抗体scFv分子量约为60 kDa,其能特异与肠炎沙门氏菌结合,但与副甲伤寒沙门氏菌、鸭沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌有轻度交叉反应。结论:成功构建了抗肠炎沙门氏菌单链抗体的表达菌株,表达的单链抗体scFv可作为沙门氏菌的检测的候选抗体分子。 展开更多
关键词 沙门氏菌 单链抗体 重链可变区 轻链可变区
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抗心肌肌凝蛋白重链的单链抗体V_H和V_L基因的合成
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作者 宋娜玲 赵启仁 +6 位作者 张春明 刘家慧 刘洁 褚丽萍 王德芝 贺欣 王月英 《中国辐射卫生》 2012年第1期1-3,共3页
目的为研制心肌显像剂—抗人心肌肌凝蛋白重链(HCMHC)的单链抗体,合成抗HCMHC单链抗体的VH和VL基因。方法用TRIZOL试剂从抗HCMHC McAb杂交瘤细胞提取总RNA,合成第一链cDNA,以这第一链cDNA为模板,用合成的特异引物、DNA聚合酶和四种单核... 目的为研制心肌显像剂—抗人心肌肌凝蛋白重链(HCMHC)的单链抗体,合成抗HCMHC单链抗体的VH和VL基因。方法用TRIZOL试剂从抗HCMHC McAb杂交瘤细胞提取总RNA,合成第一链cDNA,以这第一链cDNA为模板,用合成的特异引物、DNA聚合酶和四种单核苷酸,对重链可变区(VH)基因和轻链可变区(VL)基因进行PCR扩增。对各步骤的产物进行鉴定,并做了对RNA的稳定性与贮存温度的关系,MgCl2浓度和循环温度的最优化的选择。结果合成的第一链cDNA纯度达95%;扩增产物的琼脂糖凝胶电泳带呈单一明亮泳带,VH和VL基因分子量分别为340bp和320bp,与文献相一致。结论成功合成了VH和VL基因,为心肌显像及其显像剂抗HCMHC单链可变区抗体的研究打下了基础。 展开更多
关键词 心肌肌球蛋白重链 可变区抗体 VH基因 VL基因
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抗人脑胶质瘤单克隆抗体SZ-39轻链可变区基因的克隆与序列分析
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作者 沈树泉 周筱梅 +2 位作者 黄强 周丽英 杜子威 《中华神经外科杂志》 CSCD 北大核心 1996年第2期72-74,共3页
从抗人脑胶质瘤单克隆抗体杂交瘤细胞中抽提总RNA,并以Oligo(dT)柱纯化mRNA,经逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)直接扩增出318bp的轻链可变区(VL)cDNA片断,经核苷酸序列分析研究,证实已获得了S... 从抗人脑胶质瘤单克隆抗体杂交瘤细胞中抽提总RNA,并以Oligo(dT)柱纯化mRNA,经逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)直接扩增出318bp的轻链可变区(VL)cDNA片断,经核苷酸序列分析研究,证实已获得了SZ-39单抗轻链可变区基因。这为今后进一步制备基因工程抗体打下基础。 展开更多
关键词 单克隆抗体 可变区基因 胶质瘤 脑肿瘤
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