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甘蓝自交不亲和信号传导中SRK结合蛋白基因THL1的克隆与序列分析 被引量:9
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作者 刘东 朱利泉 王小佳 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期56-58,共3页
采用PCR和RT PCR技术 ,从甘蓝基因组和柱头总RNA中扩增获得了 719bp的硫氧还蛋白(THL1)的全长基因序列和 4 30bp的cDNA序列。序列分析首次表明 ,克隆的THL1基因全序列有两个内含子 ,cDNA序列编码
关键词 信号传导 SRK结合蛋白基因 序列分析 甘蓝 硫氧还蛋白 自交不亲和 基因克隆 S位点受体激酶 thl1基因
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甘蓝SCR、THL与SRK交替相互作用的酵母双杂交检测 被引量:2
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作者 杨永军 张贺翠 +3 位作者 杨昆 薛丽琰 常登龙 朱利泉 《中国蔬菜》 北大核心 2012年第12X期14-26,共13页
eSRK(S位点受体激酶胞外域)、SCR/SP11(S位点富含半胱氨酸蛋白-S位点蛋白11)和THL1(类硫氧还蛋白)是甘蓝自交不亲和性信号传导过程重要的3个元件。利用PCR技术获得两种甘蓝SCR2(class-Ⅱ)、eSRK2(class-Ⅱ)、THL1、SRKJ(class-Ⅰ,SRK6... eSRK(S位点受体激酶胞外域)、SCR/SP11(S位点富含半胱氨酸蛋白-S位点蛋白11)和THL1(类硫氧还蛋白)是甘蓝自交不亲和性信号传导过程重要的3个元件。利用PCR技术获得两种甘蓝SCR2(class-Ⅱ)、eSRK2(class-Ⅱ)、THL1、SRKJ(class-Ⅰ,SRK6激酶域)和eSRK28(class-Ⅰ)的编码序列,并分别构建以pGBKT7为载体的SCR2、THL1的重组诱饵质粒和以pGADT7为载体的eSRK2、eSRK28、SRKJ的重组猎物质粒。利用酵母双杂交系统验证eSRK2-SCR2、eSRK28-SCR2、SRKJ-THL1的相互作用。重组质粒在宿主细胞中未产生毒性及自激活作用,表明重组表达载体构建成功;组合Y2HGold〔pGBKT7-SCR2〕×Y187〔pGADT7-eSRK2〕在三缺平板(SD/-Trp-Leu-His/x-α-gal/AbA,TDO/x/A)上生长出蓝色克隆,激活了报告基因AUR1-C、MEL1、HIS3;组合Y2HGold〔pGBKT7-SCR2〕×Y187〔pGADT7-eSRK28〕能够在二缺平板(SD/-Trp-Leu)上生长,但在三缺平板上不生长,表明不同单倍型SRK-SCR可能不发生相互作用;组合Y187〔pGADT7-SRKJ〕×Y2HGold〔pGBKT7-THL1〕能够在四缺平板上生长,激活了4种报告基因(AUR1-C、MEL1、HIS3、ADE2)。相同的单倍型SRK与SCR之间能够相互作用,不同的单倍型之间不会发生相互作用;酵母中报告基因表达的数目和类型的差异反映了class-Ⅱ型内部的SCR-SRK和class-Ⅰ的SCR-SRK互作强度,Ⅰ型高于Ⅱ型;THL与SRK之间存在较高的互作强度。这为Ⅰ型和Ⅱ型不同的自交不亲和性表型所依赖的3个起始信号传导元件之间的识别程度差异提供了直接证据和新内容。 展开更多
关键词 甘蓝 S位点受体激酶(SRK) S位点富含半胱氨酸蛋白(SCR) 类硫氧还蛋白(thl) 蛋白质互作 酵母双杂交
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调节性及辅助性T细胞在人类IgA肾病中的表达及意义 被引量:12
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作者 肖俊 朱玲燕 +6 位作者 陈崴 聂静 陈文芳 董秀清 彭文兴 黄锋先 余学清 《中华肾脏病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期544-549,共6页
目的探讨CD4^+CD25^high调节性T细胞(Treg)及辅助性T细胞亚群(Th1、Th2)比例失衡在IgA肾病(IgAN)免疫发病机制中的作用。方法用流式细胞仪检测IgAN患者外周血Treg及Th1、Th2的比例。以胞内染色技术检测叉头框蛋白3(FOXP3)的表... 目的探讨CD4^+CD25^high调节性T细胞(Treg)及辅助性T细胞亚群(Th1、Th2)比例失衡在IgA肾病(IgAN)免疫发病机制中的作用。方法用流式细胞仪检测IgAN患者外周血Treg及Th1、Th2的比例。以胞内染色技术检测叉头框蛋白3(FOXP3)的表达。Treg及Th1、Th2的比例与IgAN各项临床病理指标的相关性分析采用Spearman或Pearson相关分析法。结果IgAN患者外周血中Treg比例明显高于健康人[(2.14±0.82)%比(1.59±0.53)%,P〈0.051,与血IgA水平呈正相关(r=0.397,P〈0.05),与eGFR呈负相关(r=-0.376,P〈0.05)。IgAN患者外周血中Th2细胞比例显著高于健康对照组[(2.57±0.72)%比(1.81±1.10)%,P〈0.051,与血IgA水平呈正相关(r=0.468,P〈0.05)。IgAN患者Th1/Th2比值显著低于健康对照组(5.75±1.89比12.73±9.79,P〈0.05),但与临床各指标间没有相关性。结论IgAN患者体内存在T细胞亚群表达紊乱。Treg在外周血中的增多以及以Th2为优势的Th1/Th2失衡可能在IgAN的发病中起重要作用。 展开更多
关键词 肾小球肾炎 IGA T淋巴细胞 CD4^+CD25^HIGH调节性T细胞 TH1细胞 TH2细胞 叉头框蛋白3
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双歧杆菌DNA上调脐带血单个核细胞Th1应答 被引量:1
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作者 赵辉 王晓川 +3 位作者 王静漪 俞晔珩 王传清 杨毅 《中华儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期415-419,共5页
目的了解双歧杆菌基因组DNA(bDNA)的免疫调节作用、双歧杆菌制剂抗过敏可能的机制。方法使用bDNA体外刺激脐带血单个核细胞(CBMC),以空白、DNaseⅠ完全酶解的bDNA(d-bDNA)和人DNA(hDNA)作为对照。在刺激后不同时间点终止培养,测定培养... 目的了解双歧杆菌基因组DNA(bDNA)的免疫调节作用、双歧杆菌制剂抗过敏可能的机制。方法使用bDNA体外刺激脐带血单个核细胞(CBMC),以空白、DNaseⅠ完全酶解的bDNA(d-bDNA)和人DNA(hDNA)作为对照。在刺激后不同时间点终止培养,测定培养上清中细胞因子IL-12、IL-10的水平;计数分泌IFN-γ和IL-4的阳性细胞数量;并检测细胞内信号蛋白T-bet(T-box expressed in T cells)、GATA3 mRNA表达强度的变化。结果刺激12 h bDNA组细胞培养上清IL-12水平明显高于其他对照组(P<0.05),这种IL-12水平升高也发生在刺激后24、48 h。刺激12、24 h后,bDNA组细胞上清中IL-10水平比对照组、d-bDNA组和hDNA有所降低,但无统计学意义(P>0.05)。bDNA组加佛波脂(PMA)刺激后,分泌IFN-γ的阳性细胞数高于对照组(P<0.05)。bDNA组分泌IL-4阳性细胞数少于对照组、d-bDNA组及hDNA组(P<0.05)。bDNA组细胞在6、12、24 h后,细胞中核转录因子T-betmRNA的表达强度比对照组增强(P<0.05)。bDNA刺激不同时间后,细胞中核转录因子GATA3 mRNA的表达强度与其他组相比无明显差异。结论双歧杆菌基因组DNA上调CBMC IL-12、IFN-γ分泌及T-bet表达,下调IL-4分泌,促进CBMC Th1应答。这可能是双歧杆菌产生抗过敏作用的重要机制之一。 展开更多
关键词 二裂菌属 Th1细胞 胞间信号肽类和蛋白质类 DNA结合蛋白质类 反式激活因子类
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