小麦光敏色素基因TaPhyB3的克隆和表达分析 被引量：8

1

作者 李壮 马燕斌 +6 位作者 蔡应繁 吴锁伟 肖阳 孟凡华 付风铃 黄玉碧 杨建平 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期779-787,共9页

从小麦品种中国春中克隆了编码光敏色素基因B的脱辅基蛋白,将其定位于4D染色体的长臂上,并命名为TaPhyB3。TaPhyB3的开放阅读框为3501bp,编码一个128kD、具有1165个氨基酸的蛋白质。它与水稻、玉米和拟南芥在氨基酸水平上的一致性分别为... 从小麦品种中国春中克隆了编码光敏色素基因B的脱辅基蛋白,将其定位于4D染色体的长臂上,并命名为TaPhyB3。TaPhyB3的开放阅读框为3501bp,编码一个128kD、具有1165个氨基酸的蛋白质。它与水稻、玉米和拟南芥在氨基酸水平上的一致性分别为93%、90%和73%。对不同光线处理7d小麦植株表达的分析表明,TaPhyB3在黑暗中表达最低、在白光下的表达水平最高,在远红光、红光、蓝光和白光下的表达水平分别是黑暗中的2.2、7.7、7.4和37.3倍。组织特异性表达分析表明,TaPhyB3在小麦幼苗所有组织中都表达,叶片中的表达水平是根的11.4倍。推测TaPhyB3的表达水平与小麦的光形态建成的程度呈正相关。 展开更多

关键词 小麦 光敏色素b 基因克隆 基因表达

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转录因子基因TaWRKY72b-1的克隆、表达及在烟草中表达对植株磷效率的影响 被引量：14

2

作者 苗鸿鹰 赵金峰 +5 位作者 李小娟 孙昭华 路文静 谷俊涛 郭程瑾 肖凯 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期2029-2036,共8页

在富集低磷胁迫特异表达基因的小麦根系cDNA差减杂交文库中,鉴定了1个与拟南芥WRKY75同源的小麦WRKY型转录因子基因表达序列标签(EST)。依据该EST序列高度同源的小麦WRKY72b序列,克隆了对应基因TaWRKY72b-1。TaWRKY72b-1与WRKY72b在cDN... 在富集低磷胁迫特异表达基因的小麦根系cDNA差减杂交文库中,鉴定了1个与拟南芥WRKY75同源的小麦WRKY型转录因子基因表达序列标签(EST)。依据该EST序列高度同源的小麦WRKY72b序列,克隆了对应基因TaWRKY72b-1。TaWRKY72b-1与WRKY72b在cDNA序列上有2个碱基的差异,但编码氨基酸没有改变。TaWRKY72b-1开放阅读框为621bp,编码206个氨基酸残基,氨基酸组成上含有保守的WRKY基序和C2H2基序。系统进化分析表明,TaWRKY72b-1与小麦WRKY72a和大麦WRKY12可能来自相同的祖先。与对照供磷水平(2mmol L-1P)相比,低磷处理使根叶中TaWRKY72b-1的转录本数量均明显增多。表明TaWRKY72b-1对低磷胁迫逆境产生了明显的应答作用。TaWRKY72b-1在烟草中表达表明,低磷胁迫条件下,高表达TaWRKY72b-1的烟草植株干重、单株磷累积量和磷利用效率均较对照明显增加。因此,TaWRKY72b-1基因在改善低磷胁迫下作物的磷效率中可能具有较重要的应用价值。 展开更多

关键词 小麦(triticum aestivum L.) WRKY转录因子 基因克隆 表达 功能 磷胁迫

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普通小麦中Puroindoline b-2基因的分子鉴定及表达分析 被引量：3

3

作者 张福彦 陈锋 +3 位作者 张建伟 董中东 杨保安 崔党群 《植物遗传资源学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期342-347,共6页

Puroindoline b-2基因与小麦子粒硬度及其产量密切相关。本研究采用特异引物PCR扩增,荧光定量PCR(RTPCR)方法以及DNA测序技术,对81份国内外小麦品种(系)的Puroindoline b-2不同变异类型进行了分子鉴定,并对Puroindoline b-B2的不同变异... Puroindoline b-2基因与小麦子粒硬度及其产量密切相关。本研究采用特异引物PCR扩增,荧光定量PCR(RTPCR)方法以及DNA测序技术,对81份国内外小麦品种(系)的Puroindoline b-2不同变异类型进行了分子鉴定,并对Puroindoline b-B2的不同变异类型在子粒、叶片以及根系部位中的表达水平进行了定量分析。结果表明,所有试验材料中的D和A基因组上均含有Pinb-D2v1和Pinb-A2v4类型,而B基因组上的Pinb-B2v3类型在所有材料中所占比例最高,为91.4%;Pinb-B2v2类型比例较低,仅为8.6%。不同变异类型间Pinb-B2基因表达量分析表明,小麦子粒中Pinb-B2v3b的表达量显著高于PinbB2v2变异类型。进一步研究表明,Pinb-B2v3b类型的相对表达量显著高于Pinb-B2v3a和Pinb-B2v3c两种类型,而此2种变异之间无明显差异(Pinb-B2v3c略高于Pinb-B2v3a变异)。不同组织间Pinb-B2基因表达量分析表明,小麦叶片中Pinb-B2的表达量显著高于根系中的表达量。本研究为进一步理解Pinb-2基因分子遗传基础提供了一定的理论依据。 展开更多

关键词 普通小麦 PUROINDOLINE b-2基因 荧光定量PCR 基因表达

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小麦Ta-UBX1基因克隆、表达及生物信息学分析

4

作者 王俊生 殷贵鸿 +3 位作者 刘红占 范小芳 韩玉林 陈龙 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期1858-1866,共9页

为深入研究小麦U-BOX基因的功能,以周麦22和周麦24为材料,利用RT-PCR技术克隆小麦的Ta-UBX1基因,对其序列结构、基因表达和进化特性进行分析。结果表明,小麦Ta-UBX1基因全长2 059 bp,编码553个氨基酸,在其序列的N端和C端分别具有UBA_lik... 为深入研究小麦U-BOX基因的功能,以周麦22和周麦24为材料,利用RT-PCR技术克隆小麦的Ta-UBX1基因,对其序列结构、基因表达和进化特性进行分析。结果表明,小麦Ta-UBX1基因全长2 059 bp,编码553个氨基酸,在其序列的N端和C端分别具有UBA_like保守域和UBX结构域,属于泛素途径中的典型U-BOX蛋白,并且与其他禾本科植物同源的U-BOX蛋白具有高度的序列相似性;该基因在小麦叶片、小花、幼穗、根、种子中均有表达,但以小花和幼穗中的表达量较高,叶片中表达量较低;在花药发育的四分体期和单核早期表达量最高,单核后期到三核期表达量逐步降低,推测该基因表达可能与小麦花发育,尤其花药发育密切相关。本研究可为探究该基因的功能奠定分子基础。 展开更多

关键词 小麦 U-box蛋白 Ta-UbX1基因 基因克隆 表达分析

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小麦TaNAC-B072基因的克隆和表达分析 被引量：4

5

作者 陈文烨 杨帆 +5 位作者 刘永伟 董福双 赵和 柴建芳 吕孟雨 周硕 《江西农业学报》 CAS 2020年第8期1-7,共7页

为了研究小麦NAC转录因子的功能及其对逆境胁迫的响应,本试验克隆了小麦的TaNAC-B072基因。该基因的开放阅读框长度为978 bp,编码蛋白长度为325个氨基酸,推测其分子量为35.75 kDa,等电点为7.06,属于中性蛋白,具有1个NAC结构域。多序列... 为了研究小麦NAC转录因子的功能及其对逆境胁迫的响应,本试验克隆了小麦的TaNAC-B072基因。该基因的开放阅读框长度为978 bp,编码蛋白长度为325个氨基酸,推测其分子量为35.75 kDa,等电点为7.06,属于中性蛋白,具有1个NAC结构域。多序列比对和系统进化树分析显示,TaNAC-B072与BdNAC72-like的亲缘关系较近。RT-PCR结果显示,在小麦的根和地上部分,TaNAC-B072基因的表达受高盐、渗透和冷胁迫的诱导,初步推测基因TaNAC-B072可能与小麦响应逆境胁迫有密切的关系。 展开更多

关键词 小麦 NAC转录因子 基因克隆 表达分析

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小麦抗逆相关基因TaGB1的克隆及其表达特性分析 被引量：1

6

作者 王小婷 王文静 +2 位作者 李波 杨雯晶 胡卫国 《麦类作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第9期1011-1019,共9页

为了解小麦的TaGB1基因特性、表达情况及其与双子叶植物同源基因的进化关系,以小麦品种济麦22为研究对象,采用同源克隆的方法获得小麦G蛋白β亚基编码区序列,TaGB1编码区全长1 143bp,编码380个氨基酸,预测分子量为41kD,基因组序列中包含... 为了解小麦的TaGB1基因特性、表达情况及其与双子叶植物同源基因的进化关系,以小麦品种济麦22为研究对象,采用同源克隆的方法获得小麦G蛋白β亚基编码区序列,TaGB1编码区全长1 143bp,编码380个氨基酸,预测分子量为41kD,基因组序列中包含6个外显子和5个内含子,分别位于小麦基因组的4A、4B、4D染色体上,不同拷贝的氨基酸同源性高达99.91%。TaGB1基因结构中包含7个WD40保守域,表达产物位于胞质和质膜上。经系统发育进化关系分析,单子叶植物与双子叶植物的G蛋白β亚基分化形成两大分支;TaGB1在进化关系上与单子叶植物较近,而与拟南芥等双子叶植物较远。TaGB1在ABA、盐、热和干旱胁迫条件下上调表达,植物的根、茎、叶等部位均有表达,叶片中表达量较高,说明该基因可能参与调控植物的抗逆反应。 展开更多

关键词 小麦 抗逆 TAGb1基因 同源克隆 表达

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小麦BES1转录因子基因TaBEH3的克隆及表达分析

7

作者 姜玉梅 张京 +2 位作者 李巧云 庄季昕 牛吉山 《麦类作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第9期1059-1065,共7页

BES1(油菜素内酯不敏感1-甲磺酸乙酯-抑制剂1)是一类植物特有的转录因子家族, TaBEH3基因是小麦 BES1基因家族成员之一,为进一步了解该基因的功能,以中国春为材料,克隆了 TaBEH3基因,将其3个同源基因分别命名为 TaBEH3-A、 TaBEH3-B和 T... BES1(油菜素内酯不敏感1-甲磺酸乙酯-抑制剂1)是一类植物特有的转录因子家族, TaBEH3基因是小麦 BES1基因家族成员之一,为进一步了解该基因的功能,以中国春为材料,克隆了 TaBEH3基因,将其3个同源基因分别命名为 TaBEH3-A、 TaBEH3-B和 TaBEH3-D。序列分析显示,3个同源基因均包含2个外显子,分别编码356、354和358个氨基酸,启动子区含有大量与植物生长发育、激素响应相关的顺式作用元件,其中,分生组织表达元件(CAT-box)和脱落酸响应元件(ABRE)在3个基因中普遍存在。系统进化树分析显示, TaBEH3基因在麦类作物中具有更近的亲缘关系。基于qRT-PCR进行的时空表达分析显示, TaBEH3基因在不同组织和不同器官间均有组成性表达,表明 TaBEH3基因在植物生长发育(特别是花器官的发育和形成)过程中具有重要的作用。 TaBEH3-A、 TaBEH3-B和 TaBEH3-D基因响应ABA激素胁迫处理,且3个基因的表达量变化趋势一致。 展开更多

关键词 小麦 TabEH3基因 克隆 表达分析

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小麦TaSABP2基因的克隆及表达分析

8

作者 李梦达 左宁 +3 位作者 杜红旭 靳海洋 贺德先 牛洪斌 《麦类作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期140-147,共8页

为挖掘小麦抗逆基因,进一步解析小麦抗逆机制,采用电子克隆结合RT-PCR的方法,从小麦叶片中分离出 TaSABP2基因;利用生物信息学手段分析其序列特征;运用实时荧光定量反转录PCR(qRT-PCR)技术检测其在不同条件下的表达情况。结果表明,小麦 ... 为挖掘小麦抗逆基因,进一步解析小麦抗逆机制,采用电子克隆结合RT-PCR的方法,从小麦叶片中分离出 TaSABP2基因;利用生物信息学手段分析其序列特征;运用实时荧光定量反转录PCR(qRT-PCR)技术检测其在不同条件下的表达情况。结果表明,小麦 TaSABP2基因的cDNA全长为878 bp,包含一个长度为807 bp的开放阅读框,编码268个氨基酸。 TaSABP2基因的编码蛋白包含Abhydrolase及PLN02211两个结构域及一个酶活性中心(VVLVGHSLGG),属于Abhydrolase超家族的成员。其蛋白二级结构由四种形式构成,包括40.3%的α-螺旋、16.42%的延伸链、4.48%的β转角、38.81%的无规则卷曲。通过与其他植物的氨基酸序列进行多重序列比对,发现功能区域的氨基酸序列较为保守。qRT-PCR结果表明, TaSABP2基因的表达具有较强的组织特异性,植物激素ABA和BR处理及干旱和盐胁迫处理,均能诱导该基因的表达量迅速增加。以上结果表明, TaSABP2基因在小麦抵抗逆境胁迫过程中起到一定作用。 展开更多

关键词 小麦 TaSAbP2 基因 基因克隆 生物信息学 表达分析

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小麦类钙调素TaCML79基因的克隆和表达分析 被引量：7

9

作者 周硕 刘永伟 +6 位作者 董福双 杨帆 赵和 柴建芳 吕孟雨 孙果忠 王海波 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2016年第6期1-6,共6页

为了研究小麦类钙调素基因的功能和在植物逆境响应中的分子机制,以电子克隆结合RT-PCR的方法,在小麦中克隆到一个类钙调素基因TaCML79。该基因的开放阅读框长度为588bp,编码的蛋白长度为195个氨基酸,推测的分子量为20.45kDa,等电点为4.6... 为了研究小麦类钙调素基因的功能和在植物逆境响应中的分子机制,以电子克隆结合RT-PCR的方法,在小麦中克隆到一个类钙调素基因TaCML79。该基因的开放阅读框长度为588bp,编码的蛋白长度为195个氨基酸,推测的分子量为20.45kDa,等电点为4.6,属于酸性蛋白,具有2个典型的和一个不完整的EF-hand结构域。多序列比对和系统进化树分析表明,TaCML79与野生稻的ObCML35和水稻的OsCML10亲缘关系较近,相似性分别为84.6%和86.8%。该基因的表达在根和地上部分受到热激、NaCl、渗透和冷胁迫的诱导或抑制,初步推断该基因可能与植物抗逆有密切的关系。 展开更多

关键词 小麦 类钙调素 EF-hand结构域 基因克隆 基因表达

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小麦AGPase胞质型大亚基基因的克隆与表达分析 被引量：4

10

作者 康国章 王永华 +3 位作者 刘超 沈丙权 郭天财 朱云集 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期1290-1293,共4页

从大粒型小麦品种豫教2号中克隆出调控小麦ADPG焦磷酸化酶(AGPase)胞质型大亚基基因(LSUI)cDNA全长。在花后15d的小麦植株中,通过半定量PCR法,发现LSUI基因在叶、籽粒、叶鞘和颖壳中表达量较高,但在根和茎中表达量较低,表明在绿色光合... 从大粒型小麦品种豫教2号中克隆出调控小麦ADPG焦磷酸化酶(AGPase)胞质型大亚基基因(LSUI)cDNA全长。在花后15d的小麦植株中,通过半定量PCR法,发现LSUI基因在叶、籽粒、叶鞘和颖壳中表达量较高,但在根和茎中表达量较低,表明在绿色光合功能器官和淀粉合成器官中,LSUI基因量表达较高。比较了LSUI基因在千粒重不同的豫教2号和兰考矮早八两小麦品种籽粒发育过程中的表达差异后,发现在籽粒形成期,LSUI基因在两品种籽粒内表达相似,但在籽粒灌浆期和成熟期间,LSUI基因在千粒重较高的豫教2号内表达量明显高于千粒重较低的兰考矮早八,这个表达差异与两品种间淀粉积累差异趋势相似,表明LSUI基因的表达量可能与淀粉的积累量密切相关。 展开更多

关键词 小麦 AGPase胞质型大亚基 基因克隆 RT-PCR 基因表达

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小麦转录因子基因TaWRKY46的克隆与表达分析 被引量：8

11

作者 丁长欢 孙昭华 +1 位作者 李小娟 肖凯 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2012年第5期65-71,共7页

在富集低磷胁迫特异表达基因的小麦根系cDNA差减杂交文库中,鉴定了1个小麦WRKY型转录因子基因(TaWRKY46)。依据该基因的cDNA序列,在石新828中克隆了该基因。TaWRKY46的cDNA长度为872 bp,开放阅读框为669 bp,编码222个氨基酸残基,氨基酸... 在富集低磷胁迫特异表达基因的小麦根系cDNA差减杂交文库中,鉴定了1个小麦WRKY型转录因子基因(TaWRKY46)。依据该基因的cDNA序列,在石新828中克隆了该基因。TaWRKY46的cDNA长度为872 bp,开放阅读框为669 bp,编码222个氨基酸残基,氨基酸组成上含有保守的WRKY基序和C2H2基序。系统进化分析表明,TaWRKY46与大麦WRKY34可能来自相同的祖先。与对照供磷水平(2 mmol/L Pi)相比,低磷处理(20μmol/L Pi)使根系中TaWRKY46的转录本数量明显增多,表明TaWRK46对低磷胁迫逆境产生了明显应答。此外,TaWRKY46对氮、钾、锌和钙养分胁迫也表现明显的上调表达特征。表明该基因编码蛋白在介导上述养分逆境信号的转导中具有重要作用。此外,TaWRKY46对干旱、盐分等非生物逆境和脱落酸(ABA)也产生明显应答。因此,TaWRKY46是小麦种属中应答多种非生物逆境的重要调控转录因子,在增强小麦抵御养分胁迫和非生物逆境的能力中可能具有重要作用。 展开更多

关键词 小麦 TaWRKY46 基因克隆 表达 非生物逆境

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小麦应答低磷的钙依赖蛋白激酶基因TaCPK1A和TaCPK10的克隆和表达 被引量：3

12

作者 路文静 李瑞娟 +3 位作者 李小娟 郭程瑾 谷俊涛 肖凯 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第9期1749-1754,共6页

采用构建富集磷胁迫特异表达基因cDNA差减文库、序列分析和cDNA-AFLP技术,鉴定了2个应答低磷胁迫的钙依赖蛋白激酶(CDPK)基因的表达序列标签。克隆、测序和比对结果表明,上述基因分别为TaCPK1A和TaCPK10。其cDNA长度分别为2129bp和1696... 采用构建富集磷胁迫特异表达基因cDNA差减文库、序列分析和cDNA-AFLP技术,鉴定了2个应答低磷胁迫的钙依赖蛋白激酶(CDPK)基因的表达序列标签。克隆、测序和比对结果表明,上述基因分别为TaCPK1A和TaCPK10。其cDNA长度分别为2129bp和1696bp,开放阅读框分别为1599bp和1281bp,分别编码532和426个氨基酸;具有CDPK的典型结构特征。系统进化分析表明,上述基因的核苷酸序列同源性低,分别来自不同的祖先。在对低磷胁迫的响应上,TaCPK1A在磷胁迫1～24h范围内根系内的表达水平不断增强,叶内表达水平在1h内明显被诱导,以后保持稳定;TaCPK10在相应磷胁迫时间范围根叶内的表达水平均呈低—高—低变化,在磷胁迫1h的表达被诱导,以后又逐渐降至胁迫前水平。TaCPK1A和TaCPK10对氮、钾胁迫没有应答响应。结果表明,CDPK在介导小麦低磷胁迫的信号转导中具有重要作用,小麦中存在两种或多种CDPK介导的磷酸化过程参与低磷信号的转导。 展开更多

关键词 小麦(triticum aestivum L.) 钙依赖蛋白激酶 克隆 低磷胁迫 基因表达

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响应低磷胁迫的小麦MDP激酶基因TaMPK1a-1的克隆和表达分析 被引量：2

13

作者 路文静 李瑞娟 +4 位作者 王效颖 李小娟 郭程瑾 谷俊涛 肖凯 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期2601-2607,共7页

【目的】蛋白磷酸化在介导非生物逆境信号的转导中具有重要作用。以笔者在低磷胁迫下鉴定的小麦促分裂原活化蛋白激酶(MAP激酶)基因TaMPK1a-1为基础,开展该基因应答低磷逆境分子特征的研究。【方法】利用cDNA-AFLP技术,鉴定特异上调表达... 【目的】蛋白磷酸化在介导非生物逆境信号的转导中具有重要作用。以笔者在低磷胁迫下鉴定的小麦促分裂原活化蛋白激酶(MAP激酶)基因TaMPK1a-1为基础,开展该基因应答低磷逆境分子特征的研究。【方法】利用cDNA-AFLP技术,鉴定特异上调表达的MAP激酶基因TaMPK1a-1。采用生物信息学技术研究基因结构和编码蛋白特征,采用半定量RT-PCR技术研究TaMPK1a-1应答低磷胁迫逆境的分子特征。【结果】TaMPK1a-1 cDNA长度为2170bp,开放阅读框为1737bp,编码578个氨基酸残基。TaMPK1a-1含有2个参与双重磷酸化作用的TEY和TDY基序。在正常供磷条件下,磷高效品种石新828和磷低效品种冀7369根叶中均检测不到TaMPK1a-1的转录本;低磷处理下,TaMPK1a-1的表达在上述品种的根叶中均受到明显诱导。与冀7369相比,低磷条件下石新828根叶中TaMPK1a-1的转录本明显增多。【结论】TaMPK1a-1级联转导途径不仅影响着小麦对低磷信号的响应,而且对于增强小麦适应低磷胁迫的能力中也可能具有重要作用。 展开更多

关键词 小麦(triticum aestivutn L.) 促分裂原活化蛋白激酶基因 磷胁迫 克隆 表达

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小麦胚乳14-3-3基因的克隆及其重组蛋白的原核表达 被引量：2

14

作者 戴双 李豪圣 +4 位作者 程敦公 刘爱峰 曹新有 刘建军 宋健民 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期2076-2084,共9页

【目的】克隆小麦籽粒胚乳14-3-3基因,并进行体外表达,为进一步研究其对籽粒生长发育的调控作用奠定基础。【方法】根据已有同源基因保守序列,设计插入限制性酶切位点的特异性扩增引物,采用RT-PCR方法扩增发育的小麦胚乳14-3-3基因,克... 【目的】克隆小麦籽粒胚乳14-3-3基因,并进行体外表达,为进一步研究其对籽粒生长发育的调控作用奠定基础。【方法】根据已有同源基因保守序列,设计插入限制性酶切位点的特异性扩增引物,采用RT-PCR方法扩增发育的小麦胚乳14-3-3基因,克隆测序后转入表达载体,在大肠杆菌中进行表达,并进行纯化。【结果】从开花后灌浆13—15 d的小麦品种济麦22籽粒胚乳中克隆到1个14-3-3基因,序列分析表明为非ε型,含1个777 bp的开放阅读框,编码蛋白259 aa,分子量约29 kD。核苷酸序列分析表明与小麦、水稻、玉米、大麦、大豆等主要农作物和模式植物拟南芥的14-3-3基因有较高的同源性,最高达98%,编码蛋白氨基酸长度也一致(260aa左右);在大肠杆菌中高效表达的重组蛋白约为30 kD,分子量大小与根据核苷酸序列推导的编码蛋白一致。从基因序列的同源性、编码蛋白的氨基酸长度、表达蛋白的分子量大小分析都说明克隆到的基因为14-3-3基因,并准确插入表达载体,得到了高效正确表达。将克隆的基因插入pET29c载体,热激转化大肠杆菌BL21-CodonPlus(DE3)-RP,得到了高效表达,但主要以包涵体形式(80%)存在。对重组蛋白进行了纯化,可溶性重组蛋白利用S-蛋白琼脂糖树脂得到纯化的蛋白,包涵体重组蛋白经变性溶解、复性后,也利用S-蛋白琼脂糖树脂得到了高度纯化的重组蛋白。【结论】利用RT-PCR技术从发育的小麦胚乳中克隆到1个14-3-3基因,并在大肠杆菌中得到了高效表达,重组蛋白经过纯化得到了纯度较高的活性蛋白。 展开更多

关键词 小麦 14-3-3蛋白 基因克隆 重组蛋白 原核表达

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小麦锌指蛋白基因TaZAT6的克隆、特征分析及其在不同磷水平下的表达 被引量：1

15

作者 李小娟 孙昭华 +4 位作者 柯忻 路文静 郭程瑾 谷俊涛 肖凯 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第9期3339-3345,共7页

【目的】在克隆小麦锌指蛋白基因TaZAT6的基础上,深入研究该基因的分子特征和在不同磷水平下的表达特性。【方法】通过对富集石新828不同低磷胁迫时间点特异表达基因的cDNA差减文库克隆测序,获得1锌指蛋白型转录因子基因EST。利用RT-PC... 【目的】在克隆小麦锌指蛋白基因TaZAT6的基础上,深入研究该基因的分子特征和在不同磷水平下的表达特性。【方法】通过对富集石新828不同低磷胁迫时间点特异表达基因的cDNA差减文库克隆测序,获得1锌指蛋白型转录因子基因EST。利用RT-PCR技术,在低磷处理24h的石新828和冀7369根系中克隆了该锌指蛋白基因TaZAT6,并采用该技术进一步研究该基因应答介质中Pi的特征。【结果】TaZAT6开放阅读框为717bp,编码238个氨基酸残基,编码的蛋白质中含有1个保守的核定位区、2个C2H2锌指蛋白域和1个DLN保守盒。系统进化分析表明,TaZAT6可能与另外2个小麦锌指蛋白基因ZAT22和ZAT23具有共同的祖先。TaZAT6的表达表现为明显的低磷诱导特性,恢复至正常磷水平下其表达降低至磷胁迫前水平。与磷低效品种冀7369相比,石新828根叶中TaZAT6具有更强应答低磷胁迫能力。小麦高亲和磷转运蛋白基因TaPT2对生长介质中Pi的响应特点与TaZAT6相似,表明TaZAT6可能参与了对TaPT2的转录调节。【结论】低磷胁迫条件下,石新828中TaZAT6具有较强应答Pi能力,由此进一步调控下游基因表达,可能与该品种在低磷下表现磷高效具有密切联系。 展开更多

关键词 小麦(triticum aestivum L.) 转录因子 锌指蛋白基因 克隆 表达

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小麦牻牛儿牻牛儿基脱氢酶基因的克隆及电子定位与表达分析 被引量：1

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作者 胡英考 朱敬 +1 位作者 李雅轩 蔡民华 《麦类作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期783-788,共6页

为更好地了解小麦维生素E的生物合成并将其应用于营养品质改良,以电子和实验克隆相结合的方法克隆分离了小麦牻牛儿牻牛儿基脱氢酶(GGH)基因的cDNA序列,序列号为DQ139268。序列分析结果表明,该cDNA序列含有一个完整的开放读码框,编码46... 为更好地了解小麦维生素E的生物合成并将其应用于营养品质改良,以电子和实验克隆相结合的方法克隆分离了小麦牻牛儿牻牛儿基脱氢酶(GGH)基因的cDNA序列,序列号为DQ139268。序列分析结果表明,该cDNA序列含有一个完整的开放读码框,编码462个氨基酸,含有保守的ChlP结构域,氮端有信号肽序列,定位于叶绿体中。氨基酸序列比对和系统发育分析结果显示,不同物种之间GGH基因编码的氨基酸序列同源性都较高。用生物信息学工具将该基因定位于小麦第六部分同源群的长臂上。RT-PCR和电子组织表达分析结果显示该基因在光合器官中表达量丰富,这可能与其亚细胞定位有关。 展开更多

关键词 小麦 牻牛儿牻牛儿基脱氢酶 基因克隆 电子表达分析

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小麦TaGSK5基因的克隆与表达分析 被引量：3

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作者 张令慧 张沛沛 +4 位作者 刘媛 陈涛 王彩香 程宏波 杨德龙 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 2021年第6期64-72,共9页

【目的】糖原合成激酶(glycogen synthase kinase,GSK)在响应植物非生物胁迫和参与植物生长发育调控方面起重要作用.克隆小麦GSK基因家族成员,分析其序列结构和表达模式,为进一步解析小麦GSK基因功能提供理论依据.【方法】通过同源克隆... 【目的】糖原合成激酶(glycogen synthase kinase,GSK)在响应植物非生物胁迫和参与植物生长发育调控方面起重要作用.克隆小麦GSK基因家族成员,分析其序列结构和表达模式,为进一步解析小麦GSK基因功能提供理论依据.【方法】通过同源克隆从小麦品种陇中1号中获得TaGSK5的4个同源基因cDNA序列,利用生物信息学结合qRT-PCR方法对TaGSK5进行基因序列和蛋白结构预测,以及基因表达模式分析.【结果】小麦TaGSK54个部分同源基因分别位于小麦1A、4A、5B和5D染色体上,分别命名为TaGSK5-1A,TaGSK5-4A,TaGSK5-5B和TaGSK5-5D.本研究克隆该基因的cDNA全长为1281 bp,包含12个外显子和11个内含子,编码426个氨基酸,具有激酶结构域,其蛋白结构与粗山羊草亲缘关系较近.TaGSK5编码的蛋白为可溶性蛋白,等电点分别为8.53、8.57、8.79和8.54,分子量分别为48226.51、47602.69、48237.52和48314.58.二级结构元件以α-螺旋和不规则卷曲为主.TaGSK5基因在小麦根、茎、叶和穗中均有表达,但在穗中表达量较高;该基因在干旱胁迫处理后0~6 h表达下调,在盐胁迫下表达量没有显著变化.【结论】小麦TaGSK5包含4个同源基因,位于不同的染色体上,其编码氨基酸序列高度相似,该基因可能负调控小麦耐旱性,与盐胁迫无关. 展开更多

关键词 小麦 TaGSK5 基因克隆 序列分析 表达分析

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三个小麦防御素基因的克隆及序列分析 被引量：1

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作者 史灵敏 张斌 +3 位作者 丁汉凤 李娜娜 高文伟 彭振英 《山东农业科学》 2016年第11期1-8,共8页

本试验从济麦22幼叶中克隆得到三个小麦防御素基因Ta PDF(Triticum aestivum defensin),分别命名为Ta PDF32、Ta PDF33和Ta PDF34(Gen Bank登录号分别为BT009185、BT009167和BT009022)。序列分析发现,三个防御素基因各自含有一个长度为... 本试验从济麦22幼叶中克隆得到三个小麦防御素基因Ta PDF(Triticum aestivum defensin),分别命名为Ta PDF32、Ta PDF33和Ta PDF34(Gen Bank登录号分别为BT009185、BT009167和BT009022)。序列分析发现,三个防御素基因各自含有一个长度为243、249 bp和225 bp的开放阅读框(open reading frame,ORF),依次编码长度为80、82个和74个氨基酸的蛋白。成熟蛋白的分子量均约为5.5 k D,等电点均大于7,含有8个保守的Cys残基。保守结构域分析发现,Ta PDF32含有一个γ-硫堇功能结构域,Ta PDF33和Ta PDF34均含有一个Knot1功能结构域,两者均是植物防御素的典型结构域,因此这三个Ta PDF属于典型的植物防御素蛋白。SWISS-MODEL在线软件分析表明,三个Ta PDF的三级结构均由三股反平行的β-折叠和一个α-螺旋组成。系统进化分析表明,Ta PDF32、Ta PDF33的氨基酸序列与玉米、粟米的防御素相似性较高,而Ta PDF34与大豆的防御素相似性较高,但均与已经报道的小麦防御素相似性较低,表明Ta PDF32、Ta PDF33和Ta PDF34是小麦三个新的防御素蛋白。荧光定量RT-PCR分析发现,Ta PDF32、Ta PDF33基因在小麦叶片中表达量最高,种子次之,根中最低;Ta PDF34基因在叶、种子和根中的表达量基本相同。 展开更多

关键词 小麦 植物防御素 基因克隆 序列分析 组织特异性表达

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小麦类钙调素TaCML8-A基因的克隆和表达分析

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作者 贾伟哲 焦博 +6 位作者 王娇 陈文烨 杨帆 刘永伟 董福双 赵立群 周硕 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2022年第1期1-8,共8页

为挖掘小麦抗逆基因,研究类钙调素基因在植物抗逆反应的分子机制,利用电子克隆结合RT-PCR的方法克隆小麦类钙调素基因TaCML8-A。生物信息学分析显示,该基因的CDS区全长为519 bp,编码172个氨基酸,包含PTZ00184和FRQ1超家族,含有4个EF-han... 为挖掘小麦抗逆基因,研究类钙调素基因在植物抗逆反应的分子机制,利用电子克隆结合RT-PCR的方法克隆小麦类钙调素基因TaCML8-A。生物信息学分析显示,该基因的CDS区全长为519 bp,编码172个氨基酸,包含PTZ00184和FRQ1超家族,含有4个EF-hand结构域,其中包含4个钙离子结合位点;编码蛋白质分子质量为18.31 ku,等电点为4.54,属于酸性蛋白质。亚细胞定位结果显示,TaCML8-A蛋白质在细胞核和细胞膜中均有分布。核苷酸序列比对发现,TaCML8-A与水稻OsCML14亲缘关系最近,相似性为79.17%。qRT-PCR结果显示,在盐、渗透和冷胁迫处理中,TaCML8-A基因在小麦地上部分和根中的表达均上升,表明植物可能通过提高TaCML8-A基因的表达来响应盐、渗透和冷胁迫;热激时TaCML8-A基因在根和地上部分分别受到诱导和抑制,从而发挥不同的功能。从小麦中成功克隆出类钙调素基因TaCML8-A,并进行表达分析,初步推测该基因可能参与调控植物的非生物胁迫,其结果可为后续研究其生物学功能提供基础理论支撑。 展开更多

关键词 小麦 类钙调素 EF-hand结构域 基因克隆 基因表达

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小麦TaLEC1基因的克隆及其表达特性分析 被引量：3

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作者 刘豪 王艳丽 +3 位作者 孟晓丹 王新国 李永春 任江萍 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期904-910,共7页

为了探讨LEC1基因在小麦(Triticum aestivumL)非生物胁迫应答中的功能,该研究通过RT-PCR结合RACE技术克隆小麦TaLEC1基因,并采用qRT-PCR方法分析了该基因在小麦不同组织以及不同处理下的表达模式,为深入研究小麦LEC1基因在干旱、高温和... 为了探讨LEC1基因在小麦(Triticum aestivumL)非生物胁迫应答中的功能,该研究通过RT-PCR结合RACE技术克隆小麦TaLEC1基因,并采用qRT-PCR方法分析了该基因在小麦不同组织以及不同处理下的表达模式,为深入研究小麦LEC1基因在干旱、高温和高盐胁迫下的响应机制奠定基础。结果表明:(1)成功克隆到小麦TaLEC1基因,该基因cDNA序列全长为1074bp,其中5′端非编码区23bp,开放阅读框为741bp,3′端非编码区310bp,编码246个氨基酸,具有典型的CBFD_NFYB结构域。(2)实时荧光定量分析显示,TaLEC1在不同组织间表达差异显著,10d龄幼苗的叶中表达量最高。(3)TaLEC1基因可被植物激素ABA诱导而上调表达,属于ABA依赖型的表达调控通路。(4)PEG模拟干旱胁迫处理后的0.5~1h,TaLEC1基因呈上调表达;42℃胁迫处理过程中,TaLEC1基因呈稳定上调表达趋势,并在胁迫处理后12h和48h时表达急剧上调,分别为对照的52.8倍和34.5倍;NaCl胁迫处理0.5h时TaLEC1基因迅速上调表达。研究表明,小麦TaLEC1基因参与ABA依赖的胁迫响应,推测可能在小麦耐受高温胁迫和渗透胁迫过程中发挥着重要的脱水保护功能。 展开更多

关键词 小麦 LEC1克隆 非生物胁迫 基因表达

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