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帚状江蓠质体UPA和线粒体COⅠ基因的序列比较及其系统进化分析
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作者 徐瑞 陈素文 +4 位作者 段亚飞 张文文 王珺 周传朋 王芸 《海洋渔业》 CSCD 北大核心 2023年第3期302-313,共12页
为研究海南省帚状江蓠(Gracilaria edulis)野生群体的种质资源、遗传多样性状况及红藻门物种间亲缘关系,采集海南省文昌和莺歌海潮间带的野生帚状江蓠,采用PCR扩增获得帚状江蓠质体UPA基因片段(质体23S rRNA V区域)和线粒体COⅠ基因片段... 为研究海南省帚状江蓠(Gracilaria edulis)野生群体的种质资源、遗传多样性状况及红藻门物种间亲缘关系,采集海南省文昌和莺歌海潮间带的野生帚状江蓠,采用PCR扩增获得帚状江蓠质体UPA基因片段(质体23S rRNA V区域)和线粒体COⅠ基因片段,分别对其进行序列比较及系统进化分析。结果表明,UPA基因片段T、C、A、G的含量分别为26.2%、16.2%、30.3%、27.3%;COⅠ基因片段T、C、A、G的含量分别为39.2%、15.1%、27.6%、18.1%;UPA和COⅠ基因片段的A+T的平均含量分别为56.5%和66.8%。UPA基因片段长度为370bp,共检测出1种单倍型,无多态性位点;COⅠ基因片段长度为664bp,共检测出2种单倍型,3个多态性位点,均为简约信息位点。与UPA基因相比,COⅠ基因具有更高的变异度,更适合用于帚状江蓠遗传多样性的分析。基于UPA和COⅠ基因片段对帚状江蓠进行系统进化分析,两者结果一致,结合形态学分析表明,帚状江蓠应是江蓠属内独立的分支。 展开更多
关键词 帚状江蓠 upa基因 COⅠ基因 序列分析 系统进化分析
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uPA基因真核表达载体的构建和鉴定 被引量:1
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作者 廖芝玲 罗殿中 +1 位作者 林静 陈罡 《广西医科大学学报》 CAS 北大核心 2007年第3期373-375,共3页
目的:构建人尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)基因真核表达载体,并转染人肝癌细胞,为进一步体外研究uPA在肝癌发生发展中的作用奠定基础。方法:从肝癌组织中提取RNA,通过RT-PCR的方式,获得基因uPA的全长cDNA,并克隆于含有HA2-标签(tag)的真... 目的:构建人尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)基因真核表达载体,并转染人肝癌细胞,为进一步体外研究uPA在肝癌发生发展中的作用奠定基础。方法:从肝癌组织中提取RNA,通过RT-PCR的方式,获得基因uPA的全长cDNA,并克隆于含有HA2-标签(tag)的真核表达载体pCMV上,酶切鉴定,质粒测序鉴定,用pCMV-uPA-HA2进行细胞瞬时转染及Western Blotting鉴定。结果:经过测序证实得到获得包含uPA基因的pCMV-HA2真核表达载体,瞬时转染细胞有蛋白表达。结论:克隆了人肝癌的uPA基因,成功构建真核表达载体。 展开更多
关键词 upa基因 肝癌细胞 真核表达载体
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uPA、uPAR和PTEN在膀胱移行细胞癌中的表达及其与肿瘤侵袭和转移的关系
3
作者 郭永连 周四维 叶章群 《临床外科杂志》 2007年第7期477-479,共3页
目的研究膀胱移行细胞癌uPA、uPAR及抑癌基因PTEN蛋白的表达及其与肿瘤侵袭、转移的关系。方法应用免疫组织化学SP法检测60例膀胱移行细胞癌组织uPA、uPAR和PTEN蛋白的表达。结果uPA、uPAR和PTEN阳性表达率分别为50.00%、50.00%和41.67%... 目的研究膀胱移行细胞癌uPA、uPAR及抑癌基因PTEN蛋白的表达及其与肿瘤侵袭、转移的关系。方法应用免疫组织化学SP法检测60例膀胱移行细胞癌组织uPA、uPAR和PTEN蛋白的表达。结果uPA、uPAR和PTEN阳性表达率分别为50.00%、50.00%和41.67%。uPA和uPAR的高表达与膀胱移行细胞癌的分化程度、浸润和转移关系密切(P<0.05);PTEN蛋白的低表达与膀胱移行细胞癌的分化程度、浸润和转移密切相关(P<0.05);膀胱癌中uPA和uP-AR与PTEN蛋白表达呈负相关(r=-0.481,P<0.05)。结论uPA和uPAR的高表达可能作为膀胱移行细胞癌侵袭、转移的指征之一,PTEN可能作为膀胱移行细胞癌预后不良的指标;uPA和uPAR对肿瘤细胞侵袭转移的作用可能在一定程度上受到PTEN的调控。 展开更多
关键词 尿激酶型纤溶酶原激活物 膀胱癌 抑癌基因 免疫组织化学
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含uPA裂解位点的人sTrail融合基因的构建及其原核蛋白表达与纯化 被引量:4
4
作者 梁宇佳 缪殿南 +2 位作者 闫国和 戴晓天 熊玮 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期789-792,共4页
目的构建含尿激酶纤溶酶原激活剂(urokinase plasminogen activator,uPA)裂解位点的人可溶性凋亡诱导配体(soluble related apoptosis inducing ligand,sTrail)基因的原核载体,表达并纯化其融合蛋白sTrail-uPA。方法 RT-PCR法克隆sTrai... 目的构建含尿激酶纤溶酶原激活剂(urokinase plasminogen activator,uPA)裂解位点的人可溶性凋亡诱导配体(soluble related apoptosis inducing ligand,sTrail)基因的原核载体,表达并纯化其融合蛋白sTrail-uPA。方法 RT-PCR法克隆sTrail基因后,经引物延伸法构建his-uPA-sTrail融合基因并亚克隆至原核表达载体pET-32a中,诱导其表达蛋白并将其纯化,肠肽酶(enterokinase,EK)切与再次纯化回收该蛋白,Western blot检测其抗原性。结果表达载体经诱导成功获约38×103含载体表达标签(Trx)的融合蛋白,EK酶切该蛋白获约19.5×103的目的蛋白uPA-sTrail。检测表明,该目的蛋白具人Trail抗原性。结论成功克隆uPA-sTrail融合基因并构建至原核表达载体,并获约19.5×103的融合蛋白,且该蛋白具人Trail抗原性。 展开更多
关键词 克隆 融合基因 融合蛋白 抗原性
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uPA基因重组GFP-腺相关病毒载体质粒的构建及其表达
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作者 毕凌云 易著文 +6 位作者 彭海宁 刘明俊 刘喜红 何庆南 党西强 吴小川 莫双红 《生命科学研究》 CAS CSCD 2007年第3期242-247,共6页
利用基因重组技术,用RT-PCR法从幼鼠肾脏获得uPA cDNA,再克隆到质粒pAAV-IRES-hrGFP的多克隆位点,构建重组质粒pAAV-hrGFP-uPA,通过酶切和DNA测序鉴定重组质粒的正确性.采用磷酸钙共沉淀法,以重组质粒pAAV-hrGFP-uPA和pAAV-RC、pHelper... 利用基因重组技术,用RT-PCR法从幼鼠肾脏获得uPA cDNA,再克隆到质粒pAAV-IRES-hrGFP的多克隆位点,构建重组质粒pAAV-hrGFP-uPA,通过酶切和DNA测序鉴定重组质粒的正确性.采用磷酸钙共沉淀法,以重组质粒pAAV-hrGFP-uPA和pAAV-RC、pHelper共转染AAV-293细胞,产生具有传染性的病毒颗粒;用斑点杂交法测定重组病毒颗粒的滴度,再将此病毒颗粒体外转染到培养的肾小管细胞中,倒置荧光显微镜观察GFP的表达,用免疫组化法检测转染的uPA蛋白表达.结果表明:成功地构建uPA基因GFP-腺相关病毒重组质粒,病毒滴度达每mL 4×1013病毒颗粒,60%~70%肾小管细胞感染了病毒颗粒,感染的肾小管细胞能稳定、高效表达外源uPA蛋白,为今后建立AAV-uPA基因治疗肾纤维化的模型奠定了良好的基础. 展开更多
关键词 upa GFP 腺相关病毒载体 基因转染
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膜联蛋白32与低分子质量单链尿激酶融合基因的构建及高效表达 被引量:6
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作者 颜宏利 孙树汉 +1 位作者 陈蕊雯 杨湘越 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期378-380,共3页
目的:构建膜联蛋白32(annexin32,Anx32)和低相对分子质量单链尿激酶(ScuPA32k)的融合基因,并在大肠杆菌系统内作表达。方法:利用重叠区扩增法进行基因拼接,然后在谷胱甘肽S转移酶原核表达系统内表达,Western印迹验证表达产物... 目的:构建膜联蛋白32(annexin32,Anx32)和低相对分子质量单链尿激酶(ScuPA32k)的融合基因,并在大肠杆菌系统内作表达。方法:利用重叠区扩增法进行基因拼接,然后在谷胱甘肽S转移酶原核表达系统内表达,Western印迹验证表达产物。结果:重叠区扩增得到 1.8 kb融合基因,该基因在原核表达系统内得到高效表达,表达量占菌体总蛋白的 26%,Western印迹证明表达产物正确。结论:用重叠区扩增法进行基因拼接快速、简便。 展开更多
关键词 膜联蛋白32 低相对分子质量单链尿激酶 基因拼接 基因表达 重叠区扩增法 大肠杆菌
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肝细胞肝癌组织尿激酶型纤溶酶原激活物及其受体的表达与意义
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作者 徐昌隆 黄智铭 +1 位作者 郑君杰 薛战雄 《温州医学院学报》 CAS 2006年第2期102-105,共4页
目的:探讨肝细胞肝癌组织中尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)及其受体(uPAR)蛋白和uPAmRNA、uPARmRNA的表达和作用。方法:应用免疫组织化学和RT-PCR方法测定71例肝组织标本,包括对照组(C)12例,肝细胞肝癌组(HCC)34例和癌旁组织组(PTT)25例的... 目的:探讨肝细胞肝癌组织中尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)及其受体(uPAR)蛋白和uPAmRNA、uPARmRNA的表达和作用。方法:应用免疫组织化学和RT-PCR方法测定71例肝组织标本,包括对照组(C)12例,肝细胞肝癌组(HCC)34例和癌旁组织组(PTT)25例的uPA、uPAR及其基因的表达,对比分析其与肝癌的临床病理因素的关系。结果:HCC组uPA、uPAR蛋白的平均吸光度值和uPAmRNA、uPARmRNA条带的光密度比值均明显高于C组和PTT组,差异非常显著(P<0.01),PTT组与C组间差异均无显著性(P>0.05)。uPA、uPAR在包膜不完整,有肝内转移和有肝外转移肝癌中的表达均明显高于包膜完整,无肝内转移和无肝外转移者(P<0.05或P<0.01);与肿瘤的大小无关(P>0.05)。结论:肝癌组织uPA、uPAR蛋白及其基因均呈现高表达,可能在肝细胞肝癌的发生、发展,尤其是在侵袭和转移过程中发挥重要的作用。 展开更多
关键词 肝细胞肝癌 upa upaR 基因
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DNA barcode assessment of Ceramiales(Rhodophyta) in the intertidal zone of the northwestern Yellow Sea 被引量:1
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作者 杜国英 吴菲菲 +2 位作者 郭皓 薛红凡 茅云翔 《Chinese Journal of Oceanology and Limnology》 SCIE CAS CSCD 2015年第3期685-695,共11页
A total of 142 specimens of Ceramiales(Rhodophyta) were collected each month from October 2011 to November 2012 in the intertidal zone of the northwestern Yellow Sea. These specimens covered 21 species,14 genera,and f... A total of 142 specimens of Ceramiales(Rhodophyta) were collected each month from October 2011 to November 2012 in the intertidal zone of the northwestern Yellow Sea. These specimens covered 21 species,14 genera,and four families. Cluster analyses show that the specimens had a high diversity for the three DNA markers,namely,partial large subunit r RNA gene(LSU),universal plastid amplicon(UPA),and partial mitochondrial cytochrome c oxidase subunit I gene(COI). No intraspecific divergence was found in our collection for these markers,except for a 1–3 bp divergence in the COI of Ceramium kondoi,Symphyocladia latiuscula,and Neosiphonia japonica. Because short DNA markers were used,the phylogenetic relationships of higher taxonomic levels were hard to evaluate with poor branch support. More than half species of our collection failed to find their matched sequences owing to shortage information of DNA barcodes for macroalgae in Gen Bank or BOLD(Barcode of Life Data) Systems. Three specimens were presumed as H eterosiphonia crispella by cluster analyses on DNA barcodes assisted by morphological identification,which was the first record in the investigated area,implying that it might be a cryptic or invasive species in the coastal area of northwestern Yellow Sea. In the neighbor-joining trees of all three DNA markers,H eterosiphonia japonica converged with D asya spp. and was distant from the other Heterosiphonia spp.,implying that H. japonica had affinities to the genus Dasya. The LSU and UPA markers amplified and sequenced easier than the COI marker across the Ceramiales species,but the COI had a higher ability to discriminate between species. 展开更多
关键词 DNA标记 条形码 北黄海 潮间带 红藻门 细胞色素C氧化酶 GENBANK 评估
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结肠癌组织中maspin及uPA基因的表达与临床意义 被引量:5
9
作者 冯波 熊观瀛 +1 位作者 王芸 范志宁 《中国临床研究》 CAS 2011年第10期874-876,共3页
目的通过对结肠癌及正常结肠黏膜组织标本中maspin和uPA基因的表达进行检测,探讨二者与结肠癌病理学特征之间的关系,以及在组织中表达的相关性,为临床寻找结肠癌早期诊断指标提供理论依据。方法采用免疫组织化学SP法测定62例结肠癌及30... 目的通过对结肠癌及正常结肠黏膜组织标本中maspin和uPA基因的表达进行检测,探讨二者与结肠癌病理学特征之间的关系,以及在组织中表达的相关性,为临床寻找结肠癌早期诊断指标提供理论依据。方法采用免疫组织化学SP法测定62例结肠癌及30例正常结肠组织中maspin以及uPA基因的表达,对结果进行分析。结果 maspin蛋白的阳性表达率在结肠癌未侵及浆膜、淋巴结无转移及TNM分期0~Ⅰ期者中明显高于侵及浆膜、淋巴结有转移及TNM分期Ⅱ~Ⅳ期者(P均<0.05),在结肠癌不同性别患者中无差异(P>0.05)。uPA蛋白的阳性表达率在结肠癌未侵及浆膜、淋巴结无转移及TNM分期0~Ⅰ期者中明显低于侵及浆膜、淋巴结有转移及TNM分期Ⅲ~Ⅳ期者(P均<0.05),在结肠癌不同性别患者中亦无差异(P>0.05)。maspin与uPA基因在结肠癌的表达中呈负相关(rs=-0.416,P<0.05)。结论 maspin和uPA基因在结肠癌和正常结肠黏膜组织中的表达有明显差异,且与结肠癌的病理学特征相关,二者在结肠癌组织样本中的表达也存在相关性,可作为反映结肠癌病理生物学行为的指标。 展开更多
关键词 结肠癌 MASPIN 尿激酶型纤溶酶原激活剂 基因 免疫组织化学
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siRNA干扰小鼠睾丸支持细胞uPA表达的初步研究
10
作者 胡廉 刘燕 +1 位作者 李红钢 熊承良 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期998-1003,共6页
该研究在验证小鼠睾丸支持细胞TM4有内源性uPA基因表达的基础上,针对uPAmRNA靶序列设计三段不同的siRNA序列(si-uPA),通过瞬时转染TM4细胞,筛选确定uPA基因的有效干扰序列。将该有效干扰序列进行时效、量效实验,观察siRNA对TM4细胞uPA m... 该研究在验证小鼠睾丸支持细胞TM4有内源性uPA基因表达的基础上,针对uPAmRNA靶序列设计三段不同的siRNA序列(si-uPA),通过瞬时转染TM4细胞,筛选确定uPA基因的有效干扰序列。将该有效干扰序列进行时效、量效实验,观察siRNA对TM4细胞uPA mRNA和蛋白表达的影响。结果显示,siRNA的最佳转染浓度为50 nmol/L。三种si-uPA转染TM4细胞后,uPA mRNA和蛋白表达量均较空白对照组明显下降(P<0.05),以si-uPA1作用最为明显。si-uPA1转染24 h后,转染组细胞uPA mRNA的表达均较对照组显著降低,其中100 nmol/L组抑制效果最为明显,抑制率达到70%;随转染时间的延长,uPA mRNA表达持续降低,转染72 h后,三组转染细胞uPA mRNA表达量分别为对照组的53.9%、35.3%和27.7%(P<0.05)。该研究成功筛选出针对uPA mRNA靶序列的有效干扰序列,抑制效应持续至72 h;同一时间点内,抑制效应随转染浓度的增加而增强,表现出良好的量效关系。 展开更多
关键词 upa RNA干扰 siRNA TM4细胞 基因表达
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uPA基因表达调控研究进展 被引量:3
11
作者 王丽石 朱运松 《医学分子生物学杂志》 CAS CSCD 2004年第4期235-238,共4页
uPA的高表达与肿瘤侵袭转移密切相关。研究表明在乳腺癌、肺癌、结肠癌等肿瘤组织中都有uPA的高表达。已经证实细胞内uPA蛋白合成增加主要由基因的转录水平引起 ,uPA基因启动子上含有AP1、NFκB、PEA3等增强子元件 ,可与相应转录因子结... uPA的高表达与肿瘤侵袭转移密切相关。研究表明在乳腺癌、肺癌、结肠癌等肿瘤组织中都有uPA的高表达。已经证实细胞内uPA蛋白合成增加主要由基因的转录水平引起 ,uPA基因启动子上含有AP1、NFκB、PEA3等增强子元件 ,可与相应转录因子结合增强uPA的基因转录 ,许多调节分子如细胞内cAMP、生长因子和佛波酯等都是通过核内转录因子起调节作用的。另外肿瘤细胞内外信号传导通路的某种改变也导致了uPA表达的增高 ,促进细胞浸润转移。 展开更多
关键词 尿激酶型纤溶酶原激活剂 肿瘤侵袭转移 基因表达调控 转录因子
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乳腺癌转移风险评估标志物的研究进展 被引量:2
12
作者 宋泓杉 张健 +2 位作者 赵付雅 郝丽 李爱东 《现代生物医学进展》 CAS 2017年第28期5594-5596,共3页
肿瘤转移是造成乳腺癌患者死亡的主要原因,为提高生存期,有大约80%的患者选择了辅助治疗,然而只有其中一部分患者最后真正发生了转移。那些实际转移风险很低,却仍然选择了进一步放疗、化疗、内分泌或免疫治疗的患者,不仅受到了治疗副作... 肿瘤转移是造成乳腺癌患者死亡的主要原因,为提高生存期,有大约80%的患者选择了辅助治疗,然而只有其中一部分患者最后真正发生了转移。那些实际转移风险很低,却仍然选择了进一步放疗、化疗、内分泌或免疫治疗的患者,不仅受到了治疗副作用的伤害、也造成了医疗资源的浪费。因此,准确评价患者的转移风险对指导临床工作格外重要。以肿瘤的基因改变和转移过程为切入点,利用先进的分子技术,已有数项指标通过严谨的实验论证,认为可以评估乳腺癌的转移风险,本文将对其进行简要的介绍和分析。 展开更多
关键词 乳腺癌 转移风险 人表皮生长因子受体-2 尿激酶型纤溶酶原激活剂/纤溶酶原激活物抑制剂1 基因表达谱
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