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Production of CCHF Virus-Like Particle by a Baculovirus-Insect Cell Expression System 被引量:2
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作者 Zhao-rui Zhou Man-li Wang Fei Deng Tian-xian Li Zhi-hong Hu Hua-lin Wang 《Virologica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2011年第5期338-346,共9页
Crimean-Congo Haemorrhagic Fever Virus (CCHFV) is a tick-born virus of the Nairovirus genus within the Bunyaviridae family,which is widespread and causes high fatality.The nucleocapsid of CCHFV is comprised of N prote... Crimean-Congo Haemorrhagic Fever Virus (CCHFV) is a tick-born virus of the Nairovirus genus within the Bunyaviridae family,which is widespread and causes high fatality.The nucleocapsid of CCHFV is comprised of N proteins that are encoded by the S segment.In this research,the N protein of CCHFV was expressed in insect cells using a recombinant baculovirus.Under an electron microscope,Virus-Like Particles (VLPs) with various size and morphology were observed in cytoplasmic vesicles in the infected cells.Sucrose-gradient purification of the cell lysate indicated that the VLPs were mainly located in the upper fraction after ultracentrifugation,which was confirmed by Western blot analysis and immuno-electron microscopy (IEM). 展开更多
关键词 Crimean-Congo hemorrhagic fever virus (CCHFV) virus-like Particle (VLP) Nucleocapsid (N)protein
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密码子优化的RHDV2双VP60基因重组杆状病毒构建及表达蛋白免疫原性分析
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作者 于吉锋 谢晶 +8 位作者 黄勇 肖璐 林毅 曹冶 叶勇刚 魏勇 吴学婧 李江凌 康润敏 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期668-677,共10页
[目的]试验旨在优化兔出血症病毒2型(Rabbit hemorrhagic disease virus 2,RHDV2)病毒样颗粒(virus-like particle, VLP)疫苗的制备策略,探究RHDV2 VLP疫苗对家兔的免疫原性,为低成本、高产量RHDV2新型疫苗研发提供新思路。[方法]根据... [目的]试验旨在优化兔出血症病毒2型(Rabbit hemorrhagic disease virus 2,RHDV2)病毒样颗粒(virus-like particle, VLP)疫苗的制备策略,探究RHDV2 VLP疫苗对家兔的免疫原性,为低成本、高产量RHDV2新型疫苗研发提供新思路。[方法]根据昆虫细胞的密码子偏好性优化合成RHDV2 VP60全基因,将双VP60基因插入真核载体pFastBacTMDual,转化携带Bacmid质粒的大肠杆菌DH10Bac感受态细胞,构建含双VP60基因的重组杆粒Bacmid-VP60-VP60,转染Sf9昆虫细胞,通过Western blotting、间接免疫荧光试验(IFA)及透射电镜对重组杆状病毒Bacmid-VP60-VP60进行表达验证;将优化策略制备的重组蛋白抗原与氢氧化铝佐剂按照9∶1比例制备VLP灭活疫苗,通过安全性检验、最小免疫剂量、免疫持续期等评估优化策略制备的RHDV2 VLP疫苗的保护效果。[结果]试验成功构建重组杆粒Bacmid-VP60-VP60。Western blotting鉴定结果显示,重组杆状病毒转染Sf9细胞表达出大小约60 ku的RHDV2 VP60蛋白。IFA鉴定结果显示,感染重组杆状病毒的Sf9细胞产生了大量的黄绿色荧光,表明重组杆状病毒在Sf9细胞中大量表达VP60蛋白。透射电镜观察结果显示,VP60蛋白折叠成VLP,大小为40 nm左右,呈现球形结构,表面光滑。优化策略制备的RHDV2 VLP疫苗对家兔具有良好的安全性和免疫原性,最小免疫剂量为0.5 mL/只,免疫持续期可达210 d以上。[结论]试验构建了含有密码子优化的双VP60基因的重组杆状病毒,并在昆虫细胞中成功表达RHDV2 VP60蛋白,该蛋白制备的VLP疫苗对家兔具有良好的免疫原性。 展开更多
关键词 兔出血症病毒2型(RHDV2) 病毒样颗粒(VLP) 密码子偏好性 重组杆状病毒 免疫原性
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铝佐剂对HBoV1 VP2 VLPs诱导小鼠免疫应答的影响 被引量:2
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作者 邓中华 段招军 +3 位作者 谢志萍 谢乐云 张兵 曹友德 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期56-58,64,共4页
目的:探讨铝佐剂对HBoV1 VP2 VLPs诱导小鼠免疫应答的影响。方法:BABL/c小鼠随机分为VLPs实验组、明矾佐剂实验组、PBS对照组和明矾佐剂对照组。实验组小鼠分别采用HBoV1 VP2 VLPs和HBoV1 VP2 VLPs加明矾佐剂肌肉注射免疫,对照组小鼠同... 目的:探讨铝佐剂对HBoV1 VP2 VLPs诱导小鼠免疫应答的影响。方法:BABL/c小鼠随机分为VLPs实验组、明矾佐剂实验组、PBS对照组和明矾佐剂对照组。实验组小鼠分别采用HBoV1 VP2 VLPs和HBoV1 VP2 VLPs加明矾佐剂肌肉注射免疫,对照组小鼠同期注射等量明矾佐剂或PBS缓冲液;实验8周后ELISA检测两实验组特异性Ig G抗体效价和活性,ELIspot检测两实验组特异性细胞免疫反应强度,从细胞免疫和体液免疫强度探讨铝佐剂对HBoV1 VP2 VLPs诱导小鼠免疫应答的影响。结果:明矾佐剂降低HBoV1 VP2 VLPs诱导细胞免疫反应强度(P<0.001),增强HBoV1 VP2 VLPs诱导的血清Ig G效价(P<0.01)和Ig G活性(P<0.05)。结论:明矾佐剂使HBoV1 VP2 VLPs诱导的体液免疫反应增强而细胞免疫反应减弱。HBoV1 VP2 VLPs作为预防性疫苗使用时应添加明矾佐剂,作为治疗性疫苗使用时应不加明矾佐剂。 展开更多
关键词 铝佐剂 人博卡病毒1(HBoV1) 病毒蛋白2(VP2) 病毒样颗粒(vlps)
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肠道病毒EV71新型VLPs疫苗的制备及鉴定 被引量:1
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作者 董轲 王希 +2 位作者 龙敏 王琳 张惠中 《中国妇幼健康研究》 2015年第6期1125-1127,共3页
目的制备肠道病毒71型(EV71)的新型病毒样颗粒(VLPs)疫苗,为手足口病防治奠定基础。方法应用分子克隆技术构建外壳蛋白VP1融合基因cVP1,免疫细胞化学及Western Blot测定该融合基因在HeLa细胞表达情况;将cVP1克隆于杆状病毒表达载体pFast... 目的制备肠道病毒71型(EV71)的新型病毒样颗粒(VLPs)疫苗,为手足口病防治奠定基础。方法应用分子克隆技术构建外壳蛋白VP1融合基因cVP1,免疫细胞化学及Western Blot测定该融合基因在HeLa细胞表达情况;将cVP1克隆于杆状病毒表达载体pFastbac1,应用昆虫细胞TN5制备重组杆状病毒cVP1 rBV,再将此重组病毒与本室保存的gag rBV以不同MOI比例共感染昆虫细胞TN5,得到含有VP1的重组嵌合病毒样颗粒cVP1 VLPs,最后以Westem Blot及电镜进行鉴定。结果免疫细胞化学及Western Blot结果显示构建的融合基因cVP1可在真核细胞内表达,并成功制备成cVP1 rBV,该重组杆状病毒和gag rBV共感染昆虫细胞制备的VLPs结构完整。结论成功制备了EV71的新型VLPs疫苗,为后续研究打下了基础。 展开更多
关键词 手足口病 肠道病毒71型 病毒样颗粒 制备及鉴定
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病毒样颗粒疫苗研究进展
5
作者 赵尉吏 吕娜 +4 位作者 李会强 何亚辉 李露露 梁明丽 李岩异 《生物技术进展》 2024年第5期776-784,共9页
病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)是含有某种病毒一个或多个结构蛋白的空心颗粒形态,结构上类似完整病毒,具有与完整病毒相似的免疫原性并通过激活抗原提呈细胞诱导免疫应答,由于不含有完整的病毒基因组,因此适合用于开发更安全... 病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)是含有某种病毒一个或多个结构蛋白的空心颗粒形态,结构上类似完整病毒,具有与完整病毒相似的免疫原性并通过激活抗原提呈细胞诱导免疫应答,由于不含有完整的病毒基因组,因此适合用于开发更安全、成本更低的候选疫苗。系统阐述了VLPs的分类、表征、优势及表达系统,回顾了VLPs疫苗的发展历程,并汇总了已上市的疫苗品种。同时,介绍了部分在研的预防性或治疗性VLPs疫苗,并探讨了新的开发策略,进一步拓宽了VLPs疫苗的研发领域,为未来的研究与应用提供了更广阔的前景。 展开更多
关键词 病毒样颗粒 vlps疫苗 表征工具 表达系统
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加热法促进猪圆环病毒2型病毒样颗粒的高效组装
6
作者 黎明 辛菲 +3 位作者 郑侃 蔡清波 杨延丽 贺笋 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2024年第10期1-9,共9页
为了提高猪圆环病毒2型(PCV2)衣壳(Cap)蛋白病毒样颗粒(VLPs)的产量,本试验探索了采用加热法促进杆状病毒-昆虫细胞表达的Cap蛋白体外组装的可行性,通过高效液相尺寸排阻色谱法定量PCV2 Cap VLPs,分析4~56℃加热0~10 h对细胞培养液上清... 为了提高猪圆环病毒2型(PCV2)衣壳(Cap)蛋白病毒样颗粒(VLPs)的产量,本试验探索了采用加热法促进杆状病毒-昆虫细胞表达的Cap蛋白体外组装的可行性,通过高效液相尺寸排阻色谱法定量PCV2 Cap VLPs,分析4~56℃加热0~10 h对细胞培养液上清中PCV2 Cap VLPs浓度的影响,并采用透射电子显微镜(TEM)验证;通过监测45℃加热6 h后的细胞培养液上清在4℃放置6个月中PCV2 Cap VLPs的浓度变化,验证PCV2 Cap VLPs的稳定性;通过全能核酸酶消化试验验证宿主核酸对PCV2 Cap VLPs组装的作用;对比加热与未加热工艺的PCV2 Cap VLPs纯化收率,并通过高效液相尺寸排阻色谱偶联多角度激光散射、圆二色光谱、差示扫描量热法和微量热泳动分析2种工艺所得PCV2 Cap VLPs表征的一致性。结果显示,细胞培养液上清中PCV2 Cap VLPs浓度随着温度和时间的延长逐渐升高,其中45℃加热6 h后PCV2 Cap VLPs浓度为未加热的3.77倍,TEM观察进一步验证PCV2 Cap VLPs浓度增加。加热后形成的PCV2 Cap VLPs在4℃储存6个月浓度稳定,未出现解聚现象。全能核酸酶消化试验显示,加热过程中宿主核酸的作用并非关键因素。采用45℃加热6 h后再进行纯化,PCV2 Cap VLPs纯化收率是未加热工艺的2.9倍。经分析,加热与未加热工艺所得PCV2 Cap VLPs具有一致的分子量(2.385×10^(6)和2.361×10^(6) Da)、水力学半径(10.1和10.2 nm)、热转变温度Tm(67.22和66.92℃)、二级结构和特异性抗体亲和力(49.0和76.5 pmol/L),表明两者具有相近结构。本试验为PCV2 Cap VLPs的生产探索了一个提高产量的新方法,为兽用疫苗的研发提供了在抗原性质分析方法上的借鉴。 展开更多
关键词 猪圆环病毒(PCV) 病毒样颗粒(vlps) 组装 理化性质 温度
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促吞噬肽功能化的HBc VLPs纳米载体的制备 被引量:2
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作者 李春华 杨静 +6 位作者 任晋 李蕾 曹艺明 王鑫 李卫国 毕胜利 王升启 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第7期804-810,共7页
促吞噬肽(Tuftsin)是机体脾组织产生的生理活性肽,具有强大的免疫调节和免疫治疗潜力。乙型肝炎病毒核心蛋白病毒样颗粒(hepatitis B virus core protein virus-like particles, HBc VLPs)是由HBc自组装形成的空心纳米颗粒,其不仅能应... 促吞噬肽(Tuftsin)是机体脾组织产生的生理活性肽,具有强大的免疫调节和免疫治疗潜力。乙型肝炎病毒核心蛋白病毒样颗粒(hepatitis B virus core protein virus-like particles, HBc VLPs)是由HBc自组装形成的空心纳米颗粒,其不仅能应用于药物的递送,还能应用于外源蛋白质的显示。因此,Tuftsin功能化HBc VLPs载体的研究在免疫治疗、分子递送等方面具有重要意义。本研究选用PET43.1-a质粒作为Tuftsin-HBc VLP的表达载体,以大肠杆菌BL21 (DE3)为工程菌进行诱导表达,通过盐析、分子筛层析和离子交换层析技术纯化生产Tuftsin-HBc VLP。利用Western印迹和ELISA分别对Tuftsin-HBc VLP上HBc和Tuftsin进行定性分析。结果显示,Tuftsin-HBc VLP可与抗HBc抗体和抗Tuftsin抗体发生特异性结合。透射电镜观察结果显示,Tuftsin-HBc VLP呈大小均一的球形结构,粒度分析仪测得Tuftsin-HBc VLP的直径约为30 nm。CCK8法显示,Tuftsin-HBc VLP在0~480μg/mL范围内,细胞增殖未见显著变化。上述结果表明,本研究成功制备了可以在原核系统中高效表达且安全有效的Tuftsin-HBc VLP生物纳米递送载体。 展开更多
关键词 促吞噬肽 乙型肝炎病毒核心蛋白病毒样颗粒 纳米载体
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Generation of Hepatitis B virus PreS2-S antigen in Hansenula polymorpha
8
作者 Xiaowei Xu Sulin Ren +8 位作者 Xiaoxiao Chen Jun Ge Zhenxing Xu Hongying Huang Honglin Sun Yue Gu Tong Zhou Jianqiang Li Hanmei Xu 《Virologica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2014年第6期403-409,共7页
Despite the long availability of a traditional prophylactic vaccine containing the HBV surface antigen(HBsA g) and aluminum adjuvant, nearly 10% of the population remains unable to generate an effective immune respons... Despite the long availability of a traditional prophylactic vaccine containing the HBV surface antigen(HBsA g) and aluminum adjuvant, nearly 10% of the population remains unable to generate an effective immune response. Previous studies have indicated that hepatitis B virus(HBV) PreS 2-S is abundant in T/B cell epitopes, which induces a stronger immune response than HBsA g, particularly in terms of cytotoxic T lymphocyte(CTL) reaction. In the current study, the HBV PreS 2-S gene encoding an extra26 amino acids(PreS 2 C-terminus) located at the N-terminus of HBsA g was cloned into the pV CH1300 expression vector. Pre S2-S expressed in the methylotrophic yeast, Hansenula polymorpha, was produced at a yield of up to 250 mg/L. Subsequent purification steps involved hydrophobic adsorption to colloidal silica, ion-exchange chromatography and density ultracentrifugation. The final product was obtained with a total yield of ~15% and purity of ~99%. In keeping with previous studies, ~22 nm viruslike particles were detected using electron microscopy. The generated PreS 2-S antigen will be further studied for efficacy and safty in animals. 展开更多
关键词 HEPATITIS B virus(HBV) PreS2-S virus-like particle(VLP) Hansenula polymorpha
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基因Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒病毒样颗粒的构建与鉴定 被引量:1
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作者 郜婷 吴斯宇 +6 位作者 高彩霞 夏苏东 尹纪元 王英英 李莹莹 石存斌 王庆 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第7期148-157,共10页
为研究Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒(GCRV)病毒样颗粒(VLPs)疫苗,实验利用杆状病毒-昆虫细胞表达系统(BEVS)将具有免疫原性的GCRV-VP3/VP4/VP35蛋白进行GCRV-VLPs的组装。实验将编码VP35蛋白的GCRV-s11基因克隆入杆状病毒载体pFastBacHTA^(TM),... 为研究Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒(GCRV)病毒样颗粒(VLPs)疫苗,实验利用杆状病毒-昆虫细胞表达系统(BEVS)将具有免疫原性的GCRV-VP3/VP4/VP35蛋白进行GCRV-VLPs的组装。实验将编码VP35蛋白的GCRV-s11基因克隆入杆状病毒载体pFastBacHTA^(TM),然后将鉴定正确的重组质粒转化至DH10Bac感受态细胞,筛选得到重组穿梭质粒Bacmid-VP35。将穿梭质粒Bacmid-VP35以及实验室前期构建的重组穿梭质粒Bacmid-VP3、Bacmid-VP4分别转染Sf9昆虫细胞获得重组杆状病毒pFHB-VP35、pFHB-VP3以及pFHB-VP4。利用Bac-PAK快速滴定试剂盒测定重组杆状病毒滴度,并通过间接免疫荧光(IFA)和蛋白质印迹法(Western blot)鉴定重组蛋白的表达情况。结果显示,实验获得了较高滴度的重组杆状病毒,并且重组蛋白在杆状病毒感染的Sf9昆虫细胞中正确表达。将成功表达蛋白的重组杆状病毒pFHB-VP35、pFHB-VP3以及pFHB-VP4共感染Sf9细胞组装GCRV-VLPs,通过透射电镜(EM)观察VLPs的组装情况。结果显示,GCRV-Ⅱ的3个蛋白在Sf9昆虫细胞中可以完成自我组装,形成与天然病毒结构形似的VLPs,直径为65~72 nm。本实验结果为进一步研制安全、高效的GCRV-VLPs疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 草鱼 草鱼呼肠孤病毒 重组杆状病毒 病毒样颗粒
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犬细小病毒VP2蛋白特点及病毒样颗粒疫苗制备研究进展 被引量:1
10
作者 杨媛茹 焦雪 +3 位作者 宋维林 刘许峰 汪惠庆 李月红 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期3286-3293,共8页
犬细小病毒病危害犬的健康,传统疫苗不能有效保护犬免受病毒的侵扰,寻求新的疫苗是当前研究和关注的热点。VP2蛋白是犬细小病毒(Canine parvovirus,CPV)的主要保护性抗原蛋白,在决定宿主范围和入侵过程中起重要作用。此外,VP2蛋白在N-... 犬细小病毒病危害犬的健康,传统疫苗不能有效保护犬免受病毒的侵扰,寻求新的疫苗是当前研究和关注的热点。VP2蛋白是犬细小病毒(Canine parvovirus,CPV)的主要保护性抗原蛋白,在决定宿主范围和入侵过程中起重要作用。此外,VP2蛋白在N-端结构域和环结构域中含有几个重要的B细胞表位,可在CPV感染过程中诱导产生有效的中和抗体。因此,在开发CPV基因组亚单位疫苗中,VP2蛋白可作为候选抗原的首选。病毒样颗粒(VLPs)与天然病毒相似,但不具备天然病毒的复制功能引起机体发生感染,故近几年来利用不同的表达系统组装VP2蛋白一直是研究者们研究的重点。笔者着重对CPV VP2蛋白的特点及构象进行分析,通过特点分析得知CPV衣壳的主要成分中含有VP2,不但具有血凝活性,还与CPV的宿主范围和抗原性密切相关,因此,有活性的VP2蛋白在CPV基因工程亚单位疫苗的开发中极其重要。通过构象分析得知CPV VP2蛋白环状结构(Flexible loop)具有更大的灵活性,这可能是CPV感染宿主范围不断扩大的分子基础。同时笔者对VLPs疫苗的制备方法及优缺点进行讨论,以期为CPV疫苗的研究制备提供有利的参考和科学依据。 展开更多
关键词 犬细小病毒(CPV) 病毒样颗粒(vlps) 疫苗 VP2蛋白
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携带BCoV抗原表位的乙型肝炎病毒核心抗原病毒样颗粒的制备及免疫效果评价
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作者 郭晓旭 张帅 +5 位作者 刘莹 赵云环 王传文 李妍 范京惠 左玉柱 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期178-184,共7页
为了制备可用于牛冠状病毒(BCoV)亚单位疫苗的含BCoV S蛋白抗原表位的病毒样颗粒(VLP),本研究将BCoV S1和S2蛋白中含B细胞表位的aa351~aa403(159 bp)和aa771~aa784(42 bp)对应的密码子按大肠杆菌偏好性原则优化后插入乙型肝炎病毒核心抗... 为了制备可用于牛冠状病毒(BCoV)亚单位疫苗的含BCoV S蛋白抗原表位的病毒样颗粒(VLP),本研究将BCoV S1和S2蛋白中含B细胞表位的aa351~aa403(159 bp)和aa771~aa784(42 bp)对应的密码子按大肠杆菌偏好性原则优化后插入乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)主要免疫显性区域(MIR),合成该重组基因后克隆至pET-32a(+),经酶切鉴定显示正确构建了重组质粒pET-32a(+)-HBcAg-BCoV S1+S2。将该重组质粒分别转化E.coli BL21(DE3)和伴侣感受态细胞BL21(DE3)(含pG-KJE8分子伴侣质粒),经诱导表达后采用镍柱亲和层析法纯化两种不同表达形式的重组蛋白,SDS-PAGE检测重组蛋白的表达及纯化效果,结果显示两种表达系统均正确表达了重组蛋白,分别命名为VLP-A、VLP-B,前者为包涵体表达,后者为可溶性表达。纯化后浓度分别为0.9 mg/mL、1.4 mg/mL。利用透射电镜观察纯化后的两种重组蛋白是否形成VLP,结果显示二者均形成VLP,且可溶性表达的重组蛋白形成的VLP产量略高。将两种VLP乳化后以50μg/只分别免疫小鼠,于免疫后7 d、14 d、21 d、28 d、35 d和42 d采血制备血清,采用ELISA方法检测小鼠血清中的BCoV IgG特异性抗体水平及细胞因子IFN-γ、IL-4,结果显示,将两种VLP乳化后免疫小鼠产生的BCoV IgG抗体(P<0.01)和两种细胞因子水平(P<0.05)均显著高于对照组,且可溶性表达的VLP诱导产生的抗体水平和细胞因子水平更高。本研究首次制备了含BCoV S蛋白抗原表位的VLP,两种不同表达形式的重组蛋白均形成VLP,且在小鼠体内均能够产生免疫应答,为BCoV亚单位疫苗及相关生物制品的制备奠定了基础。 展开更多
关键词 乙肝病毒核心抗原 牛冠状病毒 病毒样颗粒 分子伴侣质粒
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Development of a novel virus-like particle-based vaccine for preventing tick-borne encephalitis virus infection 被引量:1
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作者 Jielin Tang Muqing Fu +8 位作者 Chonghui Xu Bao Xue Anqi Zhou Sijie Chen He Zhao Yuan Zhou Jizheng Chen Qi Yang Xinwen Chen 《Virologica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2023年第5期767-777,共11页
Tick-borne encephalitis virus(TBEV)is an important tick-borne pathogen that poses as a serious public health concern.The coverage and immunogenicity of the currently available vaccines against TBEV are relatively low;... Tick-borne encephalitis virus(TBEV)is an important tick-borne pathogen that poses as a serious public health concern.The coverage and immunogenicity of the currently available vaccines against TBEV are relatively low;therefore,it is crucial to develop novel and effective vaccines against TBEV.The present study describes a novel strategy for the assembly of virus-like particles(VLPs)by co-expressing the structural(core/prM/E)and non-structural(NS2B/NS3Pro)proteins of TBEV.The efficacy of the VLPs was subsequently evaluated in C57BL/6 mice,and the resultant IgG serum could neutralize both Far-Eastern and European subtypes of TBEV.These findings indicated that the VLP-based vaccine elicited the production of cross-subtype reactive antibodies.The VLPs provided protection to mice lacking the type I interferon receptor(IFNAR^(-/-))against lethal TBEV challenge,with undetectable viral load in brain and intestinal tissues.Furthermore,the group that received the VLP vaccine did not exhibit significant pathological changes and the inflammatory factors were significantly suppressed compared to the control group.Immunization with the VLP vaccine induced the production of multiple-cytokine-producing antiviral CD4+T cells in vivo,including TNF-α^(+),IL-2^(+),and IFN-γ^(+)T cells.Altogether,the findings suggest that noninfectious VLPs can serve as a potentially safe and effective vaccine candidate against diverse subtypes of TBEV. 展开更多
关键词 Tick-borne encephalitis virus(TBEV) virus-like particle(VLP) IMMUNOGENICITY NEUTRALIZATION VACCINE
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体外组装的病毒样颗粒在疫苗和药物递送中的应用 被引量:3
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作者 李岩异 吕娜 +4 位作者 贾思凝 张永红 张红霞 张卫婷 陈金利 《生物技术进展》 2023年第2期201-209,共9页
病毒样颗粒(virus like particles,VLPs)近年来被广泛应用于疫苗和治疗性药物递送系统领域。与体内组装VLPs相比,体外组装VLPs具有组装寡聚体成分明确、反应条件可控、避免宿主成分的引入以及能实现药物活性成分的包裹和递送功能等诸多... 病毒样颗粒(virus like particles,VLPs)近年来被广泛应用于疫苗和治疗性药物递送系统领域。与体内组装VLPs相比,体外组装VLPs具有组装寡聚体成分明确、反应条件可控、避免宿主成分的引入以及能实现药物活性成分的包裹和递送功能等诸多优势。概述了体外VLPs的生产方法、影响体外VLPs形成的因素、VLPs的特征分析方法,综述了体外VLPs在疫苗和治疗性药物递送方面的应用进展,期望对体外VLPs组装技术的发展提供参考思路,促进体外VLPs组装技术在疾病预防和治疗应用方面发挥更大的作用。 展开更多
关键词 衣壳蛋白 体外组装vlps 病毒样颗粒 药物递送
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禽流感病毒样颗粒疫苗研究进展
14
作者 张莹 王成玺 +1 位作者 王秀荣 李文超 《黑龙江畜牧兽医》 北大核心 2023年第22期31-35,共5页
禽流感是由禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)感染引起的一种禽类传染病,给家禽业造成了巨大的经济损失。AIV因抗原漂移和抗原转换可能会产生新的变异毒株和亚型,因此禽流感是在世界范围内需要被重点关注的禽类传染病。病毒样颗粒(... 禽流感是由禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)感染引起的一种禽类传染病,给家禽业造成了巨大的经济损失。AIV因抗原漂移和抗原转换可能会产生新的变异毒株和亚型,因此禽流感是在世界范围内需要被重点关注的禽类传染病。病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)能自组装成类似天然病毒结构的蛋白颗粒,易被免疫系统识别,但无遗传物质,安全性较高,是疫苗制备的新方向。禽流感VLPs是基于AIV蛋白模拟禽流感病毒外表面而构成的蛋白颗粒,具有很强的免疫原性,用其制成的疫苗具有无传染性、稳定和不易失活等优势,是一种安全性较高的疫苗类型。笔者就禽流感VLPs疫苗的研发基础、与疫苗有关的结构蛋白及疫苗的通用性和优缺点进行综述,以期对未来禽流感疫苗的研发和防控提供理论参考。 展开更多
关键词 禽流感 病毒样颗粒疫苗 禽流感疫苗 血凝素 神经氨酸酶 基质蛋白
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戊型肝炎病毒细胞吸附模型的建立及病毒吸附区域初步研究 被引量:16
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作者 何水珍 郑子峥 +4 位作者 吴婷 谢明辉 苗季 张军 夏宁邵 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期426-430,共5页
E.coli中表达的HEV衣壳蛋白片段P239(aa368~606)形成的类病毒颗粒与戊肝患者恢复期血清及中和单抗具有良好的反应性,较好地模拟了天然HEV病毒颗粒的表面空间结构。利用P239吸附HepG2细胞的模型来模拟HEV对宿主细胞的吸附,多株中和... E.coli中表达的HEV衣壳蛋白片段P239(aa368~606)形成的类病毒颗粒与戊肝患者恢复期血清及中和单抗具有良好的反应性,较好地模拟了天然HEV病毒颗粒的表面空间结构。利用P239吸附HepG2细胞的模型来模拟HEV对宿主细胞的吸附,多株中和单抗对吸附的阻断验证了吸附的特异性。P239与多株传代细胞系的吸附结果则表明了这种特异性吸附的细胞选择性。对阻断P239吸附的线性单抗进行定位,初步确定了P239与细胞相互作用的区域:ORF2上的aa423~443很可能和病毒上的细胞膜受体结合部位非常靠近,或可能直接参与构成了病毒与细胞特异性识别的表位。此本研究为进一步研究HEV与宿主细胞的相互作用提供一定的线索。 展开更多
关键词 戊型肝炎病毒(HEV) 类病毒颗粒P239 HEPG2 单抗阻断
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中国HIV-1B亚型P55和嵌合的P55-V3病毒样颗粒候选疫苗免疫效果的研究 被引量:7
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作者 肖瑶 范秀娟 +5 位作者 赵全壁 潘品良 戴传斌 陈刚 王贵杰 邵一鸣 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第4期313-316,共4页
研究我国艾滋病病毒Ⅰ型 (HIV 1)病毒样颗粒 (VLP)候选疫苗的免疫原性 ,为疫苗进行灵长类实验提供实验依据。将 gag和gag -V3VLP不同剂量 (5 0 μg、10 μg、1μg)在有佐剂 (氢氧化铝 )和无佐剂条件下皮下免疫小鼠 ,然后眼眶采血 ,用EL... 研究我国艾滋病病毒Ⅰ型 (HIV 1)病毒样颗粒 (VLP)候选疫苗的免疫原性 ,为疫苗进行灵长类实验提供实验依据。将 gag和gag -V3VLP不同剂量 (5 0 μg、10 μg、1μg)在有佐剂 (氢氧化铝 )和无佐剂条件下皮下免疫小鼠 ,然后眼眶采血 ,用ELISA法观察免疫鼠血清中抗体与剂量关系 ,以及中和抗体滴度和抗体IgG亚型IgG1和IgG2a的水平。同时取鼠脾淋巴细胞 ,体外抗原刺激后收取淋巴细胞分泌上清 ,检测细胞因子IFN γ和IL 5水平。结果是gagVLP免疫剂量与是否加佐剂对免疫效果没有显著性差异 (各组P >0 1) ,而 gag -V3VLP免疫鼠剂量与加入佐剂有显著性差异 (各组P <0 0 1)。gag和 gag -V3VLP(5 0 μg ,佐剂 )中和抗体滴度为 1∶2 0和 1∶40 ,同时gag和gag-V3VLP免疫鼠血清 (5 0 μg ,佐剂 )IgG2a和IgG1均有升高 ,IgG2a稍高于IgG1;细胞因子 (5 0 μg ,佐剂 )IFN γ(gag2 40 0 pg/ml,gag -V3 10 0 0 pg/ml)和IL 5 (gag 40 0 pg/ml,gag -V3 2 0 0pg/ml)均有升高 ,IFN γ升高高于IL 5。由此得出 :HIV 1gag和gag -V3VLP候选疫苗能刺激机体产生抗体 ,其抗体有中和活性 ;抗体亚型IgG2a稍高于IgG1,Th1和Th2细胞分泌的细胞因子 (5 0 μg ,佐剂 )IFN γ比对照组升高 16 0倍 ,IL 5比对照组升高 80倍。表明VLP疫苗能诱导机体? 展开更多
关键词 艾滋病病毒 病毒样颗粒 候选疫苗 免疫效果
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兔出血症病毒衣壳蛋白基因在毕赤酵母中的表达 被引量:15
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作者 严维巍 崔治中 王永坤 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期135-138,共4页
将RHDVVP6 0基因插入酵母转移载体pPICZB中转化毕赤酵母菌GS115株 ,经筛选获得染色体基因组中整合入VP6 0基因的重组酵母菌。以甲醇诱导培养后经SDS PAGE和Westernblot检测表达产物 ,在 6 0kD处出现一特异蛋白条带 ,表明RHDV的衣壳蛋白... 将RHDVVP6 0基因插入酵母转移载体pPICZB中转化毕赤酵母菌GS115株 ,经筛选获得染色体基因组中整合入VP6 0基因的重组酵母菌。以甲醇诱导培养后经SDS PAGE和Westernblot检测表达产物 ,在 6 0kD处出现一特异蛋白条带 ,表明RHDV的衣壳蛋白得到了成功表达。血凝试验表明 ,表达的重组蛋白具有血凝特性 ,可以凝集人“O”型红细胞 ,血凝价达 2 8,同时 ,该血凝性可被抗RHDV的高免血清所抑制。经电镜观察 ,重组酵母表达的衣壳蛋白可以在酵母菌体内自聚成大小约4 0nm ,和天然RHDV病毒子在物理形态上类似的病毒样颗粒 (VLPs)。该病毒样颗粒与兔抗RHDV高免血清作用后可被凝集成团 ,表明该VLPs与天然RHDV在抗原性上也极为相似。 展开更多
关键词 兔出血症病毒 衣壳蛋白基因 毕赤酵母 表达 病毒样颗粒
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在昆虫细胞中表达能自聚成病毒样颗粒的兔出血症病毒衣壳蛋白 被引量:7
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作者 严维巍 崔治中 王永坤 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期333-337,共5页
将兔出血症病毒衣壳蛋白VP60基因插入杆状病毒转移载体pBLUEBAC4,获得重组转移载体pBLUEBAC4-VP60。在脂质体转染试剂介导下,将重组杆状病毒转移载体pBLUEBAC4-VP60与线性化的野生型杆状病毒基因组DNA共转染对数生长期的Sf9昆虫细胞,经... 将兔出血症病毒衣壳蛋白VP60基因插入杆状病毒转移载体pBLUEBAC4,获得重组转移载体pBLUEBAC4-VP60。在脂质体转染试剂介导下,将重组杆状病毒转移载体pBLUEBAC4-VP60与线性化的野生型杆状病毒基因组DNA共转染对数生长期的Sf9昆虫细胞,经过三轮蚀斑纯化后,获得了克隆化的重组杆状病毒pBLUE BAC4-VP60。以重组杆状病毒感染Sf9细胞后,收获细胞培养上清和细胞裂解液上清,SDS-PAGE电泳分析显示,重组病毒pBLUEBAC4-VP60表达一分子量各为60kD左右的特异性重组蛋白,并且该重组蛋白经Westernblot检测,皆可被兔抗RHDV高免血清所识别,表明VP60蛋白基因在重组杆状病毒感染的Sf9昆虫细胞中得到了表达,并且具有与天然VP60相似的抗原性。血凝试验表明,表达的重组蛋白具有血凝特性,可以凝集人"O"型红细胞,血凝价为213。同时,该血凝性可被抗RHDV的高免血清所抑制。经电镜观察,重组病毒表达的衣壳蛋白可以在没有其他任何成分存在的条件下,在昆虫细胞内也能自然聚合成不包裹核酸的、与天然RHDV病毒粒子在物理形态上类似的病毒样颗粒(VLPs)。在与兔抗RHDV高免血清37℃作用1h后,该病毒样颗粒于电镜下观察可出现凝集成团的现象,表明该VLPs与天然RHDV在抗原性上也极为相似。 展开更多
关键词 表达 昆虫细胞 病毒样颗粒 重组杆状病毒 衣壳蛋白 VLP 重组蛋白 转移载体 高免血清 兔出血症病毒
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MS2介导的口蹄疫类病毒颗粒疫苗的研究 被引量:8
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作者 董艳美 张国广 +2 位作者 汪卫 范红军 陈亮 《厦门大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期237-243,共7页
研究表明,口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)的VP1蛋白含有关键的抗原决定簇.根据O/HL-JOC12/03猪源FMDV毒株VP1上第141~160位氨基酸序列设计引物,利用重叠延伸PCR(SOE PCR)技术将该序列插入在大肠杆菌(Escherichia coli... 研究表明,口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)的VP1蛋白含有关键的抗原决定簇.根据O/HL-JOC12/03猪源FMDV毒株VP1上第141~160位氨基酸序列设计引物,利用重叠延伸PCR(SOE PCR)技术将该序列插入在大肠杆菌(Escherichia coli)噬菌体MS2外壳蛋白基因的特定位点.然后连接到原核表达载体pET28a上,构建了重组表达质粒28a-CP-VP1,转化BL21(DE3),ITPG诱导表达得到融合表达的CP-VP1.透射电子显微镜下观察融合蛋白CP-VP1成类病毒颗粒(virus-like particles,VLPs)状.间接ELISA实验证实该蛋白能够特异地结合豚鼠抗O型FM-DV的阳性血清,30μg的CP-VP1的VLPs蛋白免疫小鼠后可以诱导其产生高效价的特异抗体.故该口蹄疫病毒抗原决定簇展示在噬菌体MS2上表面的VLPs蛋白具有开发成口蹄疫疫苗的前景. 展开更多
关键词 口蹄疫 MS2噬菌体 抗原决定簇 类病毒颗粒
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裂谷热假病毒颗粒研制及鉴定 被引量:4
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作者 邓俊花 林祥梅 +3 位作者 张永宁 冯春燕 王彩霞 吴绍强 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期135-139,共5页
裂谷热是危害严重的人畜共患病,为了给该病的分子生物学检测提供RNA阳性质控品,制备了裂谷热假病毒颗粒并进行了检测和验证。将pGEM-T-RVF质粒与假病毒载体p-MS2质粒分别进行PstI和HindⅢ双酶切,然后连接构建p-MS2-RVF重组质粒。将p-MS2... 裂谷热是危害严重的人畜共患病,为了给该病的分子生物学检测提供RNA阳性质控品,制备了裂谷热假病毒颗粒并进行了检测和验证。将pGEM-T-RVF质粒与假病毒载体p-MS2质粒分别进行PstI和HindⅢ双酶切,然后连接构建p-MS2-RVF重组质粒。将p-MS2-RVF重组菌进行表达、酶消化及盐沉淀后纯化假病毒颗粒,在特性检测的基础上,借助荧光RT-PCR方法进行鉴定。结果表明,裂谷热假病毒颗粒耐核酸酶,室温至少保持1个月,稳定,易运输;荧光RT-PCR检测表明最低可达到4.25×102copies检测限。构建的裂谷热假病毒颗粒将为裂谷热分子生物学检测提供阳性质控物质。 展开更多
关键词 裂谷热 假病毒颗粒 鉴定
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