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赤点石斑鱼诺达病毒的纯化及其衣壳蛋白的Western-blot分析 被引量：9
1
作者 黄剑南 林蠡 +2 位作者 翁少萍 冯娟 何建国 《南方水产》 2005年第5期33-36,共4页
采用差速离心,蔗糖(10%～40%,W/V)密度梯度离心和氯化铯(30%～40%,W/W)等密度梯度离心法,对赤点石斑鱼诺达病毒大亚湾株(RGCN)进行了纯化,测定计算其浮密度为1.3102～1.3243g·cm-3。通过Westernblot法检测到的病毒的结构蛋白的分... 采用差速离心,蔗糖(10%～40%,W/V)密度梯度离心和氯化铯(30%～40%,W/W)等密度梯度离心法,对赤点石斑鱼诺达病毒大亚湾株(RGCN)进行了纯化,测定计算其浮密度为1.3102～1.3243g·cm-3。通过Westernblot法检测到的病毒的结构蛋白的分子量为37和31kDa,而以31kDa的蛋白为主。 展开更多
关键词 赤点石斑鱼诺达病毒 衣壳蛋白 纯化 western-blot分析
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PRRSV重组N蛋白的抗原性分析及其特异性抗体制备 被引量：5
2
作者 夏向荣 李玉峰 姜平 《畜牧与兽医》 北大核心 2003年第9期6-8,共3页
利用大肠杆菌表达技术和亲和层析法纯化出重组PRRSV N蛋白 ,用间接ELISA法和Western blot分析 ,证明其具有较好的抗原性。将该纯化蛋白采用大剂量长程免疫法免疫家兔 ,制备了兔抗重组N蛋白抗体 ,用Western blot分析和竞争抑制试验证明... 利用大肠杆菌表达技术和亲和层析法纯化出重组PRRSV N蛋白 ,用间接ELISA法和Western blot分析 ,证明其具有较好的抗原性。将该纯化蛋白采用大剂量长程免疫法免疫家兔 ,制备了兔抗重组N蛋白抗体 ,用Western blot分析和竞争抑制试验证明其具有很高的特异性 ,ELISA效价达 1∶32 0 0以上。 展开更多
关键词 猪 PRRSV 重组N蛋白 呼吸繁殖综合征 抗原性 特异性抗体 制备 间接ELISA法 western-blot分析
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长白猪γ-干扰素基因的原核表达与分析 被引量：2
3
作者 赵英杰 徐宏军 +3 位作者 李尚波 王文成 卫广森 宣华 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期46-51,共6页
以含长白猪IFN-γ基因的质粒载体为模板,用原核表达引物扩增了长白猪IFN-γ基因,将其定向克隆至原核表达载体pET28b的EcoRⅠ和XhoⅠ位点,构建了长白猪IFN-γ基因的原核表达载体pET28b-PoIFN-γ。经酶切、PCR鉴定,表明所构建的重组质粒... 以含长白猪IFN-γ基因的质粒载体为模板,用原核表达引物扩增了长白猪IFN-γ基因,将其定向克隆至原核表达载体pET28b的EcoRⅠ和XhoⅠ位点,构建了长白猪IFN-γ基因的原核表达载体pET28b-PoIFN-γ。经酶切、PCR鉴定,表明所构建的重组质粒为特异性长白猪IFN-γ基因原核表达质粒。将该重组质粒转化大肠埃希氏菌BL21(DE3)细胞,阳性菌落筛选、SDS-PAGE分析以及Western-blotting分析表明,成功构建了表达重组猪IFN-γ的大肠埃希氏菌基因工程菌株。亚细胞定位分析表明,目的蛋白经原核表达后主要以不溶性包涵体形式存在,其他少量可溶性目的蛋白存在于细胞浆中。 展开更多
关键词 长白猪 IFN-λ 原核表达 亚细胞定位 western-blotting分析
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线粒体基质蛋白Hsp70、Hsp60的表达、纯化、鉴定及抗体制备 被引量：2
4
作者 程晓丽 李春燕 +2 位作者 连建华 齐华 刘永波 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2006年第6期1058-1060,共3页
目的建立有效的线粒体基质蛋白Hsp70、Hsp60原核细胞表达系统,获得纯度较高的Hsp70、Hsp60蛋白,并制备抗体。方法以HeLa细胞cDNA为模板扩增成熟的hsp70、hsp60DNA,插入pPRO-EX-HTb质粒,IPTG诱导B21E.coli表达,Ni2+离子螯合树脂纯化蛋白... 目的建立有效的线粒体基质蛋白Hsp70、Hsp60原核细胞表达系统,获得纯度较高的Hsp70、Hsp60蛋白,并制备抗体。方法以HeLa细胞cDNA为模板扩增成熟的hsp70、hsp60DNA,插入pPRO-EX-HTb质粒,IPTG诱导B21E.coli表达,Ni2+离子螯合树脂纯化蛋白,获取被免疫的兔抗血清,纯化后进行Western-blot鉴定。结果与结论成功构建Hsp70、Hsp60高效原核表达系统并获得特异性较好的抗体,为进一步研究线粒体基质蛋白的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 线粒体基质蛋白 热休克蛋白 表达 纯化 western-blot分析 抗体
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HBV对IFN-α受体表达及IFN-α/STAT1和IFN-α/MHC-Ⅰ信号敏感性的影响 被引量：1
5
作者 卢秋玉 陈英 +2 位作者 陈晓宇 申庆荣 秦威 《临床医学研究与实践》 2018年第31期7-9,共3页
目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)对干扰素α(IFN-α)受体表达的影响,以及对IFN-α/STAT1和IFN-α/MHC-Ⅰ信号敏感性的影响。方法以HepG2.2.15细胞、HepG2细胞及LO2细胞为细胞模型,采用流式细胞术、Western-blot检测IFN-αR1和IFN-αR2受体的... 目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)对干扰素α(IFN-α)受体表达的影响,以及对IFN-α/STAT1和IFN-α/MHC-Ⅰ信号敏感性的影响。方法以HepG2.2.15细胞、HepG2细胞及LO2细胞为细胞模型,采用流式细胞术、Western-blot检测IFN-αR1和IFN-αR2受体的表达;采用Western-blot动态分析IFN-α2b刺激肝细胞核蛋白STAT1的活化;流式细胞术检测IFN-α2b刺激肝细胞MHC-Ⅰ的水平。结果流式细胞术、Western-blot法检测结果显示,HepG2和LO2细胞中IFN-αR1和IFN-αR2受体及蛋白表达均显著高于HepG2.2.15细胞(P<0.05);3株细胞经IFN-α2b刺激后,HepG2、LO2细胞中核蛋白p-STAT1的表达显著高于HepG2.2.15细胞(P<0.05);3株细胞经IFN-α2b刺激后,MHC-Ⅰ水平在HepG2、LO2细胞中的表达较HepG2.2.15细胞更高,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 HBV的持续存在可降低IFN-αR1和IFN-αR2表达,并降低IFN-α/STAT1和IFN-α/MHC-Ⅰ信号敏感性,推测其可能是导致HBV对IFN-α产生耐药的部分机制。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒(HBV) 干扰素-α(IFN-α)受体 IFN-α/STAT1 IFN-α/MHC-Ⅰ western-blot动态分析
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温度胁迫下沙葱萤叶甲小热激蛋白基因GdHsp20.6的克隆及表达分析（英文） 被引量：3
6
作者 霍志家 周晓榕 +3 位作者 谭瑶 庞保平 单艳敏 张卓然 《植物保护学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期874-884,共11页
为明确小热激蛋白在沙葱萤叶甲Galeruca daurica应对温度胁迫中的作用,采用PCR方法克隆沙葱萤叶甲小热激蛋白基因Hsp20(GdHsp20.6)完整的开放阅读框(open reading frame,ORF)序列,应用在线软件对GdHsp20.6基因进行生物信息学分析,通过... 为明确小热激蛋白在沙葱萤叶甲Galeruca daurica应对温度胁迫中的作用,采用PCR方法克隆沙葱萤叶甲小热激蛋白基因Hsp20(GdHsp20.6)完整的开放阅读框(open reading frame,ORF)序列,应用在线软件对GdHsp20.6基因进行生物信息学分析,通过原核表达技术诱导表达及纯化其编码蛋白,并通过实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)技术分析不同温度胁迫下GdHsp20.6基因的表达量。结果显示,GdHsp20.6基因ORF序列长度为543 bp,编码180个氨基酸,预测分子量为20.6 kD,无跨膜区和信号肽。GdHsp20.6氨基酸序列有高度保守的α-结构域。GdHsp20.6氨基酸序列与其它鞘翅目昆虫的Hsp20氨基酸序列有较高的一致性,其中与花绒寄甲Dastarcus helophoroides的Hsp20.99氨基酸序列的一致性最高,为63%。GdHsp20.6基因在大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)细胞系中成功表达,经异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(isopropyl-β-d-thiogalactoside,IPTG)诱导后GdHsp20.6蛋白成功表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)和Western-blot分析表明融合蛋白大小与预测大小一致,并纯化获得了纯度较高的目的蛋白GdHsp20.6。低温(-10~5℃)和高温(35~40℃)处理1 h以及处理后25℃恢复30 min均能诱导GdHsp20.6基因表达上调,并且0℃处理30~120 min也能诱导GdHsp20.6基因表达上调。表明GdHsp20.6基因在沙葱萤叶甲应对低温和高温胁迫中可能起着重要作用。 展开更多
关键词 沙葱萤叶甲 小热激蛋白 温度胁迫 表达谱 western-blot分析
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应用荧光显微镜技术筛选高表达布鲁杆菌Omp31蛋白单克隆抗体的研究
7
作者 薄惠 张强 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第6期180-183,共4页
为了制备布鲁杆菌外膜蛋白Omp31的单克隆抗体,试验采用荧光显微镜和ELISA相结合的方法筛选单克隆抗体。结果表明:试验成功筛选出3株外膜蛋白Omp31单克隆抗体,经Westernblot分析这3株单克隆抗体均可与Omp31蛋白发生免疫反应。说明应用荧... 为了制备布鲁杆菌外膜蛋白Omp31的单克隆抗体,试验采用荧光显微镜和ELISA相结合的方法筛选单克隆抗体。结果表明:试验成功筛选出3株外膜蛋白Omp31单克隆抗体,经Westernblot分析这3株单克隆抗体均可与Omp31蛋白发生免疫反应。说明应用荧光显微镜技术可以筛选出效价较高的单克隆抗体。 展开更多
关键词 布鲁杆菌 布鲁菌病 外膜蛋白Omp31 荧光显微镜 ELISA western-blot分析
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重组奶牛NPY成熟肽基因在毕赤酵母中的高效表达
8
作者 吴殿君 曹永国 +6 位作者 白鸽 王振全 刘磊 王建国 谢闪闪 刘国文 周昌芳 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第4期45-47,共3页
为了获得可用于临床前研究的具有生物学活性的重组奶牛神经肽Y(NPY)成熟肽,试验从牛的下丘脑组织中提取总RNA,利用RT-PCR技术克隆出NPY成熟肽基因,并在其N末端加上NPY(24 bp)的Flag标签,将该片段以正确的阅读框插入载体pPICZαA中,构建... 为了获得可用于临床前研究的具有生物学活性的重组奶牛神经肽Y(NPY)成熟肽,试验从牛的下丘脑组织中提取总RNA,利用RT-PCR技术克隆出NPY成熟肽基因,并在其N末端加上NPY(24 bp)的Flag标签,将该片段以正确的阅读框插入载体pPICZαA中,构建表达质粒pPICZαA-Flag-NPY,经线性化电转于毕赤酵母GS115,ZeocinTM抗生素筛选高拷贝重组子,重组子GS115/pPICZαA-Flag-NPY经甲醇诱导,三羟甲基氨基甘氨酸-SDS-PAGE(Tricine-SDS-PAGE)检测表达上清液,约在4.5 ku处有1条明显的蛋白带,与预期分子质量相符,经免疫印迹分析(W estern-blot)鉴定,结果与抗Flag的M2抗体发生特异性免疫反应。说明重组奶牛NPY成熟肽基因在毕赤酵母GS115中成功表达。 展开更多
关键词 奶牛 神经肽Y(NPY) 毕赤酵母表达系统 三羟甲基氨基甘氨酸-SDS-PAGE(Tricine-SDS-PAGE) 免疫印迹分析(western-blot)
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