aiiA基因在植物软腐病研究中的应用进展 被引量：5

1

作者 韩丽伟 屈淑平 崔崇士 《中国蔬菜》 北大核心 2011年第8期1-6,共6页

N-酰基高丝氨酸内酯(N-acyl-homoserine lactones,AHLs)是一类广泛存在于许多革兰氏阴性细菌群体感应系统中的信号分子,又称作自体诱导物(Autoinducer,AI)。aiiA基因编码的AiiA蛋白能降解细菌产生的AHLs信号分子,干扰该信号分子参与细... N-酰基高丝氨酸内酯(N-acyl-homoserine lactones,AHLs)是一类广泛存在于许多革兰氏阴性细菌群体感应系统中的信号分子,又称作自体诱导物(Autoinducer,AI)。aiiA基因编码的AiiA蛋白能降解细菌产生的AHLs信号分子,干扰该信号分子参与细菌群体感应的调控过程,抑制多种植物病原菌致病基因的诱导表达,从而减轻或消除病原菌的致病性。本文介绍了aiiA基因、AiiA蛋白的研究情况,以及aiiA基因在抗软腐病工程菌和转基因植物研究上的应用现状,并提出了提高植物抗软腐病的研究方向。 展开更多

关键词 aiia基因 AHLs aiia蛋白 软腐病

下载PDF 职称材料

不同来源的苏云金芽孢杆菌aiiA基因表达及其抗病性分析 被引量：17

2

作者 杨梅 姚帆 +5 位作者 黄勤清 黄天培 周志宏 关夏玉 黄志鹏 关雄 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期373-381,共9页

苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)aiiA基因所编码的AiiA蛋白是一种内酯酶,可以降解N-乙酰高丝氨酸内酯(N-acyl-homoserine lactones,AHLs),从而减弱致病菌产生的危害.本研究克隆了6株不同来源的苏云金芽孢杆菌aiiA基因,并对... 苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)aiiA基因所编码的AiiA蛋白是一种内酯酶,可以降解N-乙酰高丝氨酸内酯(N-acyl-homoserine lactones,AHLs),从而减弱致病菌产生的危害.本研究克隆了6株不同来源的苏云金芽孢杆菌aiiA基因,并对来自于苔藓(LLB15)和土壤(LLS9)的BtaiiA基因进行了生物信息学分析.结果表明,AiiA-B15分子量为27.97×103,等电点为4.59;AiiA-S9分子量为28.14×103,等电点为4.32,两者都是亲水性蛋白.AiiA蛋白具有很高的保守性,AiiA-B15和AiiA-S9同源性为90%.进化树结果表明,AiiA-B15与Bacillus thuringiensis subsp.kyushuensis进化距离最近,AiiA-S9与Bacillus cereus进化距离最近.将aiiA-B15基因克隆到pGEX-4T-3表达载体中,构建重组质粒pGEXaiiA-B15,IPTG诱导后可大量表达融合蛋白.对表达的条件进行优化.结果表明,0.6mmol/LIPTG,30℃下诱导3h为最佳诱导条件.致病性检测表明,该融合蛋白对胡萝卜欧文氏软腐病菌具有较强的抗病作用. 展开更多

关键词 苏云金芽孢杆菌 aiia基因 空间结构 融合表达

下载PDF 职称材料

AiiA融合蛋白包涵体变性和复性的研究 被引量：9

3

作者 杨梅 郭丽清 +4 位作者 关夏玉 张峰 林彬辉 陈新华 黄志鹏 《福建师范大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期76-79,共4页

通过IPTG诱导含有pGEXaiiA-B15质粒的工程菌使其大量表达AiiA融合蛋白.由于所表达的融合蛋白多为不可溶的包涵体,须经分离、变性溶解,再经过一个合适的复性过程才能实现变性蛋白的正确折叠,得到具有生物活性的蛋白.通过含N-十二烷基肌... 通过IPTG诱导含有pGEXaiiA-B15质粒的工程菌使其大量表达AiiA融合蛋白.由于所表达的融合蛋白多为不可溶的包涵体,须经分离、变性溶解,再经过一个合适的复性过程才能实现变性蛋白的正确折叠,得到具有生物活性的蛋白.通过含N-十二烷基肌氨酸钠的缓冲液A溶液及尿素等变性剂使包涵体溶解,磷酸盐缓冲液透析复性.SDS-PAGE电泳表明包涵体已由不可溶转化成可溶的蛋白.抑菌试验证明复性后的AiiA蛋白对胡萝卜欧文氏软腐病菌引起的马铃薯软腐病有较明显的抑制作用. 展开更多

关键词 苏云金芽孢杆菌 aiia蛋白 变性 复性

下载PDF 职称材料

AiiA蛋白的可溶性表达及其抗菌活性研究 被引量：9

4

作者 杨梅 张锋 +4 位作者 林彬辉 苏新华 郭丽清 黄志鹏 关雄 《分子细胞生物学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2008年第6期465-472,共8页

AHLs是革兰氏阴性细菌在增殖过程中产生的一类信号分子,与其致病性密切相关。AiiA蛋白作为一种胞内解酯酶。能水解致病菌产生的AHLs分子,使内酯环开环后不能再激活某些胞外酶的表达,从而极大地减弱了细菌的致病性。本研究从苏云金芽孢杆... AHLs是革兰氏阴性细菌在增殖过程中产生的一类信号分子,与其致病性密切相关。AiiA蛋白作为一种胞内解酯酶。能水解致病菌产生的AHLs分子,使内酯环开环后不能再激活某些胞外酶的表达,从而极大地减弱了细菌的致病性。本研究从苏云金芽孢杆菌LLB15中分离编码aiiA基因的质粒DNA,用PCR方法克隆AiiA基因,并利用pET载体构建6-His融合表达质粒pET29a-aiiA,转化E.coli BL21(DE3)菌株,并筛选得到E.coli BL21(DE3)-pET29a-aiiA工程菌。在20℃的低温和0.8 mmol/L IPTG条件下,经25 h的诱导表达,获得了54.4μg/mL可溶性AiiA蛋白。通过镍柱亲和层析,在国内外首次纯化了带6-His标记的AiiA蛋白。水解活性和抗病性检测表明。该蛋白能水解AHLs分子。对胡萝卜欧文氏软腐病菌具有较强的抗病作用。 展开更多

关键词 aiia基因 可溶性表达分离纯化 植物病害防治

下载PDF 职称材料

蜡质芽孢杆菌aiiA基因的克隆及融合表达 被引量：9

5

作者 黄天培 杨梅 +4 位作者 姚帆 黄张敏 俞晓敏 黄志鹏 黄必旺 《福建农林大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2006年第3期292-297,共6页

设计一对可扩增aiiA基因完整的开放阅读框的简并引物对aiiA1和aiiA2,通过PCR技术对3株蜡质芽孢杆菌(Bc)的aiiA基因进行检测.结果表明,它们均含有aiiA基因.利用pMD18-T克隆载体直接从GP7菌株的PCR产物中克隆了aiiA基因.测序结果表明,该基... 设计一对可扩增aiiA基因完整的开放阅读框的简并引物对aiiA1和aiiA2,通过PCR技术对3株蜡质芽孢杆菌(Bc)的aiiA基因进行检测.结果表明,它们均含有aiiA基因.利用pMD18-T克隆载体直接从GP7菌株的PCR产物中克隆了aiiA基因.测序结果表明,该基因(GenBank登录号:AY943831)由753个碱基组成,编码含有250个氨基酸残基的蛋白质.该蛋白质推测的分子质量为28 ku,等电点约4.235.核苷酸序列的BLAST分析结果表明,与之同源性较高的基因均为Bc组aiiA基因(87%-99%).在氨基酸序列多重比较的基础上,应用PHYLIP软件构建了A iiA蛋白的系统发育树.此外,利用原核融合表达载体pMXB10初步研究了A iiA、几丁质结合蛋白(CBD)及Inte in融合蛋白诱导表达的情况. 展开更多

关键词 蜡质芽孢杆菌(Bc) aiia 基因克隆 序列分析 生物信息学 系统发育树 融合蛋白

下载PDF 职称材料

苏云金芽胞杆菌AiiA蛋白对魔芋软腐病菌的抗病活性 被引量：19

6

作者 周燚 孙明 喻子牛 《武汉大学学报（理学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期761-764,共4页

AiiA蛋白通过破坏病原菌的信号分子来阻断病原菌的群体感应调节系统,达到抗病的目的,是一种新型的抗病蛋白.根据蜡状芽胞杆菌ATCC14579基因组中aiiA序列设计引物,从苏云金芽胞杆菌中成功扩增出aiiA基因,其ORF为753bp,测序后经blast检测... AiiA蛋白通过破坏病原菌的信号分子来阻断病原菌的群体感应调节系统,达到抗病的目的,是一种新型的抗病蛋白.根据蜡状芽胞杆菌ATCC14579基因组中aiiA序列设计引物,从苏云金芽胞杆菌中成功扩增出aiiA基因,其ORF为753bp,测序后经blast检测与已发表的序列相似性均在95%以上.将此基因克隆到pET28a表达载体中,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,超量表达的蛋白在菌体中以包涵体形式存在,纯化的AiiA蛋白经SDS PAGE电泳检测,表达产物分子量为28×103,致病性测定表明该蛋白对魔芋软腐病菌CZY具有较强的抗病活性. 展开更多

关键词 苏云金芽胞杆菌 aiia蛋白 魔芋软腐病菌CZY

下载PDF 职称材料

重组AiiA蛋白可溶性表达及发酵条件优化 被引量：6

7

作者 杨彩云 杜慈 +3 位作者 黄平 温真 毛惠民 杨梅 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期1219-1227,共9页

通过摇瓶培养确定重组工程菌E.coli BL21(DE3)-pET29a-aiiA表达AiiA蛋白可溶性表达的最优化条件,考察以牛肉膏蛋白胨为基础培养基添加不同种类的碳源、不同浓度的磷酸钾缓冲液(pH7.0)、微量元素、乙酸以及调整牛肉膏蛋白胨的比值对AiiA... 通过摇瓶培养确定重组工程菌E.coli BL21(DE3)-pET29a-aiiA表达AiiA蛋白可溶性表达的最优化条件,考察以牛肉膏蛋白胨为基础培养基添加不同种类的碳源、不同浓度的磷酸钾缓冲液(pH7.0)、微量元素、乙酸以及调整牛肉膏蛋白胨的比值对AiiA蛋白可溶性表达的影响,并用15 L发酵罐进行补料分批发酵,确定高密度发酵工艺条件。结果表明:优化发酵培养基为蔗糖10 g/L,牛肉膏7.8 g/L,蛋白胨31.2 g/L,NaCl 5 g/L,K2 HPO4.3H2 O 14 g/L,KH2 PO4 5.3 g/L,4 mL/L微量元素。优化后AiiA蛋白可溶性达4.31 mg/mL。在15 L发酵罐补料分批发酵培养中,诱导24 h时,发酵菌OD600达到18.5,可溶性蛋白表达量5.9 mg/mL,占AiiA总蛋白50.7%,实现了扩大培养。 展开更多

关键词 aiia蛋白 补料分批发酵 条件优化

下载PDF 职称材料

含苏云金芽孢杆菌aiiA基因的重组荧光假单胞菌的构建及对软腐病的抗病活性 被引量：6

8

作者 张霞 胡玉琴 +3 位作者 贾振华 张杰 马宏 宋水山 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2006年第4期13-16,共4页

aiiA基因编码的AiiA蛋白能降解细菌群体感应系统中的信号分子N_酰基高丝氨酸内酯AHLs,从而减弱致病菌对植物的危害。本文将aiiA基因转入到植物根际促生细菌荧光假单胞菌P303中,构建成防治植物细菌和真菌病害的工程菌P303-ss10。通过PCR... aiiA基因编码的AiiA蛋白能降解细菌群体感应系统中的信号分子N_酰基高丝氨酸内酯AHLs,从而减弱致病菌对植物的危害。本文将aiiA基因转入到植物根际促生细菌荧光假单胞菌P303中,构建成防治植物细菌和真菌病害的工程菌P303-ss10。通过PCR和RT-PCR鉴定,均获得0.8 kb的目的片断,表明aiiA基因已经导入P303中。室内平板抑菌试验表明,该工程菌保留了出发菌株对多种植物病原真菌的抑制作用;室内离体试验表明该工程菌对马铃薯软腐病和大白菜软腐病都有一定的抑制作用。 展开更多

关键词 荧光假单胞菌工程菌 群体感应 aiia基因 胡萝卜软腐欧文氏杆菌 细菌病害防治

下载PDF 职称材料

苏云金芽孢杆菌aiiA基因载体构建及石斛兰转化 被引量：6

9

作者 潘丽晶 张妙彬 +2 位作者 梁擎中 范干群 程萍 《中山大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期67-71,共5页

细菌性软腐病是石斛兰及其它兰花栽培和生产中的一大危害。苏云金芽孢杆菌Bacillus thuringiensis(Bt)中含有aiiA基因,该基因转入一些植物可赋予植物表现出软腐病抗性。从Bt菌中克隆出aiiA基因,并装载入植物表达载体pCAMBIA1301,构建出... 细菌性软腐病是石斛兰及其它兰花栽培和生产中的一大危害。苏云金芽孢杆菌Bacillus thuringiensis(Bt)中含有aiiA基因,该基因转入一些植物可赋予植物表现出软腐病抗性。从Bt菌中克隆出aiiA基因,并装载入植物表达载体pCAMBIA1301,构建出可用于转入石斛兰的pSAN载体;首次利用根癌农杆菌EHA105将pSAN载体转入石斛兰,并获得潮霉素抗性苗。这些抗性苗经GUS组织化学染色和PCR检测证实为转基因苗,这将为获得具有软腐病抗性的石斛兰品种打下基础。 展开更多

关键词 软腐病 aiia基因 载体构建 根癌农杆菌 石斛兰转化

下载PDF 职称材料

带cry3 Aa启动子的aiiA基因在苏云金芽胞杆菌中的表达 被引量：21

10

作者 朱晨光 孙明 喻子牛 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期397-401,共5页

N 乙酰高丝氨酸内酯 (N acyl homoserinelactones,AHLs) ,是一类数量感知 (Quorum sensing)系统中的信号分子 ,它参与诱导调控许多植物病原菌致病基因的表达。苏云金芽胞杆菌的AiiA蛋白能降解这类AHLs分子 ,进而可减弱病原菌致病基因表... N 乙酰高丝氨酸内酯 (N acyl homoserinelactones,AHLs) ,是一类数量感知 (Quorum sensing)系统中的信号分子 ,它参与诱导调控许多植物病原菌致病基因的表达。苏云金芽胞杆菌的AiiA蛋白能降解这类AHLs分子 ,进而可减弱病原菌致病基因表达产生的病害。苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白基因cry3Aa的启动子是一种不依赖芽胞形成的启动子 ,它相对于其它cry类基因的启动子有启动基因转录时间早 ,转录时间长的优点。通过重叠延伸PCR ,用杀虫晶体蛋白基因cry3Aa启动子替换编码AiiA蛋白的基因aiiA自身的启动子 ,构建了融合基因pro3A aiiA。将融合基因装入穿梭载体pHT3 0 4的BamHI SphI位点 ,得到重组质粒pBMB686并转化苏云金芽胞杆菌无晶体突变株BMB171,重组菌株BMB686的AiiA蛋白表达量在各个生长时期均高于对照菌株 。 展开更多

关键词 cry3Aa启动子 aiia基因 苏云金芽胞杆菌 表达 N-乙酰高丝氨酸内酯 杀虫晶体蛋白

下载PDF 职称材料

在苏云金芽胞杆菌中高效和稳定表达AiiA蛋白 被引量：6

11

作者 吴怀光 叶伟星 +1 位作者 喻子牛 孙明 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期2221-2226,共6页

【目的】摸索提高AiiA蛋白对AHLs分子的降解活性和对胡萝卜软腐欧文氏菌感染马铃薯产生病害的抑制能力的方法。【方法】苏云金芽胞杆菌的AiiA蛋白是一种胞内蛋白,能降解参与诱导调控多种植物病原菌致病基因表达的N-乙酰高丝氨酸内酯信... 【目的】摸索提高AiiA蛋白对AHLs分子的降解活性和对胡萝卜软腐欧文氏菌感染马铃薯产生病害的抑制能力的方法。【方法】苏云金芽胞杆菌的AiiA蛋白是一种胞内蛋白,能降解参与诱导调控多种植物病原菌致病基因表达的N-乙酰高丝氨酸内酯信号分子。本文采用两种方式来提高AiiA蛋白的活性,即利用苏云金芽胞杆菌S-层蛋白在细胞表面表达该蛋白以及利用苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白基因cry3Aa启动子来提高aiiA基因的表达量。为此构建该蛋白基因与细胞表面S-层蛋白的锚定区结合而成的融合蛋白基因slh-aiiA以及带有基因cry3Aa启动子的融合基因pro3A-aiiA。为了提高表达的稳定性以及去掉重组菌中非苏云金芽胞杆菌片段,本文构建了解离载体pBMB5401,并将上述两个融合基因单独或同时装入解离载体pBMB5401,分别得到重组质粒pBMBcaiiA,pBMB3aiiA和pBMB3439。转化苏云金芽胞杆菌无晶体突变株BMB171,随后导入温度敏感型辅助质粒pEG922,重组质粒在整合酶的作用下发生体内重组,消除了抗性基因等非必需片段。【结果】得到3个重组菌BMBcaiiAR,BMB3aiiAR和BMB3439R,在无抗性选择压力下的稳定性均在90%以上。融合蛋白SLH-AiiA及pro3A-AiiA在解离后的重组菌中得到表达,具有对AHLs分子的降解活性和对胡萝卜软腐欧文氏菌感染马铃薯产生病害的抑制能力。【结论】在苏云金芽胞杆菌中高效和稳定表达AiiA蛋白,可增强其对AHLs分子的降解活性和对胡萝卜软腐欧文氏菌感染马铃薯产生病害的抑制能力,当同时结合两种方式来表达AiiA蛋白时效果最好。 展开更多

关键词 苏云金芽胞杆菌 aiia蛋白 融合蛋白 解离载体

下载PDF 职称材料

重组工程菌E.coli BL21(DE3)-pET29a-aiiA可溶性AiiA蛋白的发酵条件优化 被引量：3

12

作者 杨梅 林丽玉 +1 位作者 温真 杨彩云 《福建师范大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期97-103,共7页

通过对工程菌E.coli BL21(DE3)-pET29a-aiiA的摇瓶发酵培养条件进行优化,确定了AiiA蛋白可溶性表达的最佳发酵培养基为牛肉膏蛋白胨.目的蛋白可溶性表达的最佳诱导条件为:IPTG浓度0.6 mmol/L,诱导初始OD600为0.5,诱导时间为20 h,温度20... 通过对工程菌E.coli BL21(DE3)-pET29a-aiiA的摇瓶发酵培养条件进行优化,确定了AiiA蛋白可溶性表达的最佳发酵培养基为牛肉膏蛋白胨.目的蛋白可溶性表达的最佳诱导条件为:IPTG浓度0.6 mmol/L,诱导初始OD600为0.5,诱导时间为20 h,温度20℃,pH为7.0,微量元素Na2HPO420 mmol/L,250 mL三角瓶的装液量为70 mL.优化前可溶性AiiA蛋白的相对含量为2.23 mg/mL,占总目的蛋白的31.4%,优化后达到4.54 mg/mL,占总目的蛋白的60.3%,大大提高了目的蛋白的可溶性表达. 展开更多

关键词 aiia蛋白 发酵 条件优化

下载PDF 职称材料

枯草芽孢杆菌新抗病基因aiiA的克隆 被引量：4

13

作者 黄天培 姚帆 +4 位作者 潘洁茹 邱思鑫 杨梅 黄必旺 黄志鹏 《福建农林大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2007年第3期269-273,共5页

枯草芽孢杆菌内生亚种BS-1aiiA基因测序结果表明,该基因(GenBank登录号DQ000640)由753个碱基组成,其编码的蛋白质含有250个氨基酸残基,与10个已报道的具有减弱欧文氏菌胡萝卜亚种致病力的AiiA蛋白酶氨基酸序列总的相似性为82%.它们均含... 枯草芽孢杆菌内生亚种BS-1aiiA基因测序结果表明,该基因(GenBank登录号DQ000640)由753个碱基组成,其编码的蛋白质含有250个氨基酸残基,与10个已报道的具有减弱欧文氏菌胡萝卜亚种致病力的AiiA蛋白酶氨基酸序列总的相似性为82%.它们均含有相同的氨基酸序列保守区.Signal P分析结果显示,BS-1 AiiA没有信号肽序列,并利用Swiss-model预测、分析了BS-1 AiiA蛋白的三维结构. 展开更多

关键词 枯草芽孢杆菌 群体密度感应 aiia基因 同源关系树 同源建模

下载PDF 职称材料

苏云金芽胞杆菌中aiiA基因密码子偏好性分析 被引量：6

14

作者 曾世涌 苏小惠 +2 位作者 谢盼盼 毛惠民 杨梅 《生物技术进展》 2013年第4期257-263,共7页

aiiA基因指导表达的AiiA蛋白是一类能水解细菌群体感应信号分子内酯键的内酯酶。本研究使用CodonW、CUSP和CHIPS等相关程序对苏云金芽胞杆菌中aiiA基因的密码子使用情况进行分析,比较了aiiA基因与大肠杆菌、苏云金芽胞杆菌、枯草芽胞杆... aiiA基因指导表达的AiiA蛋白是一类能水解细菌群体感应信号分子内酯键的内酯酶。本研究使用CodonW、CUSP和CHIPS等相关程序对苏云金芽胞杆菌中aiiA基因的密码子使用情况进行分析,比较了aiiA基因与大肠杆菌、苏云金芽胞杆菌、枯草芽胞杆菌以及毕赤酵母的密码子偏好性。结果表明,aiiA基因偏好使用以A、T结尾的密码子;aiiA基因的密码子用法与大肠杆菌、苏云金芽胞杆菌、枯草芽胞杆菌和毕赤酵母的基因组密码子用法都有不同程度的偏好差异,其中与毕赤酵母的密码子用法差异最大;比较了aiiA基因分别以苏云金芽胞杆菌、大肠杆菌、枯草芽胞杆菌及毕赤酵母为宿主时密码子使用频率,发现都含有不同程度的低频密码子聚集现象,如果要在上述几种表达系统中实现aiiA基因的高效表达则需对aiiA基因的部分密码子进行优化改造。 展开更多

关键词 苏云金芽胞杆菌 aiia基因 密码子偏好性 密码子优化 异源表达

下载PDF 职称材料

苏云金芽孢杆菌aiiA基因的克隆及植物表达载体构建 被引量：2

15

作者 欧阳乐军 沙月娥 +2 位作者 郭耀权 邓玉金 曾富华 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第21期135-137,140,共4页

N-酰基高丝氨酸内酯(N-acyl-homoserine lactones,AHLs)是革兰氏阴性细菌致病过程中的关键信号分子,芽孢杆菌中广泛存在的aiiA基因编码AHL-Lactonase能够水解信号分子AHLs。利用PCR方法从苏云金芽孢杆菌中克隆了aiiA基因,序列分析表明... N-酰基高丝氨酸内酯(N-acyl-homoserine lactones,AHLs)是革兰氏阴性细菌致病过程中的关键信号分子,芽孢杆菌中广泛存在的aiiA基因编码AHL-Lactonase能够水解信号分子AHLs。利用PCR方法从苏云金芽孢杆菌中克隆了aiiA基因,序列分析表明该基因由753个碱基组成,编码含有250个氨基酸残基的蛋白质,核苷酸序列与已报道aiiA的同源性为89%～97%。将该基因连接到植物表达载体pCAMBIA1301中,成功构建了aiiA基因的植物表达载体pCAM-aiiA,为进一步通过转基因技术研究该基因的功能奠定了基础。 展开更多

关键词 苏云金芽孢杆菌 aiia基因 群体感应 植物表达载体

下载PDF 职称材料

苏云金芽孢杆菌aiiA基因的克隆与结构分析

16

作者 杨梅 林彬辉 +5 位作者 关夏玉 郭丽清 姚帆 黄天培 黄志鹏 关雄 《福建师范大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期85-90,共6页

分别克隆了叶片、苔藓和土壤中分离的Bacillus thuringiensis的aiiA基因,并对其编码的蛋白AiiA-P28、AiiA-B19和AiiA-S2进行了理化特征分析、进化树分析和空间结构的研究.结果表明AiiA-P28、AiiA-B19和AiiA-S2分子质量均为28 ku;等电点... 分别克隆了叶片、苔藓和土壤中分离的Bacillus thuringiensis的aiiA基因,并对其编码的蛋白AiiA-P28、AiiA-B19和AiiA-S2进行了理化特征分析、进化树分析和空间结构的研究.结果表明AiiA-P28、AiiA-B19和AiiA-S2分子质量均为28 ku;等电点分别为4.77、4.77、4.93;三者均为亲水性蛋白,具有很高的同源性.进化树分析结果表明叶片中分离的AiiA-P28与苔藓中分离的AiiA-B19进化距离较近,而土壤中分离的AiiA-S2则与它们的进化距离较远.三维结构分析表明,AiiA蛋白具有典型的αβ/βα折叠的空间结构. 展开更多

关键词 苏云金芽孢杆菌 aiia基因 进化树分析 空间结构

下载PDF 职称材料

aiiA基因原核表达载体的构建与表达

17

作者 欧阳乐军 梁卓玲 +2 位作者 黄真池 沙月娥 曾富华 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2014年第10期141-146,共6页

【目的】构建aiiA基因的原核表达载体,并进行诱导表达,检测aiiA蛋白的抗病性,为进一步通过转基因技术培育转aiiA基因植株奠定基础。【方法】从pMDTM19-T Vector+aiiA质粒中酶切获得aiiA基因,将其与pGEX-4T-1表达载体连接构建重组原核表... 【目的】构建aiiA基因的原核表达载体,并进行诱导表达,检测aiiA蛋白的抗病性,为进一步通过转基因技术培育转aiiA基因植株奠定基础。【方法】从pMDTM19-T Vector+aiiA质粒中酶切获得aiiA基因,将其与pGEX-4T-1表达载体连接构建重组原核表达载体pGEX-4T-1+aiiA,经双酶切及测序鉴定后,进行诱导表达,并对表达产物的功能进行鉴定。【结果】双酶切与PCR检测结果表明,重组原核表达载体pGEX-4T-1+aiiA构建成功。表达条件优化结果表明,在25℃下用0.2mmol/L IPTG诱导9h,aiiA蛋白的表达量最高。aiiA重组蛋白抑菌试验结果表明,其能够降解细菌的AHLs信号分子,猝灭细菌的群体感应,明显减弱病菌的致病力。转aiiA基因尾巨桉抗性检测结果表明,转基因植株抗性明显增强,表现为发病时间延迟,病情指数降低,评价为中等抗病水平。【结论】成功构建了aiiA基因原核表达载体,其诱导表达产物能猝灭细菌的群体感应,明显减弱病菌的致病力。 展开更多

关键词 群体感应 aiia基因 N-酰基高丝氨酸内酯 N-酰基高丝氨酸内酯酶

下载PDF 职称材料

含P43启动子aiiA基因重组枯草芽孢杆菌的构建与表达

18

作者 陈嘉蔚 赵培静 +5 位作者 邓锦波 李姣清 明飞平 张淑霞 卢悄佳 张玲华 《广东农业科学》 CAS 2018年第11期21-27,共7页

细菌群体可以通过响应N-酰基高丝氨酸内酯(N-acyl-homoserine lactones, AHLs)激活某些致病基因的表达,而芽胞杆菌可以表达AiiA(Autoinducer inactivation)蛋白降解病原菌的AHLs从而减低损害。为构建外源高效表达AiiA蛋白的工程菌,利用A... 细菌群体可以通过响应N-酰基高丝氨酸内酯(N-acyl-homoserine lactones, AHLs)激活某些致病基因的表达,而芽胞杆菌可以表达AiiA(Autoinducer inactivation)蛋白降解病原菌的AHLs从而减低损害。为构建外源高效表达AiiA蛋白的工程菌,利用AiiA蛋白降解AHLs分子来防治细菌性植物病害,通过搭桥PCR扩增P43-aiiA联合片段,连接pHY300PLK载体,构建P43-aiiA-C11枯草芽孢杆菌菌株,验证其AiiA酶活。结果成功克隆得到P43-aiiA片段,经鉴定P43-aiiA-pHY300PLK成功转入C11菌株,通过AiiA活性检测,野生菌株组指示菌全部变蓝,3个平行实验组的蓝色指示菌至条状培养基中间变浅,至下端全部为白色菌落,说明实验所构建的P43-aiiA-C11菌株具有高于野生型C11菌株的淬灭酶活性,能明显降解信号分子。与野生型菌株相比,构建菌株P43-aiiA-C11表达产物具有显著降解AHLs的能力,研究结果为推动植物病害防治提供了重要理论基础。 展开更多

关键词 P43启动子 aiia基因 群体感应 枯草芽孢杆菌

下载PDF 职称材料

苏云金芽胞杆菌抗软腐病aiiA基因转花魔芋研究 被引量：19

19

作者 柴鑫莉 周盈 +5 位作者 林拥军 周燚 阮丽芳 邹玉兰 喻子牛 孙明 《分子植物育种》 CAS CSCD 2007年第5期613-618,共6页

采用农杆菌介导的遗传转化方法,将来自苏云金芽胞杆菌经密码子优化的人工合成酰基高丝氨酸环内酯酶aiiA基因导入花魔芋,以提高魔芋抗软腐病的能力。以花魔芋的茎为外植体,通过与含有植物双元表达载体pU1301的农杆菌EHA105共培养,将aiiA... 采用农杆菌介导的遗传转化方法,将来自苏云金芽胞杆菌经密码子优化的人工合成酰基高丝氨酸环内酯酶aiiA基因导入花魔芋,以提高魔芋抗软腐病的能力。以花魔芋的茎为外植体,通过与含有植物双元表达载体pU1301的农杆菌EHA105共培养,将aiiA基因导入魔芋基因组。经过潮霉素两次筛选,得到9块独立的抗性愈伤组织,经分化,生根,移入温室盆栽成活的抗性再生苗34株。对不同抗性愈伤来源的T0代再生苗进行PCR检测得到的阳性植株比例为62.7%,斑点杂交进一步确认外源aiiA基因已成功地整合到魔芋基因组中。Western杂交显示,aiiA基因在魔芋植株中能正常表达,其最高表达量占魔芋叶片总可溶蛋白的0.02%～0.06%。酰基高丝氨酸环内酯酶活性检测表明转基因魔芋叶片的蛋白可以降解酰基高丝氨酸环内酯信号分子。 展开更多

关键词 花魔芋 农杆菌 酰基高丝氨酸环内酯基因(aiia基因)

下载PDF 职称材料

表达aiiA基因多黏芽胞杆菌工程菌构建与功能分析 被引量：2

20

作者 陈珺君 刘晓艳 +1 位作者 闵勇 杨自文 《中国生物防治学报》 CSCD 北大核心 2018年第3期398-406,共9页

AiiA蛋白能够专一性地水解革兰氏阴性菌分泌的信号分子,从而抑制其致病基因的表达,减弱致病性。根据NCBI上公布的蜡状芽胞杆菌ATCC14579的aiiA序列设计引物,从苏云金芽胞杆菌Bacillus thuringiensis NBIN-861中扩增得到aiiA基因(GenBan... AiiA蛋白能够专一性地水解革兰氏阴性菌分泌的信号分子,从而抑制其致病基因的表达,减弱致病性。根据NCBI上公布的蜡状芽胞杆菌ATCC14579的aiiA序列设计引物,从苏云金芽胞杆菌Bacillus thuringiensis NBIN-861中扩增得到aiiA基因(GenBank登录号:MG704113),全长基因约750 bp。将aiiA基因插入大肠杆菌表达载体pET-28a和芽胞杆菌表达载体pBMB1A中,构建重组表达载体pETaiiA和pBMaiiA,pETaiiA转化大肠杆菌BL21(DE3),pBMaiiA转化多黏类芽胞杆菌NR1,获得重组工程菌BLaiiA和BPaiiA。SDS-PAGE和蛋白质谱鉴定表明AiiA蛋白均成功表达,利用指示菌紫色杆菌CV026检测发现目的蛋白具有水解N-酰基高丝氨酸内酯活性。其中纯化的AiiA蛋白(1.13 mg/mL)和重组菌BPaiiA浓缩的发酵上清液中的AiiA蛋白活性较高(透明圈直径分别为16和18 mm),马铃薯致病性试验和抑菌试验结果表明该蛋白对胡萝卜欧文氏菌具有一定的抗病活性,但不具有抑菌活性。多黏芽胞杆菌NR1和重组菌BPaiiA发酵产生的抑菌物质含量均为1.2%～1.3%,具有良好的抑菌效果。本研究为构建更有效的生物防治菌株奠定了理论基础。 展开更多

关键词 多黏芽胞杆菌 aiia蛋白 基因表达

下载PDF 职称材料