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Streptomyces sp.Tü 4128中新型抗生素bagremycins抗性基因bagJ的研究
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作者 张玉琛 吴海珍 +3 位作者 鞠诚 祁双双 叶江 张惠展 《华东理工大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期184-192,共9页
通过框内敲除鉴定了链霉菌Streptomyces sp.Tü4128中基因bagJ的功能。HPLC结果表明,敲除基因bagJ导致抗生素生产水平大幅降低;回补菌株恢复了抗生素的生产;过表达菌株大幅提高了抗生素的产量,证明基因bagJ在新型抗生素bagremycins... 通过框内敲除鉴定了链霉菌Streptomyces sp.Tü4128中基因bagJ的功能。HPLC结果表明,敲除基因bagJ导致抗生素生产水平大幅降低;回补菌株恢复了抗生素的生产;过表达菌株大幅提高了抗生素的产量,证明基因bagJ在新型抗生素bagremycins的生物合成中必不可少。抑菌圈实验表明基因bagJ敲除菌株较野生菌株对bagremycins更加敏感;BagJ在Streptomyces lividans TK64中异源表达后使该菌株对bagremycins的耐受性增强,证明bagJ是新型抗生素bagremycins的抗性基因。扫描电镜的结果证明了BagJ异源表达后导致Streptomyces TK64的菌丝形态发生了改变。其他抗生素的敏感性实验表明,BagJ可能是一个逆向转运蛋白。 展开更多
关键词 bagremycins STREPTOMYCES sp.Tü 4128 bagJ MFS家族 抗性基因
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抗生素Bagremycin生产菌Streptomyces sp. Tü4128接合转移系统的建立 被引量:2
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作者 朱云霞 廖思懿 +1 位作者 叶江 张惠展 《华东理工大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期160-164,共5页
基于噬菌体φC31 att/int系统,采用属间接合将来自大肠杆菌的DNA有效地导入菌株Tü4128的孢子中。通过条件优化,当融合温度为37℃时,在含80mmol/L MgCl2的ISP4培养基上使每个受体细胞的接合频率显著提高到7.3×10-3。Southern b... 基于噬菌体φC31 att/int系统,采用属间接合将来自大肠杆菌的DNA有效地导入菌株Tü4128的孢子中。通过条件优化,当融合温度为37℃时,在含80mmol/L MgCl2的ISP4培养基上使每个受体细胞的接合频率显著提高到7.3×10-3。Southern blot分析显示在受体菌染色体上存在单一的染色体附着位点(attB位点)。整合位点的DNA序列测序显示为保守。采用优化的方法建立了大肠杆菌和菌株Tü4128间高效的属间接合系统。 展开更多
关键词 attB位点 噬菌体φC31 bagremycin 属间接合 STREPTOMYCES sp. Tü4128
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bagZH编码酪氨酸酶样铜酶并参与bagremycin生物合成
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作者 祁双双 吴海珍 +1 位作者 叶江 张惠展 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第12期2229-2239,共11页
【目的】研究bagremycin产生菌链霉菌Tü4128中编码酪氨酸酶样铜酶的bagZH基因的功能。【方法】基于同源重组技术敲除bagZH基因,利用HPLC和LC-ESI-MS分析其次级代谢产物谱。在E. coli BL21(DE3)中异源表达BagH并分离纯化,分别以邻... 【目的】研究bagremycin产生菌链霉菌Tü4128中编码酪氨酸酶样铜酶的bagZH基因的功能。【方法】基于同源重组技术敲除bagZH基因,利用HPLC和LC-ESI-MS分析其次级代谢产物谱。在E. coli BL21(DE3)中异源表达BagH并分离纯化,分别以邻氨基酚和3,4-AHBA为底物,利用LC-ESI-MS分析BagH催化产物。【结果】HPLC显示,bagZH基因敲除突变株的bagremycin产量显著降低,回补bagZH基因表达盒后bagremycin产量有所上调。LC-ESI-MS分析bagZH基因敲除突变株的次级代谢产物谱,结果显示,保留时间为3.18 min的新产物分子量为286.32 g/mol,与推测的3,4-AHBA在体内酯化合成的产物分子量吻合。体外生化分析显示,BagH能将邻氨基酚的邻位氨基氧化为亚硝基(保护基团)。【结论】本文首次鉴定了bagZH基因编码的酪氨酸酶样铜酶参与bagremycin生物合成。BagH负责将3,4-AHBA的邻位氨基氧化为亚硝基(保护基团)避免自身酯化,待与反式对香豆酸衍生物缩合后,再由胞内的还原酶将保护性亚硝基还原为氨基,最终合成bagremycin A和bagremycin B。我们的研究结果为bagremycin作用机制的深入研究以及高产菌株的理性设计与改造提供了基础和参考。 展开更多
关键词 bagremycin bagZH 酪氨酸酶样铜酶 亚硝基化
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