cDNA代表性差异分析法筛选二羟环氧苯并芘致癌相关基因片段

1

作者 蒋义国 陈家堃 +2 位作者 陈学敏 易菲 冯苏妹 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2002年第10期1175-1177,共3页

目的　采用cDNA代表性差异分析法 ,分离二羟环氧苯并芘诱导恶性转化的细胞与对照组细胞之间的差异表达基因。方法　先从细胞中提取mRNA并合成双链cDNA ,双链DNA以Sau3AI内切酶消化 ,连接接头并经PCR扩增。以BPDE诱导恶变细胞的cDNA为“... 目的　采用cDNA代表性差异分析法 ,分离二羟环氧苯并芘诱导恶性转化的细胞与对照组细胞之间的差异表达基因。方法　先从细胞中提取mRNA并合成双链cDNA ,双链DNA以Sau3AI内切酶消化 ,连接接头并经PCR扩增。以BPDE诱导恶变细胞的cDNA为“检测子”、以对照组细胞cDNA为“驱赶子”进行消减杂交。结果　经 3轮消减杂交后分离出 5个cDNA片段 ,在琼脂糖凝胶上清晰显示 2 10bp以下的 5条条带 ,这些片段分别与总RNA作Northern印迹杂交证实它们均来自BPDE诱变的细胞。结论　cDNA代表性差异分析法是筛选化学致癌相关基因的有效。 展开更多

关键词 cdna代表性差异分析 恶性转化相关基因 二羟环氧苯并芘

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cDNA代表性差异分析法分离鼻咽癌上皮细胞株HNE_1表达差异cDNA序列的初步研究 被引量：26

2

作者 湛凤凰 江宁 +5 位作者 曹利 邓龙文 谭国林 周鸣 谢奕 李桂源 《中华医学遗传学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1998年第6期341-344,共4页

目的寻找鼻咽癌中差异性表达基因，包括与鼻咽癌发病相关的候选抑瘤基因。方法应用ｃＤＮＡ代表性差异分析法（ＲＤＡ），分离原代培养的正常人鼻咽上皮细胞与鼻咽癌细胞株ＨＮＥ１中差异表达的ｃＤＮＡ序列，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交和Ｎ... 目的寻找鼻咽癌中差异性表达基因，包括与鼻咽癌发病相关的候选抑瘤基因。方法应用ｃＤＮＡ代表性差异分析法（ＲＤＡ），分离原代培养的正常人鼻咽上皮细胞与鼻咽癌细胞株ＨＮＥ１中差异表达的ｃＤＮＡ序列，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交和Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交被用来分析差异性表达产物的来源，最后，将这些序列克隆到ｐＧＥＭ－Ｔｅａｓｙ载体中，并用链终止法测序。结果在第４轮杂交及扩增反应后，获得４条差异性条带。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交及Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交证明，这些差异性片段来自作为“检测”扩增子的正常人鼻咽上皮，在鼻咽癌细胞株ＨＮＥ１中不表达或表达降低。序列分析这些差异性片段的克隆，发现一些序列是与已知基因高度同源的基因，包括一些看家基因；另有一些基因则为新基因序列。结论鼻咽癌的发生是一个多基因参与的过程，所获得的差异性片段中，与之同源的一些已知基因具有抑瘤功能。 展开更多

关键词 鼻咽癌 抑瘤基因 cdna 差异分析法

原文传递

cDNA代表性差异分析和抑制性减法杂交技术的比较 被引量：2

3

作者 郭华荣 黄冰 +2 位作者 张士璀 亓飞 郭燕 《海洋湖沼通报》 CSCD 北大核心 2005年第1期61-66,共6页

本文就cDNA代表性差异分析和抑制性减法杂交这两种技术的主要原理、基本操作过程和优缺点进行了介绍和比较,并展望了这两种技术在海洋生物技术领域的应用前景。

关键词 cdna代表性差异分析 杂交技术 优缺点 海洋生物技术 基本操作 减法 过程 领域

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一种基因克隆的新策略—cDNA的代表性差异分析法 被引量：5

4

作者 杨林 袁爱力 +1 位作者 李勇 吕有勇 《国外医学（遗传学分册）》 1998年第3期113-116,共4页

ｃＤＮＡ的代表性差异分析法是近年发展起来并逐步得到广泛应用的一项基因克隆新策略。它以基因组代表性差异分析法为技术基础，并吸取了差异显示法的优点，具有灵敏、高效及假阳性率低等特点。在肿瘤基因克隆、病因分析和病源筛选、发... ｃＤＮＡ的代表性差异分析法是近年发展起来并逐步得到广泛应用的一项基因克隆新策略。它以基因组代表性差异分析法为技术基础，并吸取了差异显示法的优点，具有灵敏、高效及假阳性率低等特点。在肿瘤基因克隆、病因分析和病源筛选、发育的基因调控以及不同细胞因子和受体对基因表达的调控等方面的应用，已日益引起人们的重视。 展开更多

关键词 基因克隆 cdna 代表性差异分析

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应用代表性差异分析法筛选人癌候选抑癌基因 被引量：2

5

作者 湛凤凰 江宁 +5 位作者 曹利 邓龙文 周鸣 谢奕 曾朝阳 李桂源 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1999年第2期165-169,共5页

运用ｃＤＮＡ代表性差异分析法（ｃＤＮＡｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎａｌｄｉｆｅｒｅｎｃｅａｎａｌｙｓｉｓ，ｃＤＮＡＲＤＡ），以正常人鼻咽上皮细胞及鼻咽癌ＨＮＥ１细胞作为比较的样品来源，分离了四个在鼻咽癌中缺失的ｃＤＮ... 运用ｃＤＮＡ代表性差异分析法（ｃＤＮＡｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎａｌｄｉｆｅｒｅｎｃｅａｎａｌｙｓｉｓ，ｃＤＮＡＲＤＡ），以正常人鼻咽上皮细胞及鼻咽癌ＨＮＥ１细胞作为比较的样品来源，分离了四个在鼻咽癌中缺失的ｃＤＮＡ片段．以此四个片段作探针，分别进行ＤＮＡ杂交、ＲＮＡ杂交，结果显示，这些差异性的ｃＤＮＡ序列确实来自正常人鼻咽上皮且只在其中表达和／或在鼻咽癌ＨＮＥ１中表达降低，并在鼻咽癌病人中存在不同程度的缺失．序列分析结果表明这些差异性表达的基因为具有相当抑癌基因功能的已知基因和可能与鼻咽癌相关的抑癌基因的新基因．从而说明ｃＤＮＡＲＤＡ是一种高效、敏感。 展开更多

关键词 鼻咽癌 抑癌基因 cdna代表性差异分析法

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应用cDNA RDA联合cDNA阵列点杂交筛查差异表达基因的方法学分析 被引量：1

6

作者 彭依群 邓小戈 +3 位作者 翟木绪 隋国良 王敏 廖二元 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 2005年第4期413-417,共5页

目的探讨采用cDNA代表性差异分析法(representational difference analysis,RDA)联合cDNA阵列点杂交筛查差异表达基因的可行性及局限性。方法将17β雌二醇(E2)干预MG63细胞cDNA分别制备成检测和驱赶扩增子进行消减杂交作为整个cDNARDA... 目的探讨采用cDNA代表性差异分析法(representational difference analysis,RDA)联合cDNA阵列点杂交筛查差异表达基因的可行性及局限性。方法将17β雌二醇(E2)干预MG63细胞cDNA分别制备成检测和驱赶扩增子进行消减杂交作为整个cDNARDA的内部质控,以干预组扩增子、对照组扩增子和第4轮双向消减产物为模板,行内对照基因GAPDH的RTPCR进行消减效率分析,Southern杂交证实消减产物来源,快速Northern杂交证实消减产物确实呈差异表达;克隆到pGEMTeasy载体,转化JM109感受态细菌并铺Amp+XgalIPTG琼脂皿得到差异表达文库,随机挑取白色单菌落培养后点成尼龙阵列膜,分别与干预组和对照组扩增子及第4轮消减产物杂交,得到差异表达克隆用于后续研究。结果内部质控结果显示,第3轮消减杂交后,PCR未见差异性产物扩增;cDNARDA共得到3个雌二醇诱导表达上调条带和2个表达下调条带。Southern杂交结果显示在检测扩增子及第1～4轮差异产物中均可见阳性杂交信号,而驱赶扩增子中无杂交信号;快速Northern杂交证实干预组细胞总RNA的两处杂交信号均较对照组强;阵列膜同一克隆两个点对应的杂交信号呈高度相关一致性,共得到120个差异表达克隆(56个表达上调,64个表达下调)。结论cDNA代表性差异分析法联合cDNA阵列点杂交方法能有效快速高通量筛查E2诱导MG63差异表达基因。 展开更多

关键词 cdna代表性差异分析法 cdna阵列 基因表达 方法学

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抗双酰胺类杀虫剂小菜蛾的cDNA代表性差异分析

7

作者 王莹莹 李广阅 +2 位作者 徐巨龙 孙诗晴 薛超彬 《山东农业科学》 2018年第10期25-29,共5页

小菜蛾(Plutella xylostella L.)为世界性十字花科蔬菜的重要害虫之一,由于其繁殖力较强,世代重叠严重,加上一些地区生产上用药频繁,导致小菜蛾对多种杀虫剂产生了抗性。随着氯虫苯甲酰胺和氟苯虫酰胺等双酰胺类杀虫剂的大量应用,小菜... 小菜蛾(Plutella xylostella L.)为世界性十字花科蔬菜的重要害虫之一,由于其繁殖力较强,世代重叠严重,加上一些地区生产上用药频繁,导致小菜蛾对多种杀虫剂产生了抗性。随着氯虫苯甲酰胺和氟苯虫酰胺等双酰胺类杀虫剂的大量应用,小菜蛾对该药剂的抗性问题也日益受到关注。为了研究小菜蛾对双酰胺类杀虫剂的抗性机制,本试验利用敏感品系cDNA作为"驱动子"(Drivers),小菜蛾抗氯虫苯甲酰胺品系、抗氟苯虫酰胺品系cDNA作为"检测子"(Testers),通过改进的cDNA代表性差异分析法(cDNA rrepresentational difference analysis,cDNA RDA),在小菜蛾抗氯虫苯甲酰胺品系、抗氟苯虫酰胺品系中获得2个与28S rRNA基因有较高同源性的序列,其中一个序列(DP3-1)与棉铃虫细胞色素P450类TBP蛋白同源性为97%,另外一个序列(DP3-2)与赤拟谷盗的TcasGA2_TC010626蛋白基因同源性为93%;此外,两个抗性品系中各获得一个未知序列。本研究为进一步探讨小菜蛾对双酰胺类杀虫剂的抗性机制提供了新线索。 展开更多

关键词 小菜蛾 cdna代表性差异分析 双酰胺类杀虫剂 抗性机制

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cDNA-RDA方法筛选与分析VBNC状态沙门菌差异基因的研究 被引量：2

8

作者 胡烨 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第7期19-22,共4页

为了研究VBNC状态沙门菌特异性基因,探讨细菌VBNC状态发生机制,试验应用cDNA代表性差异分析技术(cDNA-RDA)对VBNC状态沙门菌特异性基因进行筛选及分析。结果表明:经过3轮差减杂交后,获得8条差异基因片段;分析差异基因功能,推测其中5条... 为了研究VBNC状态沙门菌特异性基因,探讨细菌VBNC状态发生机制,试验应用cDNA代表性差异分析技术(cDNA-RDA)对VBNC状态沙门菌特异性基因进行筛选及分析。结果表明:经过3轮差减杂交后,获得8条差异基因片段;分析差异基因功能,推测其中5条差异基因可能与沙门菌VBNC状态发生机制以及合成蛋白相关。 展开更多

关键词 沙门菌 活的非可培养状态 cdna代表性差异分析 差异基因

原文传递

一种新的基因克隆方法——消减杂交差异显示分析方法 被引量：3

9

作者 郭榕 李勇 《国际遗传学杂志》 CAS 2006年第3期183-186,共4页

消减杂交差异显示分析方法(subtractivehybridizationdifferencedisplay,SHDD)是近年来在cD-NA代表性差异分析方法(cDNARepresentationalDifferenceAnalysis,cDNARDA)和mRNA差异显示分析方法(mRNADifferentialDisplay,mRNADD)的基础上... 消减杂交差异显示分析方法(subtractivehybridizationdifferencedisplay,SHDD)是近年来在cD-NA代表性差异分析方法(cDNARepresentationalDifferenceAnalysis,cDNARDA)和mRNA差异显示分析方法(mRNADifferentialDisplay,mRNADD)的基础上发展而来的一种克隆基因的新方法。SHDD方法结合了cDNARDA的特异性特点与mRNADD在双向筛查差异片段和较高的检测灵敏度方面的优势。在具体技术路线设计上,SHDD最大的特点就是在两样本间双向一轮与二轮均衡、温和消减杂交基础上引入了同位素mRNADD差异显示技术,使得该方法在克隆低丰度信息及较弱差异信息、提高差异分析结果的特异性、减少假阳性、减少重复差异结果,提高差异分析的信息量同时又降低工作量等方面明显优于经典的mRNADD和cDNARDA方法。 展开更多

关键词 消减杂交差异显示分析 cdna代表性差异分析 mRNA差异显示分析

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差异表达基因分析法在肿瘤学研究中的运用

10

作者 王红卫 文格波 《美国中华临床医学杂志》 2003年第1期84-86,共3页

肿瘤发生与多种基因的表达及相互作用有关。自上世纪80年代以来，多项技术已应用于肿瘤的分子遗传学研究。本文就差异表达基因分析法(从cDNA或mRNA水平入手)包括差异显示PCR、cDNA代表性差异分析、抑制消减杂交、cDNA微阵列等概述其原... 肿瘤发生与多种基因的表达及相互作用有关。自上世纪80年代以来，多项技术已应用于肿瘤的分子遗传学研究。本文就差异表达基因分析法(从cDNA或mRNA水平入手)包括差异显示PCR、cDNA代表性差异分析、抑制消减杂交、cDNA微阵列等概述其原理、技术路线、各自优缺点及在肿瘤学中的应用。 展开更多

关键词 肿瘤学 差异表达基因 cdna代表性差异分析 肿瘤发生 分子遗传学 cdna微阵列 抑制消减杂交 优缺点

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分离差异表达基因的方法 被引量：12

11

作者 黄薇 方孝东 +1 位作者 赵文明 林栖凤 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期521-524,共4页

了解不同细胞或同类细胞在不同发育阶段、不同生理状态下的基因表达状况 ,可以为研究生命活动过程提供重要信息。以差别筛选 ,扣除杂交等基本方法为出发点 ,研究基因表达差异的方法不断完善 ,先后出现了DDRT PCR ,RDA ,SSH ,cDNA微阵列 ... 了解不同细胞或同类细胞在不同发育阶段、不同生理状态下的基因表达状况 ,可以为研究生命活动过程提供重要信息。以差别筛选 ,扣除杂交等基本方法为出发点 ,研究基因表达差异的方法不断完善 ,先后出现了DDRT PCR ,RDA ,SSH ,cDNA微阵列 (基因芯片 )等技术。这里着重对这些方法的优缺点及改进进行了论述和评介 ,并对技术的发展趋势进行了分析。 展开更多

关键词 分离 差异表达基因 代表性差异分析 抑制性扣除杂交 cdna微阵列

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植物基因差异表达的研究方法及进展 被引量：17

12

作者 汤华 帅爱华 向福英 《海南大学学报（自然科学版）》 CAS 2006年第3期309-316,共8页

对目前在植物基因差异表达研究领域主要采用的消减杂交,DDRT-PCR,cDNA-RDA,cDNA-AFLP,SSH,基因芯片和SAGE等研究方法的原理、特点、研究进展以及发展趋势进行了综述.这些方法各有特点,可根据研究工作的需要选择合适的研究方法.

关键词 基因差异表达 消减杂交 差异显示PCR cdna代表性差异分析 cdna-AFLP 抑制消减杂交 基因芯片 基因表达系列分析

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mRNA差异显示法及其在水稻分子生物学中的应用 被引量：1

13

作者 黄升谋 郭兆武 《长沙电力学院学报（自然科学版）》 2002年第1期91-94,共4页

对mRNA差异显示法中人们比较熟悉的示差筛选、扣除杂交和DDRT PCR法 ,以及近几年新提出的RDA、SSH 5种主要的差异基因筛选法 ,从其原理、在分子生物学中的应用。

关键词 示差筛选 代表性差示分析 抑制性扣除杂交 差异基因筛选法 MRNA差异显示法 水稻 分子生物学 应用

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小菜蛾对杀虫双抗性遗传的RDA分析 被引量：3

14

作者 张晓飞 程罗根 +2 位作者 陈之浩 于光 李忠英 《南京师大学报（自然科学版）》 CAS CSCD 2003年第1期78-82,共5页

采用代表性差异分析法 (RDARepresentationaldifferenceanalysis)初步研究了小菜蛾两个品系 ,敏感品系和抗杀虫双近等基因系之间基因组的差异 .用敏感品系作为驱动扩增子 (driver) ,抗杀虫双近等基因系作为检验扩增子 (tester) ,通过四... 采用代表性差异分析法 (RDARepresentationaldifferenceanalysis)初步研究了小菜蛾两个品系 ,敏感品系和抗杀虫双近等基因系之间基因组的差异 .用敏感品系作为驱动扩增子 (driver) ,抗杀虫双近等基因系作为检验扩增子 (tester) ,通过四轮消减杂交后 ,得到两个差异片段 ,范围在 1 50bp至 30 0bp之间 。 展开更多

关键词 小菜蛾 近等基因系 杀虫双抗性 代表性差异分析法

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小菜蛾对溴氰菊酯抗性相关的DNA片段的克隆与分析 被引量：2

15

作者 程罗根 陈之浩 +1 位作者 张晓飞 李忠英 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期526-529,共4页

采用代表性差异分析 (representationaldifferenceanalysis ,RDA)方法 ,以小菜蛾Plutellaxylostella (L .)的敏感品系作为对照组 ,溴氰菊酯抗性近等基因系 (nearisogenicline)作为测试组 ,通过三轮消减杂交得到大小为 15 0～ 30 0bp的... 采用代表性差异分析 (representationaldifferenceanalysis ,RDA)方法 ,以小菜蛾Plutellaxylostella (L .)的敏感品系作为对照组 ,溴氰菊酯抗性近等基因系 (nearisogenicline)作为测试组 ,通过三轮消减杂交得到大小为 15 0～ 30 0bp的差异扩增带 ,经亚克隆测序并与GenBank等数据库同源比较 ,发现差异片段与已知抗性相关基因无同源性 ;以随机选取的差异片段作探针进行Southernblot分析 ,在测试组扩增子和三轮差异产物中都获得了阳性结果 ,而在对照组扩增子中的结果是阴性的。 展开更多

关键词 小菜蛾 溴氰菊酯 抗药性 代表性差异分析法 DNA测序

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差异表达基因克隆技术的研究进展 被引量：6

16

作者 徐德全 熊远著 《中国畜牧兽医》 CAS 2004年第3期31-34,共4页

随着基因组计划的顺利实施 ,大量的生物信息被解析 ,分离并克隆差异表达基因已成为生命科学研究的热点。近些年来 ,国内外学者发展了多种分析差异表达基因的技术。现就目前主要使用的一些技术作一综述。

关键词 差异表达基因 克隆 消减杂交法 MRNA差异显示技术 代表性序列差别分析 抑制消减杂交法 基因表达系列分析 基因鉴定集成法 cdna微阵列

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基于PCR的cDNA基因克隆技术研究进展 被引量：4

17

作者 蔡欣 陈宏 汪虹英 《生物技术通讯》 CAS 2004年第6期623-625,共3页

RT-PCR、锚定PCR、cDNA末端快速扩增(RACE)、stepoutRACE、DDRT-PCR、cDNA代表性差异分析、抑制性削减杂交等都是建立在PCR基础之上的cDNA分子克隆技术。本文介绍各种技术的优缺点、应用以及与同类技术进行比较,这些技术现在已经成功应... RT-PCR、锚定PCR、cDNA末端快速扩增(RACE)、stepoutRACE、DDRT-PCR、cDNA代表性差异分析、抑制性削减杂交等都是建立在PCR基础之上的cDNA分子克隆技术。本文介绍各种技术的优缺点、应用以及与同类技术进行比较,这些技术现在已经成功应用于大量EST的分离、cDNA文库的构建、编码产物未知的差别表达基因的分离以及全长cDNA基因序列的克隆等方面。 展开更多

关键词 cdna代表性差异分析 编码产物 RT-PCR 研究进展 分离 EST 基因序列 克隆技术 RACE DNA分子

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差异表达基因分离技术研究进展 被引量：1

18

作者 刘阳 赖翼 李敏惠 《技术与市场》 2006年第02A期59-60,共2页

研究不同细胞或同类细胞在不同发育阶段、不同生理状态下(正常状态、发育、衰老、损伤及疾病)差异基因的表达状况,将有助于了解调控细胞分化的机制,为分析生命活动过程提供重要信息。而分离与克隆差异表达的基因是了解这些生命过程的基... 研究不同细胞或同类细胞在不同发育阶段、不同生理状态下(正常状态、发育、衰老、损伤及疾病)差异基因的表达状况,将有助于了解调控细胞分化的机制,为分析生命活动过程提供重要信息。而分离与克隆差异表达的基因是了解这些生命过程的基础。1990年以来,出现了mRNA差异显示技术、代表性差异分析、抑制性削减杂交、cDNA微阵列技术等多种分离差异表达基因的手段,本文对以上方法的优缺点、发展趋势及其应用前景作了简要综述。 展开更多

关键词 差异表达基因 MRNA差异显示技术 代表性差异分析 抑制性削减杂交 cdna微阵列技术

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差异筛选与基因克隆

19

作者 朱玉贤 《科学中国人》 2003年第7期44-45,共2页

1995年,科学家首次发表研究报告,证实受发育过程特异性诱导表达的启动子指导细菌异戊烯转移酶基因,导致转基因植物发育后期细胞分裂素含量显著提高,从而延缓植物叶片的衰老过程.1999年,又有人发表论文证实用上述启动子指导同源域转录调... 1995年,科学家首次发表研究报告,证实受发育过程特异性诱导表达的启动子指导细菌异戊烯转移酶基因,导致转基因植物发育后期细胞分裂素含量显著提高,从而延缓植物叶片的衰老过程.1999年,又有人发表论文证实用上述启动子指导同源域转录调控因子基因Knotted1表达,也能明显延缓烟草叶片的衰老.与此同时,有学者撰文称在番茄中过量表达拟南芥己糖酸化酶基因,导致转基因植物衰老进程加快.此后,不少作者相续报道了不同基因或不同成份对植物生长发育的调控作用. 展开更多

关键词 基因克隆 转基因植物 cdna差示分析法 PPF1基因 细菌异戊烯转移酶基因 细胞分裂素 差异筛选 G2豌豆 生长发育

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cDNA RDA及其在内分泌代谢疾病领域中的应用

20

作者 杨架林 《国外医学（内分泌学分册）》 2003年第3期214-215,共2页

关键词 内分泌代谢疾病 cdna代表性差异分析 聚合酶链反应 2型糖尿病

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