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Immunological Adjuvant Function of Aluminium Phosphate and Chicken IL-18 in NDV F Gene Vaccine
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作者 尹会方 黄青云 +2 位作者 王继文 何英杰 吴思源 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2012年第12期2581-2584,2619,共5页
[Objective] This study aimed to investigate the immunological adjuvant function of aluminium phosphate and chicken IL-18 in NDV F gene vaccine. [Method] The vaccine (0.2 ml) containing aluminum phosphate adjuvant (... [Objective] This study aimed to investigate the immunological adjuvant function of aluminium phosphate and chicken IL-18 in NDV F gene vaccine. [Method] The vaccine (0.2 ml) containing aluminum phosphate adjuvant (90 μg), pcDNA/F (200μg), and pcDNA/chlL-18 (200 μg) was prepared. The 7 d old chick- ens to be tested were randomly divided into six groups (12 chickens in each group) and immunized through intramuscular injection with inactivated Newcastle disease vaccines, pcDNA/F+pcDNA/chlL-18+phosphate aluminum, pcDNA/F, pcDNA/F.+pcDNA/ chlL-18, pcDNA/F+aluminum phosphate, and physiological saline respectively; the secondary immunization was conducted with the same dose when the chickens were 21 d old. Their blood was sampled 0, 7, 14, 21, 28 d after first immunization. Anti- body titer was detected with ELISA and T cell transformation rate was measured with MIT. Experimental chicken will be challenged with 30 LD50 NDV virulence 28 d after first immunization. [Result] The survival rate of the chickens immunized with pcDNA/F+aluminium phosphate+pcDNA/chlL-18 achieved 8/12, higher than that of those immunized with pcDNA/F 4/12 and pcDNA/F+pcDNA/chlL-18 (6/12). The NDV antibody titer of the chickens immunized with pcDNA/F+ aluminum phosphate, pcD- NA/F+pcDNA/chlL-18 and pcDNA/F+pcDNA/chlL-18+aluminum phosphate is not differ- ent (P〉0.05), but significantly lower than that of the chickens immunized with tradi- tional vaccine (P〈0.05). The T cell transformation rate of the chickens immunized with pcDNA/F+pcDNA/chlL-18+aluminium phosphate was obviously higher than that of the chickens immunized with pcDNA/F (P〈0.05). The T cell transformation rates of chickens immunized with pcDNA/F and the traditional vaccine showed no signifi- cant difference (P〉0.05). [Conclusion] Combination of aluminium phosphate and pcD- NA/chlL-18 can significantly enhance the immune effect of NDV F gene vaccine. 展开更多
关键词 Immunological adjuvant: Aluminium phosphate chicken il-18 NDV F gene gene vaccine
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Association of Bone Morphogenetic Protein-2 Gene with Skeletal Traits in Chickens
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作者 LENG Li WANG Qigui +5 位作者 LI Zhihui WANG Shouzhi WANG Yuxiang LINing HU Xiaoxiang LI Hui 《Journal of Northeast Agricultural University(English Edition)》 CAS 2009年第4期19-24,共6页
Bone morphogenetic protein-2 (BMP-2) plays a key role in bone formation and maintenance. BMP-2 can stimulate longitudinal bone growth by increasing the growth plate chondrocyte proliferation, hypertrophy, and cartil... Bone morphogenetic protein-2 (BMP-2) plays a key role in bone formation and maintenance. BMP-2 can stimulate longitudinal bone growth by increasing the growth plate chondrocyte proliferation, hypertrophy, and cartilage matrix synthesis. The current study was designed to investigate the associations of the BMP-2 gene polymorphism with chicken skeletal traits. Northeast Agricultural University F2 resource population was used in this study. Body weight and body composition traits were measured in F2 population. Polymorphism between parental lines was detected by DNA sequencing, and PCR-fragment length polymorphism method was then developed to screen the population. The results showed that the BMP-2 gene polymorphism was associated with skeletal traits in F2 population. This research suggests that BMP-2 gene may be a candidate locus or linked to a major gene that affects skeletal traits in chickens. 展开更多
关键词 chicken BMP-2 gene polymorphism skeletal traits
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Correlation between DRD2 Gene Polymorphism and Early Egg Production Performance of Libo Yaoshan Chicken
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作者 Zhu Lili Li Dongguang +2 位作者 Xu Longxin Han Xue Wu Gemin 《Animal Husbandry and Feed Science》 CAS 2015年第4期208-211,共4页
To improve egg production performance of local chicken breed in Guizhou Province, Libo Yaoshan chicken, with dopamine receptor 2 ( DRD2 ) as one of the candidate genes, we detected its genetic variation in 196 Libe ... To improve egg production performance of local chicken breed in Guizhou Province, Libo Yaoshan chicken, with dopamine receptor 2 ( DRD2 ) as one of the candidate genes, we detected its genetic variation in 196 Libe Yaoshan hens using PCR-SSCP (single-strand conformation polymorphism) and sequencing method, and analyzed the correlation between genetic variation and egg production traits. The results showed that TT and TG genotypes in mRNA SNlX)62 (C→T) loci of the DRD2 gene had extremely significant difference in egg production at 38 weeks age (P 〈0.01 ), and significant difference in egg weight at 300 days age (P 〈0.05 ). The single nucleotide polymorphisms (SNPs) mutation induced synonymous mutation of the 312th amino acids (leucine) in DRD2 protein, from L (CTG) to L (TI'G). The mRNA SNP962 (C→T) loci had a larger genetic effect on egg production at 38 weeks age, and could be used as a molecular marker in early breeding of Libo Yaoshan chicken. 展开更多
关键词 Dopamine receptor 2 (DRD2 gene gene polymorphism Libo Yaoshan chicken Early egg production performance PCR-SSCP
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Effect of Chicken Akirin2 Gene on Immune Response Induced by VP2 DNA Vaccine of Infectious Bursal Dis-ease Virus
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作者 Liu Chuangao Zhong Chuhong +6 位作者 Ren Guangcai Zhu Jiaojiao Zhao Dawei Ye Junxian Zhao Bing Wen Lianghai Chen Ruiai 《Animal Husbandry and Feed Science》 CAS 2017年第2期86-90,97,共6页
[ Abstracts ] In order to investigate the effect of chicken Akirin2 gene on the immune response induced by VP2 DNA vaccine of infectious bursal disease virus (IBDV). [ Methods] The 14-day-old SPF chickens were immun... [ Abstracts ] In order to investigate the effect of chicken Akirin2 gene on the immune response induced by VP2 DNA vaccine of infectious bursal disease virus (IBDV). [ Methods] The 14-day-old SPF chickens were immunized with recombinant plasmids expressing VP2 protein and Akirin2 protein, and strength- ened immunization was conducted at the 14'~ day after the first immunization. Finally, test chickens were challenged with IBDVBC6-85 virulent strain. [ Resultss ] Test results showed that Akirin2 gene could enhance the specific immune response induced by VP2 DNA vaccine, improve the proliferation of peripheral blood lym- phocytes and 'affect the expressing of cytokines TNF-a, IFN-Y, IL-1β, IL-2, IL-4, IL 6, IL-9, IL-10, IL-17 and IL-18. Effects of recombinant plasmids co-ex- pressing Akirin2 protein and VP2 protein on cytokine expression showed some differences with the recombinant plasmids expressing Akirir/2 protein or VP2 protein along. [ Conclusions] Chicken Akirin2 gene could significantly enhance the humoral immune response and cellular immune response induced by VP2 DNA vaccine of IBDV. 展开更多
关键词 chicken Akirin2 gene Infectious bursal disease virus VP2 DNA vaccine Immune response
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Expression of B Locus Beta 2 (<i>BLB2</i>) Gene at Cytolytic and Latent Immune Response Stages of Immunocompetence in Nigerian Indigenous Chickens
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作者 Abdulraheem Adedeji Bello-Ibiyemi Adeyemi Sunday Adenaike +2 位作者 Micheal Irewole Takeet Akpan Ubong Christian Obiora Ndubuisi Ikeobi 《Open Journal of Animal Sciences》 2021年第2期164-174,共11页
An economically-important trait in poultry for which gene identification <span style="font-family:Verdana;">continues to be a challenge is immune response. The objective of the study </span><s... An economically-important trait in poultry for which gene identification <span style="font-family:Verdana;">continues to be a challenge is immune response. The objective of the study </span><span style="font-family:Verdana;">was</span><span style="font-family:;" "=""> </span><span style="font-family:;" "=""><span style="font-family:Verdana;">to quantitate the expression of major histocompatibility complex (MHC) class II <i></i></span><i><i><span style="font-family:Verdana;">BLB2</span></i><span style="font-family:Verdana;"></span></i> gene at cytolytic and latent immune response stages in Nigerian indigenous chickens. </span><span style="font-family:Verdana;">A total of 108 Nigerian indigenous chickens (NIC) were sourced across the South-western states in Nigeria. The birds were inoculated with sheep red blood cells (SRBC), after which blood samples were obtained (5 days post-inoculation) and antibody haemagglutination test was carried out to place the birds into groups of high and low antibody titre levels.</span><span style="font-family:;" "=""> </span><span style="font-family:;" "=""><span style="font-family:Verdana;">The categorisation of the birds resulted in six groups of normal feather high, normal feather low, naked neck high, naked neck low, frizzle feather high and frizzle feather low antibody groups. </span><span style="font-family:Verdana;">A total of 48 chicks w</span></span><span style="font-family:Verdana;">ere</span><span style="font-family:Verdana;"> selected from the progeny for gene expression studies. </span><span style="font-family:Verdana;">Surgical excision of thymus and spleen was carried out for the detection of cytolytic and latent responses of the birds. β-actin was used as the endogenous control and the critical threshold method</span><span> </span><span style="font-family:Verdana;">(2<span style="white-space:nowrap;"><sup></sup></span><sup></sup></span><span style="font-family:;" "=""><span style="font-family:Verdana;"><sup>–ΔΔCт</sup><span style="white-space:nowrap;"></span>) was carried out for the determination of fold change. The fold change of spleen tissue expression at cytolytic immune response of the birds was 30,362.44 compared to latent response 294.07;and the fold change of thymus expression at cytolytic immune response of the birds was 51.98 compared to latent response 5.24</span><i><span style="font-family:Verdana;">. </span></i><span style="font-family:Verdana;">At both cytolytic and latent stages of immune response to SRBC antigen, <i></i></span><i><i><span style="font-family:Verdana;">BLB2</span></i><span style="font-family:Verdana;"></span></i> expression in the spleen was comparatively higher than in the thymus and the height of transcriptional activity was associated with the cytolytic stage</span><i><span style="font-family:Verdana;">. </span></i><span style="font-family:Verdana;">The birds of high titre at both the cytolytic and the latent responses had higher mRNA expression.</span><span style="font-family:;" "=""> </span><span style="font-family:;" "=""><span style="font-family:Verdana;">This study concluded that <i></i></span><i><i><span style="font-family:Verdana;">BLB2</span></i><span style="font-family:Verdana;"></span></i> gene expression in the Nigerian indigenous chicken was induced at the cytolytic stage and repressed at the latent stage. During avian infections, the category of high immune response birds would perform better than the low immune response counterpart;and the protective response that <i></i></span><i><i><span style="font-family:Verdana;">BLB2</span></i><span style="font-family:Verdana;"></span></i> gene <span style="font-family:Verdana;">offers </span><span style="font-family:Verdana;">will be repressed from one time point to the other.</span> 展开更多
关键词 Nigerian Indigenous chickens BLB2 gene Expression Sheep Red Blood Cells
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鸡IL-2在新城疫病毒F基因疫苗免疫中的作用 被引量:16
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作者 姜永厚 刘忠贵 +2 位作者 陈奖励 宋秀龙 童光志 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期22-24,共3页
利用国内首次克隆成功的鸡 IL- 2基因真核表达质粒与新城疫病毒 (NDV) D2 6株 F基因真核质粒 (F基因疫苗 )联合免疫 SPF雏鸡 ,观察了其诱导的免疫应答及免疫保护作用 ,以及不同免疫方式对其免疫作用的影响。结果证实了国内克隆鸡 IL- 2... 利用国内首次克隆成功的鸡 IL- 2基因真核表达质粒与新城疫病毒 (NDV) D2 6株 F基因真核质粒 (F基因疫苗 )联合免疫 SPF雏鸡 ,观察了其诱导的免疫应答及免疫保护作用 ,以及不同免疫方式对其免疫作用的影响。结果证实了国内克隆鸡 IL- 2基因的免疫增强作用 ,以及作为免疫佐剂应用于禽类基因免疫的可行性 ,为鸡 IL- 2这一新型佐剂的实际应用提供了重要的试验依据。 展开更多
关键词 新城疫病毒 F基因 il-2 佐剂 基因疫苗 免疫
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鸡IL-2全基因和去信号肽基因的原核表达 被引量:12
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作者 龚婷 杨孝朴 +3 位作者 李银聚 张春杰 吴庭才 程相朝 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期11-14,40,共5页
根据已发表的鸡白介素-2(ChIL-2)cDNA编码基因序列设计3条引物,利用RT-PCR技术从经诱导的卢氏鸡胚脾淋巴细胞中扩增出429 bp的ChIL-2全长基因cDNA和363 bp去除信号肽的ChIL-2基因cDNA.将ChIL-2全长和去信号肽的基因cDNA分别克隆到原核... 根据已发表的鸡白介素-2(ChIL-2)cDNA编码基因序列设计3条引物,利用RT-PCR技术从经诱导的卢氏鸡胚脾淋巴细胞中扩增出429 bp的ChIL-2全长基因cDNA和363 bp去除信号肽的ChIL-2基因cDNA.将ChIL-2全长和去信号肽的基因cDNA分别克隆到原核表达载体pET28a(+),构建原核重组表达质粒pET28a-IL-2和pET28a-△SIL-2,并分别转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,SDS-PAGE检测,在22 ku和18 ku处有2条清晰的蛋白带,相同条件下pET28a-△SIL-2表达量较高.RNAstructure软件分析表明,pET28a-IL-2的mRNA5′端序列形成了复杂且较为稳定的二级结构,不利于翻译的起始,证明信号肽序列的存在对ChIL-2基因在原核细胞中的表达有一定的影响. 展开更多
关键词 细胞白介素 il-2基因 信号肽 原核表达 MRNA二级结构
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传染性法氏囊病病毒VP2/4/3-ChIL-2融合基因DNA疫苗免疫原性研究 被引量:7
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作者 万旺军 谢荣辉 +3 位作者 李龙 许健 郑江涛 于涟 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期137-143,共7页
应用重叠延伸剪切技术(splicing by overlapping extension,SOE),经3次PCR将传染性法氏囊病病毒(infectiousbursal disease virus,IBDV)多聚蛋白(VP2/4/3)基因和鸡白细胞介素2(Chicken IL-2,ChIL-2)基因进行融合,定向插入真核表达载体pC... 应用重叠延伸剪切技术(splicing by overlapping extension,SOE),经3次PCR将传染性法氏囊病病毒(infectiousbursal disease virus,IBDV)多聚蛋白(VP2/4/3)基因和鸡白细胞介素2(Chicken IL-2,ChIL-2)基因进行融合,定向插入真核表达载体pCI的CMV启动子下游,获得重组质粒pCI-VP2/4/3-IL-2和pCI-IL-2-VP2/4/3。将其制备成DNA疫苗,肌肉注射14日龄非免疫鸡,2周后加强免疫,定期测定鸡抗IBDV血清ELISA抗体效价及病毒中和抗体效价。加强免疫后3周用IBDV标准强毒株攻击,连续观察3天后全部扑杀,计算保护率及囊体比,并进行组织病理学检查。结果表明:1)融合基因重组质粒pCI-VP2/4/3-IL-2、pCI-IL-2-VP2/4/3免疫后能明显增强IBDVDNA疫苗对强毒的攻击保护(保护率分别为83.3%、91.6%),显著高于pCI-VP2/4/3单独免疫对照组(58.3%);2)诱导产生的抗IBDV血清ELISA抗体效价明显增高(P<0.05),同时能提高DNA疫苗诱导产生的中和抗体效价(P<0.05);3)能显著促进鸡外周血液T淋巴细胞增殖反应。上述结果提示:IBDV VP2/4/3与ChIL-2基因融合后发挥了相互协同作用,ChIL-2产生了分子免疫佐剂效应;融合基因DNA疫苗能增强IBDV DNA疫苗的免疫原性,促进了机体特异性免疫应答。 展开更多
关键词 传染性法氏囊病病毒 鸡白细胞介素2 基因融合 DNA疫苗 免疫原性
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15个鸡群体IL-2基因的遗传变异分析 被引量:3
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作者 赵会静 张敬敬 +5 位作者 文杰 刘冉冉 郑麦青 李庆贺 马月辉 赵桂苹 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期41-49,共9页
为了深入研究鸡IL-2基因的多态性及为鸡抗病育种提供理论依据,本研究以IL-2基因为研究对象,采用直接测序的方法对11个中国地方鸡品种、3个引进鸡品种和1个培育鸡品种共448个个体该基因的遗传变异进行了分析。通过DNA池和直接测序技术,... 为了深入研究鸡IL-2基因的多态性及为鸡抗病育种提供理论依据,本研究以IL-2基因为研究对象,采用直接测序的方法对11个中国地方鸡品种、3个引进鸡品种和1个培育鸡品种共448个个体该基因的遗传变异进行了分析。通过DNA池和直接测序技术,共发现了13个突变位点。对所有个体的一段包含5个SNPs的区域进行分析,发现不同等位基因在15个鸡群体间分布存在显著差异,表明不同品种间IL-2基因具有丰富的遗传变异资源,可为抗病基因的选择提供素材;群体遗传学指标分析表明,H系京星黄鸡的遗传多样性最低,这与其品种形成过程一致,其他品种多样性差异不大;单倍型分析共发现23种单倍型,其中H1(CAACG)、H2(CAATT)、H4(TGTTG)、H9(TGTTG)、H11(TATCG)和H16(CATCG)为中国地方鸡品种特有或优势单倍型,可能与抗病能力相关。 展开更多
关键词 il-2基因 遗传多样性
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胸腺九肽对鸡脾淋巴细胞增殖转化及IL-2基因表达与分泌的影响 被引量:4
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作者 王丙云 梁敏 +1 位作者 计慧琴 陈胜锋 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期425-428,共4页
采用MTT比色法、相对半定量RT-PCR法和放射免疫测定(RIA)法研究了不同浓度的胸腺九肽对离体培养的鸡脾淋巴细胞增殖转化I、L-2基因表达与分泌的影响。结果表明,用10 ng/mL和1 ng/mL胸腺九肽处理鸡脾淋巴细胞8 h后,能显著增加由ConA诱导... 采用MTT比色法、相对半定量RT-PCR法和放射免疫测定(RIA)法研究了不同浓度的胸腺九肽对离体培养的鸡脾淋巴细胞增殖转化I、L-2基因表达与分泌的影响。结果表明,用10 ng/mL和1 ng/mL胸腺九肽处理鸡脾淋巴细胞8 h后,能显著增加由ConA诱导的淋巴细胞增殖转化反应,显著提高IL-2基因的表达水平以及细胞培养上清液中的IL-2含量(P<0.05);100 ng/mL的胸腺九肽虽有增强脾淋巴细胞增殖转化反应以及提高IL-2基因表达和分泌能力的趋势,但与对照组无显著差异(P>0.05)。提示,胸腺九肽能增强鸡脾淋巴细胞的增殖转化反应,并主要在基因转录水平上促进IL-2的合成与分泌,其作用与剂量大小有关。 展开更多
关键词 胸腺九肽 淋巴细胞增殖 il-2基因
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鸡新城疫系疫苗诱导鸡IL-2基因转录及cDNA克隆的研究 被引量:2
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作者 李银聚 程相朝 +1 位作者 吴庭才 张春杰 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2004年第9期69-72,共4页
 应用RT-PCR方法从鸡新城疫 系疫苗接种鸡胚的脾淋巴细胞中扩增出IL-2基因cDNA。结果表明,以鸡新城疫 系疫苗稀释50倍或100倍接种10日龄鸡胚,培养48h的脾脏提取mRNA的扩增效果最好。测序结果显示,所扩增片段的核苷酸序列及其所编码的...  应用RT-PCR方法从鸡新城疫 系疫苗接种鸡胚的脾淋巴细胞中扩增出IL-2基因cDNA。结果表明,以鸡新城疫 系疫苗稀释50倍或100倍接种10日龄鸡胚,培养48h的脾脏提取mRNA的扩增效果最好。测序结果显示,所扩增片段的核苷酸序列及其所编码的氨基酸序列,与已发表的IL-2基因的同源性分别为97.7%~99.8%和95.1%~99.3%。其中第8位、68位和130位氨基酸(分别是L,V和S)的变异是其他品种鸡所没有的。 展开更多
关键词 il-2基因 转录 克隆 序列分析
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鸡IL-2基因cDNA输卵管组织特异性表达载体的构建与表达 被引量:2
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作者 吴庭才 李银聚 +1 位作者 张春杰 程相朝 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2005年第10期71-74,共4页
将克隆并测序的鸡卵清蛋白基因5′端调控序列和鸡IL-2基因cDNA,以串联方式置于真核表达载体pcDNA3的CM V启动子下游,构建了鸡输卵管定位表达载体pcDNA3-OVP-IL 2。将真核表达载体pcDNA3-IL 2和构建的输卵管定位表达载体pcDNA3-OVP-IL 2... 将克隆并测序的鸡卵清蛋白基因5′端调控序列和鸡IL-2基因cDNA,以串联方式置于真核表达载体pcDNA3的CM V启动子下游,构建了鸡输卵管定位表达载体pcDNA3-OVP-IL 2。将真核表达载体pcDNA3-IL 2和构建的输卵管定位表达载体pcDNA3-OVP-IL 2分别转染鸡输卵管上皮细胞,激素诱导72 h后,用淋巴细胞转化试验检测细胞培养液中IL-2的表达水平及生物学活性。结果显示,转染细胞均可表达IL-2,且所表达的IL-2有促进T淋巴细胞转化和淋巴母细胞成熟的活性;转染pcDNA3-OVP-IL 2的输卵管上皮细胞表达产物在1∶256稀释水平下仍具有促进T淋巴细胞转化和淋巴母细胞成熟的活性。转染pcDNA3-IL 2载体的输卵管上皮细胞虽有IL-2表达,但水平较低。 展开更多
关键词 il-2基因cDNA 输卵管定位表达 转染
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京海黄鸡柔嫩艾美尔球虫感染对脾脏和盲肠IL-6、IL-8、CCLi2基因表达量的影响及其相关性 被引量:3
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作者 辛世杰 王晓慧 +6 位作者 戴国俊 安婷婷 张涛 张跟喜 谢恺舟 王金玉 王宏胜 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2019年第1期39-46,共8页
白介素6(IL-6)、白介素8(IL-8)和CC趋化因子配体2(CCLi2) 3种细胞因子在炎症反应以及机体免疫方面发挥重要作用。为了揭示球虫感染对脾脏和盲肠中IL-6、IL-8和CCLi2的表达量的影响,以京海黄鸡(Gallus gallus)为试验材料,设球虫感染组和... 白介素6(IL-6)、白介素8(IL-8)和CC趋化因子配体2(CCLi2) 3种细胞因子在炎症反应以及机体免疫方面发挥重要作用。为了揭示球虫感染对脾脏和盲肠中IL-6、IL-8和CCLi2的表达量的影响,以京海黄鸡(Gallus gallus)为试验材料,设球虫感染组和非感染的对照组,利用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测了脾脏与盲肠组织中IL-6、IL-8和CCLi2的m RNA的相对表达量,比较同一组织感染组与对照组间3个基因表达量的差异,同时分析同一处理组的同一组织内、不同组织间3个基因表达量的相关性。研究结果表明:感染组脾脏组织IL-6、IL-8和CCLi2三个基因的表达量均显著高于对照组(P <0. 05),其中IL-6基因达极显著水平(P <0. 01);感染组盲肠组织中IL-6、IL-8和CCLi2的表达量均极显著地高于对照组(P <0. 01)。相关性分析结果表明,感染组脾脏组织中IL-6、IL-8和CCLi2的表达量之间均存在极显著的正相关(P <0. 01);在感染组盲肠组织中IL-8、CCLi2与IL-6基因的表达量存在极显著的正相关(P <0. 01),但IL-8与CCLi2基因表达量相关不显著(P> 0. 05);在对照组脾脏组织中,IL-6、IL-8与CCLi2间存在极显著的正相关(P <0. 01),其他基因间相关均不显著(P> 0. 05);对照组盲肠组织中IL-6、IL-8和CCLi2之间均存在极显著的正相关(P <0. 01);此外,无论感染组还是对照组,脾脏和盲肠组织间3个基因的表达量相关性均不显著(P> 0. 05)。以上结果表明,IL-6、IL-8和CCLi2可能在京海黄鸡球虫感染过程中发挥重要作用,研究结果对进一步探讨这3个基因在球虫病抗病育种中的作用提供了依据,对京海黄鸡球虫病抗病育种具有重要意义。 展开更多
关键词 京海黄鸡 盲肠 脾脏 il-6 il-8 CCLi 2 基因表达 相关性分析
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IBDV VP2/4/3-ChIL-2融合基因真核表达载体的构建及其在Vero细胞中的表达 被引量:1
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作者 万旺军 谢荣辉 +2 位作者 李龙 许健 于涟 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期255-262,共8页
构建含有传染性法氏囊病病毒(InfectiousBursalDiseaseVirus,IBDV)VP2/4/3和鸡白细胞介素2(ChickenInterleukin2,ChIL2)融合基因的真核表达载体pCIVP2/4/3IL2、pCIIL2VP2/4/3,并在Vero细胞中进行表达.应用重叠延伸剪切技术(splicingbyov... 构建含有传染性法氏囊病病毒(InfectiousBursalDiseaseVirus,IBDV)VP2/4/3和鸡白细胞介素2(ChickenInterleukin2,ChIL2)融合基因的真核表达载体pCIVP2/4/3IL2、pCIIL2VP2/4/3,并在Vero细胞中进行表达.应用重叠延伸剪切技术(splicingbyoverlappingextension),分别经3次PCR获得融合基因片段VP2/4/3IL2、IL2VP2/4/3,定向插入真核表达载体pCI中,获得重组质粒pCIVP2/4/3IL2、pCIIL2VP2/4/3,在脂质体介导下,分别转染Vero细胞.RTPCR检测证实导入的外源基因在Vero细胞中得到了转录;间接免疫荧光试验(IFA)和Westernblot检测证实重组质粒在Vero细胞中正确表达了插入的外源基因编码的融合蛋白,且表达的融合蛋白具有免疫反应性.重组真核表达载体pCIVP2/4/3IL2、pCIIL2VP2/4/3的成功构建及其在Vero细胞中的有效表达,为进一步探讨ChIL2作为分子免疫佐剂对IBDVDNA疫苗的特异性免疫增强作用奠定了基础. 展开更多
关键词 传染性法氏囊病病毒 多聚蛋白 鸡白细胞介素2 融合基因 真核表达
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鸡IL-2基因克隆及其重组质粒的构建与表达 被引量:2
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作者 许发芝 仲大莲 +3 位作者 刘玉华 余为一 李槿年 曾明华 《安徽农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期87-91,共5页
利用一对自行设计的引物,通过反转录-聚合酶链反应(RT PCR),从ConA诱导的5周龄SPF鸡脾细胞中扩增出鸡白细胞介素2(IL 2)基因片段,其长度为439bp,经酶切鉴定,初步确定为鸡IL 2基因。再将该IL 2基因片段定向插入真核表达质粒pcDNA3中,经DN... 利用一对自行设计的引物,通过反转录-聚合酶链反应(RT PCR),从ConA诱导的5周龄SPF鸡脾细胞中扩增出鸡白细胞介素2(IL 2)基因片段,其长度为439bp,经酶切鉴定,初步确定为鸡IL 2基因。再将该IL 2基因片段定向插入真核表达质粒pcDNA3中,经DNA序列鉴定,表明构建的重组质粒含有IL 2基因,该基因的cDNA序列与Sundick报道的结果基本一致。然后,将IL 2基因片段插入原核表达载体pGEX 4T 1,并导入菌株BL21,经诱导培养、蛋白提取和SDS PAGE,获得分子量约为42000的蛋白条带,表明所克隆的鸡IL 2基因在原核细胞中得到表达。 展开更多
关键词 il-2基因 基因克隆 重组质粒 基因表达 RT-PCR 白细胞介素2 细胞因子
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鸡IL-2和IL-4融合基因真核表达质粒的构建及其表达产物的生物学活性 被引量:1
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作者 徐彤 贡鑫 +6 位作者 郑明学 吕晓玲 郑龙龙 崔凯玲 张雪松 段步婷 白瑞 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2022年第4期30-34,共5页
为提高鸡球虫病活疫苗的免疫效果并降低其副作用,本试验用合成的鸡白介素2(chIL-2)和鸡白介素4(chIL-4)基因片段构建3个融合基因真核表达质粒,并利用脂质体法将其转染至原代鸡胚盲肠上皮细胞,通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测其表达水... 为提高鸡球虫病活疫苗的免疫效果并降低其副作用,本试验用合成的鸡白介素2(chIL-2)和鸡白介素4(chIL-4)基因片段构建3个融合基因真核表达质粒,并利用脂质体法将其转染至原代鸡胚盲肠上皮细胞,通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测其表达水平,MTT法测定其表达的分泌产物活性。结果显示:成功构建的pCI-chIL-4-chIL-2-EGFP、pCI-chIL-2-EGFP、pCI-chIL-4-EGFP重组真核表达质粒能在原代鸡胚盲肠上皮细胞中高效表达;3种重组真核表达质粒转染后24~96 h的鸡脾淋巴细胞活性极显著高于空载组(P<0.01),且在72 h时达峰值;而单一因子组鸡脾淋巴细胞增殖活性极显著低于pCI-chIL-4-chIL-2-EGFP组(P<0.01)。由此可见,本试验成功构建了能表达分泌chIL-2和chIL-4的融合基因重组质粒;且chIL-4-chIL-2融合蛋白生物学活性显著高于单一因子。 展开更多
关键词 细胞因子 鸡白介素2 鸡白介素4 生物学活性 基因佐剂
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鸡IL-2/NDV-F蛋白抗原表位融合基因的表达及免疫性初探
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作者 许发芝 吴胜国 余为一 《激光生物学报》 CAS CSCD 2011年第2期230-235,共6页
研究鸡白细胞介素-2(chicken interleukin-2,ChIL-2)的免疫佐剂功能,构建ChIL-2与新城疫病毒F蛋白多抗原表位(NDV-F)的嵌合基因,以对鸡新城疫疫病进行防治。采用重叠延伸PCR方法通过基因柔性接头将ChIL-2基因和NDV-F多抗原表位基因构建... 研究鸡白细胞介素-2(chicken interleukin-2,ChIL-2)的免疫佐剂功能,构建ChIL-2与新城疫病毒F蛋白多抗原表位(NDV-F)的嵌合基因,以对鸡新城疫疫病进行防治。采用重叠延伸PCR方法通过基因柔性接头将ChIL-2基因和NDV-F多抗原表位基因构建成ChIL-2-linker-NDV-F嵌合基因并克隆入PET-32a载体,经测序鉴定后,转化BL21大肠杆菌,IPTG诱导表达6×His融合蛋白,Ni2^+亲和柱纯化,表达产物经SDS-PAGE、Western blot和间接ELISA检测和鉴定。结果表明,实验成功构建并克隆了ChIL-2-linker-NDV-F嵌合基因,嵌合基因在大肠杆菌中表达的ChIL-2-linker-NDV-F融合蛋白分子量约为48kD,表达量约占菌体蛋白总量的45%,纯化后的ChIL-2-linker-NDV-F融合蛋白能与感染NDV的鸡血清发生反应。上述结果证明ChIL-2-linker-NDV-F嵌合基因在原核细胞中能有效表达,且融合蛋白具有较强的特异性和免疫原性。 展开更多
关键词 il-2基因 NDV-F蛋白 多抗原表位 融合蛋白
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鸡脾脏中IFN-γ和IL-2的基因表达水平研究 被引量:1
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作者 顾玉宝 杨树宝 +2 位作者 李小为 徐颖 栾维民 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期611-614,共4页
为了解鸡在胚胎期以及出壳后的机体免疫状态,本研究采用SYBRGreenI实时荧光定量RT-PCR方法,检测鸡在胚胎时期和出壳后(1日龄~35日龄)脾脏中IFN-γ和IL-2mRNA表达水平,并研究鸡脾脏免疫功能的建立情况。研究发现:鸡脾脏中IFN-γ和IL-2... 为了解鸡在胚胎期以及出壳后的机体免疫状态,本研究采用SYBRGreenI实时荧光定量RT-PCR方法,检测鸡在胚胎时期和出壳后(1日龄~35日龄)脾脏中IFN-γ和IL-2mRNA表达水平,并研究鸡脾脏免疫功能的建立情况。研究发现:鸡脾脏中IFN-γ和IL-2的基因表达最早于13胚龄被检测到,随后迅速升高,分别于出壳后7日龄和10日龄达到峰值。出壳后,鸡脾脏中同一种细胞因子的基因表达水平显著高于胚胎时期。研究还表明:IFN-γ和IL-2的基因表达模型与出壳后鸡脾脏的发育以及T细胞的迁移定殖情况相一致。该研究对从分子水平,进一步了解鸡在胚胎时期和出壳后,脾脏免疫功能的建立情况具有重要意义。 展开更多
关键词 实时荧光定量PCR Γ-干扰素 白细胞介素-2 基因表达 鸡脾脏
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鸡IL-4和IL-2重组融合基因佐剂对鸡球虫活疫苗的增效作用研究 被引量:3
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作者 崔凯玲 郝飞飞 +5 位作者 郑明学 吕晓玲 贡鑫 郑龙龙 徐彤 白瑞 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第9期18-22,共5页
为了研究鸡白细胞介素4(IL-4)和IL-2重组基因佐剂pCI-chIL-4-chIL-2-EGFP对鸡球虫活疫苗的增效作用,试验采用基因佐剂配合鸡球虫活疫苗对雏鸡进行免疫攻毒试验,测定该基因佐剂的最小有效剂量、给药途径,使用该基因佐剂对鸡球虫活疫苗的... 为了研究鸡白细胞介素4(IL-4)和IL-2重组基因佐剂pCI-chIL-4-chIL-2-EGFP对鸡球虫活疫苗的增效作用,试验采用基因佐剂配合鸡球虫活疫苗对雏鸡进行免疫攻毒试验,测定该基因佐剂的最小有效剂量、给药途径,使用该基因佐剂对鸡球虫活疫苗的最短免疫间隔时间和免疫产生期的影响。结果表明:抗球虫指数(ACI)和相对增重率(RWG)随着基因佐剂剂量增高而升高,肌肉注射100μg/只时,ACI(189.32)和RWG(90.35%)达到高峰;口服基因佐剂300μg/只组的ACI(188.41)与肌肉注射基因佐剂100μg/只组接近;肌肉注射佐剂免疫攻毒组的两次免疫最短间隔时间(6 d)较不加基因佐剂组(7 d)缩短1 d;肌肉注射佐剂免疫攻毒组的免疫产生期为二免后第5天,较无基因佐剂免疫攻毒组提前1 d。说明肌肉注射IL-4和IL-2重组基因佐剂pCI-chIL-4-chIL-2-EGFP 100μg/只可提高鸡球虫活疫苗的免疫效果,缩短免疫产生期和免疫间隔。 展开更多
关键词 基因佐剂 鸡球虫活疫苗 白细胞介素4(il-4) il-2 剂量 免疫效果
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黄麻羽肉鸡β-防御素基因AvBD 1和AvBD 2克隆、生物信息学分析及组织表达
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作者 康丹菊 彭秋云 +3 位作者 周嘉欣 陈进军 林红英 周光现 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期4325-4337,共13页
【目的】防御素是生物体内产生的具有广谱抗微生物作用的活性肽。深入认识鸡β-防御素AvBD1和AvBD2的基本信息,有助于进一步研究和应用其生物学功能。【方法】采用PCR方法扩增黄麻羽肉鸡AvBD 1和AvBD 2基因并克隆测序,将测序获得的CDS... 【目的】防御素是生物体内产生的具有广谱抗微生物作用的活性肽。深入认识鸡β-防御素AvBD1和AvBD2的基本信息,有助于进一步研究和应用其生物学功能。【方法】采用PCR方法扩增黄麻羽肉鸡AvBD 1和AvBD 2基因并克隆测序,将测序获得的CDS序列推导成氨基酸序列后进行相似性比对,利用在线软件分析所预测蛋白的生物信息学特性,并探究二者在黄麻羽肉鸡不同组织中的表达情况。【结果】黄麻羽肉鸡AvBD 1和AvBD 2基因CDS区大小分别为198和195 bp,可编码65和64个氨基酸,二者CDS区序列相似度为56%,氨基酸序列相似度为36%,可见二者并非同源基因。系统进化树表明,黄麻羽肉鸡与其他几个品种鸡的亲缘关系较近,其中AvBD 1基因与小鼠亲缘关系最远;AvBD 2基因与大山雀亲缘关系最远。生物信息学分析结果显示,AvBD1和AvBD2均为疏水性蛋白,且AvBD1疏水性和稳定性均强于AvBD2,均存在信号肽,但所处氨基酸位点不同,无跨膜结构域,二级结构主要元件分别为α-螺旋和无规则卷曲,但参与形成这2种构象的氨基酸比例差异较大。实时荧光定量PCR分析发现,AvBD 1和AvBD 2基因在黄麻羽肉鸡心脏、肝脏、肺脏、肾脏和十二指肠组织中整体表达趋势相似,均以肺脏中表达量最高,十二指肠中表达量最低。【结论】试验成功克隆了黄麻羽肉鸡AvBD 1和AvBD 2基因CDS区全长序列,分析了AvBD1和AvBD2蛋白的结构和功能,二者在黄麻羽肉鸡内脏组织中的mRNA表达趋势一致,为进一步阐明AvBD1和AvBD2的生物学功能及其在生产中的应用提供参考依据。 展开更多
关键词 黄麻羽肉鸡 AvBD 1基因 AvBD 2基因 克隆 序列分析 组织表达
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