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环状RNA MYO9A_043通过下调CPEB4表达发挥抑制小鼠心脏成纤维细胞纤维化表型的作用 被引量：1
1
作者 陈泽润 李艺 +7 位作者 梁俣 苏金凤 高原 欧涛 李晖 徐金东 方咸宏 单志新 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第7期1225-1232,共8页
目的:研究环状RNA MYO9A_043(circular RNA MY09A_043, circMY09A_043)对小鼠心肌纤维化的调控作用和机制。方法:利用重组腺病毒circMYO9A_043介导其在C57BL/6乳小鼠心脏成纤维细胞(mouse cardiac fibroblasts, mCFs)中过表达,通过RT-q... 目的:研究环状RNA MYO9A_043(circular RNA MY09A_043, circMY09A_043)对小鼠心肌纤维化的调控作用和机制。方法:利用重组腺病毒circMYO9A_043介导其在C57BL/6乳小鼠心脏成纤维细胞(mouse cardiac fibroblasts, mCFs)中过表达,通过RT-qPCR和Western blot实验检测纤维化相关基因Ⅰ型胶原α1链(collagen type Ⅰ alpha 1 chain, Col1a1)、Ⅲ型胶原α1链(collagen type Ⅲ alpha 1 chain, Col3a1)和平滑肌肌动蛋白α2(smooth muscle actin alpha 2, Acta2)的表达。利用划痕实验检测mCFs的迁移能力。利用RNA测序分析和RT-qPCR验证circMYO9A_043对mCFs中胞质多腺苷酸化元件结合蛋白4(cytoplasmic polyadenylation element binding protein 4,CPEB4)等基因的下调作用。利用腺病毒介导mCFs过表达CPEB4,检测CPEB4对纤维化相关基因表达的影响。通过RNA结合蛋白免疫沉淀(RNA binding protein immunoprecipitation, RIP)实验检测CPEB4与纤维化相关基因的结合作用。进一步通过放线菌素D处理实验,检测mCFs中CPEB4对Col1a1、Col3a1和Acta2 mRNA的稳定作用。结果:利用腺病毒可以有效介导circMYO9A_043在mCFs中过表达。circMYO9A_043可显著下调Col1a1、Col3a1和Acta2表达,抑制mCFs的迁移能力(P<0.05)。circMYO9A_043可显著降低mCFs中CPEB4的表达(P<0.01),过表达CPEB4可逆转circMYO9A_043对纤维化相关基因表达的抑制作用。RIP实验显示CPEB4与mCFs中纤维化相关基因的mRNA有显著结合作用(P<0.01),而放线菌素D处理实验结果显示CPEB4可显著增强上述基因mRNA的稳定性(P<0.05)。结论:circMYO9A_043通过下调CPEB4的表达而抑制mCFs纤维化表型。 展开更多
关键词 心肌纤维化 心脏成纤维细胞 环状rna MYO9A_043 胞质多腺苷酸化元件结合蛋白4
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circMYO9A_006通过翻译蛋白MYO9A-208aa发挥抑制心肌细胞肥大的作用
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作者 姜佳雪 苏金凤 +6 位作者 王娅 欧涛 李晖 徐金东 刘宇鹏 方咸宏 单志新 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期1-8,共8页
目的:研究环状RNA MYO9A_006(circMYO9A_006)对心肌细胞肥大表型的调控作用及可能机制。方法:利用腺病毒介导在乳小鼠心室肌细胞(NMVCs)中过表达circMYO9A_006,并以腺病毒介导过表达同样带有绿色荧光蛋白标签的空载体为对照,检测NMVCs... 目的:研究环状RNA MYO9A_006(circMYO9A_006)对心肌细胞肥大表型的调控作用及可能机制。方法:利用腺病毒介导在乳小鼠心室肌细胞(NMVCs)中过表达circMYO9A_006,并以腺病毒介导过表达同样带有绿色荧光蛋白标签的空载体为对照,检测NMVCs中心肌肥大相关蛋白β-肌球蛋白重链(β-MHC)、骨骼肌肌动蛋白α1(ACTA1)和心房钠尿肽(ANP)的表达。建立去氧肾上腺素(PE)诱导的乳大鼠心室肌细胞(NRVCs)肥大模型,通过鬼笔环肽染色检测过表达circMYO9A_006对NRVCs表面积的影响。双萤光素酶报告基因实验检测circMYO9A_006包含的潜在内部核糖体进入位点(IRES)的活性。通过Western blot实验检测circMYO9A_006翻译蛋白MYO9A-208aa及其在细胞内分布情况。分别制备circMYO9A_006-ORF(直接表达MYO9A-208aa)和circMYO9A_006-ATG-mut(不能表达MYO9A-208aa)重组病毒,以空载体病毒和circMYO9A_006重组病毒分别感染NRVCs,检测circMYO9A_006翻译蛋白MYO9A-208aa对心肌细胞肥大表型的特异调节作用。结果:利用腺病毒可在NMVCs中有效介导circMYO9A_006过表达。过表达circMYO9A_006可显著抑制NMVCs中心肌肥大相关蛋白的表达(P<0.01),并显著抑制PE诱导的NRVCs中心肌肥大相关蛋白的表达和细胞表面积的增加(P<0.05)。双萤光素酶报告基因实验结果提示,circMYO9A_006包含的2个IRES均具有活性。Western blot检测结果显示,在NRVCs中过表达circMYO9A_006可翻译预期大小为28 kD的MYO9A-208aa蛋白,并主要分布于细胞质中。过表达MYO9A-208aa和circMYO9A_006可一致地抑制NRVCs心肌肥大相关蛋白表达(P<0.01),并可逆转PE诱导的NRVCs肥大反应(P<0.05);而过表达circMYO9A_006-ATG-mut没有抑制NRVCs肥大的作用。结论:circMYO9A_006通过翻译蛋白MYO9A-208aa发挥抑制心肌细胞肥大的作用。 展开更多
关键词 心肌肥大 环状rna MYO9A_006 MYO9A-208aa蛋白 心肌细胞
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