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水稻D1基因新等位突变体的鉴定与功能分析
1
作者 高郡茹 权弘羽 +3 位作者 袁刘珍 李钦颖 乔磊 李文强 《中国水稻科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期140-149,共10页
[目的]株高是作物重要的农艺性状,挖掘株高控制基因并解析其分子功能,可为作物高产育种提供更多有用的基因资源。[方法]利用EMS诱变水稻日本晴获得的矮化突变体d1-11为材料,进行表型和细胞学观察,通过图位克隆的方法鉴定d1-11基因并对... [目的]株高是作物重要的农艺性状,挖掘株高控制基因并解析其分子功能,可为作物高产育种提供更多有用的基因资源。[方法]利用EMS诱变水稻日本晴获得的矮化突变体d1-11为材料,进行表型和细胞学观察,通过图位克隆的方法鉴定d1-11基因并对基因表达、激素含量和抗旱性进行了分析。[结果]d1-11突变体表现出植株矮化、叶片变短变宽和籽粒形态变圆表型;d1-11突变体叶片中脉萎缩,大脉和小脉数量和面积减少,导致叶片形态变异。d1-11基因被定位到水稻5号染色体R5M15.2和R5M15.8两个分子标记之间;图位克隆结果表明d1-11突变体中D1基因第11外显子和内含子交界处单碱基替换导致基因功能缺失。D1基因在苗期各组织中表达量较高,从分蘖期开始表达量降低;外源脱落酸(ABA)处理24 h后诱导D1基因表达,外源赤霉素(GA)处理抑制D1基因表达,盐胁迫处理24h诱导D1基因剧烈上调表达。d1-11突变体植株GA、油菜素内酯(BR)和生长素(IAA)等激素含量均上升,叶片相对含水量上升、叶片失水速率降低,植株对干旱胁迫抗性显著增强。[结论]鉴定到水稻D1基因新等位突变d1-11,发现d1-11突变体多种内源激素水平上升、叶片含水量增加、植株对干旱胁迫抗性增强。本研究进一步丰富了水稻矮化基因资源并揭示D1基因新的生物学功能。 展开更多
关键词 株高 矮化 d1基因 d1-11突变体 植物激素 干旱胁迫
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位点特异DNA甲基化调控细胞周期素D1基因
2
作者 杨刚 孟晨雪 +7 位作者 田洁 尚雨寒 张品正 孙佳佳 王旭莹 常铭杰 马雨凯 郭志义 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期1445-1452,共8页
DNA甲基化是基因表达调控的重要方式,一般被认为以CpG岛形式发挥作用;近年的研究表明,位点特异的DNA甲基化以元件(cis-regulatory element)的形式在生物微进化以及基因精细调控中发挥重要作用。我们的研究结果显示,曲古抑菌素A(trichost... DNA甲基化是基因表达调控的重要方式,一般被认为以CpG岛形式发挥作用;近年的研究表明,位点特异的DNA甲基化以元件(cis-regulatory element)的形式在生物微进化以及基因精细调控中发挥重要作用。我们的研究结果显示,曲古抑菌素A(trichostatin A,TSA)导致细胞周期蛋白D1基因表达下调,以及其核心启动子的+65到+77之间的两段串联CpG序列发生DNA甲基化。报告基因结果显示,由细胞周期素D1核心启动子片段驱动的报告基因活性在TSA处理后下降到原来0.12,而前段(A)突变与后段(B)突变时,报告基因活性分别下降到原来1/7.6与1/8.36,双突变则下降到原来1/7.51。对于CMV启动子嵌合15 bp片段驱动的报告基因活性,野生型、A、B与AB双突变型报告基因活性分别下降1/1.48、1/1.17、1/1.51以及1/1.21。体外甲基化研究结果显示,与对照组相比,M.SssⅠ处理组的启动子活性中,野生型活性下降到原来1/8800,A突变型活性下降到原来1/2700,B突变型活性下降到原来1/4156,双突变型活性下降到原来1/6222。应用M.HhaⅠ处理进一步区分甲基化位点,A和B突变型报告基因活性分别下降到原来1/1.11和1/1.40。有趣的是,比对发现劳亚兽总目的+66位点为T。由此,我们联合应用DNA定点突变与体外DNA甲基化模拟技术,研究了细胞周期蛋白D1基因位点DNA甲基化元件的作用。我们的研究表明,细胞周期蛋白D1基因核心启动子的+65位点的甲基化在转录调控过程中可能发挥关键作用,为位点特异甲基化在基因精细调控的机制研究提供实验数据。 展开更多
关键词 dNA位点特异性甲基化 转录调控 细胞周期素d1基因
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Glt25d1基因通过调节NKT细胞及Treg细胞比例加重Con A诱导的免疫性肝损伤
3
作者 韦何锐 高美欣 +1 位作者 肖凡 魏红山 《中国肝脏病杂志（电子版）》 CAS 2023年第4期33-38,共6页
目的 探讨胶原β(1-O)半乳糖基转移酶[collagen β(1-O) galactosyltransferase 1,COLGALT1/GLT25D1]基因在刀豆蛋白A(concanavalin A,Con A)诱导的自身免疫性肝损伤中的作用及可能机制。方法 6~8周雌性野生型(wild type,WT)小鼠和Glt2... 目的 探讨胶原β(1-O)半乳糖基转移酶[collagen β(1-O) galactosyltransferase 1,COLGALT1/GLT25D1]基因在刀豆蛋白A(concanavalin A,Con A)诱导的自身免疫性肝损伤中的作用及可能机制。方法 6~8周雌性野生型(wild type,WT)小鼠和Glt25d1基因敲低杂合子(Glt25d1^(+/-))小鼠分别分为2组(对照组和Con A造模组),每组中WT小鼠和Glt25d1^(+/-)小鼠均各有6只。Con A以10 mg/kg体质量的剂量经内眦静脉丛给药。于造模后12 h处死小鼠。留取血浆,检测血清丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate transaminase,AST)水平,留取肝组织,用于肝组织病理学评估和肝脏GLT25D1蛋白表达量测定。制备肝脏、脾脏及外周血单细胞悬液,运用流式细胞术比较两种小鼠的调节性T(regulatory T,Treg)细胞、自然杀伤T(natural killer T,NKT)细胞比例,并比较NKT细胞表面凋亡相关因子配体(factor related apoptosis ligand,FasL)表达差异。结果 对照组和Con A造模组中Glt25d1^(+/-)小鼠肝组织GLT25D1表达量均显著低于WT小鼠(对照组:0.342±0.168 vs1.144±0.169,t=5.841,P=0.004;Con A造模组:0.264±0.087 vs 0.964±0.058,t=11.640,P=0.0003)。经Con A诱导12 h后,Glt25d1^(+/-)小鼠ALT水平显著高于WT小鼠[(10155.2±4489.5)U/L vs (3078.5±111.0)U/L;t=-3.522,P=0.024]。肝组织HE染色显示Glt25d1^(+/-)小鼠肝板结构损坏更为严重,肝脏坏死区域更加广泛,汇管区炎性细胞浸润更加显著。流式细胞术检测显示,Con A造模组中Glt25d1^(+/-)小鼠脾脏中Treg细胞频数较WT小鼠显著减少[(7.849±1.116)%vs (9.892±1.762)%;t=2.978,P=0.008],肝脏NKT细胞频数[(9.244±6.898)%vs (3.376±4.794)%;t=-2.253,P=0.037]和NKT细胞FasL表达量[(29.62±4.960)%vs (16.43±3.964)%;t=-5.027,P=0.001]显著高于WT小鼠。结论 Glt25d1基因敲低加重Con A诱导的免疫性肝损伤,其机制可能与其降低Treg细胞频数、增加NKT细胞频数及增强NKT细胞功能有关。 展开更多
关键词 Glt25d1基因 自身免疫性肝炎 调节性T细胞 自然杀伤T细胞
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BP1基因和Cyclin D1基因在乳腺癌组织中的表达及意义 被引量：3
4
作者 宋永春 傅四东 +2 位作者 温小鹏 马振华 党诚学 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2007年第7期709-714,共6页
背景与目的:BP1基因是新近发现的转录因子,属于同源盒基因的DLX家族。近年来的国内外研究显示BP1基因与人乳腺癌的发病密切相关。目前BP1基因与细胞周期控制因子之间的关系未见进一步的研究报道。本研究拟观察人乳腺癌组织中BP1的表达... 背景与目的:BP1基因是新近发现的转录因子,属于同源盒基因的DLX家族。近年来的国内外研究显示BP1基因与人乳腺癌的发病密切相关。目前BP1基因与细胞周期控制因子之间的关系未见进一步的研究报道。本研究拟观察人乳腺癌组织中BP1的表达情况以及BP1与Cyclin D1表达的关系。方法:收集86例乳腺癌组织和20例癌旁组织,用RT-PCR的方法检测乳腺癌组织和癌旁组织中BP1 mRNA表达的情况。合成BP1多抗,用Western blot方法验证BP1多抗的效果,并检测86例乳腺癌组织中BP1和Cyclin D1免疫组化的情况及BP1蛋白和Cyclin D1蛋白有无共表达。结果:86例乳腺癌组织中,60例呈BP1 mRNA阳性(69.8%)。20例癌旁组织中BP1 mRNA均为阴性。乳腺癌组织中BP1 mRNA表达明显高于癌旁组织(P=0.000)。在86例乳腺癌组织中,Cyclin D1 mRNA表达率为64.0%(55/86),与BP1 mRNA共阳性的有52例,共阴性的有23例,BP1 mRNA和Cyclin D1 mRNA存在共表达(P=0.277)。另外,在86例乳腺癌组织免疫组化检测中,43例呈BP1和Cyclin D1共阳性表达,31例呈BP1和Cyclin D1共阴性。经配对χ2检验显示,Cyclin D1与BP1也存在共表达(P=0.146)。结论:BP1基因在人乳腺癌组织中有较高的表达率,BP1基因和Cyclin D1基因在人乳腺癌组织中有共表达。BP1基因可能是通过调节细胞周期控制因子Cyclin D1导致乳腺癌发生的。 展开更多
关键词 乳腺肿瘤 BPl基因 CYCLIN d1基因 基因表达 逆转录聚合酶链反应 免疫组化
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鸭多巴胺受体D1基因CDS区多态性与生长性状的关联性分析 被引量：3
5
作者 潘兰兵 张依裕 +4 位作者 林家栋 李思 李万贵 杨永强 刘若余 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第1期155-159,共5页
本研究采用PCR-SSCP法与DNA直接测序技术相结合对兴义鸭和樱桃谷鸭多巴胺受体D1(dopamine receptor D1,DRD1)基因编码序列(coding sequence,CDS)区130-587bp区域的多态性进行检测,并分析其多态性对樱桃谷鸭生长性状的影响。结果表明,在... 本研究采用PCR-SSCP法与DNA直接测序技术相结合对兴义鸭和樱桃谷鸭多巴胺受体D1(dopamine receptor D1,DRD1)基因编码序列(coding sequence,CDS)区130-587bp区域的多态性进行检测,并分析其多态性对樱桃谷鸭生长性状的影响。结果表明,在樱桃谷鸭和兴义鸭DRD1基因编码区130-587bp区域内均检测到3种基因型:AA、BB和AB,2个等位基因:A和B;AA基因型均为优势基因型,频率分别为0.7416和0.5643,等位基因A均为优势等位基因,频率分别是0.8539和0.7204;多态信息含量分别为0.2184和0.3217,分别处于低度多态和中度多态位点,樱桃谷鸭群体中该座位基因型分布处于Hardy-Weinberg平衡(P>0.05),兴义鸭群体则偏离了Hardy-Weinberg平衡(P<0.05);序列比对发现2个SNPs位点,其中c.189T>C为同义突变,c.507T>A为错义突变,导致丝氨酸(S)变成精氨酸(R)。关联分析结果显示,BB基因型樱桃谷鸭个体的8周龄重和12周龄体斜长显著高于AB基因型(P<0.05),10周龄重、12周龄重和12周龄胸深显著高于AA和AB基因型(P<0.05)。研究结果揭示该多态座位可能是影响鸭生长性状的一个标记辅助选择位点。 展开更多
关键词 鸭 多巴胺受体d1基因 编码序列 PCR-SSCP SNPS
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新疆哈萨克族ADD1基因Gly460Trp多态性同高血压病的关联 被引量：7
6
作者 张朝霞 刘燕 +4 位作者 林仁勇 汪师贞 王笑峰 温浩 金力 《复旦学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期239-242,共4页
目的　探讨在新疆哈萨克族遗传隔离群中内收蛋白α亚单位 (α adducin ,ADD1)基因第 10外显子Gly4 6 0Trp多态性同高血压病 (essentialhypertension ,EH)的关系。方法　收集哈萨克族EH组 2 78例 ,正常血压(normaltensive ,NT)组 2 2 0... 目的　探讨在新疆哈萨克族遗传隔离群中内收蛋白α亚单位 (α adducin ,ADD1)基因第 10外显子Gly4 6 0Trp多态性同高血压病 (essentialhypertension ,EH)的关系。方法　收集哈萨克族EH组 2 78例 ,正常血压(normaltensive ,NT)组 2 2 0例。测定EH患者和NT者体重指数、空腹血糖、血浆胆固醇、三酰甘油。提取白细胞基因组DNA。用MS PCR法检测ADD1基因Gly4 6 0Trp多态性。 结果　Gly4 6 0Trp多态性符合Hardy Weingerg平衡。Gly4 6 0Trp基因型频率 (P =0 .5 4 )及等位基因频率 (P =0 .4 5 )分布在EH组及NT组无统计学差异。对未治疗的EH者 ,未发现Gly/Gly、Gly/Trp、Trp/Trp基因型间血压、体重指数、血糖、血脂水平有显著性差异。 结论　ADD1基因Gly4 6 0Trp多态性可能与新疆哈萨克族EH发病无关。 展开更多
关键词 新疆哈萨克族 d1基因 高血压病 多态性 Ad AddUCIN 关联 基因组dNA PCR法检测 等位基因频率 体重指数 血浆胆固醇 统计学差异 基因型频率 显著性差异 Trp Α亚单位 正常血压 EH患者 空腹血糖 三酰甘油 血脂水平 外显子 白细胞 未发现 NT
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猪CACNA2D1基因3′UTR单核苷酸多态性与肉质性状的效应研究 被引量：3
7
作者 李建华 杨明生 徐宁迎 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2007年第4期76-79,共4页
CACNA2D1基因定位在猪的第9号染色体上,其位置与影响肉质性状的QTL重叠,可作为肉质性状的候选基因。采用PCR-SSCP技术,对160头金华×皮特兰资源家系F2猪CACNA2D1基因3′端非翻译区片段进行扩增分型,共产生2种等位基因,3种基因型。... CACNA2D1基因定位在猪的第9号染色体上,其位置与影响肉质性状的QTL重叠,可作为肉质性状的候选基因。采用PCR-SSCP技术,对160头金华×皮特兰资源家系F2猪CACNA2D1基因3′端非翻译区片段进行扩增分型,共产生2种等位基因,3种基因型。通过测序发现,在CACNA2D1基因3′端非翻译区(序列DQ981407)有一单核苷酸替换(C→A)。对不同标记基因型与肉质性状的最小二乘分析表明,AA基因型猪大腿肌肉的pH45值、大腿肌肉导电率和肌内脂肪含量的最小二乘均数比BB基因型分别高0.169,0.26和0.021,差异显著(P<0.05);A等位基因的加性效应分别为0.084 5,0.133 5和0.010 5。 展开更多
关键词 猪 CACNA2d1基因 PCR-SSCP 肉质
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猪CACNA2D1基因定位及与相关遗传图谱的整合分析 被引量：3
8
作者 李建华 杨明生 徐宁迎 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2008年第1期49-53,共5页
【目的】定位猪CACNA2D1基因并分析该基因是否可作为影响猪某些生产性状的候选基因。【方法】扩增并测定猪CACNA2D1基因的部分序列，运用辐射杂种细胞系对其进行定位并将定位结果与相关遗传图谱进行整合分析。【结果】将猪cAcNA2D1基因... 【目的】定位猪CACNA2D1基因并分析该基因是否可作为影响猪某些生产性状的候选基因。【方法】扩增并测定猪CACNA2D1基因的部分序列，运用辐射杂种细胞系对其进行定位并将定位结果与相关遗传图谱进行整合分析。【结果】将猪cAcNA2D1基因定位在猪9号染色体79．3～86．7cM的位置上，发现在cACNA2D1基因定位区域有3个分别影响母猪发情期排卵数、胴体肩胛重以及10周龄体重的QTL，在定位区域附近有影响猪屠宰24h后肌肉pH值的QTL。【结论】猪CACNA2D1基因可作为猪繁殖性状、胴体性状、生长性状甚至肉质性状的候选基因进行进一步的研究。 展开更多
关键词 猪 CACNA2d1基因 基因定位 候选基因
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中国西门塔尔牛CACNA2D1基因的遗传变异及其与屠宰性状的关联分析 被引量：2
9
作者 张猛 张立敏 +10 位作者 周正奎 袁峥嵘 黄萌 邓桂馨 刘喜冬 刘利 李姣 高雪 高会江 许尚忠 李俊雅 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2011年第4期50-60,共11页
旨在研究中国西门塔尔牛CACNA2D1基因的遗传变异及其与屠宰性状的关系。本试验与所采用的传统的PCR-SSCP或者PCR-RFLP技术不同,首次借助高通量SNP芯片技术在136头中国西门塔尔牛群体中对CACNA2D1基因的遗传变异进行了研究。结果显示,在... 旨在研究中国西门塔尔牛CACNA2D1基因的遗传变异及其与屠宰性状的关系。本试验与所采用的传统的PCR-SSCP或者PCR-RFLP技术不同,首次借助高通量SNP芯片技术在136头中国西门塔尔牛群体中对CACNA2D1基因的遗传变异进行了研究。结果显示,在中国西门塔尔牛CACNA2D1基因上总计发现12个有效SNP位点,其中4个位点Ho、He和PIC值较低属于中低度多态,8个位点属于高度多态。卡方适合性检验表明,10个位点处于HarDY-Weinberg平衡状态(P>0.05)。各位点遗传变异与屠宰性状进行关联分析显示,位点1不同基因型个体在肉色性状方面差异显著(P<0.05),位点2不同基因型个体在大腿肉厚方面差异显著(P<0.05),位点3不同基因型个体在胴体重、屠宰率、眼肌面积和大腿肉厚几个重要屠宰性状差异显著(P<0.05),在肉色性状达到了差异极显著(P<0.01)。位点3杂合子AB基因型为优势基因型,其他位点AA为优势基因型。本研究表明,CACNA2D1基因可以作为中国西门塔尔牛部分屠宰性状候选基因,尤其是位点3可以作为中国西门塔尔牛屠宰性状的重要潜在分子标记,从而为中国西门塔尔牛现代育种提供一定参考。 展开更多
关键词 中国西门塔尔牛 CACNA2d1基因 SNP芯片技术 屠宰性状 关联分析
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水貂多巴胺受体D1基因多态性及与自咬行为的关系 被引量：4
10
作者 林宁 宁方勇 +1 位作者 王光圣 白秀娟 《中国畜牧兽医》 CAS 2008年第6期52-55,共4页
以多巴胺受体D1基因(DRD1)作为候选基因,分析该基因对水貂自咬行为的影响。本试验采用聚合酶链式反应法,首次从美洲黑貂脚部肌肉组织扩增出多巴胺受体D1基因的部分序列片段,并测序,现已将该序列提交到GenBank上,得到序列号为EU249297。... 以多巴胺受体D1基因(DRD1)作为候选基因,分析该基因对水貂自咬行为的影响。本试验采用聚合酶链式反应法,首次从美洲黑貂脚部肌肉组织扩增出多巴胺受体D1基因的部分序列片段,并测序,现已将该序列提交到GenBank上,得到序列号为EU249297。通过序列比较,在179位点处发生了(T→C)转换,但并没有导致氨基酸的变化。采用单链构象多态性(PCR-SSCP)方法进行了多态性检测,结果在不同个体中检测到3种基因型:AA、AB和BB型。对该基因的不同基因型与自咬行为的关系进行分析。结果表明,DRD1多态性对水貂自咬行为的影响差异显著(P<0.05)。在该群体中A等位基因的频率均高于B等位基因,AA型的基因型频率均高于BB型的基因型频率;自咬行为组AA基因型的频率远低于健康组,BB和AB基因型个体分布频率比较差异显著。 展开更多
关键词 美洲黑貂 多巴胺受体d1基因 自咬行为 PCR-SSCP
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二甲基氨基偶氮苯对肝脏和大脑组织中CYP2D1基因表达的影响 被引量：4
11
作者 宁宗 王乃平 +2 位作者 臧林泉 韦锦斌 李丽 《实用癌症杂志》 2003年第1期13-15,共3页
目的　研究二甲基氨基偶氮苯 (DAB)对大鼠肝脏和大脑组织中CYP2D1基因表达的影响。方法　用二甲基氨基偶氮苯 (DAB)诱发大鼠形成肝癌 ,应用改进的逆转录聚合酶链式反应 (RT -PCR )技术检测CYP2D1mRNA的表达情况。结果　第1次PCR经 3 0... 目的　研究二甲基氨基偶氮苯 (DAB)对大鼠肝脏和大脑组织中CYP2D1基因表达的影响。方法　用二甲基氨基偶氮苯 (DAB)诱发大鼠形成肝癌 ,应用改进的逆转录聚合酶链式反应 (RT -PCR )技术检测CYP2D1mRNA的表达情况。结果　第1次PCR经 3 0轮循环扩增后 ,正常大鼠和肝癌大鼠的肝脏组织中均有CYP2D 1表达 ,而大脑组织中无表达 ;第 2次PCR以前次的产物作为模板 ,再经 3 0轮扩增后 ,可见正常大鼠和肝癌大鼠的肝脏组织及大脑组织中均有CYP2D 1表达 ,大脑组织PCR产物电泳条带密度低于肝脏组织。结论　肝癌大鼠的肝脏组织中有CYP2D1表达 ,其表达水平与正常组织一样 ,大脑组织中CYP2D1虽有表达 ,但是其表达水平明显低于肝脏组织。 展开更多
关键词 二甲基氨基偶氮苯 CYP2d1基因 肝脏肿瘤 肝脏组织 大脑组织
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动物CACNA2D1基因研究进展 被引量：2
12
作者 李建华 杨明生 +1 位作者 母昌考 徐宁迎 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第4期1378-1379,共2页
CACNA2D1基因是编码动物L-型钙离子通道2αδ1亚基的基因。有研究表明,CACNA2D1基因可影响钙离子通道钙流的性质,其单核苷酸变异与某些疾病有关。综述了CACNA2D1基因在生物学特性、染色体上的位置、基本功能、表达调控及其单核苷酸多态... CACNA2D1基因是编码动物L-型钙离子通道2αδ1亚基的基因。有研究表明,CACNA2D1基因可影响钙离子通道钙流的性质,其单核苷酸变异与某些疾病有关。综述了CACNA2D1基因在生物学特性、染色体上的位置、基本功能、表达调控及其单核苷酸多态性与疾病的关系等方面的最新研究成果。 展开更多
关键词 CACNA2d1基因 L-型钙离子通道 α2δ1亚基
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杜氏盐藻光系统Ⅱ反应中心蛋白D1基因的克隆及序列分析 被引量：1
13
作者 刘红涛 范天黎 +3 位作者 鲁照明 王鹏举 陈涛 薛乐勋 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2008年第6期1123-1126,共4页
目的:克隆杜氏盐藻光系统Ⅱ反应中心蛋白D1(psbA)基因cDNA片段。方法:根据莱茵衣藻、稻以及普通小球藻等真核生物psbA基因的氨基酸高度保守序列,设计一对简并引物,利用Trizol试剂提取杜氏盐藻细胞总RNA,通过RT-PCR获得杜氏盐藻psbA cDNA... 目的:克隆杜氏盐藻光系统Ⅱ反应中心蛋白D1(psbA)基因cDNA片段。方法:根据莱茵衣藻、稻以及普通小球藻等真核生物psbA基因的氨基酸高度保守序列,设计一对简并引物,利用Trizol试剂提取杜氏盐藻细胞总RNA,通过RT-PCR获得杜氏盐藻psbA cDNA,PCR产物连接T载体转化大肠杆菌JM109,随机挑取数个菌落,筛选鉴定并测序,测序结果进行Blast比对分析和密码子偏爱性分析。结果:获得的cDNA片段长度为999 bp,编码333个氨基酸。其氨基酸序列与其他物种进行Blast比对,同源性分别为:衣藻89%、椭圆小球藻89%、莱茵衣藻89%、普通小球藻88%和玉米87%。psbA基因存在明显的密码子偏爱性,其(A+T)含量明显高于(G+C)含量。另外,所克隆的psbA序列编码赖氨酸残基的数量为1个。结论:所克隆的序列为杜氏盐藻psbA基因cDNA片段。 展开更多
关键词 杜氏盐藻 光系统Ⅱ反应中心蛋白d1基因 简并引物 密码子偏爱性
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P53、P21^(WAF/CIP1)和Cyclin D1基因蛋白在沥青烟暴露小鼠肺组织中的表达 被引量：1
14
作者 郭湘云 马丽雅 刘晓霞 《环境与职业医学》 CAS 北大核心 2008年第2期167-170,共4页
[目的]探讨沥青烟对小鼠肺组织形态及基因蛋白P53、P21^(WAF/CIP1)和Cyclin D1表达的影响。[方法]建立沥青烟亚急性染毒小鼠模型,将120只昆明种健康小鼠随机分为3组,即1个对照组和2个染毒组,染毒组进行不同浓度(55、165mg/m^3)和不同时... [目的]探讨沥青烟对小鼠肺组织形态及基因蛋白P53、P21^(WAF/CIP1)和Cyclin D1表达的影响。[方法]建立沥青烟亚急性染毒小鼠模型,将120只昆明种健康小鼠随机分为3组,即1个对照组和2个染毒组,染毒组进行不同浓度(55、165mg/m^3)和不同时间(30、60d)染毒,光镜下观察肺组织形态改变,采用免疫组化S-P法,对P53、P21、Cyclin D1染色,观察P53、P21和Cyclin D1基因蛋白表达。[结果]不同浓度、不同时间染毒小鼠肺组织形态有不同程度改变,高浓度染毒组出现不典型增生。小鼠肺组织P53基因蛋白表现为低浓度染毒30d组,未见阳性表达;高浓度染毒60d组呈强阳性表达(P<0.01)。P21^(WAF/CIP1)基因蛋白表达低浓度染毒30d呈阳性表达;高浓度染毒60d组表达明显下调(P<0.01)。Cyclin D1基因蛋白表达同P53基因蛋白表达。[结论]随着染毒浓度和染毒时间的增加,肺组织增生逐渐明显,P53和Cyclin D1基因蛋白的表达呈上升趋势,P21^(WAF/CIP1)呈下降趋势。 展开更多
关键词 沥青烟 P53 P21^WAF/CIP1 Cyclin d1基因蛋白表达 病理形态
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Cyclin D1基因沉默对K562细胞增殖及凋亡的影响 被引量：1
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作者 万一元 刘扬清 +1 位作者 陈小飞 姜文奇 《肿瘤学杂志》 CAS 2008年第1期48-52,共5页
[目的]利用RNA干扰(RNAi)技术观测其对白血病K562细胞cyclin D1基因的沉默效应及对细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响。[方法]体外构建靶向cyclin D1基因的小发夹RNA(shRNA)表达质粒,通过壳聚糖介导转染K562细胞,Western blot分析检测转... [目的]利用RNA干扰(RNAi)技术观测其对白血病K562细胞cyclin D1基因的沉默效应及对细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响。[方法]体外构建靶向cyclin D1基因的小发夹RNA(shRNA)表达质粒,通过壳聚糖介导转染K562细胞,Western blot分析检测转染前后cyclin D1蛋白表达变化;集落形成实验检测细胞增殖能力;流式细胞仪检测细胞周期分布及凋亡情况。[结果]构建靶向cyclin D1基因的shRNA表达质粒(pshRNA-419和pshRNA-575)经壳聚糖转染后,能显著抑制cyclin D1基因表达;抑制K562细胞增殖,影响其集落形成能力;细胞阻滞于G0/G1期,细胞凋亡明显。而m-pshRNA-790质粒并无上述生物学效应。[结论]cyclin D1基因表达下调可抑制K562细胞生长,影响细胞周期分布,并诱导细胞凋亡。提示cyclin D1基因可能是白血病治疗的一个有效靶点。 展开更多
关键词 CYCLIN d1基因 K562细胞 细胞周期 凋亡 RNA干扰 小发夹RNA
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RNA干扰靶向cyclin D1基因对K562细胞化疗增敏的研究 被引量：1
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作者 万一元 曹小龙 姜文奇 《国际医药卫生导报》 2007年第9期14-21,共8页
目的cyclinD1基因在细胞周期调控中起关键性作用。研究表明其过表达与肿瘤的发生、发展及预后密切相关；并且与肿瘤细胞对化疗药物抗拒性有关。抑制CYClinD1蛋白表达可达到化疗增敏作用。本研究利用RNA干扰（RNAi）技术体外观测其对K56... 目的cyclinD1基因在细胞周期调控中起关键性作用。研究表明其过表达与肿瘤的发生、发展及预后密切相关；并且与肿瘤细胞对化疗药物抗拒性有关。抑制CYClinD1蛋白表达可达到化疗增敏作用。本研究利用RNA干扰（RNAi）技术体外观测其对K562细胞cyclinD1基因的沉默效应及增强阿霉素（ADM）对K562细胞毒性作用。方法体外构建靶向cyclinD1基因的小发夹RNA（shRNA）表达质粒，通过壳聚糖介导转染K562细胞，Westernblot分析检测转染前后CyclinD1蛋白表达变化，流式细胞仪检测细胞周期分布及凋亡率的影响以及MTT法检测K562细胞对ADM敏感性的变化。结果构建靶向cyclinD1基因的ShRNA表达质粒（pshRNA-419和PshRNA-575）经壳聚糖转染后，能显著抑制cyclinD1基因表达；影响K562细胞周期分布，诱导细胞凋亡，并降低ADM半数抑制浓度，提高了化疗敏感性。而设计一碱基突变的序列所构建的质粒并无上述生物学效应。结论沉默K562细胞cyclinD1基因表达可达到有效的化疗增敏目的。 展开更多
关键词 CYCLIN d1基因 RNA干扰 小发夹RNA K562细胞 化疗敏感性
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RNA干扰沉默Cyclin D1基因对胰腺癌AsPC-1细胞增殖和凋亡的影响
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作者 肖卫东 李勇 +4 位作者 李学明 蔡军 邓君 曾林山 胡伟 《山东医药》 CAS 北大核心 2011年第43期20-22,共3页
目的探讨以细胞周期蛋白(Cyclin)D1为靶基因的RNA干扰对胰腺癌AsPC-1细胞增殖和凋亡的影响,为胰腺癌的靶向治疗提供依据。方法用含有10%FBS的DMEM培养液在37℃、5%CO2培养箱中常规培养AsPC-1细胞,至对数生长期后接种于96孔培养板中,随... 目的探讨以细胞周期蛋白(Cyclin)D1为靶基因的RNA干扰对胰腺癌AsPC-1细胞增殖和凋亡的影响,为胰腺癌的靶向治疗提供依据。方法用含有10%FBS的DMEM培养液在37℃、5%CO2培养箱中常规培养AsPC-1细胞,至对数生长期后接种于96孔培养板中,随机分为实验组、阴性对照组、空白对照组,并采用Lipo-fectamineTM2000脂质体分别转染Cyclin D1-小干扰RNA(siRNA)、阴性对照siRNA、脂质体4,8 h时收集细胞。应用荧光定量PCR法和Western blot法分别检测细胞中Cyclin D1 mRNA和蛋白表达水平,MTT法检测细胞体外增殖活力,流式细胞仪检测细胞周期分布及凋亡率(AI)。结果与空白对照组和阴性对照组相比,实验组Cyclin D1 mR-NA和蛋白表达均明显下调,细胞生长速度明显减慢,G0/G1细胞比例显著增大、S期细胞比例则明显降低、AI显著升高(P均<0.01)。结论 Cyclin D1-siRNA能通过沉默靶基因表达抑制AsPC-1细胞生长、改变细胞周期分布、诱导细胞凋亡,可作为胰腺癌基因治疗的一个有效靶点。 展开更多
关键词 胰腺肿瘤 胰腺癌 CYCLIN d1基因 RNA干扰 细胞增殖 细胞凋亡
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CACNA2D1基因第19内含子的SNP与猪腿臀肌电导率的相关分析
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作者 李建华 徐宁迎 +1 位作者 吕帮玉 汪殿蓓 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期600-603,共4页
采用PCR-SSCP检测猪CACNA2D1基因第19外显子和内含子在6个猪群中的DNA多态性,对纯合子个体测序检测,发现在CACNA2D1基因第19内含子中存在1个多态位点(C 2667 T,FJ156361)。χ2独立性检验结果表明,CACNA2D1基因扩增片段基因型在大白猪和... 采用PCR-SSCP检测猪CACNA2D1基因第19外显子和内含子在6个猪群中的DNA多态性,对纯合子个体测序检测,发现在CACNA2D1基因第19内含子中存在1个多态位点(C 2667 T,FJ156361)。χ2独立性检验结果表明,CACNA2D1基因扩增片段基因型在大白猪和皮特兰猪及金华和野猪猪群间分布差异不显著(P>0.05),而在其它猪群间的分布差异极显著(P<0.01)。对金华×皮特兰F2资源家系猪进行该多态位点的基因型判定,并分析不同基因型对猪腿臀肌电导率的遗传效应,结果显示:TT基因型猪腿臀肌电导率最小二乘均数分别比CC和CT基因型猪大2.58和2.44,差异显著(P<0.05)。 展开更多
关键词 猪 CACNA2d1基因 PCR—SSCP 腿臀肌电导率
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人DRD1基因启动子区克隆和双荧光素酶报告基因系统的构建
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作者 王春红 李哲 +2 位作者 王明菡 邓丽丽 王欢 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2016年第40期6060-6066,共7页
背景:多巴胺受体启动子区多态性位点的改变会影响受体的表达量,进而影响多巴胺能神经递质的作用,导致相关疾病的发生。目的:通过克隆人DRD1基因的启动子区,构建含有该基因启动子序列的双荧光素酶报告基因载体并检测其活性,为研究DRD1基... 背景:多巴胺受体启动子区多态性位点的改变会影响受体的表达量,进而影响多巴胺能神经递质的作用,导致相关疾病的发生。目的:通过克隆人DRD1基因的启动子区,构建含有该基因启动子序列的双荧光素酶报告基因载体并检测其活性,为研究DRD1基因的转录调控提供基础工具。方法:以人静脉血基因组DNA为模板,通过PCR扩增DRD1基因启动子序列并克隆至pG M-T载体,测序验证无误后酶切连接至萤火虫荧光素酶报告基因质粒pG L3-Basic,构建含有DRD1基因启动子的荧光素酶报告基因载体,采用阳离子脂质体法与内对照质粒pG L3-TK共转染HEK293细胞同时以不含启动子的pG L3-Basic载体与内对照质粒pG L3-TK共转染作为阴性对照组,化学发光仪检测相对荧光强度。结果与结论:(1)通过酶切和测序验证重组荧光素酶报告基因载体的DRD1基因启动子区序列正确;(2)与阴性对照组相比,该重组载体转染HEK293细胞后具有转录活性;(3)成功构建了含有DRD1基因启动子区的荧光素酶报告基因载体,为研究该基因的转录调控提供了基础工具。 展开更多
关键词 实验动物 基因病毒载体相关因子模型 多巴胺受体d1基因 双荧光素酶报告基因 启动子 克隆
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动物CACNA2D1基因进化遗传研究
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作者 李建华 戴余军 +1 位作者 杨明生 母昌考 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第25期10791-10793,10797,共4页
[目的]评估该基因在进化遗传中所受到的选择作用,揭示该基因的结构特征和保守性,为进一步研究该基因的功能奠定基础。[方法]参照NCBI数据库上发表的6种动物CACNA2D1基因编码序列,利用常规生物学软件,对动物CACNA2D1基因进行进化遗传分析... [目的]评估该基因在进化遗传中所受到的选择作用,揭示该基因的结构特征和保守性,为进一步研究该基因的功能奠定基础。[方法]参照NCBI数据库上发表的6种动物CACNA2D1基因编码序列,利用常规生物学软件,对动物CACNA2D1基因进行进化遗传分析。[结果]这6个动物的CACNA2D1基因序列核苷酸组成基本相同,其平均GC含量为42%,偏倚不严重,这6条同源序列的ENC值在50.319-53.624,CACNA2D1基因在密码子的使用上存在轻度偏倚,该基因各同源基因间的同义和非同义替换率之比不同,且变化范围较大,该基因在进化过程中极为保守且经历了净化选择。[结论]CACNA2D1基因可能是影响动物生长发育的重要候选基因,具有较高的研究价值。 展开更多
关键词 CACNA2d1基因 编码序列 进化遗传
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