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RYR1基因突变和表达异常在胃癌发生发展中作用机制研究
1
作者 刘晨冉 程亚楠 +2 位作者 王妍 尉迟之光 于津浦 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期271-280,共10页
目的:探讨RYR1基因与胃癌发生发展的相关性以及RYR1促进胃癌恶性进展的作用机制。方法:分析TCGA数据库胃癌患者数据,并回顾性选取2010年12月至2012年12月就诊于天津医科大学肿瘤医院的81例胃癌患者的组织样本进行高通量靶向测序和转录... 目的:探讨RYR1基因与胃癌发生发展的相关性以及RYR1促进胃癌恶性进展的作用机制。方法:分析TCGA数据库胃癌患者数据,并回顾性选取2010年12月至2012年12月就诊于天津医科大学肿瘤医院的81例胃癌患者的组织样本进行高通量靶向测序和转录组测序(TJMUCH队列),收集临床病理信息,比较RYR1基因突变与表达之间相关性,分析RYR1基因对胃癌患者预后的影响,构建RYR1过表达细胞系探索RYR1促进胃癌发生发展的作用机制。结果:在TCGA数据库胃癌患者中,亚洲人群RYR1突变率更高(12.68%vs. 8.13%),在TJMUCH队列胃癌患者中,RYR1基因突变率位于第9位,突变率为33.33%。RYR1突变与表达水平显著负相关(P=0.006 9,P<0.000 1),但RYR1高表达患者的总生存期显著差于低表达RYR1患者(P=0.009 0,P=0.042 0)。RYR1的过表达会促进细胞增殖、迁移、侵袭,减少凋亡,且可下调胃癌细胞对化疗药物的敏感性。抑制RYR1介导的钙离子过度释放可以抑制其恶性生物学行为,并逆转化疗耐药。结论:RYR1基因在亚洲胃癌患者中突变率较高,RYR1突变与表达水平显著负相关,RYR1高表达是胃癌新的预后预测标志物。RYR1过表达可增加内质网钙离子释放而促进胃癌恶性进展,并产生化疗抵抗。靶向阻断RYR1活性可抑制胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭,并逆转化疗药抵抗,为胃癌的联合治疗提供新思路。 展开更多
关键词 胃癌 RYR1基因 基因突变 基因表达 钙离子
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脂多糖与钙离子共处理的牛乳腺上皮细胞miRNA表达谱的比较分析
2
作者 许浩天 于月通 +5 位作者 李静 马志远 杨彬 王泽坤 陀海欣 齐萌 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期4066-4079,共14页
【目的】探索钙离子对牛乳腺上皮细胞炎症反应的调控作用,比较分析脂多糖与钙离子共处理的牛乳腺上皮细胞的miRNA表达谱。【方法】使用脂多糖处理牛乳腺上皮细胞构建炎症反应模型,检测不同浓度(0.5~6.6 mmol/L)钙离子和脂多糖(50μg/mL... 【目的】探索钙离子对牛乳腺上皮细胞炎症反应的调控作用,比较分析脂多糖与钙离子共处理的牛乳腺上皮细胞的miRNA表达谱。【方法】使用脂多糖处理牛乳腺上皮细胞构建炎症反应模型,检测不同浓度(0.5~6.6 mmol/L)钙离子和脂多糖(50μg/mL)共处理的牛乳腺上皮细胞的炎症因子转录水平。提取正常、脂多糖处理、脂多糖与钙离子共处理牛乳腺上皮细胞样本中总RNA,每组各3个样本。对9个RNA样本进行质量评估,并对其开展miRNA测序和生物信息学分析,最后对3组共有差异表达miRNA进行实时荧光定量PCR验证。【结果】在牛乳腺上皮细胞炎症模型中,高浓度钙离子可抑制炎症因子的转录。9个样本的clean reads在raw reads中占比为93.86%~98.18%,序列分布长度均集中在21~24 nt之间。3组样本的组内相似性高,而组间差异度高。3组样本共鉴定出47个差异表达miRNA,共有差异表达miRNA分别为bta-miR-11980、bta-miR-1246和bta-miR-677。GO功能和KEGG通路富集分析显示,差异表达miRNA的靶基因显著富集于细胞通讯调节、信号调节、内膜系统、系统发育、细胞发育过程、细胞分化等GO条目,显著富集于HIF-1信号通路、ErbB信号通路、TNF信号通路、突触囊泡周期、肌醇磷酸代谢途径等通路。实时荧光定量PCR验证结果显示,3组样本共有差异表达miRNA(bta-miR-677和bta-miR-1246)表达趋势与转录组测序结果一致。【结论】钙离子通过调控牛乳腺上皮细胞内bta-miR-11980、bta-miR-1246和bta-miR-677等差异表达miRNA的表达模式,间接影响牛乳腺上皮细胞炎症反应进程。 展开更多
关键词 脂多糖 钙离子 牛乳腺上皮细胞 miRNA表达谱
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养殖水域Cu^(2+)胁迫对虹鳟MT2基因表达模式的影响
3
作者 周静 卢军浩 +4 位作者 赵映灿 徐永辉 李湘茹 巫佳俊 权金强 《环境科学与技术》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期96-103,共8页
为了探究水体中铜离子胁迫对虹鳟(Oncorhynchus mykiss)MT2基因表达模式的影响,开发Metallothioneins作为检测水域生态中重金属铜污染的分子标志,该研究利用TA克隆法获得了虹鳟MT2基因的CDS序列,检测了MT2基因在虹鳟不同组织中的表达模... 为了探究水体中铜离子胁迫对虹鳟(Oncorhynchus mykiss)MT2基因表达模式的影响,开发Metallothioneins作为检测水域生态中重金属铜污染的分子标志,该研究利用TA克隆法获得了虹鳟MT2基因的CDS序列,检测了MT2基因在虹鳟不同组织中的表达模式,以及Cu^(2+)胁迫(Cu^(2+)浓度75、150和300μg/L)后1、2、3和4 d和胁迫恢复1、2 d时间点的MT2基因表达动态。结果表明,虹鳟MT2基因CDS区长186 bp,编码62个氨基酸,具有典型的半胱氨酸(Cys)-X(1~3个)-半胱氨酸结构,属不稳定亲水性蛋白。虹鳟MT2基因序列与大西洋鲑的同源性最高且在肝脏中表达量最高,其次是脑和肠道。胁迫试验结果显示,MT2基因在肝脏和鳃中呈现先升高后降低的趋势,在头肾、脾脏和脑中呈现逐渐升高的趋势,且呈现一定的剂量依赖性,肠道MT2基因在胁迫2、3和4 d被显著抑制。胁迫恢复后,处理组肝脏、头肾、鳃、脑MT2基因表达量仍显著升高。综上,虹鳟MT2基因能在不同组织中被Cu^(2+)诱导表达,推测MT2基因在虹鳟抗重金属毒性中可能发挥着重要作用,且MT2基因表达量与铜离子的浓度相关,可以作为分子生物标志检测水域生态中的重金属铜污染。 展开更多
关键词 虹鳟 MT2基因 铜离子胁迫 基因克隆 表达模式
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基于CEEMDAN-RVM-LSTM模型的锂电池剩余寿命预测
4
作者 牛群峰 袁强 +1 位作者 王莉 刘江鹏 《电源技术》 CAS 北大核心 2023年第10期1313-1318,共6页
为了提高锂电池长期使用的可靠性和保证系统的安全运行,提出了一种结合自适应噪声完整集合经验模态分解算法(CEEMDAN)、相关向量机(RVM)和长短期记忆神经网络(LSTM)的剩余使用寿命(RUL)的预测方法。使用CEEMDAN将电池容量数据分解为本... 为了提高锂电池长期使用的可靠性和保证系统的安全运行,提出了一种结合自适应噪声完整集合经验模态分解算法(CEEMDAN)、相关向量机(RVM)和长短期记忆神经网络(LSTM)的剩余使用寿命(RUL)的预测方法。使用CEEMDAN将电池容量数据分解为本征模态分量和残差分量,分别由RVM和LSTM进行预测,最后进行有效集成,得到准确的容量和RUL预测结果,并获得RUL的95%置信区间。采用公共数据集进行实验验证,并对比了其他几种模型。实验结果表明该方法不仅拥有较高的预测精度,而且能够提供不确定性表达,具有良好的工程应用意义。 展开更多
关键词 锂电池 剩余使用寿命 RVM LSTM 不确定性表达
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硫化物胁迫对缢蛏血液SO_(4)^(2-)浓度及 SULT1B1-12 基因表达的影响
5
作者 孙慧妙 沈伟良 +2 位作者 陈彩芳 林志华 韩庆喜 《海洋学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期62-70,共9页
作为典型的埋栖型滩涂贝类,缢蛏(Sinonovacula constricta)常暴露在富含硫化物的环境中,并表现出较强的硫化物耐受能力。胞质磺基转移酶1B1(SULT1B1)位于硫代谢途径下游,是催化磺化反应的关键酶,在甲状腺激素(THs)等内源性物质的生物转... 作为典型的埋栖型滩涂贝类,缢蛏(Sinonovacula constricta)常暴露在富含硫化物的环境中,并表现出较强的硫化物耐受能力。胞质磺基转移酶1B1(SULT1B1)位于硫代谢途径下游,是催化磺化反应的关键酶,在甲状腺激素(THs)等内源性物质的生物转化过程中发挥重要作用。为研究ScSULT1B1-12基因在缢蛏耐硫中的作用,本研究采用生物信息学方法分析了其序列特征,并结合血液中SO_(4)^(2-)浓度变化,开展其组织表达及不同浓度(50μmol/L、150μmol/L、300μmol/L)硫化物胁迫72 h后的表达特征研究。结果表明,ScSULT1B1-12基因全长cDNA为1100 bp,含有897 bp的开放阅读框,编码298个氨基酸。序列分析表明,ScSULT1B1-12含有4个催化活性位点(_(56)K、_(104)N、_(106)H和_(134)A)、1个N端的PAPS结合域(YPKSGTXW)、1个C端的PAPS结合和二聚化域(RKGXXGDWKNXFTVXXE),表明其在结构上具有催化磺化反应的能力。组织分布表明,ScSULT1B1-12基因在鳃中高表达,其次为闭壳肌和肝胰腺。硫化物胁迫后缢蛏血液中SO_(4)^(2-)浓度呈下降趋势,ScSULT1B1-12基因的表达模式也在波动中呈下降趋势,表明硫酸盐可进一步被活化生成磺化反应的供体,而ScSULT1B1-12介导的磺化反应受抑制后可使缢蛏体内THs保持在一定水平,以加强其代谢机能和免疫功能,使机体适应高硫化物的不良环境。 展开更多
关键词 缢蛏 ScSULT1B1-12 硫化物胁迫 时间表达 硫酸根
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基于转录组分析金属离子对绿绒蒿属3种植物花瓣呈色的影响 被引量：1
6
作者 罗军 陈丽琦 +2 位作者 李拓键 区智 屈燕 《植物资源与环境学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期16-27,共12页
为探究金属离子对绿绒蒿属(Meconopsis Vig.)3种植物花瓣呈色的影响,测定了盛开期全缘叶绿绒蒿(M.integrifolia(Maxim.)Franch.)、红花绿绒蒿(M.punicea Maxim.)和川滇绿绒蒿(M.wilsonii Grey-Wilson)花瓣中7种金属离子(包括Fe^(3+)、Mg... 为探究金属离子对绿绒蒿属(Meconopsis Vig.)3种植物花瓣呈色的影响,测定了盛开期全缘叶绿绒蒿(M.integrifolia(Maxim.)Franch.)、红花绿绒蒿(M.punicea Maxim.)和川滇绿绒蒿(M.wilsonii Grey-Wilson)花瓣中7种金属离子(包括Fe^(3+)、Mg^(2+)、Ca^(2+)、K^(+)、Mn^(2+)、Cu^(2+)和Zn^(2+))含量,对3个花期花瓣进行转录组分析。结果表明:盛开期,全缘叶绿绒蒿花瓣中7种金属离子含量显著(P<0.05)高于红花绿绒蒿和川滇绿绒蒿;红花绿绒蒿花瓣中Fe^(3+)、Mg^(2+)、K^(+)、Mn^(2+)和Zn^(2+)含量显著低于川滇绿绒蒿,Cu^(2+)和Ca^(2+)含量显著高于川滇绿绒蒿。全缘叶绿绒蒿花瓣中,Fe^(3+)、Fe^(2+)和Cu^(2+)相关GO富集条目以及镁螯合酶活性、钾离子稳态和对锌离子的反应条目存在明显表达的差异unigene数量在供试绿绒蒿属3种植物中总体最多,锌离子结合和锰离子结合条目存在明显表达的差异unigene数量在供试绿绒蒿属3种植物中最少,螯合钙离子释放到细胞溶质条目中仅全缘叶绿绒蒿花瓣的差异unigene明显表达。红花绿绒蒿花瓣中,亚铁结合、镁离子结合、钙离子结合、钾离子结合、钾离子转运条目和锌离子结合条目存在明显表达的差异unigene数量在供试绿绒蒿属3种植物中最多,仅三价铁结合条目存在明显表达的差异unigene数量在供试绿绒蒿属3种植物中最少。川滇绿绒蒿花瓣中,细胞钙离子稳态和锰离子结合条目存在明显表达的差异unigene数量在供试绿绒蒿属3种植物中最多,Mg^(2+)、K^(+)和Cu^(2+)相关GO富集条目以及亚铁结合、铁离子的细胞内螯合、对锌离子的反应、钙离子结合条目存在明显表达的差异unigene数量在供试绿绒蒿属3种植物中总体最少。综上所述,推测Cu^(2+)和Ca^(2+)影响全缘叶绿绒蒿花瓣呈色,Fe^(2+)、Mg^(2+)、Mn^(2+)、K^(+)和Cu^(2+)影响红花绿绒蒿花瓣呈色,Fe^(3+)、Mg^(2+)、Mn^(2+)和Cu^(2+)影响川滇绿绒蒿花瓣呈色。 展开更多
关键词 绿绒蒿属 花色 金属离子 差异unigene 基因表达
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燕麦K^(+),Na^(+)积累与AsSOS1基因表达对盐胁迫的响应 被引量：1
7
作者 杨莉 赵桂琴 +2 位作者 周向睿 柴继宽 杜文盼 《草地学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期337-348,共12页
为了解盐胁迫对燕麦(Avena sativa L.)K^(+),Na^(+)积累和质膜Na^(+)/H+逆向转运蛋白基因(AsSOS1)表达的影响,本研究以耐盐的‘青永久195’和敏盐的‘709’为材料,分别用0,30,60,90,120,150 mmol·L^(-1)NaCl和0,0.5,1,2,4,8 mmol&#... 为了解盐胁迫对燕麦(Avena sativa L.)K^(+),Na^(+)积累和质膜Na^(+)/H+逆向转运蛋白基因(AsSOS1)表达的影响,本研究以耐盐的‘青永久195’和敏盐的‘709’为材料,分别用0,30,60,90,120,150 mmol·L^(-1)NaCl和0,0.5,1,2,4,8 mmol·L^(-1)KCl处理24 h,并用30,150 mmol·L^(-1)NaCl和0.5,8 mmol·L^(-1)KCl互作处理0,12,36,72 h,分析燕麦根和叶中K^(+),Na^(+)积累、离子平衡及AsSOS1基因的表达情况。结果表明:K^(+)含量和K^(+)/Na^(+)随盐浓度的增加和处理时间的延长有所下降,‘青永久195’的K^(+)含量和K^(+)/Na^(+)高于‘709’;叶片中的K^(+)含量和K^(+)/Na^(+)高于根系,Na^(+)含量变化与之相反,且‘709’中的Na^(+)含量高于‘青永久195’,根系中的Na^(+)含量高于叶片。AsSOS1基因在燕麦根、叶中均有表达,盐胁迫会显著提高其表达水平(P<0.05),多数处理下根系中的表达量高于叶片,‘青永久195’中的表达量高于‘709’。AsSOS1通过限制Na^(+)向地上部运输、维持较高的K^(+)/Na^(+)来减缓高盐胁迫造成的伤害。 展开更多
关键词 燕麦 盐胁迫 离子积累 离子平衡 AsSOS1基因表达
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噻虫啉对表达多房棘球绦虫 nAChR 基因HEK293细胞内钙的影响
8
作者 王宇琦 达哇卓玛 +2 位作者 张雨薇 刘川川 樊海宁 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期739-749,共11页
目的构建多房棘球绦虫nAChR真核表达质粒并在HEK293细胞中表达,探讨噻虫啉(thiacloprid,Thia)对异源表达nAChR-HEK293细胞内游离钙离子的影响,为进一步研究nAChR基因的结构和功能奠定基础。方法对多房棘球绦虫nAChR蛋白进行生物信息学... 目的构建多房棘球绦虫nAChR真核表达质粒并在HEK293细胞中表达,探讨噻虫啉(thiacloprid,Thia)对异源表达nAChR-HEK293细胞内游离钙离子的影响,为进一步研究nAChR基因的结构和功能奠定基础。方法对多房棘球绦虫nAChR蛋白进行生物信息学分析。扩增nAChR序列全长,构建真核表达质粒pCMV-EGFP-nAChR并转染HEK293细胞。噻虫啉刺激后检测转染细胞内游离钙离子水平及全细胞膜电流。结果nAChR为四次跨膜蛋白,α螺旋和无规则卷曲是该蛋白的主要组成成分。噻虫啉与nAChR活性位点附近PHE 207、PHE 24、ARG 244形成Pi-Pi相互作用,与LEU 60形成盐桥。PCR扩增在接近2000 bp处观察到明显条带,经过测序证实获得nAChR序列与Wormbase Parasite数据库序列一致。重组质粒pCMV-EGFP-nAChR转染HEK293细胞成功表达nAChR蛋白于细胞膜上。噻虫啉促进nAChR-HEK293细胞内游离钙离子水平增加,并诱发nAChR-HEK293细胞内向型膜电流。结论噻虫啉促进异源表达nAChR-HEK293细胞胞内游离钙离子水平增加并诱发内向型膜电流。 展开更多
关键词 NACHR 异源表达 生物信息学分析 钙离子
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越南槐种子萌发响应钙离子胁迫的差异表达蛋白分析
9
作者 檀龙颜 马洪娜 +2 位作者 黄丽容 吴依琳 周英 《种子》 北大核心 2023年第1期36-44,共9页
为分析钙离子胁迫下越南槐种子萌发的分子响应机制,以越南槐种子为材料,在0、50、100 mmol/L CaCl_(2)溶液处理下直至萌发,利用非标记定量蛋白质组学技术结合质谱鉴定和生物信息学分析越南槐种子萌发响应钙离子胁迫的差异表达蛋白。结... 为分析钙离子胁迫下越南槐种子萌发的分子响应机制,以越南槐种子为材料,在0、50、100 mmol/L CaCl_(2)溶液处理下直至萌发,利用非标记定量蛋白质组学技术结合质谱鉴定和生物信息学分析越南槐种子萌发响应钙离子胁迫的差异表达蛋白。结果表明,50 mmol/L CaCl_(2)vs 0 mmol/L CaCl_(2)比较组中,表达上调的蛋白有43个,表达下调的蛋白有42个;100 mmol/L CaCl_(2)vs 0 mmol/L CaCl_(2)比较组中,表达上调的蛋白有44个,表达下调的蛋白有37个;100 mmol/L CaCl_(2)vs 50 mmol/L CaCl_(2)比较组中,表达上调的蛋白有32个,表达下调的蛋白有21个。差异表达蛋白主要参与信号转导,DNA复制和转录,蛋白质合成、加工和降解,糖与能量代谢,脂代谢,次生代谢,细胞骨架及细胞壁代谢,抗氧化及防御等过程。通过高通量蛋白质组学分析,初步揭示了参与越南槐种子萌发应答钙离子胁迫的关键蛋白质。 展开更多
关键词 越南槐 钙离子胁迫 差异蛋白 种子萌发
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云南红豆杉紫杉烯合成酶基因克隆、序列分析与植物表达载体的构建 被引量：9
10
作者 梁素钰 和丽岗 郑学勤 《生命科学研究》 CAS CSCD 2005年第1期24-28,共5页
利用分段RT-PCR法成功地从云南红豆杉叶片总RNA中分离出两条长约1.4kb和1.5kb的cDNA片段,克隆到pUCm-T载体中,序列拼接分析表明,该cDNA片段与WildungMR等发表的紫杉二烯合成酶基因编码区2586bp有41个核苷酸不同,同源性为98.42%,具有编码... 利用分段RT-PCR法成功地从云南红豆杉叶片总RNA中分离出两条长约1.4kb和1.5kb的cDNA片段,克隆到pUCm-T载体中,序列拼接分析表明,该cDNA片段与WildungMR等发表的紫杉二烯合成酶基因编码区2586bp有41个核苷酸不同,同源性为98.42%,具有编码862个氨基酸蛋白质的能力.为了检测所克隆的基因编码产物是否具有活性,并进一步制备抗体以便于将来转基因植物的检测,构建了一个酵母表达载体GAPA-T14;为了转化植物构建了两个具有不同启动子的植物表达载体,pBI121-T14(含35S启动子)和pBIH-T14(在pBI121的基础上以胶乳特异启动子取代35S启动子). 展开更多
关键词 云南红豆杉 紫杉烯合成酶 植物表达载体 CDNA克隆 紫杉醇
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人白细胞介素-24基因的克隆、表达和纯化 被引量：2
11
作者 肖斌 杨珺 +3 位作者 田文标 朱永红 毛旭虎 邹全明 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2006年第2期134-138,共5页
目的对人白细胞介素-24(hIL-24)进行克隆、表达和纯化。方法分离人外周血单个核细胞,ConA刺激培养,提取细胞总RNA,应用RT-PCR技术从外周血单个核细胞中扩增hIL-24成熟肽编码区,定向克隆至融合表达载体pGEX-4T-1,重组载体pGEX-4T-1/hIL-2... 目的对人白细胞介素-24(hIL-24)进行克隆、表达和纯化。方法分离人外周血单个核细胞,ConA刺激培养,提取细胞总RNA,应用RT-PCR技术从外周血单个核细胞中扩增hIL-24成熟肽编码区,定向克隆至融合表达载体pGEX-4T-1,重组载体pGEX-4T-1/hIL-24经DNA测序鉴定后,转化E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达,阴离子交换层析纯化融合蛋白,SDS-PAGE和Westernblot鉴定。结果所得hIL-24基因经序列分析,与GenBank公布一致。所构建融合表达载体pGEX-4T-1/hIL-24测序正确,转化BL21(DE3)后,37℃诱导表达相对分子质量约为44000的融合蛋白,主要以包涵体形式存在,占菌体总蛋白的30.63%。经纯化后,纯度达85%以上。Westernblot检测能与兔抗人IL-24的多克隆抗血清发生结合反应。结论已成功构建了hIL-24的融合表达载体pGEX-4T-1/hIL-24,并在大肠杆菌中高效表达,纯化后获得了高纯度的融合蛋白,为hIL-24的功能及活性研究奠定基础。 展开更多
关键词 人IL-24 克隆 融合表达 离子交换层析 人白细胞介素-24
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在大肠杆菌中表达蝮蛇毒类凝血酶基因gloshedobin 被引量：6
12
作者 黄星 杨青 +1 位作者 闫明 刘铮 《过程工程学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2004年第1期22-27,共6页
将大连蛇岛蝮蛇毒腺中的类凝血酶基因gloshedobin克隆到pET-32a(+)上,构建了T7启动子控制的大肠杆菌表达质粒,并考察了质粒的稳定性. 采用IPTG诱导,以融合蛋白的形式进行表达,得到以包涵体形式存在的类凝血酶. 通过实验对诱导时间、诱... 将大连蛇岛蝮蛇毒腺中的类凝血酶基因gloshedobin克隆到pET-32a(+)上,构建了T7启动子控制的大肠杆菌表达质粒,并考察了质粒的稳定性. 采用IPTG诱导,以融合蛋白的形式进行表达,得到以包涵体形式存在的类凝血酶. 通过实验对诱导时间、诱导温度及诱导剂浓度进行了优化,并采用正交实验考察了金属离子对表达的影响,结果表明Fe3+, Co2+对类凝血酶的表达有促进作用. 展开更多
关键词 蛇毒类凝血酶 包涵体 基因表达 金属离子 正交实验 融合蛋白
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植物金属硫蛋白研究进展(二) 植物MT基因的表达特征及其功能 被引量：15
13
作者 常团结 朱祯 《生物技术通报》 CAS CSCD 2002年第5期1-5,9,共6页
阐述了植物金属硫蛋白基因表达的组织特异性、金属离子、激素、化学试剂等对植物金属硫蛋白基因表达的影响及植物金属硫蛋白的功能。
关键词 植物金属硫蛋白 研究进展 表达特征 功能 基因表达 金属离子
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金属离子协同氨基酸提高重组β-环糊精葡萄糖基转移酶在枯草芽孢杆菌中的表达 被引量：4
14
作者 李才明 黄敏 +4 位作者 石建中 顾正彪 洪雁 程力 李兆丰 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期1-8,共8页
随着环糊精的应用越来越广,其生产所必需的环糊精葡萄糖基转移酶(EC 2.4.1.19,简称CGT酶)已成为研究热点。为了克服天然菌种产环糊精葡萄糖基转移酶(CGT)能力低等缺陷,该文将来源于Bacillus circulans STB01的β-CGT酶基因插入质粒p ST... 随着环糊精的应用越来越广,其生产所必需的环糊精葡萄糖基转移酶(EC 2.4.1.19,简称CGT酶)已成为研究热点。为了克服天然菌种产环糊精葡萄糖基转移酶(CGT)能力低等缺陷,该文将来源于Bacillus circulans STB01的β-CGT酶基因插入质粒p ST中,构建了分泌型表达载体cgt/p ST并在宿主B.subtilis WB600中成功表达;通过对摇瓶发酵产CGT酶的条件进行优化发现,当发酵培养基为TB,p H为7.0时,37℃培养48 h后胞外酶活力达到27.9 U/m L,与天然菌株B.circulans STB01在较优发酵条件下所分泌的胞外酶活力相比,提高了近19倍;对TB培养基碳源、氮源进一步优化,以6 g/L的玉米淀粉替代TB培养基中的甘油,以30 g/L的酵母提取物作为氮源,胞外酶活可达到31.2 U/m L;亮氨酸、天冬氨酸的添加能明显促进β-CGT酶的胞外表达,而0.5mmol/L Fe3+的添加能进一步将胞外酶活提高到36.9 U/m L。这是目前报道的β-CGT酶在B.subtilis中胞外表达的最高β-环化活力。 展开更多
关键词 环糊精葡萄糖基转移酶 枯草芽孢杆菌 分泌表达 金属离子 氨基酸
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干细胞转录因子Oct4和CD133蛋白在肝外胆管癌组织中的表达及临床意义 被引量：5
15
作者 谷化平 黄勇 尚培中 《中国现代普通外科进展》 CAS 2014年第2期112-115,共4页
目的:探讨干细胞转录因子Oct4(Oct4)和CD133蛋白在肝外胆管癌(EHCC)中的表达及临床意义。方法:应用免疫组化方法检测50例EHCC、30例癌旁胆管组织(TAC)和20例正常胆管组织(NBDT)中Oct4和CD133蛋白表达水平,并结合临床病理特征进行分析。... 目的:探讨干细胞转录因子Oct4(Oct4)和CD133蛋白在肝外胆管癌(EHCC)中的表达及临床意义。方法:应用免疫组化方法检测50例EHCC、30例癌旁胆管组织(TAC)和20例正常胆管组织(NBDT)中Oct4和CD133蛋白表达水平,并结合临床病理特征进行分析。结果:在EHCC中Oct4和CD133蛋白阳性表达率分别为62.0%(31/50)和68.0%(36/50)。EHCC中Oct4和CD133表达阳性率显著高于TAC和NBDT(P<0.05)。Oct4和CD133的表达与EHCC的TNM分期、分化程度和转移相关(P<0.05),且两者表达呈正相关(r=0.33,P<0.05)。结论:检测Oct4和CD133基因蛋白表达可作为评估EHCC生物学行为和预后的参考指标。 展开更多
关键词 胆管肿瘤 转录因子Oct4蛋白 CD133 基因表达调控
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重组细胞色素P450 BM-3酶的表达条件及初步纯化研究 被引量：2
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作者 黄俊 梅乐和 +2 位作者 钟春龙 邓福华 姚善泾 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期96-100,共5页
对重组细胞色素P450 BM-3基因工程菌的培养条件进行了单因素优化,确定了较佳的P450BM-3培养和表达条件:接种量1%,装液量100 mL/500 mL,发酵培养基加入0.1 mg?L-1FeCl3,OD578达到1.0左右时升温至42℃诱导,诱导时间为5 h.考察了DEAE-Sepha... 对重组细胞色素P450 BM-3基因工程菌的培养条件进行了单因素优化,确定了较佳的P450BM-3培养和表达条件:接种量1%,装液量100 mL/500 mL,发酵培养基加入0.1 mg?L-1FeCl3,OD578达到1.0左右时升温至42℃诱导,诱导时间为5 h.考察了DEAE-Sepharose FF与Resource Q 2种阴离子介质对分离纯化P450 BM-3的影响.结果表明,Resource Q纯化效果优于DEAE-Sepharose FF,通过KTA explorer100对Resource Q分离条件进行了优化,0.3 mol?L-1、0.5 mol?L-1的两步NaCl阶跃洗脱,P450 BM-3纯度较高,活性收率为30.1%,纯化倍数为2.12. 展开更多
关键词 细胞色素P450 BM-3 表达 纯化 离子交换层析
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果胶裂解酶基因PelC表达载体的构建及原核表达分析 被引量：2
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作者 邓伟科 郭安平 +5 位作者 刘恩平 王炎松 郭运玲 孔华 阳辛凤 贺立卡 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2009年第5期44-48,共5页
从实验室分离保存的1株产果胶酶的菌株(BTC105)中克隆果胶裂解酶基因(PelC)完整开放阅读框,通过载体构建,将目的基因连接到表达载体pET28a上,转化大肠埃希菌BL21(DE3)进行融合表达,在LB(Luria-Bertani)中进行摇瓶发酵,1 mmol/L IPTG(异... 从实验室分离保存的1株产果胶酶的菌株(BTC105)中克隆果胶裂解酶基因(PelC)完整开放阅读框,通过载体构建,将目的基因连接到表达载体pET28a上,转化大肠埃希菌BL21(DE3)进行融合表达,在LB(Luria-Bertani)中进行摇瓶发酵,1 mmol/L IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)诱导。结果表明,构建了表达载体pET28a-pelC,果胶裂解酶主要在胞内表达,酶活最适pH为5.4,最适温度为50℃,Ca^(2+)对酶活促进作用最为明显,Cu^(2+)完全抑制了酶的活性。 展开更多
关键词 果胶裂解酶 构建 pET28a 表达 金属离子
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论唐宋诗词中“雨”的审美意象群 被引量：14
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作者 范晓燕 《深圳大学学报（人文社会科学版）》 北大核心 2002年第1期52-59,共8页
唐宋,是古典诗歌意象最为灿烂辉煌的时期。在唐宋诗词纷繁的意象中,让人涵咏不尽的是多姿多态的“雨”意象群。诗词创作中的“雨”意象,始终不脱离它作为客观物象固有的自然特征,同时,在反复运用和沿袭不衰的过程中,人们对它的审美感情... 唐宋,是古典诗歌意象最为灿烂辉煌的时期。在唐宋诗词纷繁的意象中,让人涵咏不尽的是多姿多态的“雨”意象群。诗词创作中的“雨”意象,始终不脱离它作为客观物象固有的自然特征,同时,在反复运用和沿袭不衰的过程中,人们对它的审美感情和审美趣味长期积淀下来,使之固定地带有纤细绵柔、明丽清润、朦胧迷离、凄清冷寂、迅疾狂骤等审美特征。心物相契的“雨”意象具有生动的艺术表现力,诗人们用情感的链条将它与其他意象组合,构成具有内在生命的完整形象,用来烘染氛围、寓含象征、营造意境等,以追求一种特殊的艺术表达效果。 展开更多
关键词 "雨"意象 意象群 审美特征 纤柔美 朦胧美 唐代 宋代 诗歌 词 迅疾美 意境 象征 清润美 凄清美
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钢筋混凝土氯离子压滤实验方法研究 被引量：3
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作者 罗睿 张晓萌 黄晓明 《公路交通科技》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期21-24,共4页
采用内掺氯离子的压滤法来模拟测试钢筋混凝土抗氯离子侵蚀性能 ,并给出具体例证。得出 :内掺氯离子的压滤法既节约时间 ,还可避开其他干扰因素 ,且能明显反映不同材料抗氯离子性能 ,因而采用内掺氯离子的压滤法来模拟测试水泥路面抗氯... 采用内掺氯离子的压滤法来模拟测试钢筋混凝土抗氯离子侵蚀性能 ,并给出具体例证。得出 :内掺氯离子的压滤法既节约时间 ,还可避开其他干扰因素 ,且能明显反映不同材料抗氯离子性能 ,因而采用内掺氯离子的压滤法来模拟测试水泥路面抗氯离子侵蚀性能是可行的 。 展开更多
关键词 压滤法 氯离子 钢筋混凝土 实验研究
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肝细胞生长因子表达载体的构建及在人肝细胞中的表达 被引量：8
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作者 何勇 周峻 窦科峰 《世界华人消化杂志》 CAS 2001年第10期1143-1146,共4页
目的构建肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)真核表达载体,并观察其在人正常肝细胞中的表达.方法利用基因重组技术将 HGF 与绿色荧光蛋白(greenfluorescence protein,GFP)融合并构建真核表达质粒,通过脂质体介导法,导入正常... 目的构建肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)真核表达载体,并观察其在人正常肝细胞中的表达.方法利用基因重组技术将 HGF 与绿色荧光蛋白(greenfluorescence protein,GFP)融合并构建真核表达质粒,通过脂质体介导法,导入正常人肝细胞系中.用荧光显微镜以及免疫组化方法观察 HGF 的表达.结果酶切鉴定证实 HGF 片断已克隆到 pEGFP-N3的 BamHⅠ和 Sal Ⅰ位点之间,在转染人正常肝细胞后,利用荧光显微镜观察可见到绿色荧光蛋白的表达,用免疫组化方法进一步证实了 HGF 蛋白在细胞中的表达.结论 pEGFP-HGF 表达载体便于观察转染细胞中 HGF-GFP融合蛋白的表达情况及蛋白定位,适用于对 HGF 分子生物学特性及治疗应用的研究. 展开更多
关键词 肝细胞生长因子 表达载体 基因转染 免疫组化 绿色荧光蛋白
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