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水痘-带状疱疹病毒gE糖蛋白基因扩增法鉴别水痘减毒活疫苗 被引量：1
1
作者 金于兰 陈哲文 +1 位作者 瞿爱东 杨忠东 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2006年第6期644-646,共3页
目的利用水痘-带状疱疹病毒(VZV)gE糖蛋白基因鉴别水痘减毒活疫苗。方法以提取的病毒DNA为模板,PCR扩增gE糖蛋白基因。经琼脂糖凝胶电泳鉴定。结果水痘减毒活疫苗Oka株VZV(病毒滴度≥2.0lgPFU/ml)通过琼脂糖电泳均可见特异性的条带。使... 目的利用水痘-带状疱疹病毒(VZV)gE糖蛋白基因鉴别水痘减毒活疫苗。方法以提取的病毒DNA为模板,PCR扩增gE糖蛋白基因。经琼脂糖凝胶电泳鉴定。结果水痘减毒活疫苗Oka株VZV(病毒滴度≥2.0lgPFU/ml)通过琼脂糖电泳均可见特异性的条带。使用同样的方法检测麻疹减毒活疫苗、麻疹-腮腺炎联合疫苗、风疹减毒活疫苗以及Ⅰ、Ⅱ型单纯疱疹病毒(病毒滴度≥4.2lgCCID50/ml),结果均为阴性。结论gE糖蛋白基因可以作为VZV的特异性指标,进行病毒鉴别试验。 展开更多
关键词 水痘-带状疱疹病毒 ge糖蛋白基因 鉴别试验
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单纯疱疹病毒Ⅱ型gE糖蛋白B细胞表位的预测及初步鉴定 被引量：1
2
作者 邱艳 周晓蕾 +3 位作者 桂碧玉 邓翔 马东波 汪洋 《国际病毒学杂志》 2019年第6期412-416,共5页
目的探讨单纯疱疹病毒II型gE糖蛋白B细胞表位作为靶点研制ELISA试剂盒候选抗原的可能性.方法采用Emini、IEDB等网络在线分析工具对该基因序列的编码区进行表面可及性、柔韧性、抗原表位、亲水性以及线性B细胞表位的生物信息进行综合分析... 目的探讨单纯疱疹病毒II型gE糖蛋白B细胞表位作为靶点研制ELISA试剂盒候选抗原的可能性.方法采用Emini、IEDB等网络在线分析工具对该基因序列的编码区进行表面可及性、柔韧性、抗原表位、亲水性以及线性B细胞表位的生物信息进行综合分析.筛选出不同预测方法中一致的3条多肽,分别以标准阳、阴性血清进行Dot-blot验证,并以临床血清进行ELISA检测效果的评价.结果单纯疱疹病毒II型gE糖蛋白序列具有18个抗原表位和23个线性B细胞表位.Dot-blot检验肽段结果显示,gE糖蛋白B细胞表位具有较强的抗原反应.临床血清检验结果显示,B细胞表位2#和3#多肽均表现出良好的灵敏度和特异性.结论单纯疱疹病毒II型gE糖蛋白B细胞表位多肽可以作为开发抗体诊断用抗原的备选. 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒Ⅱ型 ge糖蛋白 B细胞表位 抗原 抗体诊断
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特超强毒648株马立克氏病病毒的囊膜糖蛋白gE基因的克隆和序列比较 被引量：6
3
作者 刘岳龙 崔治中 +2 位作者 何良梅 朱素娟 秦爱建 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期155-161,共7页
鸡马立克氏病毒特超强毒 (vv+MDV) 648株的囊膜糖蛋白 gE基因经PCR扩增并克隆入pUC1 8载体。 648株gE基因经核酸序列分析测定 ,全长为 1 494碱基。所编码的蛋白具有跨膜糖蛋白的一些特征。它含有 8个潜在的糖基化位点、N端有一段疏水区... 鸡马立克氏病毒特超强毒 (vv+MDV) 648株的囊膜糖蛋白 gE基因经PCR扩增并克隆入pUC1 8载体。 648株gE基因经核酸序列分析测定 ,全长为 1 494碱基。所编码的蛋白具有跨膜糖蛋白的一些特征。它含有 8个潜在的糖基化位点、N端有一段疏水区 (1～ 1 9aa)所构成的信号肽、C端有一段疏水区 (391～ 41 9aa)所构成的膜锚着序列。经 648株 (vv+MDV)和马立克氏病毒强毒 (vMDV)GA株的 gE相比较 ,在MDV血清 1型中 gE是较为保守的 ,二者仅有 2个核苷酸的差异 (第 51 2位、第 1 472位 ) ,并导致了有二个相应的氨基酸的改变 (第1 71位Leu/Pro、第 491位Arg/Lys)。 展开更多
关键词 糖蛋白ge 克隆 序列比较 鸡马立克氏病病毒 囊膜
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伪狂犬病病毒的囊膜糖蛋白gE的研究进展 被引量：5
4
作者 姜焱 陈溥言 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2002年第12期31-33,共3页
关键词 基因组 结构 功能 ge基因缺失疫苗 伪狂犬病病毒 囊膜糖蛋白ge
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囊膜糖蛋白gE对α疱疹病毒毒力的影响
5
作者 黄雅琳 程安春 汪铭书 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第7期1506-1514,共9页
近年来,α疱疹病毒的囊膜糖蛋白gE在病毒细胞间传递、神经系统入侵、免疫逃避等方面的研究取得新的进展。gE能促进合胞体形成,影响病毒的顺行、逆行神经传导,也是第一个报道可以抑制浆细胞样树突状细胞产生Ⅰ型干扰素的病毒蛋白。本文... 近年来,α疱疹病毒的囊膜糖蛋白gE在病毒细胞间传递、神经系统入侵、免疫逃避等方面的研究取得新的进展。gE能促进合胞体形成,影响病毒的顺行、逆行神经传导,也是第一个报道可以抑制浆细胞样树突状细胞产生Ⅰ型干扰素的病毒蛋白。本文对α疱疹病毒囊膜糖蛋白gE与毒力之间的关系进行阐述,以期为α疱疹病毒gE的功能研究提供参考。 展开更多
关键词 α疱疹病毒 囊膜糖蛋白ge 毒力 免疫逃避 神经毒力
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牛传染性鼻气管炎病毒重组gE蛋白间接ELISA诊断方法的建立 被引量：9
6
作者 王海燕 朱远茂 +4 位作者 薛飞 童光志 赵立平 相文华 韩文瑜 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第12期29-33,共5页
以重组牛传染性鼻气管炎病毒gE蛋白,经纯化后作为诊断抗原建立了检测牛血清特异性gE抗体的间接酶联免疫吸附试验,确定其最佳包被量为每孔1.075μg。样品稀释度为1:40,兔抗牛IgG辣根过氧化物酶标记抗体稀释度为1∶5000。判定标准为样品O... 以重组牛传染性鼻气管炎病毒gE蛋白,经纯化后作为诊断抗原建立了检测牛血清特异性gE抗体的间接酶联免疫吸附试验,确定其最佳包被量为每孔1.075μg。样品稀释度为1:40,兔抗牛IgG辣根过氧化物酶标记抗体稀释度为1∶5000。判定标准为样品OD值大于0.582为阳性,小于0.472为阴性,在0.472与0.582之间为可疑。经抗特异性试验和重复性试验证明该方法特异性高、重复性好。在403份血清样品中,进口试剂盒检出234份阳性样品,该诊断方法检出248阳性样品,与进口试剂盒的符合率为94.3%,但该诊断方法检出率更高。在43份血清样品中,中和试验检出24份阳性样品,该诊断方法检出28份阳性样品,与中和试验的符合率为85.7%。应用该诊断方法调查了我国部分地区IBRV的感染率,发现这些地区的IBRV感染率为68.7%。 展开更多
关键词 牛传染性鼻气管炎 牛疱疹病毒Ⅰ型 糖蛋白ge 酶联免疫吸附试验
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水痘-带状疱疹病毒糖蛋白gE在昆虫细胞中的表达鉴定及其晶体培养 被引量：3
7
作者 姚巧缤 李婷婷 +9 位作者 荣芮 张玉云 李泽凯 薛文辉 李瑾瑾 朱瑞 程通 顾颖 夏宁邵 李少伟 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2019年第5期505-510,共6页
目的利用杆状病毒-昆虫表达系统建立纯化水痘带状疱疹病毒(VZV)包膜糖蛋白gE的方法,筛选gE蛋白的晶体培养条件,以期用于结构解析。方法将VZV糖蛋白gE基因序列克隆至杆状表达载体pAcgp67B载体中,利用High FiveTM昆虫细胞表达gE蛋白并进行... 目的利用杆状病毒-昆虫表达系统建立纯化水痘带状疱疹病毒(VZV)包膜糖蛋白gE的方法,筛选gE蛋白的晶体培养条件,以期用于结构解析。方法将VZV糖蛋白gE基因序列克隆至杆状表达载体pAcgp67B载体中,利用High FiveTM昆虫细胞表达gE蛋白并进行TALON亲和层析纯化;利用WAVE生物波浪反应器建立含硒代甲硫氨酸的gE蛋白方法,以便在晶体结构解析中利用单波长或多波长异常散射进行相位解析;通过分子排阻色谱、分析超离,差示扫描量热法和酶联免疫吸附试验等分析gE蛋白的理化性质;利用结晶试剂盒对gE498和gE354蛋白的结晶条件进行初筛。结果获得的gE498和gE354蛋白纯度约为90%、产量为8~10 mg/L。理化分析显示两种gE蛋白在溶液中主要以均一稳定的单体形式存在,并呈现出良好的反应原性。在gE354晶体初筛中获得3个结晶条件:CrystalH3、PEGH12和IndexB10。结论建立了VZV糖蛋白gE表达和纯化方法,制备的蛋白纯度高,且具有反应原性,并筛选出CrystalH3、PEGH12和IndexB10这3个结晶条件,为gE糖蛋白的结构与功能研究及新型疫苗开发奠定了基础。 展开更多
关键词 水痘-带状疱疹病毒 糖蛋白ge 杆状病毒-昆虫表达系统 晶体培养 硒代甲硫氨酸
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水痘-带状疱疹病毒糖蛋白E在昆虫细胞中的表达、鉴定及免疫原性分析 被引量：4
8
作者 齐家龙 高瑞雨 +4 位作者 靳输梅 高福兰 杨旭 马雁冰 刘存宝 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期17-24,共8页
目的:利用昆虫-杆状表达系统建立表达和纯化分泌形式的水痘-带状疱疹病毒(varicellazoster virus,VZV)糖蛋白gE的方法,并鉴定其理化性质及免疫原性。方法:利用Gibson assembly同源重组试剂盒快速构建重组质粒pFastbac-VZV gE。在sf9昆... 目的:利用昆虫-杆状表达系统建立表达和纯化分泌形式的水痘-带状疱疹病毒(varicellazoster virus,VZV)糖蛋白gE的方法,并鉴定其理化性质及免疫原性。方法:利用Gibson assembly同源重组试剂盒快速构建重组质粒pFastbac-VZV gE。在sf9昆虫细胞中鉴定序列优化前后表达量的差异,并在High Five^TM细胞中大量表达。通过Ni-NTA亲和层析方法得到高纯度gE蛋白,之后通过酶联免疫吸附试验等验证了其理化性质,并进行小鼠免疫分析其免疫原性。结果:构建了pFastbac-VZV gE1/2重组质粒,经过PCR及双酶切鉴定后均为阳性克隆。使用BAC/PAC试剂盒提取Bacmid转染sf9细胞制备杆状病毒,经Western blot检测,sf9细胞开始表达gE蛋白且随着病毒代次升高gE蛋白表达量增加。序列优化后表达量明显增加,但是大部分以胞内形式存在。通过Ni-NTA一步亲和层析获得纯度较高的gE蛋白,并与VZV单抗9C8具有较好的反应性。通过免疫小鼠产生高滴度抗体,且免疫荧光结果显示其血清可以与天然病毒上的gE抗原结合。结论:成功获得了杆状表达系统表达的gE蛋白并且纯化和鉴定了蛋白质的性质及免疫原性,为进一步研发具有自主产权的VZV亚单位疫苗研究奠定了基础。 展开更多
关键词 水痘带状疱疹病毒 糖蛋白ge 昆虫表达系统 免疫原性
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我国不同基因型水痘-带状疱疹病毒流行毒株gE基因序列分析 被引量：4
9
作者 江龙凤 甘霖 +5 位作者 李珊山 冯艳艳 姜薇 段亚平 陈敬贤 王明丽 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期112-118,共7页
为进一步了解我国不同地区流行的水痘—带状疱疹病毒(VZV)病毒株的基因型分布和分析代表性病毒株gE基因序列。于2010年12月至2011年6月期间,收集来自北京市、长春市、拉萨市和乌鲁木齐市4个地区水痘和带状疱疹患者的疱疹液拭子和皮肤痂... 为进一步了解我国不同地区流行的水痘—带状疱疹病毒(VZV)病毒株的基因型分布和分析代表性病毒株gE基因序列。于2010年12月至2011年6月期间,收集来自北京市、长春市、拉萨市和乌鲁木齐市4个地区水痘和带状疱疹患者的疱疹液拭子和皮肤痂片,共计18份。用单个核苷酸多态性(SNP)谱的方法确定病毒株的基因型。然后采用聚合酶链反应(PCR)方法扩增gE基因的全长片段,并进行测序分析。SNP分析显示18个病毒株的基因型共为4种,其中有7株属于clade2遗传支,1株属于clade3遗传支,4株为clade5遗传支。另有6株病毒兼有不同遗传支的特征,按照目前国际通用的分型方法不能归属于任何明确的遗传支。对不同病毒株gE基因序列分析,除了发现3个国外已有报道的1个同义突变(T660C)和2个反义突变(C119T、C1606A),还发现了3个新的反义突变(C56T、C1109T和C917A)和4个同义突变(C54T、T1075C、T816C和G279A)。首次在我国新疆自治区发现了clade5遗传支的VZV,在长春市还发现了目前尚未能分型的6株病毒。对部分病毒株gE基因序列分析,在gE的e1和c1抗原表位的编码区内中检出1个新型反义突变(C917A),需要进一步研究该突变对该病毒免疫原性和致病性的影响。 展开更多
关键词 水痘-带状疱疹病毒 基因型 ge糖蛋白 单个核苷酸多态性 同义突变 反义突变
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水痘-带状疱疹病毒高效价中和抗体的制备及应用
10
作者 邵宏秋 魏巍 +9 位作者 黄晓娜 李景新 魏国良 张芸畅 修华谦 刘婷婷 王宇迪 孙博 卢井才 石亮 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期1430-1433,1441,共5页
目的制备水痘-带状疱疹病毒(varicella-herpes zoster virus,VZV)高效价特异性免疫血清,用于水痘减毒活疫苗及带状疱疹减毒活疫苗质量控制。方法将高纯度重组gE糖蛋白分别与弗氏佐剂、氢氧化铝佐剂及MF59佐剂组合,免疫雄性家兔,每组2只... 目的制备水痘-带状疱疹病毒(varicella-herpes zoster virus,VZV)高效价特异性免疫血清,用于水痘减毒活疫苗及带状疱疹减毒活疫苗质量控制。方法将高纯度重组gE糖蛋白分别与弗氏佐剂、氢氧化铝佐剂及MF59佐剂组合,免疫雄性家兔,每组2只,免疫后第56天,每只最大量采血(心脏或颈动脉)制备血清,与VZV混合进行中和反应后,接种至长满单层MRC-5株人二倍体细胞的6孔板中,孵育7 d,计数空斑数,检测免疫血清的中和效价和中和病毒能力;选择高中和效价和高中和病毒能力血清进行水痘减毒活疫苗及带状疱疹减毒活疫苗VZV(Oka株)工作种子批毒种鉴别试验和外源病毒因子检查。结果重组gE糖蛋白的多种组合免疫家兔后制备的免疫血清均具有中和活性,其中重组gE糖蛋白与弗氏佐剂组合免疫后制备的血清中和效价最高,为1:512,中和病毒能力可达240000 PFU/mL;制备的免疫血清用于VZV(Oka株)工作种子批毒种鉴别试验和外源病毒因子检查,结果均符合要求。结论重组gE糖蛋白可用于VZV高效价中和抗体制备,制备的高效价中和抗体适用于水痘减毒活疫苗及带状疱疹减毒活疫苗质量控制。 展开更多
关键词 水痘-带状疱疹病毒 重组ge糖蛋白 水痘减毒活疫苗 带状疱疹减毒活疫苗 特异性血清 中和抗体
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