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五环三萜酿酒酵母细胞工厂的构建 被引量：2
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作者 高惠芳 邵明龙 +4 位作者 张显 杨套伟 徐美娟 高晓冬 饶志明 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2021年第18期8-14,共7页
α-香树脂醇、羽扇豆醇和计曼尼醇作为重要的五环三萜化合物,具有抗炎、抗肿瘤、抗病毒等多种药理学功能。为构建五环三萜酿酒酵母细胞工厂,该研究运用CRISPR/Cas9技术,分别将编码长春花来源的α-香树脂醇合酶、洋甘草来源的羽扇豆醇合... α-香树脂醇、羽扇豆醇和计曼尼醇作为重要的五环三萜化合物,具有抗炎、抗肿瘤、抗病毒等多种药理学功能。为构建五环三萜酿酒酵母细胞工厂,该研究运用CRISPR/Cas9技术,分别将编码长春花来源的α-香树脂醇合酶、洋甘草来源的羽扇豆醇合酶和羊蹄甲来源的计曼尼醇合酶的基因整合至酿酒酵母基因组上,获得工程菌株S01、S02和S03。工程菌株在YPG培养基中发酵48 h,S01能生产50.7 mg/Lα-香树脂醇,S02羽扇豆醇产量达到45.8 mg/L,S03计曼尼醇产量为17.6 mg/L,表明五环三萜酿酒酵母细胞工厂构建成功。进一步在S01、S02和S03中过表达甲羟戊酸途径中的关键酶:鲨烯环氧酶,增加前体物质2,3-氧化鲨烯的供应,最终α-香树脂醇、羽扇豆醇和计曼尼醇产量分别达96.3、91.6和38.7 mg/L。该研究建立了三萜微生物合成平台,为构建五环三萜酸及其衍生物酿酒酵母细胞工厂奠定了理论和技术基础。 展开更多
关键词 α-香树脂醇 羽扇豆醇 计曼尼醇 五环三萜 合成生物学 酿酒酵母
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构建酿酒酵母细胞工厂高效合成摩尔酸 被引量：1
2
作者 高惠芳 邵明龙 +5 位作者 周武林 张显 杨套伟 徐美娟 高晓冬 饶志明 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期3506-3519,共14页
【目的】摩尔酸作为齐墩果烷型三萜化合物具有抗HIV、抗炎等多种生物学活性,其前体物质是计曼尼醇,本研究基于合成生物学策略构建酿酒酵母细胞工厂高效合成摩尔酸。【方法】运用CRISPR/Cas9技术,首先分别整合不同来源的氧化鲨烯环化酶(O... 【目的】摩尔酸作为齐墩果烷型三萜化合物具有抗HIV、抗炎等多种生物学活性,其前体物质是计曼尼醇,本研究基于合成生物学策略构建酿酒酵母细胞工厂高效合成摩尔酸。【方法】运用CRISPR/Cas9技术,首先分别整合不同来源的氧化鲨烯环化酶(OSCs),筛选高产计曼尼醇底盘细胞;进一步异源表达长春花来源的细胞色素P450氧化酶(CYP716AL1)和麻风树来源的细胞色素P450还原酶(JcCPR),构建摩尔酸生物合成途径;并通过CYP716AL1和不同来源的CPR适配研究以及过表达甲羟戊酸(MVA)代谢途径中关键酶的方式提高摩尔酸的产量。【结果】整合苹果来源的氧化鲨烯环化酶MdOSC获得的重组菌株计曼尼醇产量最高,达68.3 mg/L;以此为底盘细胞进一步整合CYP716AL1和JcCPR实现了摩尔酸的生物合成,产量为15.0 mg/L;共表达CYP716AL1和拟南芥来源的CPR获得的重组菌株摩尔酸产量最高,达到24.3 mg/L;最后过表达MVA代谢途径中的关键酶法呢基焦磷酸合酶(ERG20)和鲨烯环氧酶(ERG1),获得的重组菌株摩尔酸产量高达34.1 mg/L。【结论】本研究实现了摩尔酸的高效生物合成,为构建高产齐墩果烷型三萜酿酒酵母细胞工厂提供了理论和技术依据。 展开更多
关键词 三萜 计曼尼醇 摩尔酸 合成生物学 酿酒酵母
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