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山羊痘病毒036(gtpv-036)基因的克隆及序列分析
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作者 张汐 周正国 +2 位作者 赵垚鑫 王永飞 李有文 《现代畜牧科技》 2023年第3期69-74,共6页
为研究山羊痘病毒036(gtpv-036)基因的生物学特征,试验利用PCR法扩增gtpv-036基因,经NdeΙ、XhoΙ双酶切后与PET 42b同源重组构建其原核表达载体,并用菌液PCR和测序鉴定,测序结果进行生物信息学分析,预测其蛋白生物学特性。结果表明:成... 为研究山羊痘病毒036(gtpv-036)基因的生物学特征,试验利用PCR法扩增gtpv-036基因,经NdeΙ、XhoΙ双酶切后与PET 42b同源重组构建其原核表达载体,并用菌液PCR和测序鉴定,测序结果进行生物信息学分析,预测其蛋白生物学特性。结果表明:成功构建原核表达载体PET 42b-gtpv-036,测序结果显示036基因大小为285 bp,与山羊痘gtpvIsolateIndia等参考株系同源性为97.9%~100%,遗传进化树表明其与gtpv处于同一分支,亲源关系最近,测序比对发现其基因有2个碱基发生了突变,推测氨基酸序列:从第37位和95位异亮氨酸密码子是“ATA”分别突变成异亮氨酸氨酸“ATT”和天冬氨酸氨酸“CTA”;预测山羊痘病036蛋白亚细胞定位在细胞质;蛋白信号肽的剪切位点位于第23和24号氨基酸之间;蛋白磷酸化位点有10个;蛋白二级结构以α-螺旋和无规则卷曲为主,其次β-折叠,三级结构以α-螺旋为主,推测山羊痘病gtpv-036蛋白功能可能是巯基氧化酶。这为制备山羊痘病毒疫苗研究和为研发新型药物提供理论基础。 展开更多
关键词 山羊痘病毒036 克隆 序列分析
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山羊痘病毒NM株的分离鉴定 被引量：3
2
作者 切环 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第7期179-181,共3页
从内蒙古牛场疑似山羊痘病毒感染的病羊中分离到1株病毒,命名为NM株。取病羊的皮肤痘疹和水疱作病料样品,分别接种BHK-21传代细胞和10日龄SPF鸡胚。结果表明,BHK-21细胞出现了明显的、规律的细胞病变,鸡胚接种部位出现了明显的痘斑;NM... 从内蒙古牛场疑似山羊痘病毒感染的病羊中分离到1株病毒,命名为NM株。取病羊的皮肤痘疹和水疱作病料样品,分别接种BHK-21传代细胞和10日龄SPF鸡胚。结果表明,BHK-21细胞出现了明显的、规律的细胞病变,鸡胚接种部位出现了明显的痘斑;NM株细胞毒和胚毒均能够被山羊痘病毒阳性血清所抑制。利用1对山羊痘病毒特异性检测引物对NM株病毒进行PCR扩增,获得445bp片段,与预期大小一致。将扩增产物提纯后克隆至pMD18-T载体,经酶切鉴定正确后,对阳性克隆株进行序列测定,结果表明,NM株的基因片段与已发表的山羊痘病毒毒株的相应基因片段具有高度同源性,同源性在99.2%～100%之间。 展开更多
关键词 山羊痘病毒 分离 聚合酶链式反应 鉴定
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