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人类肝脏cDNA文库的构建及hHGF基因的筛选、克隆与表达 被引量：1
1
作者 张锦前 牛俊奇 王峰 《生物医学工程与临床》 CAS 2006年第5期315-319,共5页
目的构建人类肝脏的cDNA文库,从中筛选hHGF基因并进行克隆与表达。方法从人类胎儿肝脏中快速分离提取出mRNA;将已提取出的mRNA构建成cDNA文库;从中筛选出hHGF(hepatocyte growth factor)基因后,进行克隆并测序确定;构建表达质粒pBV221-h... 目的构建人类肝脏的cDNA文库,从中筛选hHGF基因并进行克隆与表达。方法从人类胎儿肝脏中快速分离提取出mRNA;将已提取出的mRNA构建成cDNA文库;从中筛选出hHGF(hepatocyte growth factor)基因后,进行克隆并测序确定;构建表达质粒pBV221-hHGF后转化大肠杆菌BL21(DE3α),以异丙基硫代-B-D-半乳糖苷(IPTG)诱导,收集菌体后提取蛋白样品并对其进行SDS-PAGE电泳及蛋白免疫印迹检测。结果成功地构建了人类肝脏的cDNA文库;经筛选得到约2200bp的hHGF基因;对其进行测序确认;成功地构建该基因的表达型质粒,并对表达蛋白进行蛋白免疫印迹检测,检测出其表达产生的蛋白质相对分子量在100000左右。结论人类肝脏cDNA文库成功地构建后可用于筛选获取完整的cDNA基因,从中筛选、克隆hHGF基因,并测序确认,进行表达蛋白质检测,结果正确,以上工作为进一步深入地进行与人类肝脏cDNA文库及hHGF相关的实验研究奠定了一定的基础。 展开更多
关键词 人类肝脏cDNA文库 hhgf基因 筛选、克隆及表达
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