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Rapid Identification of Mycobacterium Leprae by Polymerase Chain Reaction-restriction Fragment Length Polymorphism Analysis of the Heat Shock Protein 65 Gene from Skin Specimens 被引量:1
1
作者 Zheng Zhao Xi-Wan Liu Jun Jia Lin Cai Jian-Zhong Zhang 《Chinese Medical Journal》 SCIE CAS CSCD 2015年第21期2964-2966,共3页
INTRODUCTIONLeprosy caused by Mvcobacterium leprae (M. leprae), is a chronic granulomatous disease affecting the skin and peripheral nervous system, which is transmitted through direct contact with nontreated or ina... INTRODUCTIONLeprosy caused by Mvcobacterium leprae (M. leprae), is a chronic granulomatous disease affecting the skin and peripheral nervous system, which is transmitted through direct contact with nontreated or inadequate treatment patients. Diagnosis of leprosy depends on the clinical signs and symptoms and slit skin smear positivity. However, it's sometimes similar with other granulomatous disease caused by mycobacterial infection. Early stage leprosy is difficult to diagnose by clinical criterion alone because the sensitivity of acid-fast bacilli staining is quite low. The polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) shows the great advantage in rapid identification and diagnosis for early cases and has a differentiation between leprosy and nonleprosy cases. 展开更多
关键词 heat shock protein 65 Gene Mycobacterium Leprae Polymerase Chain Reaction-restriction Fragment LengthPolymorphism
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结核分枝杆菌HSP65与IL-2融合蛋白的表达和纯化 被引量:6
2
作者 王丽梅 师长宏 +4 位作者 张海 薛莹 柏银兰 高辉 徐志凯 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期801-804,共4页
目的获得融合表达的结核分枝杆菌热休克蛋白65与人白细胞介素2的重组蛋白,为进一步研究其对结核疫苗的作用奠定基础。方法用PCR的方法分别从H37Rv DNA和质粒pGEM-Teasy-IL-2中扩增目的基因片段hsp65和IL-2,将各目的片段克隆至pMD18-T载... 目的获得融合表达的结核分枝杆菌热休克蛋白65与人白细胞介素2的重组蛋白,为进一步研究其对结核疫苗的作用奠定基础。方法用PCR的方法分别从H37Rv DNA和质粒pGEM-Teasy-IL-2中扩增目的基因片段hsp65和IL-2,将各目的片段克隆至pMD18-T载体中进行测序,将测序正确的目的基因片段分别经EcoRI和ClaI,ClaI和HindⅢ双酶切后亚克隆至原核表达载体pPro-EX HTa,转化大肠杆菌DH5α,挑选阳性克隆,经IPTG诱导后进行融合表达,并通过镍柱对融合蛋白进行纯化。结果PCR法扩增获得的各目的基因片段与GenBank报道的一致。构建的融合蛋白原核表达载体在大肠杆菌中表达后,经SDS-PAGE和Western-blot分析,在Mr 78000处有特异性的蛋白表达条带。用镍柱进行亲和层析纯化后得到了高纯度的HSP65-IL-2融合蛋白。结论成功的构建了结核分枝杆菌HSP65与人IL-2的融合表达载体,并在大肠杆菌中获得高效表达,有望为结核的预防提供有效的疫苗。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 热休克蛋白65 白细胞介素2 表达 纯化
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热休克蛋白65及其融合蛋白Hsp65-6×P277的分离纯化和稳定性研究(英文) 被引量:6
3
作者 陈庆梅 吴国君 +3 位作者 吴洁 李泰明 曹荣月 刘景晶 《药物生物技术》 CAS CSCD 2007年第4期249-254,共6页
来源于牛分枝杆菌的热休克蛋白65(Hsp65)在没有佐剂的情况下可作为载体分子将抗原表位递呈给免疫系统。热休克蛋白具有蛋白酶的催化活性,容易发生自溶而降解,这制约了基于Hsp65疫苗的研究。该研究中,建立了纯化Hsp65及其融合蛋白Hsp65-6... 来源于牛分枝杆菌的热休克蛋白65(Hsp65)在没有佐剂的情况下可作为载体分子将抗原表位递呈给免疫系统。热休克蛋白具有蛋白酶的催化活性,容易发生自溶而降解,这制约了基于Hsp65疫苗的研究。该研究中,建立了纯化Hsp65及其融合蛋白Hsp65-6×P277(P277为来源于人热休克蛋白60的肽段,线性重复6次)的方法。Hsp65与Hsp65-6×P277以可溶形式表达于大肠杆菌。在低温及添加EDTA的条件下经细胞裂解、硫酸铵沉淀及阴离子交换树脂等纯化方法,可得到电泳纯的目的蛋白。用纯化的融合蛋白Hsp65-6×P277免疫小鼠,可激发机体产生强烈的免疫应答,该融合蛋白有希望作为免佐剂的糖尿病疫苗加以进一步研究开发。 展开更多
关键词 热休克蛋白65(Hsp65) 融合蛋白 纯化 降解 稳定性
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皮下免疫热休克蛋白65对高密度脂蛋白抗炎抗氧化功能的影响 被引量:5
4
作者 孙海阁 田迪 +4 位作者 谭迎 刘挺榕 罗甜甜 赖文岩 郭志刚 《中国动脉硬化杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期977-981,共5页
目的观察不同剂量热休克蛋白65对载脂蛋白E基因敲除小鼠高密度脂蛋白抗炎抗氧化功能的影响。方法 8周龄载脂蛋白E基因敲除小鼠随机分为磷酸盐缓冲液对照组、5μg热休克蛋白65组及25μg热休克蛋白65组,分别于第3、6周进行皮下免疫。第16... 目的观察不同剂量热休克蛋白65对载脂蛋白E基因敲除小鼠高密度脂蛋白抗炎抗氧化功能的影响。方法 8周龄载脂蛋白E基因敲除小鼠随机分为磷酸盐缓冲液对照组、5μg热休克蛋白65组及25μg热休克蛋白65组,分别于第3、6周进行皮下免疫。第16周取标本,分别检测血脂水平、血清屏氧酶1活性、髓过氧化物酶活性、高密度脂蛋白炎症指数及炎症因子白细胞介素10和干扰素γ含量。结果随着热休克蛋白65剂量的增加,血清高密度脂蛋白胆固醇水平和白细胞介素10表达量逐渐下降,屏氧酶1活性逐渐降低,高密度脂蛋白炎症指数、髓过氧化物酶活性和干扰素γ表达量则逐渐升高。与对照组比较,25μg热休克蛋白65组血清高密度脂蛋白胆固醇水平和白细胞介素10表达量明显下降(P<0.01),屏氧酶1活性明显降低(P<0.05),高密度脂蛋白炎症指数、髓过氧化物酶活性、干扰素γ表达量则显著升高(P<0.01)。结论热休克蛋白65可引起炎症反应,损害高密度脂蛋白抗炎抗氧化功能,并且这种作用与其剂量有关。 展开更多
关键词 热休克蛋白65 高密度脂蛋白 抗炎 抗氧化
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结核杆菌热休克蛋白65“自杀性”DNA疫苗的构建及其免疫效应研究 被引量:2
5
作者 李向群 刘君炎 +4 位作者 刘焰 居薇 刘斌波 李真 刘胜武 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期159-162,共4页
目的构建表达结核杆菌热休克蛋白65(HSP65)的“自杀性”DNA疫苗。方法用聚合酶链反应,从我室构建的表达结核杆菌HSP65真核表达质粒中(pCHSP65),扩增出编码HSP65的基因,与“自杀性”DNA载体pSFV重组。经酶切、测序鉴定,间接免疫荧光(IF)... 目的构建表达结核杆菌热休克蛋白65(HSP65)的“自杀性”DNA疫苗。方法用聚合酶链反应,从我室构建的表达结核杆菌HSP65真核表达质粒中(pCHSP65),扩增出编码HSP65的基因,与“自杀性”DNA载体pSFV重组。经酶切、测序鉴定,间接免疫荧光(IF)证实其能表达HSP65后,将此“自杀性”DNA疫苗(pAHSP65)免疫小鼠。用ELISA、MTT法研究其免疫效应,并观察其对结核菌感染小鼠的保护作用。结果酶切、测序鉴定结果证实为结核杆菌HSP65基因,在BHK21细胞中经IF证实有HSP65表达。该疫苗接种能诱导小鼠产生特异性抗体,刺激淋巴细胞增殖,并能抵抗结核杆菌的感染。结论我们成功地构建了表达结核杆菌HSP65的“自杀性”DNA疫苗,该疫苗能诱导特异性免疫应答,并对结核菌感染的小鼠有保护作用。其免疫效应优于常规的HSP65DNA疫苗。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 热休克蛋白6.5 “自杀性”DNA疫苗
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pIHsp65GM的构建及其对结核杆菌感染小鼠的保护 被引量:3
6
作者 胡方靖 武军驻 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期666-671,共6页
目的构建pIHsp65GM双顺反子真核表达质粒,并在真核细胞中表达,研究该基因疫苗的免疫原性及其对小鼠感染结核杆菌后的免疫保护效果。方法制备基因疫苗,将C57BL/6小鼠于胫前肌注射质粒DNA免疫,末次免疫后用h37rv强毒株经尾静脉攻击小鼠,... 目的构建pIHsp65GM双顺反子真核表达质粒,并在真核细胞中表达,研究该基因疫苗的免疫原性及其对小鼠感染结核杆菌后的免疫保护效果。方法制备基因疫苗,将C57BL/6小鼠于胫前肌注射质粒DNA免疫,末次免疫后用h37rv强毒株经尾静脉攻击小鼠,计数肺和脾组织中结核杆菌的菌落数,对小鼠的部分肺和脾组织作病理切片,经HE染色观察组织病变的程度,测血清特异性IgG,MTT测定脾淋巴细胞特异性增殖指数,测小鼠脾细胞培养上清中IFN-γ的水平,乳酸脱氢酶(LDH)释放法测定免疫小鼠特异性细胞毒性T细胞(CTL)活性。结果 pIHsp65GM基因疫苗构建成功并且诱导小鼠特异性IgG的产生、脾淋巴细胞增殖以及IFN-γ的分泌(平均含量显著高于2个阴性对照组(P<0.001))。pIHsp65GM免疫组小鼠的脾和肺的平均结核菌载量分别低于两个阴性对照组的相应器官的结核菌载量(P<0.001),同时也显著高于BCG免疫对照组。结论成功构建和表达pIHsp65GM质粒,该基因疫苗对小鼠结核杆菌感染有一定的免疫保护效果。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 热休克蛋白65 人粒细胞-吞噬细胞集落刺激因子 pIHsp65GM质粒 DNA疫苗
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HSP65-MUC1肿瘤疫苗对小鼠胰腺组织的分子模拟作用 被引量:1
7
作者 孙琳 吴秀丽 +1 位作者 王丽颖 于永利 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期15-17,F0002,共4页
目的:探讨重组抗肿瘤融合蛋白疫苗热激蛋白65-黏蛋白1(HSP65-MUC1)在小鼠体内通过分子模拟方式损伤小鼠胰腺的可能性。方法:21只C57BL/6小鼠随机分为PBS对照组、HSP65组和HSP65-MUC1组(每组7只),分别皮下注射PBS、HSP65和HSP65-MUC1,每... 目的:探讨重组抗肿瘤融合蛋白疫苗热激蛋白65-黏蛋白1(HSP65-MUC1)在小鼠体内通过分子模拟方式损伤小鼠胰腺的可能性。方法:21只C57BL/6小鼠随机分为PBS对照组、HSP65组和HSP65-MUC1组(每组7只),分别皮下注射PBS、HSP65和HSP65-MUC1,每周1次,给药3周。无菌分离小鼠脾细胞,利用流式细胞术检测特异性淋巴细胞的增殖情况,组织病理学观察小鼠胰腺的病理改变。结果:流式细胞术检测,与PBS对照组和HSP65组比较,HSP65-MUC1肿瘤疫苗组HSP65-MUC1特异性淋巴细胞升高了16.88%(P<0.001);HSP65特异性淋巴细胞升高了7.29%(P<0.01);与HSP60交叉识别的特异性淋巴细胞升高了5.79%(P<0.05)。3个免疫组小鼠胰腺组织HE染色病理均正常。结论:HSP65-MUC1肿瘤疫苗没有通过分子模拟诱导损伤小鼠胰腺。 展开更多
关键词 重组抗肿瘤融合蛋白 疫苗 热激蛋白65-黏蛋白1 分子模拟
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鼻粘膜免疫融合蛋白Hsp65-6×p277预防NOD小鼠1型糖尿病的发生(英文) 被引量:1
8
作者 金亮 王宇 +1 位作者 朱爱华 刘景晶 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2006年第8期857-862,共6页
目的提高多肽p277的免疫原性,从而提高其对自身免疫性糖尿病的预防作用。方法将p2776次重复与Hsp65融合置于pET28a中构建重组Hsp65-6×p277表达质粒。该重组质粒在大肠杆菌BL21中以高效可溶形式表达。依次通过细胞裂解、硫酸铵沉淀... 目的提高多肽p277的免疫原性,从而提高其对自身免疫性糖尿病的预防作用。方法将p2776次重复与Hsp65融合置于pET28a中构建重组Hsp65-6×p277表达质粒。该重组质粒在大肠杆菌BL21中以高效可溶形式表达。依次通过细胞裂解、硫酸铵沉淀、双蒸水透析、DEAE纤维素52柱层析纯化获得目的蛋白。用纯化后的融合蛋白Hsp65-6×p277通过鼻腔给药方式,在不添加任何佐剂的情况下3次免疫4周龄雌性NOD小鼠。每月眼角取血,检测抗体和血糖浓度。结果初步药效学实验表明融合蛋白Hsp65-6×p277可抑制NOD小鼠中1型糖尿病的发生。结论融合蛋白Hsp65-6×p277有可能发展成为一种具有防治胰岛素依赖性糖尿病作用的疫苗。 展开更多
关键词 热休克蛋白65 p277 胰岛素依赖性糖尿病 免疫
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溃疡性结肠炎发病新机制以及热休克蛋白65的作用 被引量:3
9
作者 董颖 邵圣文 +1 位作者 王莎 杨红霞 《湖州师范学院学报》 2017年第8期79-83,共5页
溃疡性结肠炎是一种肠道非特异慢性炎症疾病,被世界卫生组织列为难治疾病,目前尚无特效治疗手段.溃疡性结肠炎病因和发病机制尚不十分清楚,限制了治疗药物的开发.对肠道菌群、热休克蛋白家族在溃疡性结肠炎发病中的作用以及热休克蛋白6... 溃疡性结肠炎是一种肠道非特异慢性炎症疾病,被世界卫生组织列为难治疾病,目前尚无特效治疗手段.溃疡性结肠炎病因和发病机制尚不十分清楚,限制了治疗药物的开发.对肠道菌群、热休克蛋白家族在溃疡性结肠炎发病中的作用以及热休克蛋白65的潜在治疗作用,以期加深对溃疡性结肠炎发病机制认识,为寻找潜在治疗靶点及药物开发提供借鉴. 展开更多
关键词 溃疡性结肠炎 热休克蛋白65 肠道菌群 免疫异常
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热休克蛋白65对小鼠溃疡性结肠炎的作用机制研究 被引量:1
10
作者 李小余 王莎 +4 位作者 董颖 马旭东 王伟伟 韩江余 邵圣文 《中国现代医学杂志》 CAS 2019年第17期6-10,共5页
目的探讨热休克蛋白65(HSP65)对小鼠溃疡性结肠炎(UC)的作用及机制。方法选择C57BL/6小鼠,应用葡聚糖硫酸钠法复制UC模型。6只正常小鼠为正常对照组(A组),48只UC小鼠随机分成模型对照组(B组)、低剂量组(C组)、中剂量组(D组)及高剂量组(E... 目的探讨热休克蛋白65(HSP65)对小鼠溃疡性结肠炎(UC)的作用及机制。方法选择C57BL/6小鼠,应用葡聚糖硫酸钠法复制UC模型。6只正常小鼠为正常对照组(A组),48只UC小鼠随机分成模型对照组(B组)、低剂量组(C组)、中剂量组(D组)及高剂量组(E组),每组12只。A组和B组小鼠灌胃给予磷酸盐缓冲液(PBS),C组、D组、E组小鼠分别灌胃给予HSP65,剂量分别是0.5、2.5及5.0mg/kg体重。隔天灌胃1次,共7次,末次灌胃2d后,麻醉处死小鼠。计算小鼠疾病活动指数(DAI)。取小鼠结肠中段组织,HE染色镜检并计算组织病理评分。取小鼠血液、脾脏和肠系膜淋巴结,分离有核细胞后采用流式细胞术检测调节性T细胞(Treg)活化情况。结果 HSP65蛋白治疗UC小鼠14d,B、C、D及E组小鼠的DAI分别为(3.66±0.39)、(3.07±0.15)、(1.50±0.43)和(0.83±0.31),C组、D组、E组小鼠DAI变化趋势有差异(P<0.05);C组、D组和E组小鼠结肠组织病理评分均低于B组小鼠(P<0.05);E组小鼠结肠组织病理评分低于C组和D组(P<0.05),D组小鼠结肠组织病理评分低于C组(P<0.05);与未治疗的B组比较,C组、D组、E组小鼠肠系膜淋巴结中的Treg细胞比例均高于B组(P?<0.05)。结论 HSP65蛋白可以缓解小鼠溃疡性结肠炎,其机制可能是通过激活小鼠肠系膜淋巴结中的静止Treg细胞,使得活化Treg细胞比例增加,再通过活化Treg细胞发挥抑制肠道炎症反应作用。 展开更多
关键词 结肠炎溃疡性 热休克蛋白65 调节性T细胞
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人乳腺癌疫苗HSP65-HER2联用CpG684的抗肿瘤作用
11
作者 吴秀丽 颜游游 +4 位作者 宋丹丹 付尧 华立 王丽颖 王华 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期989-991,共3页
目的:检测人乳腺癌融合蛋白疫苗HSP65-HER2联用CpG684的抗肿瘤效果。方法:C57BL/6小鼠分别皮下注射PBS,CpG684,HSP65-HER2和CpG684混合物,一周一次,共三次,随后给小鼠腹腔接种7.5×104个转染了pcDNA3-GFP-HER2质粒的B16肿瘤细胞(HER... 目的:检测人乳腺癌融合蛋白疫苗HSP65-HER2联用CpG684的抗肿瘤效果。方法:C57BL/6小鼠分别皮下注射PBS,CpG684,HSP65-HER2和CpG684混合物,一周一次,共三次,随后给小鼠腹腔接种7.5×104个转染了pcDNA3-GFP-HER2质粒的B16肿瘤细胞(HER2+B16),监测各组小鼠的生存期至接种肿瘤后70天。结果:免疫了HSP65-HER2和CpG684的小鼠在接种肿瘤后70天时,仍有80%存活,而GpG684组的小鼠仅有10%存活,PBS组小鼠在接种肿瘤后36天后全部死亡。与PBS和CpG684对照组相比,免疫了HSP65-HER2和CpG684的小鼠的生存期显著延长(P<0.01)。结论:HSP65-HER2联用CpG684在体内发挥了强大的抗肿瘤活性,为进一步的临床研究和应用奠定了基础。 展开更多
关键词 热休克蛋白65 HER2 CPGODN 乳腺癌 抗肿瘤
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融合蛋白HSP65-6×P277在NOD鼠中降糖作用的机制研究(英文)
12
作者 金亮 王宇 +1 位作者 朱爱华 刘景晶 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2009年第10期1142-1150,共9页
目的:探讨融合蛋白HSP65 -6×P277在NOD鼠中的降糖作用机制。方法:融合蛋白HSP65 -6×P277通过鼻腔给药方式,在不添加任何佐剂的情况下3次免疫4周龄雌性NOD小鼠。观察该融合蛋白对NOD小鼠血糖,细胞因子水平,抗体类型和胰腺炎严... 目的:探讨融合蛋白HSP65 -6×P277在NOD鼠中的降糖作用机制。方法:融合蛋白HSP65 -6×P277通过鼻腔给药方式,在不添加任何佐剂的情况下3次免疫4周龄雌性NOD小鼠。观察该融合蛋白对NOD小鼠血糖,细胞因子水平,抗体类型和胰腺炎严重程度的影响。结果:融合蛋白HSP65 -6×P277免疫组动物血清中含有高水平的IL-4和低水平的IL-2 ,P277特异性抗体类型主要为IgGl和IgG2b,IgG2a水平较低;T细胞增殖实验的培养上清中含有较高水平的IL-10和较低水平的IFN-γ;胰腺炎的严重程度和1型糖尿病的发病率显著降低。结论:诱导了Th2免疫反应可能是HSP65-6×P277预防1型糖尿病发生的作用机制之一。 展开更多
关键词 热休克蛋白65 p277肽 TH1/TH2细胞 细胞因子
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热休克蛋白65对Jurkat细胞增殖和胆固醇流出的影响
13
作者 罗甜甜 刘季晨 +5 位作者 习丹 卢浩 李梦豪 熊浩伟 赖文岩 郭志刚 《中国动脉硬化杂志》 CAS 北大核心 2015年第2期127-131,共5页
目的探讨动脉粥样硬化中的重要炎性物质—热休克蛋白65(HSP65)诱导活化的Jurkat细胞发生增殖、免疫活化反应时胆固醇流出率的改变,并揭示其可能的分子机制。方法 Jurkat细胞经刀豆蛋白A(Con A)活化48 h后,与不同浓度HSP65孵育24 h,CCK-... 目的探讨动脉粥样硬化中的重要炎性物质—热休克蛋白65(HSP65)诱导活化的Jurkat细胞发生增殖、免疫活化反应时胆固醇流出率的改变,并揭示其可能的分子机制。方法 Jurkat细胞经刀豆蛋白A(Con A)活化48 h后,与不同浓度HSP65孵育24 h,CCK-8检测细胞增殖能力,ELISA测定上清液中炎症因子干扰素γ(IFN-γ)和白细胞介素10(IL-10)含量,液闪计数仪检测Jurkat细胞胆固醇流出率;RT-PCR检测胆固醇相关转运蛋白,包括ATP结合盒转运体A1(ABCA1)和G1(ABCG1)、B族Ⅰ型清道夫受体(SR-BⅠ)、过氧化体增殖物激活型受体γ(PPARγ)、肝X受体α(LXRα)的表达。结果 5 mg/L Con A与Jurkat细胞孵育48 h后可显著促进细胞增殖,HSP65呈剂量依赖性促进Con A诱导的Jurkat细胞增殖(P<0.001)。以0.5、1 mg/L HSP65分别处理Jurkat细胞后,Jurkat细胞胆固醇流出率和IL-10含量均呈浓度依赖性下降,IFN-γ含量则逐渐升高(P<0.01),细胞ABCA1、ABCG1、SR-BⅠ、PPARγ、LXRα的mRNA表达水平呈剂量依赖性降低(P<0.01)。结论在0.5~1 mg/L浓度范围内,HSP65不仅可促进T细胞增殖、加剧细胞免疫反应,还可引起胆固醇流出率降低,其机制可能与下调胆固醇转运相关蛋白ABCA1、ABCG1、SR-BⅠ、PPARγ、LXRα的基因表达相关。 展开更多
关键词 热休克蛋白65 T细胞 免疫反应 高密度脂蛋白 胆固醇流出率
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结核分枝杆菌热休克蛋白65与汉坦病毒G2糖蛋白融合基因真核表达载体的构建与表达
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作者 黄浩 黄汉菊 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期49-51,共3页
目的构建以结核分枝杆菌热休克蛋白65(HSP65)和汉坦病毒G2糖蛋白重组融合基因为基础的真核表达载体,为进一步研究其在结核病和出血热防治中的作用奠定基础。方法采用聚合酶链反应从结核分枝杆菌H37Rv株基因中,扩增出HSP65的编码基因,从T... 目的构建以结核分枝杆菌热休克蛋白65(HSP65)和汉坦病毒G2糖蛋白重组融合基因为基础的真核表达载体,为进一步研究其在结核病和出血热防治中的作用奠定基础。方法采用聚合酶链反应从结核分枝杆菌H37Rv株基因中,扩增出HSP65的编码基因,从T-H8205G2质粒扩增出G2糖蛋白的编码基因,经相应限制性核酸内切酶消化后,插入真核表达载体pcDNA3.1/His,并将此重组质粒通过脂质体介导转染NIH3T3细胞,用SDS-PAGE、免疫组织化学及免疫荧光方法分别测定表达产物的相对分子量及特异性。结果获得正向插入的pcDNA3.1/His-HSP65-G2重组表达质粒,表达产物的相对分子量为105 kD,与理论预期大小一致,并且可与汉坦病毒H8205株的腹水抗体和HSP65单抗起特异反应。表明构建的pcDNA3.1/His-HSP65-G2能在哺乳动物细胞中表达并具有抗原性。结论编码HSP65和G2抗原基因的重组基因的真核表达载体构建成功。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 热休克蛋白65 汉坦病毒 G2糖蛋白
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结核杆菌热休克蛋白-65重组质粒的构建及其在真核细胞中的初步表达
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作者 梁增伟 李用国 任红 《现代临床医学生物工程学杂志》 2001年第6期404-406,共3页
目的 构建结核杆菌热休克蛋白 -65 (HSP65 )真核表达质粒 ,并探讨其在人肺癌细胞系A549中的表达 .方法 用PCR的方法从结核杆菌H37Rv基因组中扩增出HSP65基因 ,并定向克隆到真核表达质粒pcDNA3.1( +) ,构建成重组质粒pcDNA3.1-HSP65 ;... 目的 构建结核杆菌热休克蛋白 -65 (HSP65 )真核表达质粒 ,并探讨其在人肺癌细胞系A549中的表达 .方法 用PCR的方法从结核杆菌H37Rv基因组中扩增出HSP65基因 ,并定向克隆到真核表达质粒pcDNA3.1( +) ,构建成重组质粒pcDNA3.1-HSP65 ;然后用电穿孔的方法将质粒pcDNA3.1-HSP65转染到A549细胞 ,经G418筛选后获得抗性细胞克隆 ;用RT -PCR的方法检抗性细胞中HSP65mRNA的表达 .结果 经酶切鉴定和DNA序列测定证实重组质粒pcDNA3.1-HSP65构建正确 ;RT -PCR检测结果发现 ,重组质粒pcDNA3.1-HSP65转染的A549细胞总RNA中结核杆菌HSP65mRNA为阳性 .结论 真核表达质粒pcDNA3.1-HSP65构建成功 。 展开更多
关键词 热休克蛋白-65 结核杆菌 构建 真核表达
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结核杆菌pIHSP65真核表达载体的构建和表达 被引量:7
16
作者 李岩 邓军霞 管大伟 《新乡医学院学报》 CAS 2007年第1期29-33,共5页
目的构建结核杆菌热休克蛋白65KD(HSP65)基因真核表达载体pIHSP65,并在Hela细胞中表达。方法从结核杆菌H37Rv株的基因组中扩增HSP65基因,克隆到双顺反子真核表达载体pIRES的多克隆位点A中,构建pIHSP65真核表达载体,采用阳离子多聚体将... 目的构建结核杆菌热休克蛋白65KD(HSP65)基因真核表达载体pIHSP65,并在Hela细胞中表达。方法从结核杆菌H37Rv株的基因组中扩增HSP65基因,克隆到双顺反子真核表达载体pIRES的多克隆位点A中,构建pIHSP65真核表达载体,采用阳离子多聚体将其转染到Hela细胞中,用免疫组化染色法检测HSP65基因的表达。结果所克隆的HSP65基因片段经测序完全正确。重组质粒转染Hela细胞后,用免疫组化染色法检测有HSP65蛋白的表达。结论成功构建了结核杆菌pIHSP65真核表达载体,并在Hela细胞中有效表达,为构建双抗原双顺反子真核表达质粒,以及在整体动物水平的实验研究奠定了基础。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 真核表达载体 热休克蛋白65KD DNA疫苗
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BCG HSP65-人HER-2/neuT细胞表位融合蛋白基因的扩增及序列分析 被引量:2
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作者 王丽娟 吴士彬 +1 位作者 于永利 王丽颖 《蚌埠医学院学报》 CAS 2002年第4期292-294,共3页
目的 :获得卡介苗热休克蛋白 6 5 (BCGHSP6 5 )与人HER 2 /neuT细胞表位 (GP2 )构成的融合蛋白 (BCGHSP6 5 GP2 )基因 ,并对其进行测序。方法 :从卡介苗结核杆菌中提取其基因组DNA ,设计一对寡核苷酸引物 ,采用聚合酶链反应 (PCR)获得B... 目的 :获得卡介苗热休克蛋白 6 5 (BCGHSP6 5 )与人HER 2 /neuT细胞表位 (GP2 )构成的融合蛋白 (BCGHSP6 5 GP2 )基因 ,并对其进行测序。方法 :从卡介苗结核杆菌中提取其基因组DNA ,设计一对寡核苷酸引物 ,采用聚合酶链反应 (PCR)获得BCGHSP6 5基因 ,再设计一对寡核苷酸引物 ,再次PCR ,获得BCGHSP6 5 GP2 基因 ,DNA序列分析BCGHSP6 5 GP2 基因。结果 :本实验采用两轮PCR方法获得的基因片段长度为 170 0bp ,DNA序列分析确证为编码BCGHSP6 5 GP2 融合蛋白的序列。结论 :采用PCR获得BCGHSP6 5 GP2 基因序列是正确的 。 展开更多
关键词 人HER-2/neu T细胞表位 基因表达调节 卡介苗热休克蛋白65 基因扩增 基因序列 免疫疗法 肿瘤疫苗 肿瘤治疗
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胞壁表达HSP65-IL-2融合蛋白的重组耻垢分枝杆菌的构建和鉴定
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作者 栗文彬 师长宏 +4 位作者 张海 张廷芬 王丽梅 赵勇 白冰 《生物技术通讯》 CAS 2008年第5期667-669,共3页
目的:获得胞壁表达结核分枝杆菌热激蛋白65(HSP65)和人白细胞介素2(IL-2)融合蛋白的重组耻垢分枝杆菌。方法:将HSP65和IL-2融合基因克隆入大肠杆菌-卡介苗(E.coli-BCG)穿梭质粒pCW,构建成重组质粒HSP65-IL-2-pCW,电穿入耻垢分枝杆菌,经... 目的:获得胞壁表达结核分枝杆菌热激蛋白65(HSP65)和人白细胞介素2(IL-2)融合蛋白的重组耻垢分枝杆菌。方法:将HSP65和IL-2融合基因克隆入大肠杆菌-卡介苗(E.coli-BCG)穿梭质粒pCW,构建成重组质粒HSP65-IL-2-pCW,电穿入耻垢分枝杆菌,经潮霉素抗性筛选和PCR方法选取阳性克隆;用间接免疫荧光法对重组耻垢分枝杆菌进行表型鉴定;用重组耻垢分枝杆菌免疫BALB/c小鼠,检测其诱导的抗体水平。结果:筛选获得的重组耻垢分枝杆菌增殖特性与普通耻垢分枝杆菌无明显区别;与抗人的IL-2抗体和HSP65抗体均可形成免疫印迹条带;间接荧光染色后,可见细菌表面有极强的绿色荧光;重组耻垢分枝杆菌免疫BALB/c小鼠2周后,小鼠血清中HSP65抗体平均滴度为1∶4000,而生理盐水组的抗体几乎为阴性。结论:结核分枝杆菌HSP65和人IL-2融合基因在耻垢分枝杆菌胞壁获得表达,有望为结核病的预防提供有效的疫苗。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 耻垢分枝杆菌 热激蛋白65 白细胞介素2 融合蛋白
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热休克蛋白65对视网膜毛细血管粥样硬化的影响
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作者 王玲 刘伟仙 +1 位作者 黄雄高 李科 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2018年第7期634-637,共4页
目的探讨热休克蛋白65(heat shock protein 65,HSP65)对视网膜毛细血管粥样硬化的影响。方法 30只成年Wistar大鼠随机分为实验组(n=15)和对照组(n=15),实验组给予高脂高糖饮食建立视网膜毛细血管粥样硬化模型,对照组正常喂养,8周后测定... 目的探讨热休克蛋白65(heat shock protein 65,HSP65)对视网膜毛细血管粥样硬化的影响。方法 30只成年Wistar大鼠随机分为实验组(n=15)和对照组(n=15),实验组给予高脂高糖饮食建立视网膜毛细血管粥样硬化模型,对照组正常喂养,8周后测定两组大鼠血清与视网膜组织中HSP65表达情况,电子显微镜下观察视网膜毛细血管粥样硬化情况与斑块情况。结果实验组的总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇均高于对照组,血糖值也高于对照组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。实验组与对照组的血清中HSP65含量分别为(45.66±8.24)μmol·L^(-1)和(20.67±9.44)μmol·L^(-1),实验组高于对照组(P<0.05);实验组视网膜中的HSP65蛋白相对表达量为0.56±0.11,高于对照组的0.10±0.02,差异有统计学意义(P<0.05)。对照组视网膜毛细血管内皮细胞层和弹力板均完整且贴附紧密;实验组视网膜毛细血管内膜有程度不等的增厚,管腔呈偏心性狭窄,内膜中细胞外基质增多。实验组视网膜毛细血管的血管面积、斑块面积与斑块比例均高于对照组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论 HSP65在视网膜毛细血管粥样硬化大鼠的血清与视网膜组织中均呈高表达,可导致视网膜毛细血管的血管面积、斑块面积与斑块比例增加。 展开更多
关键词 热休克蛋白65 视网膜毛细血管 血管粥样硬化 血脂
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白细胞介素18、热休克蛋白65和和肽素与中青年缺血性脑卒中的相关性研究 被引量:2
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作者 周丽坤 马金珠 +1 位作者 张蕾 唐艳 《心脑血管病防治》 2021年第5期465-468,共4页
目的探讨白细胞介素18(IL-18)、热休克蛋白65(HSP65)、和肽素(CPP)与中青年缺血性脑卒中(IS)的相关性。方法选取2017年1月到2019年6月云南中医药大学第二附属医院神经内科收治的91例中青年(18~45岁)IS患者作为中青年IS组,按照改良Ranki... 目的探讨白细胞介素18(IL-18)、热休克蛋白65(HSP65)、和肽素(CPP)与中青年缺血性脑卒中(IS)的相关性。方法选取2017年1月到2019年6月云南中医药大学第二附属医院神经内科收治的91例中青年(18~45岁)IS患者作为中青年IS组,按照改良Rankin量表(mRS)评分将患者分为预后不良组(26例,mRS>2分)和预后良好组(65例,mRS≤2分),另选我院收治52例老年(>60岁)IS患者及46例体检健康人员分别作为老年IS组和对照组,检测所有纳入对象入院1d时血清IL-18、HSP65、CPP水平,并收集患者临床资料,分析血清IL-18,HSP65、CPP水平与美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分相关性及影响预后的相关因素。结果IS患者血清IL-18、HSP65、CPP水平明显高于对照组,且老年IS组血清IL-18、HSP65、CPP水平明显高于中青年IS组,差异具有统计学意义(P<0.05);预后不良组年龄、血清IL-18、HSP65、CPP水平、NIHSS评分、吸烟史、合并高血压、合并高尿酸症、合并高血脂症、合并糖尿病概率均高于预后良好组,差异具有统计学意义(P<0.05);Pearson相关性分析显示,血清IL-18、HSP65、CPP水平与NIHSS评分均呈正相关(r=0.485、0.537、0.432,P<0.05);多因素Logistic回归分析显示,年龄、NIHSS评分、IL-18、HSP65、CPP偏高及合并吸烟史、高血压、高尿酸症、高血脂症、糖尿病是影响患者预后不良的危险因素(P<0.05)。结论血清IL-18、HSP65和CPP水平与IS患者病情严重程度和预后相关,可作为病情评估及预后预测的参考指标。 展开更多
关键词 白细胞介素18 热休克蛋白65 和肽素 缺血性脑卒中
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