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Down-regulation of histone deacetylase 7 reduces biological activities of retinal microvascular endothelial cells under high glucose condition and related mechanism
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作者 Jia-Yi Ning Han-Yi Yang +2 位作者 Ting-Ke Xie Yi-Xuan Chen Jing Han 《International Journal of Ophthalmology(English edition)》 SCIE CAS 2023年第8期1210-1217,共8页
AIM:To investigate the expression and effect of histone deacetylase 7(HDAC7)in human retinal microvascular endothelial cells(HRMECs)under high glucose condition and related mechanism,and the expression of HDAC7 in the... AIM:To investigate the expression and effect of histone deacetylase 7(HDAC7)in human retinal microvascular endothelial cells(HRMECs)under high glucose condition and related mechanism,and the expression of HDAC7 in the retinal tissue in diabetic rats.METHODS:The expression of HDAC7 in HRMECs under high glucose and the retinal tissue from normal or diabetic rats were detected with immunohistochemistry and Western blot.LV-shHDAC7 HRMECs were used to study the effect of HDAC7 on cell activities.Cell count kit-8(CCK-8),5-ethynyl2’-deoxyuridine(EdU),flow cytometry,scratch test,Transwell test and tube formation assay were used to examine the ability of cell proliferation,migration,and angiogenesis.Finally,a preliminary exploration of its mechanism was performed by Western blot.RESULTS:The expression of HDAC7 was both upregulated in retinal tissues of diabetic rats and high glucosetreated HRMECs.Down-regulation of HDAC7 expression significantly reduced the ability of proliferation,migration,and tube formation,and reversed the high glucose-induced high expression of CDK1/Cyclin B1 and vascular endothelial growth factor in high glucose-treated HRMECs.CONCLUSION:High glucose can up-regulate the expression of HDAC7 in HRMECs.Down-regulation of HDAC7 can inhibit HRMECs activities.HDAC7 is proposed to be involved in pathogenesis of diabetic retinopathy and a therapeutic target. 展开更多
关键词 human retinal microvascular endothelial cells histone deacetylase 7 high glucose diabetic rat vascular endothelial growth factor
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连翘苷通过调控CTRP3表达对高糖诱导的人视网膜血管内皮细胞损伤的影响及其机制研究
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作者 韩莎莎 尹丹 +1 位作者 李跃峰 叶琴 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2024年第5期354-359,共6页
目的比较不同剂量连翘苷(PHN)对高糖(HG)诱导的人视网膜血管内皮细胞损伤的影响,并分析其对补体C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白3(CTRP3)表达的调控作用及可能的作用机制。方法采用HG培养人视网膜血管内皮细胞并建立细胞损伤模型(HG组)。HG+PH... 目的比较不同剂量连翘苷(PHN)对高糖(HG)诱导的人视网膜血管内皮细胞损伤的影响,并分析其对补体C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白3(CTRP3)表达的调控作用及可能的作用机制。方法采用HG培养人视网膜血管内皮细胞并建立细胞损伤模型(HG组)。HG+PHN-L组、HG+PHN-M组、HG+PHN-H组人视网膜血管内皮细胞分别用1μmol·L^(-1)、10μmol·L^(-1)、100μmol·L^(-1)PHN处理后进行HG诱导。HG+pcDNA组、HG+pcDNA-CTRP3组分别用pcDNA、pcDNA-CTRP3转染至人视网膜血管内皮细胞后进行HG诱导。HG+PHN-H+sh-NC组、HG+PHN-H+sh-CTRP3组分别用sh-NC、sh-CTRP3转染后,用100μmol·L^(-1)PHN处理HG诱导的人视网膜血管内皮细胞。检测细胞丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平。采用流式细胞术检测细胞凋亡率。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)、Western blot分别检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关蛋白(Bax)、CTRP3蛋白表达水平。结果与Con组比较,HG组细胞凋亡率、MDA水平、Bax蛋白水平均升高,SOD、GSH-Px、Bcl-2蛋白、CTRP3 mRNA及蛋白水平均降低(均为P<0.05)。与HG组比较,HG+PHN-L组、HG+PHN-M组、HG+PHN-H组细胞凋亡率、MDA水平、Bax蛋白水平均降低,且HG+PHN-H组<HG+PHN-M组<HG+PHN-L组(均为P<0.05),SOD、GSH-Px、Bcl-2蛋白、CTRP3 mRNA及蛋白水平均升高,且HG+PHN-H组>HG+PHN-M组>HG+PHN-L组(均为P<0.05)。与HG+pcDNA组比较,HG+pcDNA-CTRP3组细胞凋亡率、MDA水平、Bax蛋白水平均降低,SOD、GSH-Px、CTRP3蛋白、Bcl-2蛋白水平均升高(均为P<0.05)。与HG+PHN-H+sh-NC组比较,HG+PHN-H+sh-CTRP3组细胞凋亡率、MDA水平、Bax蛋白水平均升高,SOD水平、GSH-Px水平、CTRP3蛋白、Bcl-2蛋白水平均降低(均为P<0.05)。结论PHN可减轻HG诱导的人视网膜血管内皮细胞损伤,其作用机制可能与上调CTRP3表达有关。 展开更多
关键词 连翘苷 高糖 人视网膜血管内皮细胞 补体C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白3 氧化应激 细胞凋亡
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miR-519d-3p靶向HIF-1α抑制高糖诱导的人视网膜微血管内皮细胞功能障碍及血管生成 被引量:3
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作者 蔡晖 宋颖 +1 位作者 石华宗 杨豫湘 《国际眼科杂志》 CAS 北大核心 2023年第7期1087-1092,共6页
目的:明确miR-519d-3p对高糖诱导的人视网膜微血管内皮细胞(HRMEC)功能障碍与血管生成的影响,并阐明其对低氧诱导因子-1α(HIF-1α)的调控机制。方法:通过5、30mmol/L葡萄糖分别诱导HRMEC建立正常(NG)和高糖(HG)细胞模型。将HRMEC分为... 目的:明确miR-519d-3p对高糖诱导的人视网膜微血管内皮细胞(HRMEC)功能障碍与血管生成的影响,并阐明其对低氧诱导因子-1α(HIF-1α)的调控机制。方法:通过5、30mmol/L葡萄糖分别诱导HRMEC建立正常(NG)和高糖(HG)细胞模型。将HRMEC分为对照组(HG细胞模型转染阴性对照模拟物)、甘露醇组(对照组加入25mmol/L甘露醇)、miR-519d-3p过表达组(HG细胞模型转染miR-519d-3p模拟物)、miR-519d-3p联合HIF-1α过表达组(HG细胞模型共转染miR-519d-3p模拟物和HIF-1α过表达载体)。实时荧光定量PCR法检测各组miR-519d-3p的表达情况。Western blotting法检测各组HIF-1α蛋白的表达情况。荧光素酶报告基因实验检测miR-519d-3p和HIF-1α的结合位点情况。CCK-8法检测各组细胞增殖情况。Hoechst 33342染色法检测各组细胞凋亡情况。ELISA法检测各组细胞外液炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6蛋白的表达情况。小管形成实验检测各组新生毛细血管管腔样结构形成情况。结果:与NG相比,HG细胞模型中miR-519d-3p表达显著减少,而HIF-1α蛋白表达显著增加(均P<0.01)。与对照组比较,miR-519d-3p过表达组中HIF-1α蛋白表达显著降低(P<0.01)。miR-519d-3p中“CGUGAAA”序列可以与HIF-1α3'-非编码区(3'-UTR)中“GCACUUU”序列特异性结合。与对照组比较,miR-519d-3p过表达组细胞24、48、72h吸光度值均显著增加,细胞凋亡率显著减少,细胞外液TNF-α、IL-1β、IL-6浓度均显著减少,新生毛细血管管腔样结构数量显著减少(均P<0.01)。与miR-519d-3p过表达组比较,miR-519d-3p联合HIF-1α过表达组细胞24、48、72h吸光度值均显著减少,细胞凋亡率显著增加,细胞外液TNF-α、IL-1β、IL-6浓度均显著增加,新生毛细血管管腔样结构数量显著增加(均P<0.01)。对照组和甘露醇组中上述各指标比较无差异(均P>0.05)。结论:高糖诱导HRMEC模型中miR-519d-3p表达下调,而HIF-1α蛋白表达上调。HIF-1α是miR-519d-3p的靶基因,miR-519d-3p靶向HIF-1α增加细胞增殖并降低细胞凋亡和炎症反应,从而减轻高糖诱导的HRMEC功能障碍并抑制血管生成。 展开更多
关键词 miR-519d-3p 高糖 人视网膜微血管内皮细胞 功能障碍 低氧诱导因子-1α(HIF-1α)
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胃饥饿素通过抑制内质网应激减少高糖诱导的视网膜血管内皮细胞凋亡
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作者 李蓉 姚国敏 +1 位作者 张敏 王小娣 《山西医科大学学报》 CAS 2023年第12期1632-1637,共6页
目的研究胃饥饿素(ghrelin)对内质网应激及高浓度葡萄糖导致的人视网膜血管内皮细胞(HRMECs)凋亡的影响。方法将HRMECs细胞分为对照组、高糖组、高糖+ghrelin组和高糖+ghrelin+衣霉素(内质网应激诱导剂)组。对照组细胞不加干预,高糖组采... 目的研究胃饥饿素(ghrelin)对内质网应激及高浓度葡萄糖导致的人视网膜血管内皮细胞(HRMECs)凋亡的影响。方法将HRMECs细胞分为对照组、高糖组、高糖+ghrelin组和高糖+ghrelin+衣霉素(内质网应激诱导剂)组。对照组细胞不加干预,高糖组采用30 mmol/L葡萄糖构建细胞损伤模型,高糖+ghrelin组采用30 mmol/L葡萄糖和10 nmol/L ghrelin处理细胞,高糖+ghrelin+衣霉素组采用30 mmol/L葡萄糖、10 nmol/L ghrelin和10μmol/L衣霉素联合处理细胞,所有细胞均培养48 h。采用AnnexinⅤ-FITC/7-AAD试剂盒检测4组细胞凋亡率,蛋白质印迹法检测对照组、高糖组和高糖+ghrelin组细胞凋亡蛋白Bax、Bcl-2及内质网应激蛋白GPR78、IRE1α的表达。结果与对照组比较,高糖组HRMECs细胞凋亡率明显升高(P<0.05);与高糖组相比,高糖+ghrelin组细胞凋亡率明显降低(P<0.05)。与对照组比较,高糖组细胞Bax、GPR78及p-IRE1α的蛋白表达明显增加(均P<0.05),Bcl-2的表达明显降低(P<0.05);与高糖组相比,高糖+ghrelin组细胞Bax、GPR78及p-IRE1α的蛋白表达均明显降低(均P<0.05),Bcl-2的表达明显升高(P<0.05)。与高糖+ghrelin组相比,高糖+ghrelin+衣霉素组的细胞凋亡率明显升高(P<0.05)。结论Ghrelin可以减少高糖诱导的视网膜血管内皮细胞凋亡,其机制可能与ghrelin抑制激活的内质网应激有关。 展开更多
关键词 胃饥饿素 视网膜血管内皮细胞 细胞凋亡 高糖 内质网应激
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miR-1-3p调控ANXA2表达对高糖诱导的视网膜微血管内皮细胞新生血管生成的影响
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作者 巨朝娟 许寅聪 +3 位作者 李康宁 石笑楠 熊朝晖 戴明明 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2023年第12期952-957,共6页
目的 探讨微小RNA-1-3p(miR-1-3p)/膜联蛋白A2(ANXA2)分子轴在高糖诱导的人视网膜微血管内皮细胞(HRMECs)新生血管生成过程中的作用机制。方法 体外培养HRMECs并采用高糖(HG)处理细胞建立细胞损伤模型。HRMECs分组处理:Con组(含体积分数... 目的 探讨微小RNA-1-3p(miR-1-3p)/膜联蛋白A2(ANXA2)分子轴在高糖诱导的人视网膜微血管内皮细胞(HRMECs)新生血管生成过程中的作用机制。方法 体外培养HRMECs并采用高糖(HG)处理细胞建立细胞损伤模型。HRMECs分组处理:Con组(含体积分数10%胎牛血清的DMEM培养)、HG组(25 mmol·L^(-1)D-葡萄糖培养)、HG+miR-NC组(转染miR-NC)、HG+miR-1-3p组(转染miR-1-3p mimics)、HG+sh-NC组(转染sh-NC)、HG+sh-ANXA2组(转染sh-ANXA2)、HG+miR-1-3p+pcDNA组(转染miR-1-3p mimics+pcDNA)、HG+miR-1-3p+pcDNA-ANXA2组(转染miR-1-3p mimics+pcDNA-ANXA2)。转染48 h后收集细胞,采用25 mmol·L^(-1)的D-葡萄糖培养基培养HRMECs 24 h。采用MTT、Transwell小室实验分别检测细胞活力、迁移细胞数。管腔形成实验检测管腔形成数。双荧光素酶报告实验检测miR-1-3p与ANXA2的靶向关系。Western blot检测VEGF、MMP-2蛋白水平。结果 与Con组比较,HG组miR-1-3p表达水平降低,ANXA2 mRNA及蛋白水平均升高,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。与Con组比较,HG组细胞活力升高,迁移细胞数、管腔形成数增多,VEGF、MMP-2蛋白水平升高,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。与HG+miR-NC组比较,HG+miR-1-3p组细胞活力降低,迁移细胞数、管腔形成数减少,VEGF、MMP-2蛋白水平降低,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。与HG+sh-NC组比较,HG+sh-ANXA2组细胞活力降低,迁移细胞数、管腔形成数减少,VEGF、MMP-2蛋白水平降低,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。与HG+miR-1-3p+pcDNA组比较,HG+miR-1-3p+pcDNA-ANXA2组细胞活力升高,迁移细胞数、管腔形成数增多,VEGF、MMP-2蛋白水平升高,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论 miR-1-3p过表达可通过靶向调控ANXA2表达抑制HRMECs的增殖、迁移及新生血管生成。 展开更多
关键词 微小RNA-1-3p 膜联蛋白A2 高糖 视网膜微血管内皮细胞 新生血管 细胞增殖 细胞迁移
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补阳还五汤对高糖培养的人视网膜微血管内皮细胞自噬和血管形成的干预作用 被引量:1
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作者 陈凯铭 陈子扬 +3 位作者 石颖 胡艳红 胡俊 陈胜 《中国中医眼科杂志》 2023年第2期105-110,共6页
目的探究补阳还五汤(BYHW)对高糖培养的人视网膜微血管内皮细胞(HRCECs)自噬影响和血管形成的干预作用。方法将HRCECs随机分为对照组(CG)、模型组(MG)、BYHW组、自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)组。除CG组外,其余各组细胞于25 g/L葡萄糖... 目的探究补阳还五汤(BYHW)对高糖培养的人视网膜微血管内皮细胞(HRCECs)自噬影响和血管形成的干预作用。方法将HRCECs随机分为对照组(CG)、模型组(MG)、BYHW组、自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)组。除CG组外,其余各组细胞于25 g/L葡萄糖环境中培养建立高糖损伤模型,BYHW组在MG组的基础上加入5 mg/mL的BYHW水提液,3-MA组加入40μM的3-MA,各组细胞均孵育24 h。采用血管形成实验检测HRCECs血管生成情况,划痕实验检测细胞迁移能力,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western Blot法分别检测细胞中微管相关蛋白1A/1B-轻链3(LC3)、苄氯素1(Becline-1)的mRNA和蛋白表达水平。结果(1)血管形成:与CG组比较,MG组血管形成数升高(t=7.747,P=0.000);与MG组比较,BYHW、3-MA组血管形成数降低(t_(BYHW)=-6.303,P=0.000;t_(3-MA)=-4.596,P=0.002),差异均有统计学意义。而BYHW、3-MA组血管形成数比较,差异无统计学意义(P>0.05)。(2)迁移能力:与CG组比较,MG组HRCECs迁移率升高(t=14.035,P=0.000);与MG组比较,BYHW、3-MA组HRCECs迁移率降低(t_(BYHW)=-9.247,t_(3-MA)=-5.358,均P=0.000);与BYHW组比较,3-MA组HRCECs迁移率升高(t=-3.890,P=0.003),差异均有统计学意义。(3)自噬:与CG组比较,MG组LC3 mRNA、蛋白表达水平升高(t_(mRNA)=8.249,t_(蛋白)=14.890,均P=0.000),Beclin-1蛋白表达水平升高(t=7.114,P=0.000);与MG组比较,BYHW、3-MA组的LC3 mRNA和蛋白表达水平均降低(BYHW:t_(mRNA)=-9.298,t_(蛋白)=-11.727,均P=0.000。3-MA:t_(mRNA)=-3.718,P=0.006;t_(蛋白)=-7.511,P=0.000),BYHW组的Beclin-1蛋白表达水平下降(t=-4.115,P=0.003);与BYHW组比较,3-MA组HRCECs的Beclin-1蛋白表达水平升高(t=-2.448,P=0.038),差异均有统计学意义。结论BYHW延缓非增殖期糖尿病视网膜病的发展可能与其调控HRCECs自噬减少血管形成和迁移有关。 展开更多
关键词 补阳还五汤 高糖 人视网膜微血管内皮细胞 自噬 血管形成 糖尿病视网膜病变
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二甲双胍对高糖诱导的RF/6A细胞增殖、迁移和血管形成的影响及其可能机制 被引量:2
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作者 孟婷宇 范晶 +2 位作者 郑柳 杨彬彬 丁芝祥 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2023年第5期346-351,共6页
目的研究二甲双胍(MET)对高糖诱导的恒河猴脉络膜⁃视网膜内皮细胞RF/6A增殖、迁移和血管形成的影响,并初步探讨其作用机制。方法RF/6A细胞随机分为5组:NC组、HG组、HG+15 mmol·L^(-1) MET组、HG+30 mmol·L^(-1) MET组、HG+45 ... 目的研究二甲双胍(MET)对高糖诱导的恒河猴脉络膜⁃视网膜内皮细胞RF/6A增殖、迁移和血管形成的影响,并初步探讨其作用机制。方法RF/6A细胞随机分为5组:NC组、HG组、HG+15 mmol·L^(-1) MET组、HG+30 mmol·L^(-1) MET组、HG+45 mmol·L^(-1) MET组,CCK⁃8法检测细胞增殖情况。将RF/6A细胞随机分为4组:NC组和NC+15 mmol·L^(-1) MET组、NC+30 mmol·L^(-1) MET组、NC+45 mmol·L^(-1) MET组,CCK⁃8法检测MET的细胞毒性。将RF/6A细胞随机分为3组:NC组、HG组和HG+15 mmol·L^(-1) MET组,细胞划痕法和Transwell法检测细胞迁移,Matrigengel法检测细胞血管形成,RT⁃PCR、Western blot检测Hippo信号通路的核心成分YAP、TEAD1的mRNA及蛋白表达。结果CCK⁃8法检测结果显示,与NC组比较,HG组RF/6A细胞的增殖活性升高(P<0.001);与HG组比较,HG+15 mmol·L^(-1) MET组、HG+30 mmol·L^(-1) MET组和HG+45 mmol·L^(-1) MET组RF/6A细胞的增殖活性均降低(均为P<0.001)。与NC组比较,NC+15 mmol·L^(-1) MET组RF/6A细胞增殖活性无变化(P=0.2273),因此选择15 mmol·L^(-1) MET进行后续实验。细胞划痕法和Transwell法检测结果显示,与NC组比较,HG组RF/6A细胞的迁移率升高、迁移个数增加(均为P<0.01);与HG组比较,HG+15 mmol·L^(-1) MET组RF/6A细胞的迁移率降低、迁移个数减少(均为P<0.01)。Matrigengel法检测结果显示,与NC组比较,HG组RF/6A细胞的血管相对总长度增加(P<0.05);与HG组比较,HG+15 mmol·L^(-1) MET组RF/6A细胞的血管相对总长度减少(P<0.01)。RT⁃PCR检测结果显示,与NC组比较,HG组RF/6A细胞的YAP和TEAD1 mRNA相对表达量均增加(均为P<0.05);与HG组比较,HG+15 mmol·L^(-1) MET组RF/6A细胞的YAP和TEAD1 mRNA相对表达量均减少(均为P<0.05)。Western blot检测结果显示,与NC组比较,HG组RF/6A细胞的YAP和TEAD1蛋白相对表达量均增加(均为P<0.05);与HG组比较,HG+15 mmol·L^(-1) MET组RF/6A细胞的YAP和TEAD1蛋白相对表达量均减少(均为P<0.05)。结论MET可抑制高糖诱导的RF/6A细胞增殖、迁移和血管形成,下调YAP、TEAD1的mRNA及蛋白表达,推测其作用机制与Hippo信号通路有关。 展开更多
关键词 糖尿病视网膜病变 二甲双胍 RF/6A细胞 高糖 细胞增殖 细胞迁移 血管形成 Hippo信号通路
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S1PR1激活PI3K/Akt保护高糖环境下视网膜血管内皮细胞的生物学功能 被引量:1
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作者 范玲玲 刘伦 《临床眼科杂志》 2023年第6期555-560,共6页
目的研究1⁃磷酸鞘氨醇受体1(S1PR1)对高糖环境下人视网膜血管内皮细胞(HREC)的迁移、成管能力的影响,并进一步探讨其作用机制。方法将HREC随机分为空白病毒组、S1PR1过表达组、高糖+空白病毒组和高糖+S1PR1过表达组。采用细胞划痕及Tran... 目的研究1⁃磷酸鞘氨醇受体1(S1PR1)对高糖环境下人视网膜血管内皮细胞(HREC)的迁移、成管能力的影响,并进一步探讨其作用机制。方法将HREC随机分为空白病毒组、S1PR1过表达组、高糖+空白病毒组和高糖+S1PR1过表达组。采用细胞划痕及Transwell实验检测细胞迁移能力,成管实验检测细胞成管能力,并采用Western blot检测PI3K/Akt通路相关蛋白分子表达情况。结果与空白病毒组相比,高糖+空白病毒组的伤口愈合百分比、细胞迁移数量、成管分支点数及小管总长度均显著减少(均P<0.01);而与高糖+空白病毒组相比,高糖+S1PR1过表达组均显著增多(均P<0.01)。各组间PI3K、Akt总蛋白表达差异均无统计学意义均无显著差异(均P>0.05),而p⁃PI3K、p⁃Akt蛋白表达差异均有统计学意义均具有显著性差异(均P<0.01);与空白病毒组相比,高糖+空白病毒组的p⁃PI3K、p⁃Akt均显著减少(均P<0.01);而与高糖+空白病毒组相比,高糖+S1PR1过表达组均显著增多(均P<0.01)。结论S1PR1通过激活PI3K/Akt通路,保护高糖环境下HREC的迁移及成管能力。 展开更多
关键词 1⁃磷酸鞘氨醇受体 视网膜血管内皮细胞 迁移 成管 高糖 PI3K/AKT
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基于正交实验设计补阳还五汤水提液对高糖培养视网膜微血管内皮细胞活性影响
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作者 曹俊昌 石颖 +2 位作者 胡艳红 胡俊 陈胜 《福建中医药》 2023年第11期55-58,共4页
目的基于正交实验筛选高糖损伤模型的最佳葡萄糖干预浓度、补阳还五汤水提液(BYHWT)保护高糖诱导视网膜微血管内皮细胞(HRCECs)损伤的最佳浓度及最佳作用时间。方法CCK8法检测4.5、5、10、15、20、25 mg/mL葡萄糖浓度和0、5、10、15.625... 目的基于正交实验筛选高糖损伤模型的最佳葡萄糖干预浓度、补阳还五汤水提液(BYHWT)保护高糖诱导视网膜微血管内皮细胞(HRCECs)损伤的最佳浓度及最佳作用时间。方法CCK8法检测4.5、5、10、15、20、25 mg/mL葡萄糖浓度和0、5、10、15.625、31.25、62.5、125、250 mg/mL BYHWT浓度对HRCECs细胞增殖的影响。采用L9(34)正交实验设计以葡萄糖浓度、BYHWT浓度及孵育时间为影响因素,以OD值为评价指标,优选出高糖损伤模型的最佳葡萄糖干预浓度、BYHWT防护高糖损伤HRCECs的最佳浓度及最佳作用时间。根据正交实验优选出的葡萄糖浓度和BYHWT浓度,将HRCECs细胞分为正常组、模型组(优选葡萄糖浓度)与干预组(优选葡萄糖浓度+优选BYHWT浓度),培养24、48、72 h,每日换液1次,CCK8法测定3组细胞不同时间的OD值。结果①与4.5 mg/mL组比较,25 mg/mL葡萄糖浓度干预HRCECs细胞24、48、72 h后OD值均明显降低(P<0.05),提示该浓度可引起细胞损伤。与0 mg/mL组比较,5 mg/mL BYHWT干预24 h,10、15.625 mg/mL BYHWT干预48、72 h后OD值均明显提高(P<0.05),提示该浓度可促进增殖。②筛选正交实验可知,影响细胞增殖活性的主次因素为孵育时间>葡萄糖浓度>BYHWT浓度,选择25 mg/mL葡萄糖浓度建立高糖损伤模型,选择5 mg/mL BYHWT浓度干预细胞,观察细胞增殖活性,筛选干预时间。③与正常组比较,模型组干预24、48、72 h后OD值明显降低(P<0.05);干预组干预24、48 h后OD值明显升高(P<0.05),干预72 h后明显降低(P<0.05)。与模型组比较,干预组干预24、48、72 h后OD值明显升高(P<0.05)。结论25 mg/mL葡萄糖培养的HRCECs细胞可以作为高糖损伤模型,5 mg/mL BYHWT干预24 h可以用于研究其对高糖诱导HRCECs损伤的保护作用。 展开更多
关键词 补阳还五汤 高糖 视网膜微血管内皮细胞 正交实验设计
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黄芪多糖调控TXNIP/NLRP3炎症小体对高糖诱导的人视网膜内皮细胞凋亡的作用机制
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作者 陶雯璇 李君卿 +1 位作者 张元坤 张京红 《生命科学仪器》 2023年第6期65-68,共4页
目的探究黄芪多糖调控TXNIP/NLRP3炎症小体对高糖诱导的人视网膜内皮细胞凋亡的作用机制。方法将hRECs细胞随机分为Control组、HG组、APS组和APS+pcDNA3.1-TXNIP组。采用CCK-8和流式细胞仪检测细胞存活率和凋亡率;DCFH-DA荧光探针检测... 目的探究黄芪多糖调控TXNIP/NLRP3炎症小体对高糖诱导的人视网膜内皮细胞凋亡的作用机制。方法将hRECs细胞随机分为Control组、HG组、APS组和APS+pcDNA3.1-TXNIP组。采用CCK-8和流式细胞仪检测细胞存活率和凋亡率;DCFH-DA荧光探针检测活性氧(ROS)水平;检测细胞中氧化应激和炎症因子水平;蛋白质印迹法检测细胞中TXNIP、NLRP3、IL-1β和caspase-1蛋白表达。结果和Control组相比,HG组细胞存活率、SOD活性和GSH-Px含量明显降低,细胞凋亡率、ROS相对荧光强度、MDA含量、IL-1β和IL-18含量及细胞中TXNIP、NLRP3、IL-1β、caspase-1蛋白表达明显增加(P<0.05);和HG组相比,APS组细胞存活率、SOD活性和GSH-Px含量明显增加,细胞凋亡率、ROS相对荧光强度、MDA含量、IL-1β和IL-18含量及细胞中TXNIP、NLRP3、IL-1β、caspase-1蛋白表达明显降低(P<0.05);和APS组相比,APS+pcDNA3.1-TXNIP组细胞存活率、SOD活性和GSH-Px含量明显降低,细胞凋亡率、ROS相对荧光强度、MDA含量、IL-1β和IL-18含量及细胞中TXNIP、NLRP3、IL-1β、caspase-1蛋白表达明显增加(P<0.05)。结论黄芪多糖可抑制高糖诱导的视网膜内皮细胞凋亡、炎症反应和氧化应激损伤,其作用机制可能和抑制TXNIP/NLRP3通路激活有关。 展开更多
关键词 黄芪多糖 高糖诱导的视网膜内皮细胞 凋亡 TXNIP/NLRP3通路
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维生素B_1对高糖所致牛视网膜微血管内皮细胞损伤的保护作用 被引量:5
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作者 王大江 方伯言 +1 位作者 刘学政 黄一飞 《国际眼科杂志》 CAS 2005年第1期77-79,共3页
目的:研究维生素B1(thiamine)通过改变糖酵解和细胞复制对高浓度葡萄糖所致体外培养的牛视网膜微血管内皮细胞(BREC)损伤的保护作用,探讨维生素B1的保护作用。方法:取2~3代体外培养的牛视网膜微血管内皮细胞,将培养板上的细胞随机分为4... 目的:研究维生素B1(thiamine)通过改变糖酵解和细胞复制对高浓度葡萄糖所致体外培养的牛视网膜微血管内皮细胞(BREC)损伤的保护作用,探讨维生素B1的保护作用。方法:取2~3代体外培养的牛视网膜微血管内皮细胞,将培养板上的细胞随机分为4组,DMEM培养基含不同葡萄糖浓度(5.5,20.0mmol/L),同时分别加与不加维生素B1(150μmol)。7d后检测细胞活力和上层培养液中的LDH的含量;3H-TdR掺入法测定DNA合成以及流式细胞仪测定牛视网膜微血管内皮细胞细胞周期,观察高糖对牛视网膜微血管内皮细胞的损伤作用并观察维生素B1对其的保护作用。结果:与正常组(葡萄糖5.5mmol/L)相比,高糖组(葡萄糖20.0mmol/L)的细胞活力明显降低,培养液中的LDH含量显著增加,细胞DNA合成减少,细胞凋亡率增加。而加入维生素B1(150μmol)能够显著降低细胞的损伤程度。结论:高浓度葡萄糖对牛视网膜微血管内皮细胞有显著的损伤作用,维生素B1能减轻高糖对内皮细胞的损伤,其保护作用可能是通过改变糖酵解和细胞复制来实现的。 展开更多
关键词 微血管内皮细胞 维生素B1 视网膜 保护作用 高糖 损伤 高浓度葡萄糖 糖酵解 结论 培养
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脂联素对高糖条件下视网膜血管内皮细胞增殖、迁移和管腔形成的作用 被引量:4
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作者 李蓉 姚国敏 +1 位作者 王小娣 姚杨 《国际眼科杂志》 CAS 北大核心 2019年第3期363-367,共5页
目的:观察脂联素(APN)对高糖培养条件下恒河猴脉络膜视网膜血管内皮细胞(RF/6A细胞)增殖、迁移和管腔形成的影响。方法:将体外培养的RF/6A细胞随机分为空白对照组(正常培养基培养)、甘露醇对照组(含20mmol/L甘露醇的培养基培养)、高糖组... 目的:观察脂联素(APN)对高糖培养条件下恒河猴脉络膜视网膜血管内皮细胞(RF/6A细胞)增殖、迁移和管腔形成的影响。方法:将体外培养的RF/6A细胞随机分为空白对照组(正常培养基培养)、甘露醇对照组(含20mmol/L甘露醇的培养基培养)、高糖组(含25mmol/L D-葡萄糖的培养基培养)和高糖+APN组(含25mmol/L D-葡萄糖+10μg/mL APN的培养基培养)。分别采用CCK-8法检测细胞增殖,Transwell小室检测细胞迁移,基质胶(Matrigel)法检测细胞管腔形成能力。结果:空白对照组与甘露醇对照组细胞增殖率(100.00%±0.00%vs 99.09%±0.46%)、迁移数(121.60±6.02个vs 119.60±9.39个)及管腔形成数(12.11±0.84个vs 12.22±0.96个)均无差异(P>0.05)。高糖组细胞增殖率(71.42%±2.29%)明显低于空白对照组和甘露醇对照组,细胞迁移数(144.20±9.65个)和管腔形成数(16.00±2.90个)均明显高于空白对照组和甘露醇对照组(P<0.05)。高糖+APN组细胞增殖率(90.87%±1.68%)明显低于空白对照组和甘露醇对照组,明显高于高糖组;细胞迁移数(73.00±6.04个)和管腔形成数(7.89±0.38个)均明显低于空白对照组、甘露醇对照组及高糖组(P<0.05)。结论:APN可以促进高糖条件下RF/6A细胞存活及增殖,抑制细胞迁移和管腔形成,提示APN对高糖导致的RF/6A细胞损伤具有一定的保护作用,抑制病理刺激条件下的血管生成。 展开更多
关键词 脂联素 高糖 视网膜血管内皮细胞 血管生成
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G补缀FHA域血管生成因子1在糖尿病视网膜新生血管形成中的作用 被引量:3
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作者 李蓉 姚国敏 +5 位作者 闫红林 王莉 蔡天志 袁博博 巨伟 王丽娜 《国际眼科杂志》 CAS 北大核心 2020年第9期1487-1492,共6页
目的:观察G补缀FHA域血管生成因子1(AGGF1)在糖尿病视网膜组织及高糖条件下视网膜血管内皮细胞中的表达,以及AGGF1对视网膜血管内皮细胞增殖、迁移和管腔形成的影响。方法:将C57BL/6J小鼠随机分为对照组和糖尿病视网膜病变(DR)模型组,... 目的:观察G补缀FHA域血管生成因子1(AGGF1)在糖尿病视网膜组织及高糖条件下视网膜血管内皮细胞中的表达,以及AGGF1对视网膜血管内皮细胞增殖、迁移和管腔形成的影响。方法:将C57BL/6J小鼠随机分为对照组和糖尿病视网膜病变(DR)模型组,采用免疫组化法检测视网膜组织中AGGF1的蛋白表达。将体外培养的恒河猴脉络膜视网膜血管内皮细胞(RF/6A细胞)随机分为对照组(低糖环境培养)和高糖组(培养基中加入25mmol/L D-葡萄糖),采用免疫荧光法检测细胞中AGGF1的蛋白表达。然后将RF/6A细胞分为对照组和AGGF1处理组,分别采用CCK-8法、Transwell法和Matrigel检测细胞增殖、迁移及管腔形成。结果:AGGF1蛋白在视网膜各层均有表达,在血管内皮细胞中也有明显表达,AGGF1在DR组视网膜中的表达(0.17±0.05)明显强于对照组(0.07±0.02)(P<0.05)。AGGF1蛋白在高糖组和对照组RF/6A细胞中均有表达,AGGF1在高糖下RF/6A细胞中的表达(0.63±0.10)明显强于对照组(0.40±0.03)(P<0.05)。处理12h,AGGF1组细胞增殖率(114.88%±0.84%)明显高于对照组(100.00%±2.17%)(P<0.05);处理24h,AGGF1组细胞增殖率(157.35%±1.89%)明显高于对照组(142.77%±0.50%)(P<0.05);处理48h,AGGF1组细胞增殖率(185.39%±1.90%)明显高于对照组(160.17%±1.33%)(P<0.05)。处理12h,AGGF1组细胞迁移数(127.00±7.00个)明显多于对照组(90.33±6.66个)(P<0.05)。处理12h,AGGF1组细胞管腔数(33.67±1.15个)明显多于对照组(15.33±3.51个)(P<0.05);AGGF1组细胞分支总长度(8226.33±288.55μm)明显多于对照组(6463.33±938.01μm)(P<0.05)。结论:糖尿病视网膜组织和高糖诱导的视网膜血管内皮细胞表达AGGF1蛋白明显增多,AGGF1可促进视网膜血管内皮细胞增殖、迁移和管腔形成,提示AGGF1可能参与了DR的视网膜新生血管形成。 展开更多
关键词 G补缀FHA域血管生成因子1 糖尿病视网膜病变 高糖 视网膜血管内皮细胞 血管生成
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自噬在高糖条件下视网膜色素上皮细胞表达血管内皮生长因子促进RF/6A细胞血管生成中的作用 被引量:6
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作者 李蓉 姚杨 +3 位作者 杜军辉 姚国敏 王小娣 张进 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2019年第8期714-718,共5页
目的研究高糖条件下诱导的人视网膜色素上皮细胞株(ARPE-19)自噬对其表达血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF),及恒河猴脉络膜视网膜血管内皮细胞(RF/6A)迁移和管腔形成的影响。方法根据不同干预将ARPE-19细胞... 目的研究高糖条件下诱导的人视网膜色素上皮细胞株(ARPE-19)自噬对其表达血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF),及恒河猴脉络膜视网膜血管内皮细胞(RF/6A)迁移和管腔形成的影响。方法根据不同干预将ARPE-19细胞随机分为对照组、高糖组及3-甲基腺嘌呤(3-MA)+高糖组。对照组细胞在无糖DMEM培养基中常规培养24 h,高糖组细胞在DMEM培养基中加入30 mmol·L^-1葡萄糖溶液处理24 h,3-MA+高糖组细胞先用10 mmol·L^-1 3-MA处理24 h,然后更换培养基再加入30 mmol·L^-1葡萄糖溶液处理24 h。Western blot法检测细胞自噬标志性蛋白微管相关蛋白1轻链3(microtubule-related protein 1 light chain 3,LC3)II型和I型的比值(LC3-II/LC3-I)、Beclin-1及细胞中自噬相关基因3(autophagy-related gene 3,Atg3)的蛋白表达。ELISA法检测ARPE-19细胞上清液中VEGF的蛋白表达。比较三组ARPE-19细胞LC3-II/LC3-I、Beclin-1、Atg3及VEGF的蛋白表达量。然后将以上三组ARPE-19细胞上清液分别加入RF/6A细胞培养基中,将RF/6A细胞也按以上方法分组,分别采用Transwell法及Matrigel胶法检测并比较三组RF/6A细胞迁移数及细胞管腔形成数。结果对照组、高糖组和3-MA+高糖组ARPE-19细胞中LC3-II/LC3-I比值分别为0.405±0.095、0.932±0.024和0.635±0.048;Beclin-1蛋白相对表达量分别为0.205±0.035、0.590±0.120和0.425±0.082;Atg3蛋白相对表达量分别为0.277±0.035、0.539±0.071和0.389±0.019。ARPE-19细胞上清液中VEGF的蛋白表达量三组分别为(44.03±9.08)ng·L^-1、(205.70±17.90)ng·L^-1和(112.52±21.06)ng·L^-1;RF/6A细胞迁移数三组分别为(125.60±6.35)个、(153.60±19.20)个和(67.40±7.95)个;细胞管腔形成数三组分别为(12.22±0.84)个、(18.44±1.68)个和(5.44±0.51)个;整体比较差异均有统计学意义(均为P<0.01)。与对照组相比,高糖组ARPE-19细胞的LC3-II/LC3-I比值、Beclin-1及Atg3蛋白相对表达量均明显增加(均为P<0.01),VEGF表达水平均明显升高(P<0.01),RF/6A细胞迁移数和管腔形成数均明显增加(均为P<0.01),3-MA+高糖组ARPE-19细胞中LC3-II/I比值、Beclin-1和Atg3蛋白相对表达量、VEGF表达量、RF/6A细胞迁移数和细胞管腔形成数均较高糖组明显降低(均为P<0.01)。结论高糖激活ARPE-19细胞自噬,进而上调VEGF的表达并促进RF/6A细胞迁移和管腔形成,自噬抑制剂3-MA可抑制ARPE-19细胞自噬,并下调VEGF的表达从而抑制RF/6A细胞的血管形成能力。 展开更多
关键词 自噬 血管生成 高糖 血管内皮生长因子 视网膜新生血管 糖尿病视网膜病变 细胞培养
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脂联素对高糖条件下RF/6A细胞的保护作用 被引量:3
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作者 李蓉 杜军辉 +2 位作者 姚国敏 王小娣 姚杨 《山西医科大学学报》 CAS 2019年第2期169-174,共6页
目的观察脂联素(adiponectin,APN)对高糖培养条件下恒河猴脉络膜视网膜血管内皮细胞(monkey choroid-retinalendothelial cell line,RF/6A)增殖及凋亡的影响。方法将体外培养的生长良好的RF/6A细胞随机分为空白对照组(PBS)、甘露醇对照... 目的观察脂联素(adiponectin,APN)对高糖培养条件下恒河猴脉络膜视网膜血管内皮细胞(monkey choroid-retinalendothelial cell line,RF/6A)增殖及凋亡的影响。方法将体外培养的生长良好的RF/6A细胞随机分为空白对照组(PBS)、甘露醇对照组(25 mmol/L甘露醇)、高糖组(25 mmol/L D-葡萄糖)、高糖+APN组(25 mmol/L D-葡萄糖+10μg/mlAPN),各组加入不同的药物处理48 h。分别采用CCK-8法检测细胞增殖,Western blot检测细胞凋亡关键蛋白Bax、Bcl-2的表达,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果高糖组(71. 42%±2. 29%)和高糖+APN组(90. 87%±1. 68%)细胞增殖率低于空白对照组(100%±0%)和甘露醇对照组(99. 09%±0. 46%)(P <0. 001);与高糖组相比,高糖+APN组细胞增殖率明显升高(P <0. 001)。高糖组和高糖+APN组的RF/6A细胞Bax的相对表达量高于空白对照组和甘露醇对照组(P <0. 001)。高糖组和高糖+APN组细胞Bcl-2的相对表达量低于空白对照组和甘露醇对照组(P <0. 001)。与高糖组相比,高糖+APN组细胞Bax的表达明显降低,Bcl-2的表达明显升高(均P <0. 001)。高糖组及高糖+APN组细胞凋亡率均比空白对照组和甘露醇对照组增多(P <0. 001)。与高糖组相比,高糖+APN组细胞凋亡率明显减少(P <0. 001)。结论 APN处理可抑制高糖培养条件下的RF/6A细胞凋亡,促进细胞增殖,提示APN对视网膜血管内皮细胞具有一定的保护效应。 展开更多
关键词 脂联素 高糖培养 视网膜血管内皮细胞 凋亡 细胞增殖
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白藜芦醇对高糖环境下视网膜血管内皮细胞增殖及HMGB1乙酰化的影响 被引量:4
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作者 韦艳 李红 +1 位作者 苏晓庆 燕振国 《国际眼科杂志》 CAS 2015年第12期2049-2051,共3页
目的:探讨白藜芦醇对高糖环境下视网膜血管内皮细胞增殖的影响,并对其机制进行探讨。方法:人视网膜血管内皮细胞培养于低糖或高糖环境,通过MTT法测定各组细胞增殖,研究白藜芦醇对高糖培养的视网膜血管内皮细胞增殖的影响。通过Western-b... 目的:探讨白藜芦醇对高糖环境下视网膜血管内皮细胞增殖的影响,并对其机制进行探讨。方法:人视网膜血管内皮细胞培养于低糖或高糖环境,通过MTT法测定各组细胞增殖,研究白藜芦醇对高糖培养的视网膜血管内皮细胞增殖的影响。通过Western-blot及免疫共沉淀检测SIRT1表达及HMGB1的乙酰化。结果:白藜芦醇对高糖环境下的视网膜血管内皮细胞增殖具有显著抑制作用(P<0.05),且随白藜芦醇剂量增加,抑制作用增强。高糖抑制SIRT1表达,提高HMGB1的乙酰化,白藜芦醇能逆转上述改变。结论:白藜芦醇可能通过SIRT1-HMGB1通路抑制高糖环境下的视网膜血管内皮细胞增殖。 展开更多
关键词 白藜芦醇 视网膜血管内皮细胞 细胞增殖 SIRT1 HMGB1
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高糖对人视网膜微血管内皮细胞炎症因子和线粒体功能的影响及津力达联合通心络的保护作用 被引量:2
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作者 位庚 邢玉微 +4 位作者 申瑞霞 郭会敏 梁俊清 姚兵 郭志方 《中国老年学杂志》 CAS 北大核心 2018年第20期5008-5010,共3页
目的观察津力达联合通心络对高糖诱导人视网膜微血管内皮细胞(HRCECs)损伤的干预作用及其相关机制。方法用高糖培养基建立细胞损伤模型,将HRCECs分为正常对照组、模型组、津力达(JLD)组、通心络(TXL)组、津力达+通心络(JLD+TXL)组。分... 目的观察津力达联合通心络对高糖诱导人视网膜微血管内皮细胞(HRCECs)损伤的干预作用及其相关机制。方法用高糖培养基建立细胞损伤模型,将HRCECs分为正常对照组、模型组、津力达(JLD)组、通心络(TXL)组、津力达+通心络(JLD+TXL)组。分别检测各组细胞的生存活性、细胞上清液中白细胞介素(IL)-6和细胞间黏附分子(ICAM)-1含量、线粒体膜电位(MMP)、细胞内核转录因子(NF)-κB及细胞色素(Cyt) C蛋白表达水平的变化。结果与正常对照组比较,模型组细胞生存活性及MMP显著降低,细胞上清液中IL-6及ICAM-1含量显著升高,NF-κB、CytC蛋白表达显著上调(P<0. 01);与模型组比较,JLD组、TXL组及JLD+TXL组细胞生存活性显著升高,细胞上清液中IL-6、ICAM-1含量显著降低,NF-κB、CytC蛋白表达均显著上调(P <0. 01),TXL组及JLD+TXL组细胞MMP显著升高(P<0. 01);与JLD组比较,TXL组细胞上清液ICAM-1含量显著降低,细胞MMP显著升高,JLD+TXL组细胞生存活性及MMP显著升高,细胞上清液IL-6及ICAM-1含量显著降低,细胞NF-κB、CytC蛋白表达显著下调(P<0. 05,P<0. 01);与TXL组比较,JLD+TXL组细胞生存活性及MMP显著升高(P<0. 05)。结论津力达联合通心络能够干预高糖诱导的HRCECs损伤,其保护作用与减轻细胞炎症损伤及改善线粒体功能有关。 展开更多
关键词 津力达 通心络 人视网膜微血管内皮细胞 高糖 炎症 线粒体
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pEGFP/Ang-1转染BMSCs对高糖环境中RF/6A细胞的保护作用 被引量:2
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作者 侯阳 李福智 +1 位作者 左中夫 刘学政 《国际眼科杂志》 CAS 2014年第5期807-810,共4页
目的:观察血管生成素-1/重组质粒(pEGFP/Ang-1)转染的大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)对高浓度葡萄糖损伤猴脉络膜-视网膜内皮细胞(RF/6A)的保护作用。方法:以pEGFP/Ang-1转染BMSCs,倒置荧光显微镜下观察增强型绿色荧光蛋白的表达,再利用Tr... 目的:观察血管生成素-1/重组质粒(pEGFP/Ang-1)转染的大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)对高浓度葡萄糖损伤猴脉络膜-视网膜内皮细胞(RF/6A)的保护作用。方法:以pEGFP/Ang-1转染BMSCs,倒置荧光显微镜下观察增强型绿色荧光蛋白的表达,再利用Transwell模型,将转染的BMSCs与RF/6A共培养于高浓度葡萄糖培养基中。3d后MTT法检测RF/6A活力,Western blot检测磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated protein kinase B,P-PKB)的表达,从而探讨转染pEGFP/Ang-1的BMSCs对高浓度葡萄糖培养中的RF/6A的保护作用。结果:成功转染pEGFP/Ang-1的BMSCs可见增强型绿色荧光蛋白表达,与转染pEGFP/Ang-1的BMSCs共培养的RF/6A细胞活力及P-PKB的表达均高于未转染组(均P<0.01),与对照组无明显差别(均P>0.05)。结论:质粒pEGFP/Ang-1转染的BMSCs对高糖环境中的RF/6A具有保护作用,其机制可能与P-PKB表达上调有关。 展开更多
关键词 血管生成素-1 骨髓间充质干细胞 脉络膜-视网膜内皮细胞 高浓度葡萄糖
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迷迭香酸通过调控自噬抑制高糖诱导的HRMEC血管生成 被引量:4
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作者 李蓉 陈琳 +2 位作者 李亚 马雅玲 周凌霄 《中国中医眼科杂志》 2020年第10期691-698,共8页
目的探讨迷迭香酸(RA)对高糖培养条件下人视网膜微血管内皮细胞(HRMEC)血管生成的影响及与自噬的关系。方法将HRMEC随机分为正常对照组(NC组)、高糖组(HG组)、低浓度RA组(LC组)、中浓度RA组(MC组)、高浓度RA组(HC组)。NC组细胞,在低糖... 目的探讨迷迭香酸(RA)对高糖培养条件下人视网膜微血管内皮细胞(HRMEC)血管生成的影响及与自噬的关系。方法将HRMEC随机分为正常对照组(NC组)、高糖组(HG组)、低浓度RA组(LC组)、中浓度RA组(MC组)、高浓度RA组(HC组)。NC组细胞,在低糖培养基中培养;HG组细胞,在培养基中加入30 mmol/L D-葡萄糖培养;LC组细胞,在培养基中加入25μmol/L RA+30 mmol/L D-葡萄糖培养;MC组细胞,在培养基中加入50μmol/L RA+30 mmol/L D-葡萄糖培养;HC组细胞,在培养基中加入100μmol/L RA+30 mmol/L D-葡萄糖培养。培养48 h。分别采用MTT、Transwell及Matrigel法检测细胞增殖、迁移和管腔形成;电镜下各组细胞内的自噬泡形成情况;采用Western blot法检测各组细胞的自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)及Beclin-1的表达。结果(1)HRMEC增殖:与NC组比较,HG组细胞增殖率增加(t=-98.465,P=0.000);与HG组比较,LC组、MC组和HC组细胞增殖率依次降低(t LC=8.198,P=0.001;t MC=12.427,P=0.000;t HC=44.898,P=0.000),差异有统计学意义。(2)HRMEC迁移:与NC组比较,HG组细胞迁移数均增加(t=-22.958,P=0.000);与HG组比较,LC组、MC组、HC组细胞迁移数依次降低(t LC=17.504,t MC=22.463,t HC=20.330,均P=0.000),差异有统计学意义。(3)HRMEC管腔形成:与NC组比较,HG组细胞管腔形成数增加(t HG=-13.924,P=0.000);与HG组比较,LC组、MC组和HC组细胞管腔形成数依次降低(t LC=3.528,P=0.024;t MC=7.437,P=0.002;t HC=11.213,P=0.000),差异有统计学意义。(4)HRMEC自噬泡:与NC组相比,HG组细胞质内自噬泡增多,LC组、MC组和HC组自噬泡较HG组减少,且RA浓度越高,自噬泡越少。(5)自噬蛋白LC3表达:与NC组比较,HG组LC3-II/LC3-I比值增加(t=-86.500,P=0.000);与HG组比较,LC组、MC组和HC组的LC3-II/LC3-I比值依次降低(t LC=40.000,t MC=35.002,t HC=37.165,均P=0.000),差异均有统计学意义。(6)自噬蛋白Beclin-1表达:与NC组比较,HG组表达增加(t=-85.865,P=0.000);与HG组比较,LC组、MC组、HC组表达依次降低(t LC=13.762,t MC=23.200,t HC=50.051,均P=0.000),差异有统计学意义。结论RA可通过抑制细胞自噬从而抑制高糖诱导的视网膜血管内皮细胞增殖、迁移和管腔形成,且效应随着RA浓度的升高而增强。 展开更多
关键词 迷迭香酸 自噬 高糖 视网膜内皮细胞 血管生成
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姜黄素对高浓度葡萄糖诱导的RF/6A细胞损伤的抑制作用 被引量:2
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作者 左中夫 张强 刘学政 《国际眼科杂志》 CAS 2013年第2期262-264,共3页
目的:探讨姜黄素对高浓度葡萄糖培养的恒河猴脉络膜-视网膜内皮细胞(rhesus choroido-retinal endothelial cell,RF/6A)损伤的保护作用及机制。方法:RF/6A细胞分4组培养(n=6/组),对照组:DMEM培养基+100/L胎牛血清;高糖组:对照组培养基添... 目的:探讨姜黄素对高浓度葡萄糖培养的恒河猴脉络膜-视网膜内皮细胞(rhesus choroido-retinal endothelial cell,RF/6A)损伤的保护作用及机制。方法:RF/6A细胞分4组培养(n=6/组),对照组:DMEM培养基+100/L胎牛血清;高糖组:对照组培养基添加40mmol/L葡萄糖;姜黄素组:对照组培养基添加30μmol/L姜黄素;姜黄素-高糖组:对照组培养基添加40mmol/L葡萄糖及30μmol/L姜黄素。分组培养5d后,显微镜观察各组细胞生长状态,噻唑蓝比色法(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)检测各组细胞活力,琼脂糖凝胶电泳检测DNA ladder判断凋亡,Western-blot检测肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的表达。结果:与对照组相比,高糖组RF/6A细胞生长状态较差,活力明显降低(P<0.01),而姜黄素组及姜黄素-高糖组RF/6A活力无明显变化(P>0.05)。高糖组RF/6A出现明显的DNA ladder,对照组、姜黄素组以及姜黄素-高糖组未见明显DNA ladder。与对照组相比,高糖组TNF-α表达上调(P<0.01),姜黄素组及姜黄素-高糖组TNF-α表达无明显变化(P>0.05)。结论:姜黄素抑制高浓度葡萄糖诱导的RF/6A细胞凋亡、维持细胞活力,可能与姜黄素恢复高浓度葡萄糖诱导的TNF-α表达有关。 展开更多
关键词 高浓度葡萄糖 姜黄素 猴脉络膜-视网膜内皮细胞
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