小反刍兽疫病毒非结构蛋白C单克隆抗体的制备与鉴定

1

作者 李菊 毕冬琳 +5 位作者 杨晓莉 杨东亮 张潇文 刘方程 李琼毅 柏家林 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2024年第5期1047-1054,共8页

为制备小反刍兽疫病毒(PPRV)非结构蛋白C单克隆抗体,根据PPRV C基因编码多肽链氨基酸序列抗原性分析,设计合成一条含20个氨基酸的抗原肽(CRSGKPRGETPGPLLPEIMQ)和一条含21个氨基酸的筛选抗原多肽(PLRAGERGLAPQAVQHRTLIK),将它们分别与... 为制备小反刍兽疫病毒(PPRV)非结构蛋白C单克隆抗体,根据PPRV C基因编码多肽链氨基酸序列抗原性分析,设计合成一条含20个氨基酸的抗原肽(CRSGKPRGETPGPLLPEIMQ)和一条含21个氨基酸的筛选抗原多肽(PLRAGERGLAPQAVQHRTLIK),将它们分别与钥孔血蓝蛋白(keyhole limpet hemocyanin, KLH)和生物素羧基蛋白(biotin carboxyl carrier protein, Biotin)交联,制备获得免疫原和筛选抗原。用免疫原肌肉注射5只8~12周龄、体重约20 g的无特定病原体(specific pathogen free, SPF)级BALB/c雌性小鼠,第1次免疫后分别间隔7 d进行第2次免疫和第3次免疫,三免后21 d进行冲击免疫,冲击免疫后第3天采集血液分离血清,采用间接酶联免疫吸附法(ELISA)测得1只免疫小鼠血清抗体效价为1∶312 500,2只为1∶62 500。取3只小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0经聚乙二醇(PEG)融合制备杂交瘤细胞,通过间接ELISA筛选出26株阳性淋巴杂交瘤细胞,进一步经克隆化培养筛选出46株单克隆细胞株。通过Western blot(WB)筛选获得2株能稳定分泌特异性抗PPRV C蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,WB、间接免疫荧光(indirect immunofluorescence assay, IFA)鉴定显示,制备的单克隆抗体具有较好的灵敏性和病毒反应性。研究结果为进一步阐明C蛋白在PPRV生命周期中的作用奠定了基础,也为小反刍兽疫(PPR)诊断提供了有效的诊断试剂。 展开更多

关键词 小反刍兽疫病毒 非结构蛋白C 杂交瘤细胞技术 单克隆抗体

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用p[Tj(a-)]外周血淋巴细胞建立抗-PP1P^(k)杂交瘤细胞株 被引量：1

2

作者 郭忠慧 朱自严 +2 位作者 向东 赵俸涌 杨颖 《中国输血杂志》 CAS 2023年第4期294-298,共5页

目的建立分泌抗-PP1P^(k)(又称抗-Tj^(a))的淋巴母细胞样细胞系(lymphoblastoid cell line,LCL)和单克隆杂交瘤细胞株。方法无菌条件下常规方法制备p[Tj(a-)]血型献血者外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cells,PBMC),用E... 目的建立分泌抗-PP1P^(k)(又称抗-Tj^(a))的淋巴母细胞样细胞系(lymphoblastoid cell line,LCL)和单克隆杂交瘤细胞株。方法无菌条件下常规方法制备p[Tj(a-)]血型献血者外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cells,PBMC),用EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)转化单个核细胞中的B淋巴细胞,使其增殖形成B淋巴母细胞样细胞克隆。用菠萝酶处理的正常AB型和O型红细胞以及p[Tj(a-)]红细胞筛选培养上清,通过显微吸引分离技术获得分泌特异性抗-PP1P^(k)的LCL,与SHM-D33骨髓瘤细胞进行融合。异源杂交瘤细胞经次黄嘌呤(H)-氨基蝶呤(A)-胸腺嘧啶(T)-脱氧胞嘧啶核苷(D)-毒毛旋花苷(O)即HOTD培养基选择性培养、抗体筛选以及有限稀释亚克隆,建立分泌特异性抗体的单克隆杂交瘤细胞株。结果从O型p[Tj(a-)]献血者外周血B淋巴细胞EBV转化细胞培养上清中,初筛得到与正常红细胞全部凝集,与p[Tj(a-)]红细胞不凝集的单个淋巴母细胞样克隆5E1-E5,初步鉴定培养上清具有抗-PP1P^(k)特异性。随后利用杂交瘤技术,将5E1-E5细胞与SHM-D33骨髓瘤细胞进行融合,建立了持续稳定分泌IgM抗-PP1P^(k)的单克隆杂交瘤细胞株。结论本研究通过EBV转化和杂交瘤技术建立了分泌抗-PP1P^(k)的人单克隆细胞株,这项工作使大规模筛选稀有p[Tj(a-)]血型成为可能,对我国稀有血型库的建设具有重要意义。 展开更多

关键词 p[Tj(a-)] 抗-PP1P^(k) 抗-Tj^(a) 杂交瘤技术 人单克隆抗体

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抗幽门螺杆菌单克隆抗体的制备与鉴定 被引量：7

3

作者 李妍 宁云山 +5 位作者 洪燕华 刘宜楚 罗军 龙敏 董文其 李明 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期425-427,共3页

目的制备抗幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)全菌的单克隆抗体并对其特异性进行初步鉴定。方法用培养的幽门螺杆菌超声破菌后的上清和沉淀为抗原分别免疫BALB／c小鼠,通过杂交瘤技术制备单克隆抗体并测定抗体免疫球蛋白亚类、效价及... 目的制备抗幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)全菌的单克隆抗体并对其特异性进行初步鉴定。方法用培养的幽门螺杆菌超声破菌后的上清和沉淀为抗原分别免疫BALB／c小鼠,通过杂交瘤技术制备单克隆抗体并测定抗体免疫球蛋白亚类、效价及亲和力,用重组表达的Hp Lpp20、HspA、urease A、CagA、urease B、catalase蛋白鉴定抗体。结果共获得34株抗Hp的单克隆抗体,其中抗上清31株和抗沉淀3株,34株抗体中针对Lpp20、HspA、urease A、CagA、urease B、catalase蛋白的抗体分别为3、2、4、1、5、2株,目前已鉴定的部分单克隆抗体的亚类均为IgGl,细胞培养上清的效价为1:16-1:32,腹水效价为1:32000～1:64000,抗体亲和常数介于1×10-10mol／L-5．2×10-12mol／L。结论获得特异性针对幽门螺杆菌的单克隆抗体,为幽门螺杆菌的诊断和疫苗研究奠定基础。 展开更多

关键词 幽门螺杆菌 单克隆抗体 疫苗 杂交瘤技术

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抗创伤弧菌单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立及特性鉴定 被引量：5

4

作者 付凯飞 马骢 +3 位作者 郭建巍 乔媛媛 郝秀红 王大鹏 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期279-281,共3页

目的:制备高效、特异的抗创伤弧菌的单克隆抗体(mAb),并进行特性鉴定。方法:用创伤弧菌菌体蛋白抗原免疫小鼠,利用杂交瘤细胞融合技术,制备抗创伤弧菌的杂交瘤细胞株。用ELISA法及Western blot等筛选、鉴定其与创伤弧菌溶血素蛋白(vvhA... 目的:制备高效、特异的抗创伤弧菌的单克隆抗体(mAb),并进行特性鉴定。方法:用创伤弧菌菌体蛋白抗原免疫小鼠,利用杂交瘤细胞融合技术,制备抗创伤弧菌的杂交瘤细胞株。用ELISA法及Western blot等筛选、鉴定其与创伤弧菌溶血素蛋白(vvhA)及其他重要海洋细菌的交叉反应性和效价。结果:共获得5株抗创伤弧菌的mAb,鉴定结果表明,5株mAb均具有良好的特异性和免疫反应性。结论:获得5株抗创伤弧菌的特异性mAb,为建立创伤弧菌快速检测试剂盒提供了重要制剂。 展开更多

关键词 创伤弧菌 单克隆抗体 杂交瘤技术

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神经微丝的纯化及其单克隆抗体的制备与鉴定 被引量：6

5

作者 杨青峰 范维珂 +1 位作者 段积华 韦克 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1990年第2期92-96,共5页

本文采用羟基磷灰石吸附洗脱法,从牛脊髓中分离神经微丝(NF)。用SDS-PAGE显示其分子量为72K,164K及195K,负染电镜可见直径为8-10nm的丝状结构。以此为抗原免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与NS1细胞融合,获得了一株持续分泌抗NF单克隆抗体的... 本文采用羟基磷灰石吸附洗脱法,从牛脊髓中分离神经微丝(NF)。用SDS-PAGE显示其分子量为72K,164K及195K,负染电镜可见直径为8-10nm的丝状结构。以此为抗原免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与NS1细胞融合,获得了一株持续分泌抗NF单克隆抗体的杂交瘤细胞株AN_1。其染色体众数为91,所分泌抗体属IgG1亚类。免疫印迹表明此抗体为NF195特异性。免疫组化显示该抗体具有神经纤维特异性,对神经原胞体及非神经组织呈阴性反应。 展开更多

关键词 神经微丝 单克隆抗体 制备 鉴定

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杂交瘤技术方法的建立和融合条件的研究 被引量：6

6

作者 潘赛贻 黄健康 +1 位作者 周洁娴 吴建民 《湖南医科大学学报》 CSCD 1997年第2期179-182,共4页

通过制备抗华支睾吸虫单克隆抗体，建立和稳定了淋巴细胞杂交瘤技术方法，并对影响融合效果的融合条件进行了观察。聚乙二醇浓度、新生牛血清质量、更换ＨＡＴ培养基的时间等因素对融合效果有影响。筛选了５株分泌高滴度单克隆抗体的杂... 通过制备抗华支睾吸虫单克隆抗体，建立和稳定了淋巴细胞杂交瘤技术方法，并对影响融合效果的融合条件进行了观察。聚乙二醇浓度、新生牛血清质量、更换ＨＡＴ培养基的时间等因素对融合效果有影响。筛选了５株分泌高滴度单克隆抗体的杂交瘤细胞株。 展开更多

关键词 杂交瘤技术 单克隆抗体 华支睾吸虫 免疫诊断

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猪繁殖与呼吸综合征病毒单克隆抗体的研究 被引量：8

7

作者 谷红 张中直 +1 位作者 杨汉春 赵继勋 《中国兽医科技》 CSCD 2000年第12期9-11,共3页

采用差速离心和蔗糖不连续密度梯度离心法提纯猪繁殖与呼吸综合征病毒 (PRRSV)北京地区分离株BJ 4病毒抗原 ,免疫BALB/c小鼠 ,按常规杂交瘤技术制备杂交瘤细胞株 ,经间接ELISA筛选和克隆化 ,获得 1株能稳定分泌PRRSV抗体的单克隆杂交瘤... 采用差速离心和蔗糖不连续密度梯度离心法提纯猪繁殖与呼吸综合征病毒 (PRRSV)北京地区分离株BJ 4病毒抗原 ,免疫BALB/c小鼠 ,按常规杂交瘤技术制备杂交瘤细胞株 ,经间接ELISA筛选和克隆化 ,获得 1株能稳定分泌PRRSV抗体的单克隆杂交瘤细胞株 ,命名为GE3。经过鉴定 ,GE3株杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体亚类为IgG1;分子质量为 161.64ku ;腹水效价为 1∶8× 10 4;不与猪瘟病毒 (HCV)和伪狂犬病病毒 (PRV)发生交叉反应 ;蛋白质印迹 (Westren blotting)试验结果表明 ,该株单克隆抗体为针对核衣壳蛋白 (NP)的单克隆抗体 ;腹水与欧洲株 (Lv)、美洲株 (VR 2 3 3 2 )和北京分离株BJ 1、BJ 2、BJ 5、BJ 6均能发生反应 ,说明其所针对的位点为NP上的保守位点。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 杂交瘤技术 单克隆抗体

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分泌高效价抗碱性磷酸酶McAb杂交瘤系的建立及其在APAAP免疫组化研究中的应用 被引量：2

8

作者 赵宁 刘雪松 +5 位作者 黄传书 田方 金伯泉 薛采芳 陈伯虹 舒翠玲 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1991年第5期275-277,共3页

用碱性磷酸酶长程多途径免疫BALB/C小鼠,采用反向间接ELISA法筛选融合孔上清,获得2株稳定分泌抗碱性磷酸酶McAb杂交瘤细胞株,腹水效价比国外报道高15～30倍,在APAAP免疫组化检测CD抗原、病毒抗原、肿瘤抗原以及细菌菌毛抗原等研究中均... 用碱性磷酸酶长程多途径免疫BALB/C小鼠,采用反向间接ELISA法筛选融合孔上清,获得2株稳定分泌抗碱性磷酸酶McAb杂交瘤细胞株,腹水效价比国外报道高15～30倍,在APAAP免疫组化检测CD抗原、病毒抗原、肿瘤抗原以及细菌菌毛抗原等研究中均获得满意结果。 展开更多

关键词 单克隆抗体 APAAP 杂交瘤

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抗独特型疫苗在兽医领域的研究进展 被引量：3

9

作者 李淑娜 蒋文灿 +1 位作者 郑维维 刘义铃 《动物医学进展》 CSCD 2008年第2期61-63,共3页

抗独特型抗体作为疫苗以其独特的优点为疫病的预防开辟了新的途径,它不仅能诱导体液免疫应答,亦能诱导细胞免疫应答。抗独特型疫苗能够刺激机体产生抗病毒、细菌、寄生虫感染的特异性和保护性免疫。近年来,在动物体内的试验结果表明,抗... 抗独特型抗体作为疫苗以其独特的优点为疫病的预防开辟了新的途径,它不仅能诱导体液免疫应答,亦能诱导细胞免疫应答。抗独特型疫苗能够刺激机体产生抗病毒、细菌、寄生虫感染的特异性和保护性免疫。近年来,在动物体内的试验结果表明,抗独特型疫苗能够刺激机体产生足够的免疫力,显示了巨大的研究和临床应用潜力。 展开更多

关键词 抗独特型疫苗 抗独特型抗体 单克隆抗体 杂交瘤技术

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单克隆抗体用于比较禽呼肠孤病毒株的抗原关系 被引量：3

10

作者 陈士友 陈溥言 蔡宝祥 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1993年第1期96-99,共4页

利用淋巴细胞杂交瘤技术在国内首次建立了8株分泌禽呼肠孤病毒(ARVS)的单克隆抗体(McAb)杂交瘤细胞株,腹水效价在10^(-3)～10^(-5)之间。用琼脂扩散试验鉴定,5株属 IgGl,2株属IgG2b,1株属 IgG3.ELISA 阻断试验表明,4个 ARVS 分离株的抗... 利用淋巴细胞杂交瘤技术在国内首次建立了8株分泌禽呼肠孤病毒(ARVS)的单克隆抗体(McAb)杂交瘤细胞株,腹水效价在10^(-3)～10^(-5)之间。用琼脂扩散试验鉴定,5株属 IgGl,2株属IgG2b,1株属 IgG3.ELISA 阻断试验表明,4个 ARVS 分离株的抗原结构明显不同,提示利用 McAb 进行 ARVS 的分型具有很大潜力.在与两个国内毒株(广州分离株和 NAU-8902)分别发生特异性反应的4株 McAb 中,有3株是相同的,说明两者具有很近的亲缘关系.试验还发现,McAb D19株能被试验的所有毒株阻断,提示 D19株有希望成为检测 ARVS 的群特异性 McAb。 展开更多

关键词 单克隆抗体 禽呼肠孤病毒 禽病

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抗胶质纤维酸性蛋白单克隆抗体(AG_1)的研制与初步应用 被引量：2

11

作者 殷秀 范维珂 +1 位作者 段积华 韦克 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1990年第1期27-30,共4页

用尿素抽提及DE_(32)^-纤维素离子交换柱层析,从牛大脑白质中提取GFAP,经鉴定具理化性质符合文献报道。用提取的GFAP免疫BALB/c小鼠,经杂交瘤技术,获得稳定分泌抗GFAP单克隆抗体的杂交瘤细胞株AG_1,染色体众数为68,属小鼠IgG_1亚类,免... 用尿素抽提及DE_(32)^-纤维素离子交换柱层析,从牛大脑白质中提取GFAP,经鉴定具理化性质符合文献报道。用提取的GFAP免疫BALB/c小鼠,经杂交瘤技术,获得稳定分泌抗GFAP单克隆抗体的杂交瘤细胞株AG_1,染色体众数为68,属小鼠IgG_1亚类,免疫印迹试验时仅与GFAP起特异性反应,ABC免疫组化显示AG_1单抗与星形胶质细胞及其肿瘤呈阳性反应,而与非胶质细胞及其肿瘤呈阴性反应。 展开更多

关键词 GFAD 单克隆抗体 肿瘤诊断

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结核分枝杆菌分泌蛋白MPB64小鼠单克隆抗体制备、纯化及鉴定 被引量：2

12

作者 马荣 陈振 +3 位作者 黑龙 赵志军 徐广贤 戈朝晖 《宁夏医科大学学报》 2015年第9期1013-1016,共4页

目的应用细胞融合技术制备和鉴定抗MPB64单克隆抗体。方法采用重组目的蛋白p ET32aMPB64(680bp)为免疫原,免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤Sp2/0细胞融合。间接ELISA法筛选分泌抗体的杂交瘤细胞,采用有限稀释方法对所有筛... 目的应用细胞融合技术制备和鉴定抗MPB64单克隆抗体。方法采用重组目的蛋白p ET32aMPB64(680bp)为免疫原,免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤Sp2/0细胞融合。间接ELISA法筛选分泌抗体的杂交瘤细胞,采用有限稀释方法对所有筛选确认的阳性细胞株进行亚克隆,杂交瘤细胞诱导小鼠产生腹水,再用蛋白G亲和层析法纯化抗体,通过间接ELISA、Western Blot鉴定该单克隆抗体。结果通过杂交瘤技术获得10株可稳定分泌抗MPB64单克隆抗体的细胞株。以命名的"1A3"单抗细胞株进行腹水制备,经鉴定腹水效价>1∶720000,经纯化抗体效价约为1∶720000,抗体浓度2.15mg·m L-1。结论成功制备和获得了抗MPB64单克隆抗体的细胞株,为MPB64单克隆抗体制备和鉴定奠定了基础。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 MPB64 单克隆抗体 杂交瘤技术

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肌肉标志结蛋白单抗的研制与初步应用 被引量：1

13

作者 邓华瑜 范维珂 +1 位作者 韦克 李培然 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1992年第2期90-94,共5页

以鸡胗为材料提纯结蛋白,经鉴定后免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术建立了能稳定分泌抗结蛋白单抗的杂交瘤细胞株AD1,其染色体中位数为77。AD1单抗属小鼠Igg1亚类;ELISA间接法测定AD1细胞培养上清抗体效价为10^(-4);酶联免疫印迹试验显示... 以鸡胗为材料提纯结蛋白,经鉴定后免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术建立了能稳定分泌抗结蛋白单抗的杂交瘤细胞株AD1,其染色体中位数为77。AD1单抗属小鼠Igg1亚类;ELISA间接法测定AD1细胞培养上清抗体效价为10^(-4);酶联免疫印迹试验显示能特异地与结蛋白起反应;经ABC-AEC免疫酶组化法鉴定组织特异性,AD1单抗具有特异地识别肌肉组织和肌源性肿瘤的能力,能用于常规病理标本的石蜡切片。AD1单抗对肌源性肿瘤和非肌源性肿瘤的病理诊断与鉴别诊断具有重要应用价值。 展开更多

关键词 结蛋白 杂交瘤技术 肌源性 肿瘤

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抗人白血病细胞单克隆抗体C_3H_6的产生及初步鉴定 被引量：11

14

作者 张毅 张澜生 徐兴娣 《苏州大学学报（医学版）》 CAS 1989年第2期100-105,168-174,共8页

本文报告了抗人白血病细胞单克隆抗体C_3H_6的产生.运用间接免疫荧光技术、ELISA、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫印迹技术对其特征作了初步分析.结果表明:单抗C_3H_6与白血病细胞S_(7811)(免疫原)和K_(562)细胞有强阳性反应,与Raji 细胞... 本文报告了抗人白血病细胞单克隆抗体C_3H_6的产生.运用间接免疫荧光技术、ELISA、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫印迹技术对其特征作了初步分析.结果表明:单抗C_3H_6与白血病细胞S_(7811)(免疫原)和K_(562)细胞有强阳性反应,与Raji 细胞和U_(937)细胞反应较弱.单抗C_3H_6主要与髓性白血病细胞有阳性反应.对鉴别AML 与ALL 有显著意义.并与AML-m_5的反应有非常显著意义,从而有助于鉴别AML-M_5与其他AML 的亚类(M_(1～4)).免疫印迹结果显示C_3H_6抗原为单一的肽链结构.其分子量为57kd.C_3H_6抗原很可能为一新的髓性白细胞分化抗原. 展开更多

关键词 杂交瘤 单克隆抗体 白细胞分化抗原 间接免疫荧光技术 SDS-聚丙烯酰胺凝 胶电泳 免疫印迹技术

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抗波形蛋白单克隆抗体的研制、鉴定及初步应用 被引量：1

15

作者 周兰 范维珂 +1 位作者 韦克 段积华 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 1990年第1期1-7,共7页

用从猪眼晶体中提取的波形蛋白免疫BALB/C小鼠;用杂交瘤技术建立了两株稳定分泌抗波形蛋白单克隆抗体(IgG_1亚类)的杂交瘤细胞株:H_1C_2和I_3B_2;其染色体众数分别为和8690;免疫印迹显示两者均特异地与波形蛋白反应;免疫组化结果:纤维(... 用从猪眼晶体中提取的波形蛋白免疫BALB/C小鼠;用杂交瘤技术建立了两株稳定分泌抗波形蛋白单克隆抗体(IgG_1亚类)的杂交瘤细胞株:H_1C_2和I_3B_2;其染色体众数分别为和8690;免疫印迹显示两者均特异地与波形蛋白反应;免疫组化结果:纤维(母)细胞、巨噬细胞、浆细胞、内皮细胞、纤维瘤、恶纤、淋巴瘤、黑色素瘤等呈阳性反应;而神经原、肝、胰、肺鳞癌等呈阴性反应。此抗体的制成。 展开更多

关键词 波形蛋白 杂交瘤技术 免疫印迹

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人O型外周血淋巴细胞制备人单克隆抗-A细胞株 被引量：2

16

作者 郭忠慧 朱自严 +1 位作者 赵俸涌 向东 《中国输血杂志》 CAS 2020年第11期1155-1157,共3页

目的以正常O型人外周血淋巴细胞为实验对象,制备能稳定分泌人单克隆抗-A或抗-B的杂交瘤细胞株,在本实验室建立人血型单克隆抗体制备流程。方法使用淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞(PBMCs),从狨猴B95-8细胞培养上清收获EB病毒(Epstei... 目的以正常O型人外周血淋巴细胞为实验对象,制备能稳定分泌人单克隆抗-A或抗-B的杂交瘤细胞株,在本实验室建立人血型单克隆抗体制备流程。方法使用淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞(PBMCs),从狨猴B95-8细胞培养上清收获EB病毒(Epstein-Barr virus),用于转化B淋巴细胞,血清学微量板法筛选能够分泌目标抗体的细胞孔。显微镜下挑选分离单个克隆的细胞团,分泌特异性抗体的转化细胞与SHM-D33瘤细胞进行融合,经HOTD选择性培养,血清学筛选,得到分泌特异性抗体的杂交瘤细胞。结果从随机O型个体的外周血淋巴细胞,成功构建持续稳定分泌人源IgM单克隆抗-A的细胞株。结论本研究提供一种可行的技术路线,为从人外周血淋巴细胞制备有诊断和筛选价值的人源血型单克隆抗体细胞株奠定基础。 展开更多

关键词 红细胞血型 人单克隆抗体 外周血单个核细胞 杂交瘤技术

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利用D--外周血B细胞构建单克隆抗-C杂交瘤细胞株 被引量：1

17

作者 郭忠慧 赵俸涌 +7 位作者 张德梅 向东 张嘉敏 杨颖 李勤 杨启修 王晨 朱自严 《中国输血杂志》 CAS 2022年第4期400-404,共5页

目的以1例稀有的O型D--献血者外周血单个核细胞为实验对象,制备分泌Rh血型系统单克隆抗体的杂交瘤细胞株。方法无菌分离外周血白细胞,经淋巴细胞分离液分离得到单个核细胞(PBMCs),利用B95-8培养上清中的EB病毒(EBV),转化PBMCs中的B淋巴... 目的以1例稀有的O型D--献血者外周血单个核细胞为实验对象,制备分泌Rh血型系统单克隆抗体的杂交瘤细胞株。方法无菌分离外周血白细胞,经淋巴细胞分离液分离得到单个核细胞(PBMCs),利用B95-8培养上清中的EB病毒(EBV),转化PBMCs中的B淋巴细胞使其母细胞化。血清学筛选分泌特异性抗体的单一B细胞克隆并扩大培养,与SHM-D33瘤细胞在电刺激下融合,经含有次黄嘌呤(Hypoxantine,H)、氨基蝶呤(Aminopterin,A)、胸腺嘧啶核苷(Thymidine,T)、脱氧胞嘧啶核苷(2-Deoxycytide,D)、毒毛旋花苷(Ouabain,O)的培养基,即HOTD(HATD+Ouabain)选择性培养、微量板抗体筛选以及有限稀释亚克隆,建立分泌特异性抗体的杂交瘤细胞株,血清学和流式细胞试验鉴定抗体特异性。结果从D--外周血转化B淋巴细胞培养上清中,初筛得到与R;R;(DCe/DCe)O型红细胞凝集,与R;R;(DcE/DcE)O型红细胞不凝集的单个细胞克隆3A6-C6,初步鉴定抗体特异性为抗-C,与SHM-D33骨髓瘤细胞杂交后建立了持续稳定分泌IgM抗-C的杂交瘤细胞株。结论本研究从外周血B细胞开始构建单克隆杂交瘤细胞株,为Rh血型系统血清学单克隆试剂的研发和改造奠定了基础。 展开更多

关键词 D--表型 人单克隆抗体 抗-C 杂交瘤技术

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抗间日疟原虫红内期单克隆抗体的研制和鉴定 被引量：1

18

作者 罗树宏 刘多 +2 位作者 叶炳辉 舒衡平 付冉定 《湖南医科大学学报》 CSCD 1995年第3期244-246,共3页

用Ｐｅｒｃｏｌｌ密度梯度离心法从志愿者血液中分离出感染间日疟原虫的红细胞。以此作为免疫原，免疫Ｂａｌｂ／ｄ小鼠，获得５株杂交瘤细胞系。融合率平均为４５％，抗体阳性率为０．６６％。用ＩＦＡｆｏＩＰＡ染色进行免疫组化分析... 用Ｐｅｒｃｏｌｌ密度梯度离心法从志愿者血液中分离出感染间日疟原虫的红细胞。以此作为免疫原，免疫Ｂａｌｂ／ｄ小鼠，获得５株杂交瘤细胞系。融合率平均为４５％，抗体阳性率为０．６６％。用ＩＦＡｆｏＩＰＡ染色进行免疫组化分析，４Ｂ２和８Ｅ３分泌的单克隆抗体呈较强的阳性反应，与约氏疟原虫红内期无交叉反应。 展开更多

关键词 间日疟原虫 杂交瘤 免疫酶技术 单克隆抗体类

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抗辣根过氧化物酶单克隆抗体的研制和鉴定

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作者 杨东亮 李方和 +2 位作者 喻植群 汪由坤 郝连杰 《同济医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1992年第1期30-32,共3页

用国产辣根过氧化物酶(HRP)免疫BALB/C鼠,取免疫脾细胞与SP2/0小鼠骨髓瘤细胞融合,获得了7株分泌HRP特异性抗体的杂交瘤细胞株,其培养上清液的效价为256～4096,腹水效价为1024×10~3～4 096×10~3.上述7株细胞株中的6株所产生... 用国产辣根过氧化物酶(HRP)免疫BALB/C鼠,取免疫脾细胞与SP2/0小鼠骨髓瘤细胞融合,获得了7株分泌HRP特异性抗体的杂交瘤细胞株,其培养上清液的效价为256～4096,腹水效价为1024×10~3～4 096×10~3.上述7株细胞株中的6株所产生的单克隆抗体均能制备出质量良好的鼠单克隆PAP复合物,用于免疫组织化学及血清学研究均取得较理想效果。将7株分泌HRP特异性抗体的杂交瘤细胞株适应于含8-氮杂鸟嘌呤培养基中,诱导出了对HAT敏感的突变细胞株,为研制双特异性单克隆抗体奠定了基础。 展开更多

关键词 过氧化物酶 单克隆抗体 杂交瘤技术

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抗钙调素单克隆抗体的制备及开发利用

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作者 甘露 陈兴 +3 位作者 黄庆军 王志玲 勾凌燕 刘景东 《河北医药》 CAS 2003年第10期723-724,共2页

目的　抗钙调素单克隆抗体的制备及开发利用。方法　以碳化二亚胺法将钙调素 卵清蛋白偶联物作为免疫原 ,采用常规免疫方法免疫BALB C小鼠 ,杂交瘤技术制备抗牛脑钙调素单克隆抗体。酶联免疫吸附法 (ELISA)检验 ,应用硫酸铵盐析法进行... 目的　抗钙调素单克隆抗体的制备及开发利用。方法　以碳化二亚胺法将钙调素 卵清蛋白偶联物作为免疫原 ,采用常规免疫方法免疫BALB C小鼠 ,杂交瘤技术制备抗牛脑钙调素单克隆抗体。酶联免疫吸附法 (ELISA)检验 ,应用硫酸铵盐析法进行了抗体的纯化。结果　采用免疫印迹、免疫酶斑点法及液相竞争法鉴定了抗钙调素单克隆抗体的性质 ,表明该抗体对钙调素有较强的特异性。结论　此研究制备出的高特异性、高亲和力及高效价的抗牛脑钙调素单克隆抗体可用于胞外钙调素促进皮肤创伤修复的基础研究 ,也可用于免疫学定量分析、免疫学定位分析及共沉淀分析 ,具有较好的经济价值。 展开更多

关键词 钙调素 单克隆抗体 制备 开发 杂交瘤技术

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