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苯并[a]芘恶性转化细胞THBEc1中miR-584-5p/miR-211-5p/叉头框蛋白A1轴参与IDH1和HSPB1转录调控
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作者 马雪 刘芷毓 +3 位作者 邢云昆 姚碧云 傅娟玲 赵鹏 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS 北大核心 2023年第11期841-852,共12页
目的探索苯并[a]芘(BaP)恶性转化人支气管上皮细胞T-16HBE-C1(THBEc1)中微RNA(miRNA)调控叉头框蛋白A1(FOXA1)表达上调的机制,并筛选和验证FOXA1的潜在靶基因。方法利用TargetScan,ENCORI数据库和THBEc1细胞与非转化细胞16HBE间miRNA的... 目的探索苯并[a]芘(BaP)恶性转化人支气管上皮细胞T-16HBE-C1(THBEc1)中微RNA(miRNA)调控叉头框蛋白A1(FOXA1)表达上调的机制,并筛选和验证FOXA1的潜在靶基因。方法利用TargetScan,ENCORI数据库和THBEc1细胞与非转化细胞16HBE间miRNA的二代测序(NGS)结果,综合预测靶向调控FOXA1的miRNA,并通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)进一步筛选预测的miRNA。采用miRNA模拟物(mimics)转染THBEc1细胞,Western印迹法测定FOXA1蛋白表达水平,对靶向调控FOXA1的miRNA进行鉴定。利用hTF,JASPAR和ENCODE数据库结合FOXA1敲除细胞THBEc1-ΔFOXA1-c34和对照细胞THBEc1-ctrl间mRNA的NGS结果,综合预测FOXA1的潜在靶基因。利用RT-qPCR进一步对预测的靶基因[跨膜蛋白98(TMEM98)、IKAROS家族锌指2(IKZF2)、异柠檬酸脱氢酶1(IDH1)、肿瘤坏死因子受体相关因子5(TRAF5)、骨形态发生蛋白2型受体(BMPR2)、热休克蛋白B1(HSPB1)、Runt相关转录因子2(RUNX2)、golgin A7家族成员B(GOLGA7B)和维甲酸相关孤核受体A(RORA)]进行筛选。通过转染过表达质粒构建稳定表达FOXA1的细胞模型THBEc1-ΔFOXA1-c34-oe,即FOXA1功能回补,并利用RT-qPCR和Western印迹法验证FOXA1的潜在靶基因。结果TargetScan和ENCORI数据库分别预测到213和145个可能靶向调控FOXA1的miRNA。NGS共发现351个miRNA在THBEc1细胞中表达下调(差异倍数<0.5,且错误发现率<0.05),其中hsa-miR-584-5p(miR-584-5p),hsa-miR-142-5p(miR-142-5p)和hsa-miR-211-5p(miR-211-5p)在上述2个数据库中均被预测可靶向调控FOXA1。RT-qPCR结果证实,THBEc1细胞中miR-584-5p,miR-142-5p和miR-211-5p表达水平显著低于16HBE细胞(P<0.01)。转染miR-584-5p模拟物或miR-211-5p模拟物均可显著下调THBEc1细胞FOXA1蛋白表达水平(P<0.01),而转染miR-142-5p模拟物对THBEc1细胞FOXA1蛋白表达水平无明显影响。THBEc1-ΔFOXA1-c34和THBEc1-ctrl细胞间的20个差异表达基因(差异倍数<0.5或>2,且错误发现率<0.05)被hTF,JASPAR和ENCODE数据库均预测为FOXA1的潜在靶基因。RT-qPCR结果显示,在THBEc1-ΔFOXA1-c34中,TMEM98,IKZF2,IDH1,TRAF5,BMPR2,HSPB1和RUNX2 mRNA表达水平显著下调(P<0.05,P<0.01),GOLGA7B和RORA mRNA表达水平显著上调(P<0.05,P<0.01);在THBEc1-ΔFOXA1-c34-oe中,IDH1和HSPB1的mRNA表达水平显著上调(P<0.01),余7个基因mRNA表达水平未见改变。Western印迹结果显示,THBEc1-ΔFOXA1-c34细胞中IDH1和HSPB1表达水平较THBEc1-ctrl均显著下调(P<0.01);而恢复FOXA1表达的THBEc1-ΔFOXA1-c34-oe细胞中IDH1和HSPB1表达水平较对照细胞THBEc1-ΔFOXA1-c34-ctrl均显著上调(P<0.01)。结论BaP恶性转化细胞THBEc1中miR-584-5p/miR-211-5p/FOXA1轴参与IDH1和HSPB1转录调控。 展开更多
关键词 苯并[A]芘 叉头框蛋白A1 miR-584-5p miR-211-5p 异柠檬酸脱氢酶1 热休克蛋白B1
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结直肠癌中HSF1、c-Jun、p-c-Jun及DPD的表达水平及临床意义 被引量：1
2
作者 邓江 黎相照 《海南医学》 CAS 2021年第15期1926-1930,共5页
目的检测结直肠癌患者中热休克因子1(HSF1)、氨基末端激酶(c-Jun)、p-c-Jun及二氢嘧啶脱氢酶(DPD)的表达水平,并探讨其临床意义。方法收集南方医科大学南方医院2018年1月至2019年12月收治的114例结直肠癌患者的临床资料,检测结直肠癌组... 目的检测结直肠癌患者中热休克因子1(HSF1)、氨基末端激酶(c-Jun)、p-c-Jun及二氢嘧啶脱氢酶(DPD)的表达水平,并探讨其临床意义。方法收集南方医科大学南方医院2018年1月至2019年12月收治的114例结直肠癌患者的临床资料,检测结直肠癌组织及癌旁组织的HSF1、c-Jun、p-c-Jun及DPD表达情况,并对比HSF1、c-Jun、p-c-Jun及DPD阳性表达率,采用Log-rank检验分析不同HSF1、c-Jun、p-c-Jun及DPD阳性表达的结直肠癌患者预后情况,采用Spearman相关性分析法分析各指标之间的相关性。结果HSF1、c-Jun、p-c-Jun及DPD在结直肠癌组织中的阳性表达率分别为64.04%、61.40%、52.63%、58.77%,明显高于癌旁组织的23.68%、21.93%、14.04%、25.44%,差异均有统计学意义(P<0.05);Ⅲ+Ⅳ期、低分化、淋巴结转移阳性者HSF1、c-Jun、p-c-Jun及DPD阳性表达率,明显高于Ⅰ+Ⅱ期、中高分化、淋巴结转移阴性者,差异均有统计学意义(P<0.05);HSF1、c-Jun、p-c-Jun及DPD阳性者1年生存率分别为83.56%、82.86%、81.67%、83.58%,明显低于阴性者的97.56%、97.73%、97.30%、95.74%,差异均有统计学意义(P<0.05);结直肠癌患者HSF1、c-Jun、p-c-Jun及DPD之间的表达水平均呈正相关(P<0.05)。结论结直肠癌组织中HSF1、c-Jun、p-c-Jun及DPD的阳性表达率均高于癌旁组织,且与结直肠癌的临床分期、分化程度、淋巴结转移有关。 展开更多
关键词 结直肠癌 热休克因子1 氨基末端激酶 p-c-Jun 二氢嘧啶脱氢酶
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糖代谢关键酶活性对林可霉生物合成影响的研究
3
作者 李为全 陈海军 +1 位作者 陈长华 李友元 《药物生物技术》 CAS CSCD 2007年第6期424-428,共5页
研究了林可霉素糖代谢的关键酶,己糖激酶、6-磷酸葡萄糖脱氢酶、磷酸果糖激酶和异柠檬酸脱氢酶,以及它们在发酵过程中的活性变化与菌体代谢的变化规律,比较了菌株W11-2和S-41在发酵过程中酶活性的变化趋势,进一步阐明了林可霉素合成和... 研究了林可霉素糖代谢的关键酶,己糖激酶、6-磷酸葡萄糖脱氢酶、磷酸果糖激酶和异柠檬酸脱氢酶,以及它们在发酵过程中的活性变化与菌体代谢的变化规律,比较了菌株W11-2和S-41在发酵过程中酶活性的变化趋势,进一步阐明了林可霉素合成和糖代谢关键酶活性的关系。研究表明在发酵的生长阶段,提高糖代谢GK、PFK、G6PDH的活性有利于菌体生长;己糖激酶、6-磷酸葡萄糖脱氢酶的活性和林可霉素合成有正相关性。在林可霉素合成期提高HMP途径的代谢流量,减少EMP途径的代谢流量有利于林可霉素的合成,该研究为发酵工艺的调控和菌种代谢工程的改造提供依据。 展开更多
关键词 葡萄糖激酶 6-磷酸葡萄糖脱氢酶 磷酸果糖激酶 异柠檬酸脱氢酶
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乳腺癌与ALDH1相关性研究的现状 被引量：1
4
作者 梁艳 庄静 孙长岗 《中华肿瘤防治杂志》 CAS 北大核心 2013年第24期1942-1944,共3页
目的:总结近年来关于乙醛脱氢酶1(acetaldehyde dehydrogenase 1,ALDH1)特点的研究及其作为乳腺癌干细胞标志的相关性研究。方法:应用PubMed、Elsevier Sciencedirect和CNKI期刊全文数据库,以"乳腺肿瘤、ALDH1、干细胞、免疫组织... 目的:总结近年来关于乙醛脱氢酶1(acetaldehyde dehydrogenase 1,ALDH1)特点的研究及其作为乳腺癌干细胞标志的相关性研究。方法:应用PubMed、Elsevier Sciencedirect和CNKI期刊全文数据库,以"乳腺肿瘤、ALDH1、干细胞、免疫组织化学、蛋白质组学"为关键词,检索2002-01-2012-11相关文献,共检索到256篇。排除标准:非乳腺癌和非ALDH1。纳入标准:1)ALDH1与乳腺癌的相关性研究;2)免疫组织化学方法及蛋白质组学研究乳腺癌干细胞。根据排除标准和纳入标准符合分析的文献18篇。结果:应用免疫组织化学、蛋白质组学和临床试验等方法的大量研究结果表明,ALDH1细胞能满足干细胞的定义标准,具有自我更新和多向分化的特性,并且已经在多种组织中证实了ALDH1是一种有效的干细胞通用标志,兼之检测方法的多样化,使之成为多种组织类型干细胞鉴定和分离的有力工具,在干细胞研究领域具有特别重要的意义。作为乳腺癌干细胞标志之一,ALDH1与多种临床病理因素相关,在一定程度上可以反应疾病的恶性程度及预后,是导致乳腺癌发生、进展、耐药、复发和预后不良的根源,在临床上有非常重要的指导意义。结论:ALDH1可能具有自身独立的生物学特性,进一步深入研究其作为乳腺癌干细胞的特性,有助于发现新的关于ALDH1的靶点,为乳腺癌的个体化治疗提供理论依据。 展开更多
关键词 乳腺肿瘤 乙醛脱氢酶 干细胞 免疫组织化学 蛋白质组学 综述文献
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用于选择性优产雄烯二酮的工业小金色分枝杆菌的基因改造
5
作者 余舒琪 瞿旭东 《武汉大学学报（理学版）》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期51-56,共6页
工业上用于生产4-雄烯-4-醇-3,17-二酮(4-雄烯二酮,4-AD)的小金色分枝杆菌(Mycobacterium neoaurum)在降解植物甾醇侧链的过程中同时产生部分1,4-雄烯-4-醇-3,17-二酮(1,4-雄烯二酮,ADD),而3-甾酮-Δ1-脱氢酶KstD催化了4-AD到ADD的转化... 工业上用于生产4-雄烯-4-醇-3,17-二酮(4-雄烯二酮,4-AD)的小金色分枝杆菌(Mycobacterium neoaurum)在降解植物甾醇侧链的过程中同时产生部分1,4-雄烯-4-醇-3,17-二酮(1,4-雄烯二酮,ADD),而3-甾酮-Δ1-脱氢酶KstD催化了4-AD到ADD的转化.克隆该工业菌株的kstD基因测序后发现,其与报道的标准分枝杆菌基因组中的kstD基因相比有3个氨基酸的突变(A6E,S138L,A193V).这些突变使得KstD的酶活受到影响,一定程度上阻碍4-AD向ADD的转变.为了实现从植物甾醇降解中选择性地得到4-AD或ADD,通过敲除kstD基因,阻断4-AD到ADD的转化,获得一株只产4-AD的突变菌株,代谢产物中4-AD达79.3%.通过修复kstD酶的氨基酸位点,使之恢复到文献报道的正常序列,并在敲除kstD基因菌株中,将修复后的kstD基因安置在强启动子pG13下,重新导回到突变菌株中进行回补强化表达,获得一株可以大量产生ADD的菌株.野生型分枝杆菌转化植物甾醇产生的产物中,ADD仅占27.0%,经回补强化表达后的基因工程菌株转化植物甾醇产生的产物中ADD占63.0%.结果表明,通过敲除或者在突变体菌株中过表达正常的kstD基因可以使该工业菌株选择性地优产4-AD或ADD. 展开更多
关键词 甾醇降解 1 4-雄烯二酮 4-雄烯二酮 3-甾酮-Δ1-脱氢酶 基因修复
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线粒体功能障碍与精神分裂症关系研究进展
6
作者 蔡洪斌 王峰 《神经疾病与精神卫生》 2012年第6期618-620,共3页
精神分裂症是一种复杂的神经精神性疾病，发病机制涉及神经化学、神经发育等因素。有证据表明在对精神分裂症患者脑部研究中可观察到由线粒体功能障碍导致的病理变化，最近发现精神分裂症断裂基因（Disrupted—in—Schizophrenia1，DISC... 精神分裂症是一种复杂的神经精神性疾病，发病机制涉及神经化学、神经发育等因素。有证据表明在对精神分裂症患者脑部研究中可观察到由线粒体功能障碍导致的病理变化，最近发现精神分裂症断裂基因（Disrupted—in—Schizophrenia1，DISC1）存在于线粒体中，可以确定线粒体与精神分裂症发病存在某种联系。 展开更多
关键词 线粒体 精神分裂症 精神分裂症断裂基因 NADH脱氢酶 氧化性应激
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