目的探讨miR-577在幼儿复发性喉乳头状瘤中的表达及其对细胞增殖、侵袭的影响和潜在分子机制。方法收集2016年6月至2019年12月确诊的30例幼儿喉乳头状瘤组织样本及其相匹配且远离病灶经病理检查证实的正常喉组织样本,并选取人正常喉上...目的探讨miR-577在幼儿复发性喉乳头状瘤中的表达及其对细胞增殖、侵袭的影响和潜在分子机制。方法收集2016年6月至2019年12月确诊的30例幼儿喉乳头状瘤组织样本及其相匹配且远离病灶经病理检查证实的正常喉组织样本,并选取人正常喉上皮细胞株和喉乳头状瘤细胞(分为miR-577过表达组、阴性对照组及空白对照组)进行研究。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分别检测30例喉乳头状瘤组织、配对正常喉组织、正常喉上皮细胞和喉乳头状瘤细胞中miR-577相对表达;通过Lipofectamine^(TM)3000脂质体转染试剂盒将miR-577 mimic模拟物转染至喉乳头状瘤细胞构建miR-577过表达细胞系,采用CCK-8法、Tanswell实验分别检测miR-577对喉乳头状瘤细胞增殖、侵袭的影响;采用Western blot检测miR-577对喉乳头状瘤细胞侵袭相关蛋白(MMP-1、MMP-9)表达及Notch通路相关蛋白(Notch、DSL)表达的影响。结果幼儿喉乳头状瘤组织中miR-577相对表达量(0.134±0.026)显著低于正常喉组织(0.823±0.056)(P<0.001);喉乳头状瘤细胞中miR-577相对表达量(0.256±0.026)显著低于正常喉上皮细胞(0.962±0.072)(P<0.001);与阴性对照组相比,转染miR-577 mimic后喉乳头状瘤细胞增殖能力(1.248±0.103 vs 0.902±0.094)和细胞侵袭率(71.016±5.869 vs 42.867±4.795)明显降低(P<0.05);侵袭相关蛋白MMP-1(1.011±0.124 vs 0.417±0.056)、MMP-9(1.012±0.155 vs 0.502±0.058)表达抑制(P<0.01)。喉乳头状瘤细胞中Notch、DSL表达显著上调(P<0.05);转染miR-577 mimic后喉乳头状瘤细胞中Notch通路相关蛋白Notch、DSL表达明显抑制(P<0.05)。共转染miR-577 mimic和pcDNA3.1-Notch后喉乳头状瘤细胞增殖能力和细胞侵袭率较单纯转染miR-577 mimic组明显增加(P<0.05);共转染pcDNA3.1-Notch逆转了miR-577 mimic对喉乳头状瘤细胞增殖、侵袭能力的抑制作用。结论幼儿喉乳头状瘤组织及喉乳头状瘤细胞中miR-577显著低表达,过表达miR-577显著抑制喉乳头状瘤细胞的增殖和侵袭;Notch是miR-577的潜在靶点,miR-577可能通过与Notch的3'UTR区结合进而调控Notch信号通路来抑制喉乳头状瘤细胞的增殖和侵袭。展开更多
文摘目的探讨miR-577在幼儿复发性喉乳头状瘤中的表达及其对细胞增殖、侵袭的影响和潜在分子机制。方法收集2016年6月至2019年12月确诊的30例幼儿喉乳头状瘤组织样本及其相匹配且远离病灶经病理检查证实的正常喉组织样本,并选取人正常喉上皮细胞株和喉乳头状瘤细胞(分为miR-577过表达组、阴性对照组及空白对照组)进行研究。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分别检测30例喉乳头状瘤组织、配对正常喉组织、正常喉上皮细胞和喉乳头状瘤细胞中miR-577相对表达;通过Lipofectamine^(TM)3000脂质体转染试剂盒将miR-577 mimic模拟物转染至喉乳头状瘤细胞构建miR-577过表达细胞系,采用CCK-8法、Tanswell实验分别检测miR-577对喉乳头状瘤细胞增殖、侵袭的影响;采用Western blot检测miR-577对喉乳头状瘤细胞侵袭相关蛋白(MMP-1、MMP-9)表达及Notch通路相关蛋白(Notch、DSL)表达的影响。结果幼儿喉乳头状瘤组织中miR-577相对表达量(0.134±0.026)显著低于正常喉组织(0.823±0.056)(P<0.001);喉乳头状瘤细胞中miR-577相对表达量(0.256±0.026)显著低于正常喉上皮细胞(0.962±0.072)(P<0.001);与阴性对照组相比,转染miR-577 mimic后喉乳头状瘤细胞增殖能力(1.248±0.103 vs 0.902±0.094)和细胞侵袭率(71.016±5.869 vs 42.867±4.795)明显降低(P<0.05);侵袭相关蛋白MMP-1(1.011±0.124 vs 0.417±0.056)、MMP-9(1.012±0.155 vs 0.502±0.058)表达抑制(P<0.01)。喉乳头状瘤细胞中Notch、DSL表达显著上调(P<0.05);转染miR-577 mimic后喉乳头状瘤细胞中Notch通路相关蛋白Notch、DSL表达明显抑制(P<0.05)。共转染miR-577 mimic和pcDNA3.1-Notch后喉乳头状瘤细胞增殖能力和细胞侵袭率较单纯转染miR-577 mimic组明显增加(P<0.05);共转染pcDNA3.1-Notch逆转了miR-577 mimic对喉乳头状瘤细胞增殖、侵袭能力的抑制作用。结论幼儿喉乳头状瘤组织及喉乳头状瘤细胞中miR-577显著低表达,过表达miR-577显著抑制喉乳头状瘤细胞的增殖和侵袭;Notch是miR-577的潜在靶点,miR-577可能通过与Notch的3'UTR区结合进而调控Notch信号通路来抑制喉乳头状瘤细胞的增殖和侵袭。
