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miR-582-5p靶向调控FOXO1对新生大鼠缺血缺氧性脑病神经元损伤的影响
1
作者 颜海峰 吴小红 +2 位作者 林欲庆 霍开明 王莹莹 《天津医药》 CAS 2024年第4期356-361,共6页
目的 探讨微小RNA-582-5p(miR-582-5p)靶向调控叉头框转录因子1(FOXO1)对新生大鼠缺血缺氧性脑病(HIE)神经元损伤的影响。方法 90只新生大鼠按照随机数字表法均分为对照(NC)组、模型(HIE)组、miRNA对照(LV-miRNA-NC)组、miR-582-5p过表... 目的 探讨微小RNA-582-5p(miR-582-5p)靶向调控叉头框转录因子1(FOXO1)对新生大鼠缺血缺氧性脑病(HIE)神经元损伤的影响。方法 90只新生大鼠按照随机数字表法均分为对照(NC)组、模型(HIE)组、miRNA对照(LV-miRNA-NC)组、miR-582-5p过表达(LV-miR-582-5p)组、miR-582-5p过表达+mRNA对照(LV-miR-582-5p+LV-NC)组、miR-582-5p过表达+FOXO1过表达(LV-miR-582-5p+LV-FOXO1)组。除NC组外的各组大鼠建立HIE模型,对大鼠进行神经功能缺损评分,TTC染色测定脑梗死体积,Real-time PCR检测miR-582-5p和FOXO1表达,双萤光素酶报告基因实验检测miR-582-5p和FOXO1靶向关系,HE染色观察海马组织病理变化,TUNEL和Neu N荧光双标共定位检测海马组织神经元凋亡,免疫组化染色检测FOXO1、胱天蛋白酶3(Caspase-3)蛋白表达。结果miR-582-5p和FOXO1具有靶向关系,与NC组比较,HIE组大鼠神经功能缺损评分、脑梗死体积、FOXO1表达、神经元凋亡率、FOXO1、Caspase-3蛋白表达增加,miR-582-5p表达降低,海马组织出现病理损伤(P<0.05);与LVmiRNA-NC组比较,LV-miR-582-5p组大鼠神经功能缺损评分、脑梗死体积、FOXO1表达、神经元凋亡率、FOXO1、Caspase-3蛋白表达降低,miR-582-5p表达增加,海马组织病理损伤好转(P<0.05);LV-FOXO1可以逆转LV-miR-582-5p对于HIE大鼠神经元损伤的保护作用。结论 miR-582-5p可以直接靶向负调控FOXO1表达,减少HIE新生大鼠神经元凋亡,对神经损伤具有保护作用。 展开更多
关键词 缺氧缺血 脑 创伤 神经系统 叉头框蛋白O1 微小RNA-582-5p
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LncRNA NNT-AS1通过miR-582-5p/MCL1对肝癌细胞侵袭和转移的影响
2
作者 孙波 周雷 +4 位作者 周东亚 王小龙 徐超 吕莹 刘犇 《贵州医科大学学报》 CAS 2023年第7期787-793,818,共8页
目的探讨LncRNA NNT-AS1通过miR-582-5p/MCL1轴对肝癌的侵袭和转移的影响。方法培养正常肝L-02细胞和肝癌细胞MHCC97H、LM3、SMCC7721、Huh7、Hep3B,选取肝癌Huh7细胞系,将细胞进行分组与转染;采用qRT-PCR检测各组细胞中NNT-AS1、miR-58... 目的探讨LncRNA NNT-AS1通过miR-582-5p/MCL1轴对肝癌的侵袭和转移的影响。方法培养正常肝L-02细胞和肝癌细胞MHCC97H、LM3、SMCC7721、Huh7、Hep3B,选取肝癌Huh7细胞系,将细胞进行分组与转染;采用qRT-PCR检测各组细胞中NNT-AS1、miR-582-5p表达,WB检测各组细胞MCL1蛋白表达,RIP检测LncRNA NNT-AS1和miR-582-5p的结合情况,双荧光素酶报告基因实验验证miR-582-5p和MCL1靶向关系,Transwell实验检测细胞侵袭和转移能力。结果与正常肝细胞L-02比较,NNT-AS1在肝癌细胞系中高表达,miR-582-5p在肝癌细胞系中低表达;NNT-AS1和miR-582-5p沉默后,细胞中NNT-AS1和miR-582-5p表达显著降低,细胞侵袭和转移能力也明显减弱;LncRNA NNT-AS1可结合吸附miR-582-5p,MCL1是miR-582-5p的下游靶基因、且MCL1在肝癌细胞系中高表达;干扰LncRNA NNT-AS1或过表达miR-582-5p表达可抑制肝癌细胞侵袭和迁移;同时沉默NNT-AS1和过表达miR-582-5p,可显著降低细胞侵袭和迁移能力;干扰MCL1也可抑制肝癌细胞侵袭和迁移能力增强的现象。结论沉默LncRNA NNT-AS1可通过miR-582-5p作用,抑制MCL1表达从而抑制肝癌细胞侵袭和转移。 展开更多
关键词 NNT反义核糖核酸1 微小核糖核酸582-5p 髓细胞白血病1 肝肿瘤 侵袭 转移
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miR-582-5p靶向PDCD10对胃癌细胞迁移、侵袭及凋亡的影响 被引量：3
3
作者 翟宏芳 刘丽丽 +2 位作者 刘爱娟 李青科 胡万宁 《山东医药》 CAS 2020年第28期37-40,44,共5页
目的探讨微小RNA(miR)-582-5p靶向程序性细胞死亡因子10(PDCD10)对胃癌细胞迁移、侵袭、凋亡的影响。方法常规培养人正常胃黏膜上皮细胞株(GES-1)、胃癌细胞系(HGC-27、MKN74、NUGC-4),用qPCR法检测细胞中miR-582-5p表达,筛选miR-582-5... 目的探讨微小RNA(miR)-582-5p靶向程序性细胞死亡因子10(PDCD10)对胃癌细胞迁移、侵袭、凋亡的影响。方法常规培养人正常胃黏膜上皮细胞株(GES-1)、胃癌细胞系(HGC-27、MKN74、NUGC-4),用qPCR法检测细胞中miR-582-5p表达,筛选miR-582-5p表达最低的HGC-27作为实验细胞。将对数生长期的HGC-27随机分为8组,各组采用脂质体转染法分别转染miR-582-5p模拟物(使miR-582-5p过表达)、miR-582-5p抑制剂(使miR-582-5p低表达)、miR-582-5p模拟物阴性对照miR-NC、miR-582-5p抑制剂阴性对照anti-miR-NC、PDCD10小干扰RNA si-PDCD10(使PDCD10低表达)、PDCD10小干扰RNA阴性对照si-NC、PDCD10过表达载体pcDNA-PDCD10(使PDCD10过表达)、过表达载体阴性对照pcDNA-NC。用qPCR法检测细胞内miR-582-5p、PDCD10 mRNA表达,证实转染成功。用Western blotting法检测细胞内PDCD10、活化半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved-caspase-3)、基质金属蛋白酶2(MMP2)、MMP9蛋白表达,用流式细胞术测算细胞凋亡率,用Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭能力,用双荧光素酶报告基因检测法验证miR-582-5p与PDCD10的靶向调控关系。结果与miR-NC组比较,miR-582-5p组Cleaved-caspase-3蛋白相对表达量高,MMP2、MMP9蛋白相对表达量低,细胞凋亡率高,细胞迁移数、侵袭数少(P均<0.05)。与si-NC组比较,Cleaved-caspase-3蛋白相对表达量低,MMP2、MMP9蛋白相对表达量高,细胞凋亡率低,细胞迁移数、侵袭数多(P均<0.05)。miR-582-5p与PDCD10的3′UTR存在靶向结合位点。miR-582-5p与WT-PDCD10报告质粒共转染HGC-27后的荧光素酶活性低于miR-NC与WT-PDCD10报告质粒共转染(P<0.05);miR-582-5p或miR-NC与MUT-PDCD10报告质粒共转染HGC-27后的荧光素酶活性比较差异无统计学意义(P>0.05)。与miR-NC组比较,miR-582-5p组PDCD10蛋白相对表达量低(P<0.05);与anti-miR-NC组比较,anti-miR-582-5p组PDCD10蛋白相对表达量高(P<0.05)。与miR-582-5p+pcDNA-NC组比较,miR-582-5p+pcDNA-PDCD10组Cleaved-caspase-3蛋白相对表达量低,MMP2、MMP9蛋白相对表达量高,细胞凋亡率低,细胞迁移数、侵袭数多(P均<0.05)。结论miR-582-5p可通过靶向抑制PDCD10表达诱导胃癌细胞凋亡,抑制细胞迁移、侵袭。 展开更多
关键词 胃癌 微小RNA-582-5p 程序性细胞死亡因子10 细胞迁移 细胞侵袭 细胞凋亡
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miR-582-5p靶向抑制Rab27a对肺癌细胞生物学行为的影响 被引量：6
4
作者 叶璐 母丹 +2 位作者 杨莉 付波 王敏 《临床肿瘤学杂志》 CAS 北大核心 2019年第2期102-107,共6页
目的探讨microRNA-582-5p(miR-582-5p)在非小细胞肺癌(NSCLC)中表达及其对A549细胞增殖、侵袭的影响,以及对Rab27a基因的靶向调控作用。方法采用实时荧光定量PCR(QPCR)检测33例行手术治疗的NSCLC患者的癌组织、对应癌旁组织以及A549细... 目的探讨microRNA-582-5p(miR-582-5p)在非小细胞肺癌(NSCLC)中表达及其对A549细胞增殖、侵袭的影响,以及对Rab27a基因的靶向调控作用。方法采用实时荧光定量PCR(QPCR)检测33例行手术治疗的NSCLC患者的癌组织、对应癌旁组织以及A549细胞株、人正常支气管肺上皮细胞株BEAS-2B中miR-582-5p的表达水平。采用miR-582-5p inhibitor(anti-miR-582-5p)和miR-582-5p mimics(mim-miR-582-5p)转染A549细胞,另分别转染miRNA inhibitor无关系列(antiNC)和miRNA mimics无关系列(mim-NC)作阴性对照。采用双荧光素酶报告实验验证Rab27a与miR-582-5p的关系。采用MTT法和Transwell小室法检测各组细胞增殖、侵袭能力;采用QPCR和Western blotting检测各组A549细胞中Rab27a mRNA和蛋白水平。结果 NSCLC组织和癌旁组织中miR-582-5p表达水平分别为0. 26±0. 09和0. 83±0. 10; A549细胞株和BEAS-2B细胞株中miR-582-5p表达水平分别为0. 63±0. 08和1. 17±0. 09,差异均有统计学意义(P<0. 05)。anti-miR-582-5p组A549细胞24、48、72、96 h后的增殖率分别为(115. 68±4. 34)%、(130. 48±5. 48)%、(138. 95±5. 55)%、(147. 03±5. 69)%,明显高于anti-NC组; mim-miR-582-5p组A549细胞24、48、72、96 h后的增殖率分别为(91. 31±4. 18)%、(86. 74±3. 23)%、(79. 45±3. 20)%、(75. 22±4. 09)%,明显低于mim-NC组,差异均有统计学意义(P<0. 05)。Transwell小室结果显示,anti-miR-582-5p组A549细胞侵袭数为189±19,明显高于anti-NC组; mim-miR-582-5p组A549细胞侵袭数为55±8,明显低于mim-NC组,差异均有统计学意义(P<0. 05)。miR-582-5p可抑制野生型Rab27a 3’-UTR报告基因载体的荧光素酶活性,而对突变型Rab27a 3’-UTR的荧光素酶活性无影响。anti-miR-582-5p组A549细胞Rab27a mRNA和蛋白表达水平分别为2. 01±0. 29和0. 85±0. 12,高于anti-NC组; mimi-miR-582-5p组A549细胞Rab27a mRNA和蛋白表达水平分别为0. 35±0. 08和0. 21±0. 05,明显低于mim-NC组,差异均有统计学意义(P<0. 05)。结论上调miR-582-5p表达可抑制Rab27a表达,从而抑制肺癌A549细胞增殖、侵袭活性,miR-582-5p有望成为肺癌新的治疗靶点。 展开更多
关键词 非小细胞肺癌 微小RNA miR-582-5p Rab27a 增殖 侵袭
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