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Al_(2)O_(3)载体孔结构优化:提升FeMo/Al_(2)O_(3)催化剂在焦炉煤气加氢脱硫性能
1
作者 王龙龙 秦志峰 +5 位作者 班红艳 李乃珍 杜朕屹 于峰 翟志强 吴琼笑 《化工学报》 EI CSCD 北大核心 2024年第10期3623-3638,共16页
探讨了Al_(2)O_(3)载体孔结构对FeMo/Al_(2)O_(3)预加氢脱硫(HDS)催化剂活性和选择性的影响,采用浸渍法制备了一系列具有不同孔结构的FeMo/Al_(2)O_(3)催化剂,并通过微型固定床技术对其在模拟焦炉煤气中COS、CS_(2)、C_(4)H_(4)S和C_(2)... 探讨了Al_(2)O_(3)载体孔结构对FeMo/Al_(2)O_(3)预加氢脱硫(HDS)催化剂活性和选择性的影响,采用浸渍法制备了一系列具有不同孔结构的FeMo/Al_(2)O_(3)催化剂,并通过微型固定床技术对其在模拟焦炉煤气中COS、CS_(2)、C_(4)H_(4)S和C_(2)H_(4)的HDS活性和选择性进行了系统评价,通过N_(2)吸附-脱附、红外碳硫、XRD、NH_(3)-TPD、H_(2)-TPR、XPS、Raman以及HRTEM等技术对催化剂进行了表征。研究结果表明,Al_(2)O_(3)载体孔结构对催化剂活性相MoS_(2)有显著影响,从而影响加氢脱硫活性和选择性,其中较大孔径的载体更有利于COS和CS_(2)的有效转化,而较小孔径的载体则更倾向于促进C_(4)H_(4)S和C_(2)H_(4)的转化;此外,具有较大孔径的催化剂不仅展现出更低的积炭倾向,还通过提高Mo物种的分散性,有效调控了MoS_(2)片晶的生长尺寸和层数,从而在COS和CS_(2)的加氢脱硫活性上显示了优异性能。研究结果为高效HDS催化剂的设计与开发开辟了新途径。 展开更多
关键词 Al_(2)O_(3)载体 孔结构 FeMo/Al_(2)O_(3)催化剂 焦炉煤气 加氢脱硫
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绣球‘杜丽’AP 3基因克隆与基因编辑载体构建
2
作者 李童 王月莹 赵惠恩 《广西植物》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期257-266,共10页
绣球(Hydrangea macrophylla)是以花序为主要观赏部位的园林植物,多用作切花装饰和景观营造,在亚洲、美洲、欧洲广泛栽培。为探究AP 3基因在绣球花萼形成过程中的功能,加快重瓣绣球新品种培育进程,该研究以绣球‘杜丽’为材料,克隆其MAD... 绣球(Hydrangea macrophylla)是以花序为主要观赏部位的园林植物,多用作切花装饰和景观营造,在亚洲、美洲、欧洲广泛栽培。为探究AP 3基因在绣球花萼形成过程中的功能,加快重瓣绣球新品种培育进程,该研究以绣球‘杜丽’为材料,克隆其MADS-box B类基因HmAP 3,并结合生物信息学方法预测基因功能;根据HmAP 3序列信息,筛选出高特异性编辑靶点并构建CRISPR/Cas9基因编辑载体,通过农杆菌转化法将载体整合到绣球基因组中。结果表明:(1)克隆到1段HmAP 3基因的cDNA序列,其序列全长546 bp,共编码181个氨基酸,测序结果表明其氨基酸序列与参考序列一致性为100%,与拟南芥AtAP3相似度为58.8%。(2)不同属植物AP3氨基酸序列差异较大,在同属不同物种中,AP3蛋白主要结构较为保守,仅在少数基序上存在差异。(3)在HmAP 3中共鉴定到2个高特异性靶点,并成功构建2个单靶点CRISPR/Cas9基因编辑载体。(4)该研究共获得5株基因组内含有Cas 9序列的抗性芽,但其靶点均未突变,在抗性芽中没有检测到Cas9表达。该研究探讨了AP 3基因在重瓣绣球育种中的价值,对绣球的CRISPR/Cas9基因编辑技术进行了初探,为绣球优良品种繁育工作奠定了基础。 展开更多
关键词 绣球 MADS-box家族 AP3 CRISPR/Cas9 载体构建
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溶质载体家族3成员2表达与双硫死亡、铁死亡及肿瘤关系的研究进展
3
作者 马欢 代九菊 +1 位作者 杨艳丽 周祖邦 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期1772-1776,共5页
铁死亡和双硫死亡与多种疾病相关。铁死亡的特征是铁离子和脂质活性氧的异常累积,而双硫死亡则是二硫化物的异常累积。溶质载体家族3成员2(SLC3A2)作为溶质载体家族的一员,不仅参与调控肿瘤细胞的增殖、迁移、侵袭和凋亡,还参与细胞铁... 铁死亡和双硫死亡与多种疾病相关。铁死亡的特征是铁离子和脂质活性氧的异常累积,而双硫死亡则是二硫化物的异常累积。溶质载体家族3成员2(SLC3A2)作为溶质载体家族的一员,不仅参与调控肿瘤细胞的增殖、迁移、侵袭和凋亡,还参与细胞铁死亡和双硫死亡,在肿瘤的发生发展中起关键作用。本文阐述了SLC3A2与双硫死亡、铁死亡和肿瘤关系的研究进展,旨在为癌症靶向治疗提供理论基础。 展开更多
关键词 溶质载体家族3成员2 双硫死亡 铁死亡 肿瘤
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小鼠SGK3真核表达载体的构建及鉴定
4
作者 巴隆 张丽娜 孟峻 《山西医科大学学报》 CAS 2024年第7期849-854,共6页
目的构建含有小鼠血清和糖皮质激素诱导蛋白激酶3(serum and glucocorticoid-induced protein kinase 3,SGK3)基因的真核表达载体pcDNA3.1-MYC-SGK3-mCherry,并观察和验证其在转染细胞HEK293中的表达。方法通过聚合酶链式反应将实验室... 目的构建含有小鼠血清和糖皮质激素诱导蛋白激酶3(serum and glucocorticoid-induced protein kinase 3,SGK3)基因的真核表达载体pcDNA3.1-MYC-SGK3-mCherry,并观察和验证其在转染细胞HEK293中的表达。方法通过聚合酶链式反应将实验室保存的真核表达质粒pcDNA3.1-MYC-SGK3中目的基因SGK3与mCherry融合并扩增出来,然后定向克隆至pcDNA3.1-MYC质粒中,经限制性内切酶消化和测序证实后,通过脂质体法转染HEK293细胞,Western blotting法检测目的基因的蛋白表达情况。结果测序结果与之前预期结果相符,证实pcDNA3.1-MYC-SGK3-mCherry真核表达载体构建成功。Western blotting结果显示,转染pcDNA3.1-MYC-SGK3-mCherry的HEK293细胞出现清晰的阳性反应条带,说明目的片段成功表达。结论pcDNA3.1-MYC-SGK3-mCherry真核表达载体构建成功。 展开更多
关键词 血清和糖皮质激素诱导蛋白激酶3 真核表达载体 聚合酶链式反应 限制性内切酶 HEK293细胞 载体构建
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载体颗粒尺寸对Pd/γ-Al_(2)O_(3)催化氧化苯甲醇性能影响
5
作者 王哲 李晓良 史荣会 《精细化工中间体》 CAS 2024年第5期35-41,共7页
为了探究载体粒径尺寸对Pd/γ-Al_(2)O_(3)催化性能的影响,分别以微米级γ-Al_(2)O_(3)-V和纳米级γ-Al_(2)O_(3)-N为载体,通过浸渍法负载活性组分Pd,然后将制备的Pd/γ-Al_(2)O_(3)用于苯甲醇无溶剂催化氧化研究。实验结果表明:在苯甲... 为了探究载体粒径尺寸对Pd/γ-Al_(2)O_(3)催化性能的影响,分别以微米级γ-Al_(2)O_(3)-V和纳米级γ-Al_(2)O_(3)-N为载体,通过浸渍法负载活性组分Pd,然后将制备的Pd/γ-Al_(2)O_(3)用于苯甲醇无溶剂催化氧化研究。实验结果表明:在苯甲醇催化氧化反应过程中,γ-Al_(2)O_(3)的颗粒尺寸对Pd基催化剂的催化活性具有显著影响,相较于Pd/γ-Al_(2)O_(3)-V(Ea=127.4 kJ/mol),载体颗粒尺寸更小的Pd/γ-Al_(2)O_(3)-N(Ea=82.1 kJ/mol)具有更低的反应活化能,从而具有更高的催化活性。通过X射线衍射(XRD)、N_(2)物理吸附(N_(2)-BET)、电感耦合等离子体原子发射光谱(ICP-AES)、透射电子显微镜(TEM)和X射线光电子能谱(XPS)分析,发现由载体差异引起的较小的Pd纳米颗粒尺寸、较大的孔容和孔径及表面较为丰富的Pd^(0)物种是纳米级Pd/γ-Al_(2)O_(3)-N取得优异催化性能的关键。 展开更多
关键词 Pd/γ-Al_(2)O_(3) 载体颗粒尺寸 苯甲醇 催化氧化 无溶剂
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油-盐柱成型技术制备球形Al_(2)O_(3)载体
6
作者 于秋莹 王永林 +1 位作者 隋宝宽 袁胜华 《石油化工》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期771-776,共6页
以碳化法生产的拟薄水铝石为原料,配制成均匀的酸性溶胶,经油-盐柱成球工艺形成凝胶小球,再经焙烧制得球形Al_(2)O_(3)载体。采用N_(2)吸附-脱附、NH_(3)-TPD、机械强度测试、形貌表征等方法,分别考察了溶胶、盐柱溶液的性质对球形Al_(2... 以碳化法生产的拟薄水铝石为原料,配制成均匀的酸性溶胶,经油-盐柱成球工艺形成凝胶小球,再经焙烧制得球形Al_(2)O_(3)载体。采用N_(2)吸附-脱附、NH_(3)-TPD、机械强度测试、形貌表征等方法,分别考察了溶胶、盐柱溶液的性质对球形Al_(2)O_(3)载体的影响,并利用水蒸气处理过程对载体孔结构进行了优化。实验结果表明,水蒸气处理后球形Al_(2)O_(3)孔体积、比表面积均明显上升,所得球形Al_(2)O_(3)载体机械强度大于50 N,平均孔径为14.2 nm,孔体积为0.60 cm3/g,总酸量为0.189 mmol/g。 展开更多
关键词 球形Al_(2)O_(3) 油-盐柱 拟薄水铝石 催化剂载体
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γ–Al_(2)O_(3)载体的扩孔研究进展
7
作者 席笑迎 刘畅飞 +2 位作者 姚艳敏 白立光 赵晓东 《化学推进剂与高分子材料》 CAS 2024年第3期14-20,共7页
总结了γ–Al_(2)O_(3)载体的常用扩孔方法,主要包括控制前驱物晶粒大小法、模板剂法、添加助剂法或扩孔剂法,以及其他方法,如水热处理法和低温烧结法,并结合具体实例,指出了上述各扩孔方法的优点和存在的局限性,展望了未来制备大孔γ–... 总结了γ–Al_(2)O_(3)载体的常用扩孔方法,主要包括控制前驱物晶粒大小法、模板剂法、添加助剂法或扩孔剂法,以及其他方法,如水热处理法和低温烧结法,并结合具体实例,指出了上述各扩孔方法的优点和存在的局限性,展望了未来制备大孔γ–Al_(2)O_(3)载体的研究方向。 展开更多
关键词 γ–Al_(2)O_(3) 载体 扩孔 制备
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LAMB3重组慢病毒载体的构建、包装和鉴定
8
作者 何小蓉 黄彬彬 吴小末 《西藏医药》 2024年第3期148-150,共3页
目的 构建含有LAMB3基因的慢病毒表达载体,并感染HaCaT细胞,评价重组慢病毒载体提高LAMB3基因及蛋白表达的效果。方法 提取皮肤组织的总RNA,通过反转录方法扩增LAMB3基因,将其连入慢病毒载体pCDH-CMV中,在感受态细胞DH5α中扩增培养,并... 目的 构建含有LAMB3基因的慢病毒表达载体,并感染HaCaT细胞,评价重组慢病毒载体提高LAMB3基因及蛋白表达的效果。方法 提取皮肤组织的总RNA,通过反转录方法扩增LAMB3基因,将其连入慢病毒载体pCDH-CMV中,在感受态细胞DH5α中扩增培养,并进行LAMB3基因的测序鉴定,将重组的慢病毒质粒转染293T细胞,浓缩纯化病毒液,感染HaCaT细胞并提取细胞的总蛋白和总RNA,用qPCR方法检测LAMB3 mRNA在感染病毒的HaCaT细胞中的表达,通过Western blot方法检测LAMB3蛋白在感染病毒的HaCaT细胞中的表达。结果 构建的慢病毒载体pCDH-CMV-LAMB3经测序分析证实基因序列正确。包装后的慢病毒滴度为108PFU/mL。qPCR方法检测到感染病毒的HaCaT细胞中,LAMB3基因在转录水平上有表达,Western blot方法检测到感染病毒的HaCaT细胞中,LAMB3过表达组与空白对照组相比,LAMB3蛋白表达量显著增加,LAMB3蛋白在翻译水平有表达。结论 本研究构建的携带LAMB3基因的重组慢病毒能够感染HaCaT细胞,并使其LAMB3基因及蛋白含量增加。 展开更多
关键词 LAMB3基因 慢病毒载体 克隆 HACAT细胞
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GATA-3小干扰RNA载体对变应性鼻炎小鼠外周血单个核细胞中辅助性T细胞亚群功能的体内调节机制 被引量：1
9
作者 李玉晓 贺铭 +1 位作者 王天蓉 王雨 《中国耳鼻咽喉头颈外科》 CSCD 2023年第10期646-651,共6页
目的 研究RNA干扰(RNA interference,RNAi)介导的GATA-3小干扰RNA载体(si-GATA-3)对变应性鼻炎(AR)小鼠外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)中辅助性T细胞1(T-helper 1,Th1)和Th2功能的调节作用。方法 构建si-G... 目的 研究RNA干扰(RNA interference,RNAi)介导的GATA-3小干扰RNA载体(si-GATA-3)对变应性鼻炎(AR)小鼠外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)中辅助性T细胞1(T-helper 1,Th1)和Th2功能的调节作用。方法 构建si-GATA-3,用卵清蛋白构建BALB/c AR模型,si-GATA-3组、si-NC组(无目标基因小干扰RNA的空白对照组)分别用si-GATA-3和si-NC腹腔注射干预AR小鼠,AR组和正常对照组用等量的生理盐水干预。干预结束抽取其外周血,分离PBMCs和血浆。分别用荧光定量PCR和Western blot技术检测PBMCs中GATA-3和T-bet mRNA及其相应蛋白的表达量;用ELISA技术检测血浆中白细胞介素4(IL-4)和干扰素γ(IFN-γ)的含量。结果 si-GATA-3滴度为5×10^(8)TU/ml。成功制备BALB/C小鼠AR模型。si-GATA-3能明显改善AR小鼠的症状。si-GATA-3组PBMCs中GATA-3 mRNA表达明显低于AR组和si-NC组(P<0.01),AR组和si-NC组明显高于正常对照组(P<0.01)。PBMCs中GATA-3蛋白和血浆中IL-4的表达量与GATA-3 mRNA表达相似。si-GATA-3组PBMCs中T-bet mRNA及其蛋白的相对表达均明显高于AR组和si-NC组(P<0.01),AR组和si-NC组二者均明显低于对照组(P<0.01)。si-GATA-3组血浆中IFN-γ的表达量高于正常对照组(P<0.05);AR组与si-NC组中IFN-γ的表达量均明显高于正常对照组和si-GATA-3组(P<0.01)。结论 si-GATA-3能有效改善AR小鼠症状,下调AR小鼠PBMCs中Th2细胞中GATA-3 mRNA、GATA-3蛋白和IL-4的表达,同时上调Th1细胞中T-bet mRNA和T-bet蛋白的表达,纠正Th2/Th1的免疫失衡。 展开更多
关键词 鼻炎 过敏 RNA干扰 模型 动物 小鼠 GATA-3 T-BET 慢病毒载体
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pEGFP-N3-LPL重组真核表达载体的构建及在Vero细胞中的表达 被引量：3
10
作者 赵佳福 许厚强 +2 位作者 乜玉丽 陈祥 张勇 《西南大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期40-45,共6页
目的:构建贵州白香猪LPL基因与增强型绿色荧光蛋白基因的融合表达载体pEGFP-N3-LPL,转染Vero细胞,观察重组质粒的表达.方法:采用HindⅢ和BamHⅠ两种限制性内切酶获得LPL基因编码区片段和pEGFP-N3线型载体,将目的片段与该载体连接、转化... 目的:构建贵州白香猪LPL基因与增强型绿色荧光蛋白基因的融合表达载体pEGFP-N3-LPL,转染Vero细胞,观察重组质粒的表达.方法:采用HindⅢ和BamHⅠ两种限制性内切酶获得LPL基因编码区片段和pEGFP-N3线型载体,将目的片段与该载体连接、转化、挑取阳性克隆,进行菌落PCR、双酶切及测序鉴定.使用Lipofectamine2000将重组质粒转染Vero细胞,观察细胞中绿色荧光蛋白的表达并对其进行mRNA检测.结果:成功构建重组真核表达载体pEGFP-N3-LPL,经mRNA检测,实验组在1 500bp处出现特异性条带,说明重组载体已在Vero细胞中获得表达.结论:本试验构建的真核细胞表达载体pEGFP-N3-LPL,为进一步阐明LPL基因与肌内脂肪沉积间的生物学作用机制奠定了基础. 展开更多
关键词 脂蛋白酯酶 pegfp-n3 载体 VERO细胞 真核表达 荧光检测
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S100A9真核表达载体pEGFP-N3-S100A9的构建及其对U251细胞生长的影响 被引量：1
11
作者 陈松 程远 +1 位作者 廖鹏 邓金木 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第16期1596-1599,共4页
目的构建S100A9真核表达载体pEGFP-N3-S100A9,观察其对胶质瘤细胞系U251内S100A9基因表达及细胞生长的影响。方法应用RT-PCR和DNA重组技术构建pEGFP-N3-S100A9融合蛋白表达载体,并用双酶切、测序进行鉴定,用脂质体转染胶质瘤细胞系U251... 目的构建S100A9真核表达载体pEGFP-N3-S100A9,观察其对胶质瘤细胞系U251内S100A9基因表达及细胞生长的影响。方法应用RT-PCR和DNA重组技术构建pEGFP-N3-S100A9融合蛋白表达载体,并用双酶切、测序进行鉴定,用脂质体转染胶质瘤细胞系U251细胞。荧光显微镜下动态观察U251细胞绿色荧光的变化;培养24 h后提取转染细胞的总RNA及总蛋白。通过荧光定量PCR(qRT-PCR)观察其mRNA表达情况,Western blot检测其蛋白表达情况,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期分布。结果酶切鉴定与S100A9全长基因长度一致(345 bp);测序证实重组质粒中含有一与GenBank上登录的S100A9基因(NM_002965)序列完全一致的片段,表明成功构建真核表达载体;荧光显微镜下转染U251细胞可见绿色荧光蛋白表达,12 h后逐渐增多,24～48 h达高峰,且稳定表达较长时间;24 h后通过qRT-PCR检测到mRNA表达,Western blot检测到14×103目的蛋白表达(P<0.05),其增殖能力明显增强(P<0.01),且引起细胞G1期减少,S期增加(P<0.05)。结论成功构建真核表达载体pEGFP-N3-S100A9,转染到U251细胞后能有效上调S100A9基因的mRNA及蛋白的表达、促进细胞增殖。 展开更多
关键词 pegfp-n3 S100A9 胶质瘤 基因转染
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关岭牛pEGFP-N_3-UCP3重组真核表达载体的构建
12
作者 代振新 陈伟 +4 位作者 韩雪 许厚强 吴国文 申勇 熊元松 《畜牧与饲料科学》 2018年第7期31-33,共3页
旨在构建不含CMV启动子的p EGFP-N3-UCP3重组真核表达载体。利用PCR技术克隆UCP3基因启动子,扩增不含CMV区的p EGFP-N3载体片段,将UCP3启动子与该载体经连接、转化后,挑取阳性克隆进行PCR鉴定及测序鉴定。结果表明,成功地构建了重组载体... 旨在构建不含CMV启动子的p EGFP-N3-UCP3重组真核表达载体。利用PCR技术克隆UCP3基因启动子,扩增不含CMV区的p EGFP-N3载体片段,将UCP3启动子与该载体经连接、转化后,挑取阳性克隆进行PCR鉴定及测序鉴定。结果表明,成功地构建了重组载体p EGFP-N3-UCP3,为UCP3基因转录调控机制的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 关岭牛 UCP3 pegfp-n3载体
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CXCR4-3’-UTR双荧光素酶报告基因载体的构建及与microRNA-494的靶向作用
13
作者 林海霞 舒丹桦 《现代实用医学》 2023年第11期1405-1408,共4页
目的 构建野生型与突变型CXCR4基因3’-非编码区(3’-UTR)的双荧光素酶报告基因载体,验证microRNA-494 (miR-494)对CXCR4的靶向调控作用。方法 使用生物信息学相关软件预测miR-494与CXCR4之间的靶向关系;利用PCR法扩增CXCR4的目的基因... 目的 构建野生型与突变型CXCR4基因3’-非编码区(3’-UTR)的双荧光素酶报告基因载体,验证microRNA-494 (miR-494)对CXCR4的靶向调控作用。方法 使用生物信息学相关软件预测miR-494与CXCR4之间的靶向关系;利用PCR法扩增CXCR4的目的基因片段构建野生型与突变型CXCR4基因3’-UTR的双荧光素酶报告基因载体;将miR-494模拟物和阴性对照物分别与野生型pMIR-CXCR4-wt-3’-UTR或突变型pMIR-CXCR4-mut-3’-UTR双荧光素酶报告基因载体共同转染NRK-49F细胞,然后进一步检测相对荧光值。结果 成功构建野生型与突变型CXCR4基因3’-UTR的双荧光素酶报告基因载体,荧光结果显示加入miR-494模拟物可使野生型pMIR-CXCR4-wt-3’-UTR的荧光素酶活性降低约52%,但突变型pMIR-CXCR4-mut-3’-UTR的荧光素酶活性与对照组相比无显著变化。结论 初步证实miR-494与CXCR4之间存在靶向调控关系。 展开更多
关键词 CXCR4 3’-非编码区 双荧光素酶报告载体 miR-494
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SLC3A2在慢性阻塞性肺病中的表达及其与炎症的关系
14
作者 武小杰 李伟 +1 位作者 毛莉娜 杨硕 《内科急危重症杂志》 2024年第5期401-403,共3页
目的:探讨溶质转运载体家族3成员2(SLC3A2)在慢性阻塞性肺病(COPD)发生机制中的作用。方法:收集72例COPD稳定期患者纳入COPD组,另选取67例同期健康体检者为对照组。采集2组外周静脉血,通过密度梯度离心和红细胞裂解的方法分离出中性粒细... 目的:探讨溶质转运载体家族3成员2(SLC3A2)在慢性阻塞性肺病(COPD)发生机制中的作用。方法:收集72例COPD稳定期患者纳入COPD组,另选取67例同期健康体检者为对照组。采集2组外周静脉血,通过密度梯度离心和红细胞裂解的方法分离出中性粒细胞,采用蛋白免疫印迹法检测外周血中性粒细胞SLC3A2水平,酶联免疫吸附(ELISA)法检测血浆中白介素(IL)-8水平,同时收集2组的肺功能指标,包括第1秒用力呼气容积(FEV_(1))、用力肺活量(FVC)。分析SLC3A2与IL-8、FEV_(1)/FVC、FEV_(1)%预计值的相关性。结果:COPD组外周血中性粒细胞的SLC3A2及IL-8水平高于对照组(P均<0.01),SLC3A2与IL-8呈正相关(r=0.45,P<0.01),与FEV_(1)/FVC、FEV_(1)%预计值呈负相关(r=-0.42,-0.45,P均<0.01)。结论:SLC3A2可能通过炎症反应参与COPD的发生,SLC3A2有可能成为COPD临床的炎症标志物和治疗的靶点。 展开更多
关键词 慢性阻塞性肺病 溶质转运载体家族3成员2 氨基酸代谢 炎症机制
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神经营养因子3-壳聚糖载体诱导神经干细胞分化为神经元的亚型及其电生理特性 被引量：2
15
作者 张博雅 段红梅 +6 位作者 白天宇 郝飞 郝鹏 赵文 高钰丹 李晓光 杨朝阳 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2023年第25期4020-4027,共8页
背景:前期研究已证实神经营养因子3-壳聚糖载体可支持神经干细胞的存活和增殖,同时可高效诱导神经干细胞向神经元方向分化。目的:观察神经营养因子3-壳聚糖载体对神经元发育进程、发育各阶段电生理特性及发育成熟神经元亚型的影响。方法... 背景:前期研究已证实神经营养因子3-壳聚糖载体可支持神经干细胞的存活和增殖,同时可高效诱导神经干细胞向神经元方向分化。目的:观察神经营养因子3-壳聚糖载体对神经元发育进程、发育各阶段电生理特性及发育成熟神经元亚型的影响。方法:取第3代新生大鼠脊髓神经干细胞,分4组培养:空白对照组加入神经干细胞培养基,壳聚糖组加入含壳聚糖的神经干细胞培养基,NT3组加入含神经营养因子3的神经干细胞培养基,NT3-壳聚糖组加入含神经营养因子3-壳聚糖载体的神经干细胞培养基。利用免疫荧光染色观察神经干细胞发育各阶段标志物表达情况,借助全细胞膜片钳技术评价神经干细胞发育过程中电生理特性的变化情况,利用免疫荧光染色观察神经干细胞分化21 d后中间神经元的亚型。结果与结论:①Nestin、DCX、Tuj1及MAP2免疫荧光染色显示,神经营养因子3-壳聚糖载体维持了神经干细胞池的稳态,并且通过加速神经母细胞的发育进程来促进神经元发育成熟;②全细胞膜片钳记录发育过程中的细胞发现,营养因子神经营养因子3和神经营养因子3-壳聚糖在发育早期对神经干细胞膜功能以及细胞膜上离子通道的发育成熟具有一定的促进作用,但是仅有神经营养因子3-壳聚糖可将这一优势维持到发育中后期,即分化后7-14 d;③免疫荧光染色显示,神经干细胞分化21 d后,NT3-壳聚糖组成熟神经元可表达运动神经元特异性标记物HB9、V1类型中间神经元FOXP1、V2类型中间神经元特异性标记物LHX3,以及调控机械性痛觉感觉中间神经元的特异性标记物VGLUT3;④结果显示,神经营养因子3-壳聚糖载体促进了神经干细胞向神经母细胞的发育,在发育早期对细胞膜功能及细胞膜上的离子通道发育成熟具有一定的促进作用,可诱导发育成熟的神经元亚型多样化。 展开更多
关键词 神经营养因子3 壳聚糖载体 神经干细胞 发育 神经元 膜片钳 分化 离子通道 电生理 中间神经元
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LGALS3BP 3’UTR荧光素酶报告基因载体构建及鉴定 被引量：1
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作者 刘翠华 邓林林 +8 位作者 赵方新 红梅 武建强 张烜 李奕君 温琪 郭冉 刘奕彤 马启豪 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2023年第5期8-14,共7页
目的构建LGALS3BP(lectin,galactoside-binding,soluble,3 binding protein,LGALS3BP)基因3’非编码区(3’-untranslated region,3’UTR)的野生型及突变型荧光素酶报告基因重组载体并进行鉴定,以备进一步研究miRNA对LGALS3BP基因的调控... 目的构建LGALS3BP(lectin,galactoside-binding,soluble,3 binding protein,LGALS3BP)基因3’非编码区(3’-untranslated region,3’UTR)的野生型及突变型荧光素酶报告基因重组载体并进行鉴定,以备进一步研究miRNA对LGALS3BP基因的调控。方法Targetscan软件预测LGALS3BP 3’UTR上的miRNA结合位点;以人肝癌细胞系SMMC-7721基因组DNA为模板,进行PCR扩增,获得野生型LGALS3BP基因3’UTR片段,经双酶切将目的片段定向插入报告基因载体pGL3-Control中,将克隆好的重组载体转化大肠埃希菌DH5α感受态细胞进行扩增,采用菌落PCR及测序监定重组子。设计位点突变型LGALS3BP 3’UTR扩增引物,以构建的野生型LGALS3BP 3’UTR重组质粒为模板,采用重叠PCR及定点突变PCR技术进行扩增分别构建单独位点及双位点突变型重组荧光素酶报告基因载体。结果野生型LGALS3BP 3’UTR重组质粒经菌落PCR鉴定,可见871 bp的目的基因片段,大小与预期相符;测序结果表明,插入序列与LGALS3BP 3’UTR序列完全一致且插入方向正确。Targetscan软件预测到LGALS3BP 3’UTR区有两个感兴趣的miRNA结合位点。突变型LGALS3BP 3’UTR重组质粒测序鉴定结果表明,单独位点及双位点突变型重组质粒中均成功引入结合位点突变。结论成功构建LGALS3BP的3’UTR野生型(pGL3-LGAL-W-3’UTR)、两个单独位点突变型(pGL3-LGAL-M1-3’UTR和pGL3-LGAL-M2-3’UTR)及双位点突变型(pGL3-LGAL-M-3’UTR)重组荧光素酶报告基因载体,为后续研究miRNA对LGALS3BP基因的调控奠定基础。 展开更多
关键词 LGALS3BP 3’UTR 报告基因载体构建 定点突变
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墨兰AP3基因过表达载体构建及遗传转化铁皮石斛
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作者 何玲 孙博 +4 位作者 王义琴 臧睿 陈宇 和凤美 朱永平 《湖北农业科学》 2023年第7期157-162,共6页
为探讨墨兰(Cymbidium sinense)AP3基因在兰花唇瓣中的功能,基于前期从墨兰转录组中得到的AP3基因序列,通过PCR技术构建墨兰AP3基因过表达载体,利用农杆菌EHA105转化铁皮石斛(Dendrobium officinale)原球茎,建立遗传转化体系。经PCR验证... 为探讨墨兰(Cymbidium sinense)AP3基因在兰花唇瓣中的功能,基于前期从墨兰转录组中得到的AP3基因序列,通过PCR技术构建墨兰AP3基因过表达载体,利用农杆菌EHA105转化铁皮石斛(Dendrobium officinale)原球茎,建立遗传转化体系。经PCR验证,20棵抗性苗中获得9棵阳性苗,其阳性苗率达45%,成功将墨兰AP3基因导入铁皮石斛。 展开更多
关键词 墨兰(Cymbidium sinense) AP3基因 过表达载体 铁皮石斛(Dendrobium officinale) 遗传转化
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基于α-Al_(2)O_(3)载体管的新型MXene膜异丙醇脱水性能
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作者 张国春 周志辉 吴红丹 《化工进展》 EI CAS CSCD 北大核心 2023年第10期5381-5389,共9页
二维过渡金属碳(氮)化合物MXene(Ti_(3)C_(2)T_(x))因其亲水性且层间距可调在膜分离领域得到了广泛关注,但层流状MXene膜易从基底上剥离,因而选取合适的基底材料并增加MXene膜与基底材料的黏附性是其工业应用的关键。以大孔α-Al_(2)O_... 二维过渡金属碳(氮)化合物MXene(Ti_(3)C_(2)T_(x))因其亲水性且层间距可调在膜分离领域得到了广泛关注,但层流状MXene膜易从基底上剥离,因而选取合适的基底材料并增加MXene膜与基底材料的黏附性是其工业应用的关键。以大孔α-Al_(2)O_(3)陶瓷管为载体,采用α-Al_(2)O_(3)颗粒和SiO_(2)-ZrO_(2)溶胶对其进行修饰,通过自交联反应制备得到MXene渗透汽化分离膜材料。探究了Ti_(3)C_(2)T_(x)纳米片负载量、异丙醇浓度、运行温度对MXene膜在异丙醇/水体系中渗透汽化分离性能的影响。结果表明:MXene纳米片形成的层状结构有利于阻隔大直径的异丙醇分子通过层间孔道,当MXene纳米片负载量为1.97mg/cm^(2)时,MXene膜在55℃对质量分数为90%的异丙醇/水溶液表现出较高的脱水性能,其渗透侧含水率为95.51%,通量可达485.13g/(m^(2)·h)。基于大孔α-Al_(2)O_(3)载体管的新型MXene膜结构稳定,分离性能良好,在渗透汽化有机溶剂脱水方面具有广阔的应用前景。 展开更多
关键词 二维过渡金属碳(氮)化合物 Ti_(3)C_(2)T_(x)纳米片 α-Al_(2)O_(3)载体管 渗透汽化 异丙醇 分离
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小鼠shRNA-Slfn3重组腺病毒载体的构建及其在EPCs中转染效率的测定
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作者 辛晨 况春燕 刘兴德 《贵州医科大学学报》 CAS 2023年第9期1013-1019,1046,共8页
目的构建小鼠短发夹RNA(shRNA)-Schlafen3(Slfn3)重组腺病毒载体,并检测其在内皮祖细胞(EPCs)中的转染效率。方法采用GenBank基因软件查询小鼠Slfn3基因序列,设计并合成3个siRNA片段及其引物,取腺病毒干扰载体pADV-U6-shRNA-CMV-EGFP,... 目的构建小鼠短发夹RNA(shRNA)-Schlafen3(Slfn3)重组腺病毒载体,并检测其在内皮祖细胞(EPCs)中的转染效率。方法采用GenBank基因软件查询小鼠Slfn3基因序列,设计并合成3个siRNA片段及其引物,取腺病毒干扰载体pADV-U6-shRNA-CMV-EGFP,采用限制性内切酶进行酶切,线性化后连接siRNA片段,获得重组腺病毒载体shRNA-Slfn3,从中筛选阳性克隆抽提质粒,进行DNA测序验证;取对数生长期的人胚胎肾细胞HEK293,采用Admax系统将目的质粒转染至HEK293细胞,获得重组腺病毒shRNA-Slfn3后进行小量扩增及病毒滴度测定;取小鼠脾脏单个核细胞体外培养至对数期EPCs,用前述所得重组腺病毒shRNA-Slfn3对其进行转染48 h,采用绿色荧光蛋白量检测重组腺病毒的转染效率。结果测序验证3组目的质粒构建成功;获得shRNA-Slfn3重组腺病毒,病毒滴度分别为2.37×10^(13)pfu/L、3.16×10^(13)pfu/L及4.74×10^(13)pfu/L;EPCs转染效率为(63.64±2.58)%。结论成功构建了小鼠shRNA-Slfn3重组腺病毒载体,转染小鼠脾源EPCs后的转染效率较高。 展开更多
关键词 内皮祖细胞 基因敲低技术 Slfn3基因 短发夹RNA 载体构建 包装
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牛支持细胞和成纤维细胞体外培养及pEGFP-N3转染 被引量：4
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作者 于娜 杨泽宇 +3 位作者 林旭 李玉龙 赵洵武 张贵学 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期89-94,共6页
试验以新生牛睾丸组织、牛胎儿皮肤组织为材料,进行支持细胞、成纤维细胞的分离、纯化、鉴定及pEGFP-N3载体转染。结果表明,完善犊牛支持细胞、胎牛皮肤成纤维细胞体外培养体系,细胞纯度可达95%。支持细胞在相同密度下较成纤维细胞能更... 试验以新生牛睾丸组织、牛胎儿皮肤组织为材料,进行支持细胞、成纤维细胞的分离、纯化、鉴定及pEGFP-N3载体转染。结果表明,完善犊牛支持细胞、胎牛皮肤成纤维细胞体外培养体系,细胞纯度可达95%。支持细胞在相同密度下较成纤维细胞能更快完成细胞生长指数期,生长迅速。转染pEGFP-N3载体后,初期EGFP均匀充满胞浆,后期EGFP向细胞核聚集,荧光强度明显高于细胞质中。转染后24、48、72 h,成纤维细胞转染效率高于支持细胞,转染pEGFP-N3的成纤维细胞和支持细胞在转染48 h后达到最大转染效率。转染后成纤维细胞的存活时间明显高于支持细胞,这与支持细胞生物学性质有关。 展开更多
关键词 支持细胞 成纤维细胞 体外培养 pegfp-n3载体
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