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水稻OsNCED3基因的RNAi载体构建 被引量:2
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作者 冯光秀 陈惠 《生物学杂志》 CAS CSCD 2012年第1期47-50,58,共5页
水稻OsNCED3基因是水稻抗逆过程中重要的基因之一。以水稻中花10号幼苗为材料,提取基因组DNA。设计引物扩增区段cDNA并引入相应的酶切位点,以基因组DNA作为模板,进行RNAi-OsNCED3顺式和反式目的片段的PCR扩增。将PCR产物连接到pMD19-T... 水稻OsNCED3基因是水稻抗逆过程中重要的基因之一。以水稻中花10号幼苗为材料,提取基因组DNA。设计引物扩增区段cDNA并引入相应的酶切位点,以基因组DNA作为模板,进行RNAi-OsNCED3顺式和反式目的片段的PCR扩增。将PCR产物连接到pMD19-T载体上,经酶切和PCR检测后进行测序。测序结果表明:RNAi-Os-NCED3顺式和反式目的片段均已正确的连接到pMD19-T载体上。然后将RNAi-OsNCED3顺式和反式目的片段通过酶切和连接,连接到含有发夹结构的质粒pFGC5941上。PCR及双酶切结果显示,构建的pFGC5941-OsNCED3即RNAi-OsNCED3载体结构完整。 展开更多
关键词 水稻 RNAI OsNCED3 pfgc5941
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甘蓝型油菜3个AP3重复基因植物反义表达载体的构建及遗传转化
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作者 邓喜 李晓晨 +2 位作者 马欣荣 毛德华 赵云 《四川大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期393-397,共5页
利用pFGC5941构建了甘蓝型油菜3个AP3重复基因的植物反义表达载体pFGC5941-BnAP3-2、pFGC5941-BnAP3-3和pFGC5941-BnAP3-4.采用快速冻融法,将载体导入农杆菌EHA105,转化甘蓝型油菜下胚轴.在5mg/L PPT的MS培养基中筛选,获得反义BnAP3-2... 利用pFGC5941构建了甘蓝型油菜3个AP3重复基因的植物反义表达载体pFGC5941-BnAP3-2、pFGC5941-BnAP3-3和pFGC5941-BnAP3-4.采用快速冻融法,将载体导入农杆菌EHA105,转化甘蓝型油菜下胚轴.在5mg/L PPT的MS培养基中筛选,获得反义BnAP3-2基因的抗性再生植株31株,反义BnAP3-3基因的抗性再生植株20株,反义BnAP3-4基因的抗性再生植株42株.PCR鉴定结果显示,获得BnAP3-2反义的转基因植株12株,BnAP3-3反义的转基因植株7株,BnAP3-4反义的转基因植株16株.半定量PCR分析结果显示,三个外源AP3基因的反义链已在油菜叶片中表达. 展开更多
关键词 BnAP3 pfgc5941 载体构建 遗传转化 反义技术
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