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超声波诱导基因在CHO细胞的高效转移 被引量：2
1
作者 许宁 赵南明 +1 位作者 邹翔 陈伯权 《自然科学进展（国家重点实验室通讯）》 1994年第3期368-370,共3页
1 引言 近年来,我们在国际上首次提出了利用超声波诱导植物细胞基因转移的方法,并取得了一系列的研究成果。最近,我们进一步将超声波法推广应用到哺乳动物细胞的基因转移中。我们选择了CHO细胞作为受体细胞,首先研究了利用超声波法将外... 1 引言 近年来,我们在国际上首次提出了利用超声波诱导植物细胞基因转移的方法,并取得了一系列的研究成果。最近,我们进一步将超声波法推广应用到哺乳动物细胞的基因转移中。我们选择了CHO细胞作为受体细胞,首先研究了利用超声波法将外源荧光分子Calcein导入CHO细胞的最佳物理参数,然后选择适当的参数,进一步将pSV2-dhfr基因导入了CHO-dhfr细胞。外源基因最高转移效率达到2.8×10^(-3)。 展开更多
关键词 超声波 基因转移 CHO细胞 psv2-dhfr基因
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人β干挠素基因在SV40晚期启动子控制下在小鼠骨髓瘤细胞中表达
2
作者 王晓鸣 于曼 +3 位作者 王嘉玺 吴淑华 胡裕文 侯云德 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 1989年第5期399-403,共5页
人成纤维细胞干挠素(Hu-IFN-β)基因的HindⅡ片段,插入载体pSV2-dhfr质粒中SV40晚期启动子(Lp)下游PvuⅡ位点处。用此重组质粒与带有黄嘌呤磷酸核糖转移酶(XGPRT)基因的质粒pSV2-gpt共转染次黄嘌吟核糖转移酶(HGPRT)基因缺陷的小鼠骨髓... 人成纤维细胞干挠素(Hu-IFN-β)基因的HindⅡ片段,插入载体pSV2-dhfr质粒中SV40晚期启动子(Lp)下游PvuⅡ位点处。用此重组质粒与带有黄嘌呤磷酸核糖转移酶(XGPRT)基因的质粒pSV2-gpt共转染次黄嘌吟核糖转移酶(HGPRT)基因缺陷的小鼠骨髓瘤(SP2/0)细胞。在含有霉酚酸和氨基喋呤的选择培基中,筛选出有效地组成性表达的细胞株。在未加氨甲喋呤压力倍增的条件下,Hu-IFN-β抗病毒活性为1275U/10~5细胞,1ml,48小时。 展开更多
关键词 人 β干挠素基因 共转染 重组质粒
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TPO在COH/dhfr-中的表达及生物活性测定
3
作者 陈伟民 王飞 +3 位作者 彭鑫 蔡绮君 胡颖 关艺青 《甘肃医药》 2011年第6期321-325,共5页
目的:研究获得高效表达重组蛋白TPO-His的哺乳动物表达系统稳定细胞株。方法:采用overlap PCR拼接得到带有TPO信号肽的TPO N-端功能区序列;构建重组表达载体pCDNA3.1-TPO-His,然后将其与pSV2-dhfr载体磷酸钙法共转哺乳动物表达系统细胞... 目的:研究获得高效表达重组蛋白TPO-His的哺乳动物表达系统稳定细胞株。方法:采用overlap PCR拼接得到带有TPO信号肽的TPO N-端功能区序列;构建重组表达载体pCDNA3.1-TPO-His,然后将其与pSV2-dhfr载体磷酸钙法共转哺乳动物表达系统细胞系COH/dhfr-,经过G418、MTX及条件培养基多重压力筛选得到高效表达重组蛋白TPO-His的稳定细胞株;通过采用GIEMSA法检测TPO刺激UT-7/EPO-Mpl细胞的分化作用来测试重组蛋白TPO-His的生物活性。结果:经过多重压力筛选获得高效稳定分泌表达目的蛋白的细胞株CHO(dhfr-)/pCDNA3.1-TPO-His,其表达量可达2.8μg/106cells/24h,纯化蛋白具有较高的生物活性。结论:研究获得具有高效分泌表达目的蛋白的稳定细胞株,其表达产物TPO-His具有较高的生物学活性。 展开更多
关键词 TPO 哺乳动物表达系统 COH/dhfr- pCDNA3.1-TPO-His psv2-dhfr GIEMSA UT-7/EPO-Mpl
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红细胞生成素(EPO)在中国仓鼠卵巢细胞(CHO)中稳定表达 被引量：2
4
作者 赵玮 戴长柏 孙茂盛 《云南大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 1999年第3期175-178,共4页
将ＥＰＯｃＤＮＡ分别插入真核表达质粒载体ｐＳＶ２ｄｈｆｒ和ｐｃＤＮＡ３的适当位点，用电脉冲法导入ＣＨＯ细胞，用ＥＬＩＳＡ法检测ＥＰＯ的表达量，用ＴＦ１细胞检测ＥＰＯ表达产物的生物活性．结果表明，用ｐＳＶ２ｄｈｆ... 将ＥＰＯｃＤＮＡ分别插入真核表达质粒载体ｐＳＶ２ｄｈｆｒ和ｐｃＤＮＡ３的适当位点，用电脉冲法导入ＣＨＯ细胞，用ＥＬＩＳＡ法检测ＥＰＯ的表达量，用ＴＦ１细胞检测ＥＰＯ表达产物的生物活性．结果表明，用ｐＳＶ２ｄｈｆｒ作为载体，在抗ＭＴＸ阳性细胞克隆中，获得了表达ＥＰＯ（２５８ｎｇ／ｍＬ培养液）的ＣＨＯ细胞株，并且表达产物具有生物活性．进一步的传代和冻存试验表明。 展开更多
关键词 红细胞生成素 CHO细胞 真核表达 卵巢细胞
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