pCDNA3-AADC真核表达载体的构建及其在原代培养骨骼肌细胞中的表达 被引量：5

1

作者 刘军 肖颂华 +2 位作者 陶恩祥 邢诒刚 梁秀龄 《中国神经精神疾病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期255-257,I001,共4页

目的 将人类神经元性芳香族氨基酸脱羧酶（AADC）基因构建于含CMV启动子的真核表达载体pCD-NA3上,并检测其在原代培养骨骼肌细胞中的表达。方法 采用分子克隆技术将经测序证实的人神经元性AADC基因片段同真核表达载体pCDNA3连接,酶切鉴... 目的 将人类神经元性芳香族氨基酸脱羧酶（AADC）基因构建于含CMV启动子的真核表达载体pCD-NA3上,并检测其在原代培养骨骼肌细胞中的表达。方法 采用分子克隆技术将经测序证实的人神经元性AADC基因片段同真核表达载体pCDNA3连接,酶切鉴定并筛选出正向连接重组体,并采用脂质体转染法将其导入原代培养的骨骼肌细胞,免疫印记检测该基因的表达。结果 酶切证实基因片断正向连接于pCDNA3上,并在原代骨骼肌细胞中获得表达。结论 含人类神经元AADC基因的真核表达重组体可在原代培养的骨骼肌细胞中有效的表达。 展开更多

关键词 pcdna3-AADC真核表达载体 构建 原代培养 骨骼肌细胞 芳香族氨基酸脱羧酶 免疫印记 帕金森病

下载PDF 职称材料

pcDNA3.1(+)/人前脑啡肽原基因真核表达载体的构建 被引量：3

2

作者 李静 杨保仲 +3 位作者 王维 洛珉 聂丽霞 方爱莉 《中国药物与临床》 CAS 2010年第10期1126-1127,共2页

目前慢性疼痛及癌症晚期疼痛的治疗方法仍主要依靠三阶梯药物疗法,三阶梯药物中以外源性镇痛药吗啡为主,其不良反应大,成瘾性高,限制了其大量使用,因此研究新的镇痛药及新的镇痛方法成为最近研究的热点。20世纪50年代以来,人们着力于研... 目前慢性疼痛及癌症晚期疼痛的治疗方法仍主要依靠三阶梯药物疗法,三阶梯药物中以外源性镇痛药吗啡为主,其不良反应大,成瘾性高,限制了其大量使用,因此研究新的镇痛药及新的镇痛方法成为最近研究的热点。20世纪50年代以来,人们着力于研究新的镇痛物质,之后内源性镇痛物质[1]的发现及基因克隆技术[2]的应用为开辟新的镇痛研究奠定了基础。 展开更多

关键词 pcdna3.1(+) 基因真核表达载体 前脑啡肽原 三阶梯药物疗法 内源性镇痛物质 基因克隆技术 镇痛药 治疗方法

下载PDF 职称材料

pcDNA3.1-mAFP真核表达载体的构建及其在293细胞中的表达

3

作者 匡志鹏 谢裕安 +2 位作者 梁安民 罗小玲 吴继宁 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期1059-1061,共3页

目的构建真核表达载体pcDNA3.1-mAFP,观察其在293肿瘤细胞中的表达情况。方法从Hepa1-6小鼠肝癌细胞中提取总RNA,设计特异性引物,通过RT-PCR法扩增小鼠甲胎蛋白(mAFP)基因编码区全长序列,测序确认后,插入到pcDNA3.1真核表达载体中,双酶... 目的构建真核表达载体pcDNA3.1-mAFP,观察其在293肿瘤细胞中的表达情况。方法从Hepa1-6小鼠肝癌细胞中提取总RNA,设计特异性引物,通过RT-PCR法扩增小鼠甲胎蛋白(mAFP)基因编码区全长序列,测序确认后,插入到pcDNA3.1真核表达载体中,双酶切鉴定。用Lipofectamine脂质体将构建的重组载体转染293肿瘤细胞,检测AFP蛋白在293细胞中的表达情况。结果成功克隆了mAFP基因编码区全长序列,构建出重组真核表达载体pcDNA3.1-mAFP,脂质体转染后可检测到mAFP基因在293细胞中的表达。结论该研究成功构建了重组pcDNA3.1-mAFP真核表达载体,为进一步开展原发性肝癌的靶向性基因治疗奠定了基础。 展开更多

关键词 小鼠甲胎蛋白 重组真核表达载体 pcdna3.1 原发性肝癌

下载PDF 职称材料

野生型抑癌基因PTEN真核表达载体的鉴定及其在COS-7细胞株表达产物的鉴定 被引量：2

4

作者 马斌林 徐虓 +1 位作者 库热西.玉努斯 耿中利 《新疆医科大学学报》 CAS 2008年第2期129-132,共4页

目的:电泳并真核细胞鉴定pcDNA3.0-PTEN真核表达质粒。方法:将含有pcDNA3.0-PTEN真核表达质粒的EcoliJM109细胞挑少许于LB液体培养基上,振荡过夜,离心,碱裂解法裂解细菌,参照UNIQ-10柱式质粒抽提试剂盒操作步骤抽提质粒,电泳鉴定,将获得... 目的:电泳并真核细胞鉴定pcDNA3.0-PTEN真核表达质粒。方法:将含有pcDNA3.0-PTEN真核表达质粒的EcoliJM109细胞挑少许于LB液体培养基上,振荡过夜,离心,碱裂解法裂解细菌,参照UNIQ-10柱式质粒抽提试剂盒操作步骤抽提质粒,电泳鉴定,将获得的pcDNA3.0-PTEN真核表达质粒采用脂质体转染法转入COS-7细胞株,传代培养细胞株,West-Blot鉴定PTEN蛋白质的表达。结果:实验得到的pcDNA3.0-PTEN真核表达质粒大小约为6.0kb,质粒浓度为0.080μg/μl。该质粒目的基因在COS-7细胞株表达产物经West-Blot鉴定证实为目的基因表达产物。结论:pcDNA3.0-PTEN真核表达质粒内含有所需目的基因,该真核表达系统能在真核细胞株COS-7表达所需目的基因产物,可以应用该质粒对PTEN基因缺失或杂合性缺失的肿瘤细胞进行试验性治疗。 展开更多

关键词 PTEN抑癌基因 pcdna3.0-pten真核表达载体 COS-7细胞株

下载PDF 职称材料

小鼠T-bet基因真核表达载体的构建 被引量：4

5

作者 檀卫平 麦友刚 +4 位作者 黄嘉凌 刘然义 麦贤弟 黄绍良 黄文林 《广东医学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第10期1332-1334,共3页

目的构建小鼠T—bet基因重组真核表达载体pcDNA3一T—bet,为T—bet基因治疗研究提供有效的生物表达系统。方法采用内切酶切从质粒T—bet/GFP—RV中获得约1.7 kb的小鼠T—betcDNA片段,以单酶切非定向克隆方式与真核表达质粒pcDNA3连接,... 目的构建小鼠T—bet基因重组真核表达载体pcDNA3一T—bet,为T—bet基因治疗研究提供有效的生物表达系统。方法采用内切酶切从质粒T—bet/GFP—RV中获得约1.7 kb的小鼠T—betcDNA片段,以单酶切非定向克隆方式与真核表达质粒pcDNA3连接,构建真核表达载体pcDNA3-T-bet。结果经PCR筛选阳性重组子,双酶切鉴定T—bet基因重组方向,并测序鉴定无错配及插入移位等DNA顺序改变。结论本实验成功构建了小鼠T—bet基因真核表达载体pcDNA3-T-bet。 展开更多

关键词 T-BET基因 真核表达载体peDNA3-T-bet 小鼠 基因真核表达载体 重组真核表达载体 CDNA片段 真核表达质粒 酶切鉴定 pcdna3 阳性重组子

下载PDF 职称材料

人血管生成素1真核表达载体的构建及在兔骨髓间充质干细胞的表达 被引量：4

6

作者 张晔 曾炳芳 +1 位作者 张长青 王建华 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期377-380,共4页

目的　探索构建人血管生成素1( human angiopoietin 1,h Ang- 1)真核表达载体,转染体外培养兔骨髓间充质干细胞( marrow mesenchymal stem cells,MSCs)修复骨缺损的可能性。　方法　基因重组和限制性内切酶酶切构建真核表达载体pc DNA3-... 目的　探索构建人血管生成素1( human angiopoietin 1,h Ang- 1)真核表达载体,转染体外培养兔骨髓间充质干细胞( marrow mesenchymal stem cells,MSCs)修复骨缺损的可能性。　方法　基因重组和限制性内切酶酶切构建真核表达载体pc DNA3- h Ang- 1,经脂质体DOTAP介导质粒转染兔MSCs,G4 18筛选阳性克隆,RT- PCR及免疫印迹杂交检测h Ang- 1m RNA及蛋白表达。　结果　重组真核表达载体pc DNA3- h Ang- 1经限制性内切酶Xho- I和Bam H- I酶切后,电泳显示1.4 kb h Ang- 1目的片段和5 .4 kb pc DNA3载体片段,转染兔MSCs后,RT- PCR检测出目的基因m RNA,免疫印迹杂交检出h Ang- 1的蛋白表达。　结论　构建的真核表达载体pc DNA3- h Ang- 1能在转染的兔MSCs中表达。 展开更多

关键词 骨髓间充质干细胞 人血管生成素 ANGIOPOIETIN 重组真核表达载体 RT-PCR检测 限制性内切酶 兔 MSCs pcdna3 基因mRNA 免疫印迹杂交 蛋白表达 DOTAP RTPCR 体外培养 基因重组 阳性克隆 杂交检测 组织工程 转染 可能性 骨缺损

下载PDF 职称材料

构建不同筛选特性的HBV X基因真核表达载体 被引量：2

7

作者 贺兴鄂 雷建华 +3 位作者 杨旭 王文龙 罗红雨 梁骏 《中西医结合肝病杂志》 CAS 2005年第5期274-276,共3页

目的:构建不同筛选特性的两个HBV X基因真核表达载体。方法:从质粒pEcob6中PCR扩增HBV X全基因,利用pCEP4和pcDNA3.1(+)两者多克隆位点的特点,选用pGEMR○-T Easy Vector构建中间载体pEasy-X,分别酶切后连接特异性片段构建载体pCEP4-X和... 目的:构建不同筛选特性的两个HBV X基因真核表达载体。方法:从质粒pEcob6中PCR扩增HBV X全基因,利用pCEP4和pcDNA3.1(+)两者多克隆位点的特点,选用pGEMR○-T Easy Vector构建中间载体pEasy-X,分别酶切后连接特异性片段构建载体pCEP4-X和pcDNA3.1(+)-X。结果:从质粒pEcob6成功PCR扩增出HBV X全基因并克隆至质粒pEasy-X,酶切、PCR及测序均证实真核表达载体质粒pCEP4-X和pcDNA3.1(+)-X构建成功。结论:具有不同筛选特性的两个HBV X基因真核表达载体业已成功构建。 展开更多

关键词 HBV X基因 真核表达载体 构建 基因真核表达载体 HBVX 筛选 pcdna3.1(+) PCR扩增 载体质粒 特异性片段 多克隆

下载PDF 职称材料

HBeAg真核表达载体的构建及其在中国仓鼠卵巢细胞中的表达

8

作者 杨军 刘妮 +5 位作者 卫阳 靳耀锋 王军宁 康安静 苏宝山 李宗芳 《临床肝胆病杂志》 CAS 2012年第11期845-848,共4页

目的克隆HBeAg基因,构建重组HBeAg真核表达载体,并在中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)中进行表达。方法采用PCR法从HBeAg阳性乙型肝炎患者血清HBV DNA中扩增HBeAg基因,克隆入pcDNA3.1(+)真核表达载体中,构建重组pcDNA-HBeAg真核表达载体,经PC... 目的克隆HBeAg基因,构建重组HBeAg真核表达载体,并在中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)中进行表达。方法采用PCR法从HBeAg阳性乙型肝炎患者血清HBV DNA中扩增HBeAg基因,克隆入pcDNA3.1(+)真核表达载体中,构建重组pcDNA-HBeAg真核表达载体,经PCR、双酶切、测序鉴定后,将其转染入CHO细胞,G418筛选,用PCR、免疫斑点、Western Blot、免疫细胞化学方法检测HBeAg在CHO细胞中的表达。结果成功克隆到HBeAg基因,并构建了重组pcDNA-HBeAg真核表达载体;基因测序证实克隆的HBeAg基因中共有12个位点发生单碱基置换突变(C1819G,A2007T,C2046T,C2061G,G2106A,C2109A,C2146T,T2172C,C2203T,A2235G,G2253A,C2298T),1个位点发生缺失突变(2346 del T);成熟HBeAg蛋白中149位缬氨酸(valine,V)突变为苯丙氨酸(phenylalanine,F)(V149F),在HBeAg蛋白羧基端融合有一段长11个氨基酸的多肽(RLESRGPVZTR)。PCR、免疫斑点、Western Blot和免疫细胞化学方法证实重组pcDNA-HBeAg真核表达载体可在CHO细胞中表达分泌型HBeAg蛋白。结论重组HBeAg真核表达载体的构建和表达为HBeAg的临床诊断和深入研究提供了条件。 展开更多

关键词 肝炎病毒 乙型 肝炎e抗原 乙型 pcdna3 1(+)真核表达载体

下载PDF 职称材料

突变型DNA聚合酶β真核表达载体的构建及其表达

9

作者 赵四敏 陈旭东 +1 位作者 赵国强 董子明 《重庆医学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第17期1716-1718,共3页

目的构建含食管癌突变型DNA聚合酶β基因(DNA polymeraseβ,polβ)的真核表达载体pcDNA4-C-polβ,使其在polβ基因敲除的EC9706细胞中表达。方法根据食管癌突变型polβ基因序列,设计并合成一对特异性引物(引物1、引物2),通过PCR扩增获得... 目的构建含食管癌突变型DNA聚合酶β基因(DNA polymeraseβ,polβ)的真核表达载体pcDNA4-C-polβ,使其在polβ基因敲除的EC9706细胞中表达。方法根据食管癌突变型polβ基因序列,设计并合成一对特异性引物(引物1、引物2),通过PCR扩增获得含BamHⅠ和ApaⅠ的基因序列,将其克隆入T载体,PCR及测序鉴定无误后,将其插入真核表达载体pcD-NA4-C,从而构建了含突变型polβ基因的真核表达载体pcDNA4-C-polβ。将重组质粒以脂质体包裹的方式转染入polβ基因敲除的EC 9706细胞,G418筛选获得稳定转染的细胞株。结果经过PCR筛选及DNA测序鉴定,证实真核表达载体pcDNA4-C-polβ构建成功。筛选后的EC 9706细胞经HislinkTM蛋白纯化试剂盒纯化,仅在39kD位置有一条带,证明蛋白表达及纯化成功。结论成功构建了食管癌突变型polβ基因的真核表达载体pcDNA4-C-polβ,并纯化出polβ蛋白,为进一步研究polβ的功能奠定坚实的基础。 展开更多

关键词 突变型DNA聚合酶β pcdna4-C真核表达载体 EC9706细胞

下载PDF 职称材料

釉成熟蛋白真核表达载体的构建及其在293T细胞中的表达 被引量：2

10

作者 魏亚红 郝建忠 +2 位作者 孙岩 高玉光 官秀梅 《牙体牙髓牙周病学杂志》 CAS 北大核心 2009年第6期338-341,367,共5页

目的:构建釉成熟蛋白真核表达载体pcDNA3.1-Amelotin,并观察其在293T细胞中的表达情况。方法:以出生后6 d的昆明小鼠下颌磨牙中提取的总RNA为模板,设计合成特异性引物,通过RT-PCR法扩增小鼠的釉成熟蛋白[Amelotin(GeneID:71421)],包括... 目的:构建釉成熟蛋白真核表达载体pcDNA3.1-Amelotin,并观察其在293T细胞中的表达情况。方法:以出生后6 d的昆明小鼠下颌磨牙中提取的总RNA为模板,设计合成特异性引物,通过RT-PCR法扩增小鼠的釉成熟蛋白[Amelotin(GeneID:71421)],包括编码区全长在内的部分cDNA序列,克隆到pMD18-T克隆载体,酶切鉴定正确;然后亚克隆至pcDNA3.1真核表达载体中,双酶切鉴定及测序正确。将构建的重组载体磷酸钙法转染293T细胞,检测Amelotin的表达情况。结果:成功克隆了Amelotin基因编码区全长序列;构建出重组真核表达载体pcDNA3.1-Amelotin,磷酸钙法转染后可检测到Amelotin基因在293T细胞中的表达。结论:构建了重组pcDNA3.1-Amelotin真核表达载体,并成功表达,为进一步研究该蛋白的生物学活性奠定了基础。 展开更多

关键词 釉成熟蛋白 重组真核表达载体pcdna3.1 磷酸钙法转染

下载PDF 职称材料

pcDNA3.1-Pax6载体的构建及其对胶质瘤细胞增殖的影响

11

作者 黄涛 彭志宏 黄柏胜 《激光生物学报》 CAS 2015年第6期533-538,共6页

目的:构建pc DNA3.1-Pax6过表达质粒并观察其对胶质瘤U251细胞增殖的影响。方法:以K562细胞c DNA为模版,采用RT-PCR的方法扩增Pax6基因,将扩增产物酶切回收后与同样酶切回收的真核表达载体pc DNA3.1连接、转化,构建pc DNA3.1-Pax6重组质... 目的:构建pc DNA3.1-Pax6过表达质粒并观察其对胶质瘤U251细胞增殖的影响。方法:以K562细胞c DNA为模版,采用RT-PCR的方法扩增Pax6基因,将扩增产物酶切回收后与同样酶切回收的真核表达载体pc DNA3.1连接、转化,构建pc DNA3.1-Pax6重组质粒,再经菌落PCR、酶切及测序鉴定重组质粒;利用脂质体lipofectamine 2000转染重组质粒至U251细胞。Real-time PCR检测Pax6 mRNA的表达水平,Western blot检测PAX6蛋白的表达,MTT法检测U251细胞增殖。结果:PCR扩增获得长度为1 131 bp的阳性产物,经pc DNA3.1真核表达载体克隆、酶切鉴定及序列分析后,证实真核表达质粒pc DNA3.1-Pax6构建成功;Real-time PCR结果显示,Pax6过表达后的U251细胞Pax6 mRNA表达水平明显高于正常对照组;Western blot结果显示,PAX6蛋白表达亦明显高于正常对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);MTT结果显示,与正常对照组细胞比较,转染pc DNA3.1-Pax6组的细胞,细胞增殖能力明显降低,差异亦具有统计学意义(P<0.05)。结论:成功构建人Pax6基因的pc DNA3.1-Pax6重组质粒,过表达Pax6基因抑制U251细胞的增殖。 展开更多

关键词 PAX6基因 pcdna3.1真核表达载体 胶质瘤细胞 细胞增殖

下载PDF 职称材料

人RhoC基因正、反义真核表达载体的构建及对肿瘤增殖的影响 被引量：7

12

作者 石铮 王家兴 +1 位作者 何庆良 曾金华 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第11期1289-1291,共3页

目的构建人RhoC基因正、反义真核表达载体,研究RhoC基因对胆管癌QBC939细胞株增殖的影响。方法应用分子克隆技术,用KpnⅠ和BamHⅠ双限制性内切酶从RhoC基因切下所需目的片段,然后将该片段正、反向定向克隆到真核表达载体pcDNA 3.1/Hyg(+... 目的构建人RhoC基因正、反义真核表达载体,研究RhoC基因对胆管癌QBC939细胞株增殖的影响。方法应用分子克隆技术,用KpnⅠ和BamHⅠ双限制性内切酶从RhoC基因切下所需目的片段,然后将该片段正、反向定向克隆到真核表达载体pcDNA 3.1/Hyg(+)上,构建正、反义RhoC cDNA真核表达载体,以脂质体转染人胆管癌QBC939细胞,检测细胞生长曲线。结果经测序鉴定,将正、反义目的片段成功的连接到pcDNA 3.1/Hyg(+)载体上。结果序列测定证实RhoC基因正、反义真核表达载体成功构建,反义RhoC基因抑制QBC939细胞增殖,正义RhoC基因促进QBC939细胞增殖。结论成功地将RhoC目的片段正、反向插入到pcDNA 3.1/Hyg(+)中,构建了人RhoC正、反义表达真核载体,RhoC基因调控QBC939细胞增殖。 展开更多

关键词 肿瘤 反义寡核苷酸类 增殖 反义真核表达载体 RHOC基因 真核表达载体pcdna3.1 QBC939细胞 肿瘤增殖 pcdna3.1 分子克隆技术

原文传递

IL-8基因真核表达载体的构建及其在OVCAR-3卵巢癌细胞中的表达

13

作者 李万胜 胡洁 +2 位作者 赵娟 魏林 程建新 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 2008年第2期144-147,共4页

目的:构建白细胞介素8(interleukin 8,IL-8)基因真核表达载体,瞬时转染OVCAR-3卵巢癌细胞,为进一步探讨其与肿瘤发生发展关系奠定基础。方法:采用RT-PCR法自健康志愿者外周血单个核细胞扩增IL-8基因,构建pcDNA3.1(+)/IL-8重组质粒;脂质... 目的:构建白细胞介素8(interleukin 8,IL-8)基因真核表达载体,瞬时转染OVCAR-3卵巢癌细胞,为进一步探讨其与肿瘤发生发展关系奠定基础。方法:采用RT-PCR法自健康志愿者外周血单个核细胞扩增IL-8基因,构建pcDNA3.1(+)/IL-8重组质粒;脂质体介导将外源基因转入OVCAR-3卵巢癌细胞,半定量RT-PCR、Western印迹及ELISA法鉴定其mRNA及蛋白瞬时表达后,MTT法检测细胞转染前后生长增殖特性的改变,FCM检测细胞周期的变化。结果:重组质粒双酶切电泳结果显示,相应位置(300 bp,5 400 bp)可见2条清晰特异的DNA条带;DNA测序结果进一步显示,重组质粒中插入的基因片段全长300 bp,编码序列与GenBank报道的基因序列相符,阅读框保持不变;RT-PCR、Western印迹检测及ELISA检测结果显示,转染后OVCAR-3细胞IL-8 mRNA及蛋白表达水平均明显升高(P<0.05);MTT检测结果显示,IL-8转染细胞组转染3 d后的光密度值(D值)显著高于未转染细胞组(P<0.05);FCM分析结果显示,OVCAR-3细胞转染IL-8基因后进入S期的细胞比例显著增高,增殖指数也相应上升,与未转染及空质粒转染组细胞相比,差异显著(P<0.05)。结论:IL-8基因真核表达载体成功构建并瞬时转染OVCAR-3卵巢癌细胞;IL-8可以自分泌方式促进卵巢癌OVCAR-3细胞生长增殖。 展开更多

关键词 白细胞介素8 卵巢肿瘤 pcdna3.1(+)真核表达载体 肿瘤生长增殖

原文传递

包装信号可以被Cre重组酶切除的辅助性腺病毒的构建及鉴定

14

作者 董刚 俞卫锋 +2 位作者 徐学武 吴飞翔 袁扬 《生物技术通讯》 CAS 2010年第4期461-465,共5页

目的:为了探索构建第三代复制依赖性腺病毒载体系统的有效实验方法,利用细菌内重组原理,分别构建了第三代腺病毒生产体系中的辅助性腺病毒和表达Cre重组酶的真核表达载体,并分析了Cre切除辅助病毒包装信号的有效性。方法:通过PCR及酶处... 目的:为了探索构建第三代复制依赖性腺病毒载体系统的有效实验方法,利用细菌内重组原理,分别构建了第三代腺病毒生产体系中的辅助性腺病毒和表达Cre重组酶的真核表达载体,并分析了Cre切除辅助病毒包装信号的有效性。方法:通过PCR及酶处理法依次将2个同向的loxP位点及绿色荧光蛋白表达盒克隆至pShuttle穿梭载体质粒,按照AdEasy系统的标准实验方法产生和扩增辅助病毒;同时构建pcDNA3.1(+)-cre真核表达载体,并用该载体经脂质体法转染HEK293细胞,通过PCR和流式细胞术分析转染细胞内表达的Cre重组酶对随后感染的辅助病毒的包装信号的切除作用。结果:构建的辅助性腺病毒能够在HEK293细胞内扩增,其包装信号可以由细胞内表达的Cre重组酶有效切除。结论:构建了辅助性腺病毒和pcDNA3.1(+)-cre真核表达载体,为第三代腺病毒的生产奠定了实验基础。 展开更多

关键词 第三代腺病毒载体 辅助性腺病毒 AdEasy系统 pcdna3.1真核表达载体 CRE重组酶

下载PDF 职称材料

凋亡素基因在人乳腺癌细胞中的表达及诱导凋亡作用 被引量：1

15

作者 于春梅 罗丽琼 张岂凡 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第7期801-803,共3页

目的构建pcDvp3重组真核表达质粒,并观察凋亡素基因(vp3)在人乳腺癌细胞435中的表达及诱导凋亡作用。方法(1)扩增vp3基因,与pcDNA3.1连接构建pcDvp3重组真核表达载体,并测序;(2)将pcDvp3和pcDNA3.1转染Hela细胞,免疫荧光技术检测凋亡素... 目的构建pcDvp3重组真核表达质粒,并观察凋亡素基因(vp3)在人乳腺癌细胞435中的表达及诱导凋亡作用。方法(1)扩增vp3基因,与pcDNA3.1连接构建pcDvp3重组真核表达载体,并测序;(2)将pcDvp3和pcDNA3.1转染Hela细胞,免疫荧光技术检测凋亡素蛋白表达;(3)将pcDvp3和pcDNA3.1空质粒转染人乳腺癌细胞435和正常细胞,转染48h后用透射电镜、琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测肿瘤细胞的凋亡。结果(1)核酸序列分析证明克隆的vp3基因与文献报道一致,且正确插入载体中,表明真核表达载体pcDvp3构建成功;(2)转染pcDvp3的Hela细胞48h后可见明显的荧光,而pcDNA3.1组未见;(3)电镜可见细胞明显形态改变及凋亡小体形成;电泳见典型梯形条带;流式细胞仪检测出现凋亡峰,于转染48h后达最高,凋亡百分率为14.42%;而转染pcDNA3.1细胞未见上述改变。结论vp3在体内能够表达并有效地诱导人乳腺癌435细胞凋亡。 展开更多

关键词 人乳腺癌细胞 诱导凋亡作用 凋亡素 表达及 pcdna3.1 流式细胞仪检测 重组真核表达载体 Hela细胞 琼脂糖凝胶电泳 VP3基因 真核表达质粒 核酸序列分析 蛋白表达 技术检测 免疫荧光 正常细胞 透射电镜 肿瘤细胞 文献报道

原文传递