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旋毛虫pcDNA3.1/Ts87重组质粒的构建和表达 被引量：2
1
作者 杨雅平 诸欣平 +4 位作者 杨静 张路平 徐旭娜 黄松 Pascal Boireau 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期93-95,共3页
目的 构建和表达旋毛虫重组质粒。方法 PCR法在旋毛虫抗原基因Ts87两端加上合适的酶切位点和KOZAK序列,与真核表达载体pcDNA3.1(+)连接,构建pcDNA3.1/Ts87重组质粒。采用Lipofectamine介导的细胞外源DNA转染法,把重组质粒导入COS7细胞... 目的 构建和表达旋毛虫重组质粒。方法 PCR法在旋毛虫抗原基因Ts87两端加上合适的酶切位点和KOZAK序列,与真核表达载体pcDNA3.1(+)连接,构建pcDNA3.1/Ts87重组质粒。采用Lipofectamine介导的细胞外源DNA转染法,把重组质粒导入COS7细胞。分别用肌肉注射和基因枪免疫小鼠。结果和结论 成功构建pcD-NA3.1/Ts87重组质粒,并在COS7细胞和BALB/c小鼠体内表达。 展开更多
关键词 旋毛虫病 疫苗 pcdna3.1/Ts87重组质粒 细胞外源DNA转染法 基因枪 COS7细胞
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pcDNA3.1(+)-MCP-1和pcDNA3.1(+)-Gro α真核表达质粒的构建及鉴定 被引量：1
2
作者 任玥欣 宋于刚 +5 位作者 陈学清 智发朝 钟世顺 南清振 武金宝 崔忠林 《世界华人消化杂志》 CAS 2004年第11期2623-2626,共4页
目的:构建并鉴定真核表达质粒pcDNA3.1(+)-MCP-1和pcDNA3.1(+)-Groα. 方法:据GeneBank中大鼠MCP-1和GroαcDNA序列设计并合成引物,提取急性胰腺炎模型大鼠总RNA,RT-PCR 扩增,并将扩增产物TA克隆至pGEM-T easy载体,然后分别双酶切pGEM-M... 目的:构建并鉴定真核表达质粒pcDNA3.1(+)-MCP-1和pcDNA3.1(+)-Groα. 方法:据GeneBank中大鼠MCP-1和GroαcDNA序列设计并合成引物,提取急性胰腺炎模型大鼠总RNA,RT-PCR 扩增,并将扩增产物TA克隆至pGEM-T easy载体,然后分别双酶切pGEM-MCP-1和pGEM-Groα回收目的片段再克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+). 结果:pcDNA3.1(+)-MCP-1和pcDNA3.1(+)-Gro α真核表达质粒构建完成后,用限制性内切酶、PCR及DNA序列分析等多种方法进行鉴定,证实其构建成功. 结论:pcDNA3.1(+)-MCP-1和pcDNA3.1(+)-Groα真核表达质粒构建成功,为进一步研究该真核表达质粒的免疫保护效果及制备急性胰腺炎pcDNA3.1(+)-MCP-1和pcDNA3.1(+)-GroαDNA疫苗奠定了基础. 展开更多
关键词 pcdna3.1(+)-MCP-1 pcdna3.1(+)-Gmoα 真核表达质粒 构建 鉴定 急性胰腺炎
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阿尔茨海默病pcDNA3.1/APP595/596质粒的构建研究 被引量：2
3
作者 吴志国 冯莉 肖波 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第14期2146-2149,共4页
目的构建人类阿尔茨海默病淀粉样前体蛋白(APP)真核表达质粒,为深入研究该病发病机制提供基础。方法从原始质粒克隆模板中,利用PCR方法扩增目的基因APP695cDNA,将目的基因和目的载体pcDNA3.1分别酶切;纯化酶切产物后定向连接,并将其转... 目的构建人类阿尔茨海默病淀粉样前体蛋白(APP)真核表达质粒,为深入研究该病发病机制提供基础。方法从原始质粒克隆模板中,利用PCR方法扩增目的基因APP695cDNA,将目的基因和目的载体pcDNA3.1分别酶切;纯化酶切产物后定向连接,并将其转化细菌感受态细胞,对生长出的克隆行PCR鉴定,PCR鉴定为阳性的克隆送测序并行比对分析。结果应用DNAStar软件对阳性克隆测序结果与GenBank中APP基因序列比对,证实原序列中的错义突变G已被突变回C,第4位点碱基定点突变完成。结论成功构建了真核表达质粒pcDNA3.1/APP595/596,为建立阿尔茨海默病转基因细胞模型奠定基础。 展开更多
关键词 阿尔茨海默病 pcdna3.1/APP595/596质粒 淀粉样前体蛋白
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气肿疽pcDNA3.1-CctA质粒在小鼠体内免疫应答的研究 被引量：1
4
作者 陈竞 崔林泽 +4 位作者 齐强 张皓 李成辉 于建华 金鑫 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第21期123-125,共3页
为了检测pcDNA3. 1-CctA质粒的免疫效果,试验将pcDNA3. 1-CctA质粒转染至Vero细胞,48 h后提取细胞蛋白进行Western-blot检测,正确表达气肿疽梭菌细胞毒素A（CctA）基因后用质粒免疫动物,检测特异性抗体免疫球蛋白G2a（IgG2a）、免疫球蛋... 为了检测pcDNA3. 1-CctA质粒的免疫效果,试验将pcDNA3. 1-CctA质粒转染至Vero细胞,48 h后提取细胞蛋白进行Western-blot检测,正确表达气肿疽梭菌细胞毒素A（CctA）基因后用质粒免疫动物,检测特异性抗体免疫球蛋白G2a（IgG2a）、免疫球蛋白G1（IgG1）、白细胞介素-4（IL-4）、γ干扰素（IFN-γ）的表达水平。结果表明：pcDNA3. 1-CctA质粒成功在Vero细胞中表达CctA蛋白;pcDNA3. 1-CctA质粒可有效刺激小鼠的体液免疫及细胞免疫应答,能在一定程度上提高机体的细胞免疫水平。 展开更多
关键词 气肿疽梭菌 pcdna3.1-CctA 小鼠 特异性抗体 表达水平 免疫应答
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pcDNA3.1(+)/ChM-Ⅰ表达质粒的构建及鉴定
5
作者 周连仲 刘冲 +1 位作者 苏玢 王明辉 《医学理论与实践》 2022年第4期544-547,共4页
目的:为了研究软骨调节素Ⅰ的生物学作用,构建pcDNA3.1(+)/ChM-Ⅰ表达质粒。方法:用Trizol法提取大鼠软骨组织总RNA,根据ChM-Ⅰ基因序列(序列号:AF051425)设计特异引物,通过PCR获取ChM-Ⅰ目的基因,分别将ChM-Ⅰ目的基因的PCR产物和pcDNA... 目的:为了研究软骨调节素Ⅰ的生物学作用,构建pcDNA3.1(+)/ChM-Ⅰ表达质粒。方法:用Trizol法提取大鼠软骨组织总RNA,根据ChM-Ⅰ基因序列(序列号:AF051425)设计特异引物,通过PCR获取ChM-Ⅰ目的基因,分别将ChM-Ⅰ目的基因的PCR产物和pcDNA3.1(+)质粒双酶切,并将两者定向连接,构建pcDNA3.1(+)/ChM-Ⅰ质粒,转化感受态细菌,挑取阳性单克隆并扩增,酶切鉴定阳性克隆,并对插入的ChM-Ⅰ片段进行测序。结果:结果显示与ChM-Ⅰ基因长度相符,序列无误,且读码框正确。结论:成功构建pcDNA3.1(+)/ChM-Ⅰ表达质粒,为进一步研究ChM-Ⅰ的生物学作用打下基础。 展开更多
关键词 软骨调节素Ⅰ pcdna3.1(+)质粒 肿瘤治疗
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真核表达质粒pcDNA3.1a-FGFR1构建及意义
6
作者 王笑 严金川 龚杰 《江苏大学学报（医学版）》 CAS 2011年第4期333-336,共4页
目的:构建真核表达质粒pcDNA3.1a-FGFR1。方法:通过PCR扩增FGFR1目的片段,双酶切纯化PCR产物及pcDNA3.1a,将扩增的FGFR1基因片段插入pcDNA3.1a线性质粒,即构建成pcDNA3.1a-FGFR1真核表达质粒,将质粒转化感受态DH5α菌株,筛选阳性克隆行... 目的:构建真核表达质粒pcDNA3.1a-FGFR1。方法:通过PCR扩增FGFR1目的片段,双酶切纯化PCR产物及pcDNA3.1a,将扩增的FGFR1基因片段插入pcDNA3.1a线性质粒,即构建成pcDNA3.1a-FGFR1真核表达质粒,将质粒转化感受态DH5α菌株,筛选阳性克隆行双酶切鉴定及测序鉴定。结果:酶切及测序结果表明pcD-NA3.1a-FGFR1真核表达质粒构建成功。结论:pcDNA3.1a-FGFR1真核表达质粒构建成功,为下一步对心血管疾病研究奠定了一定的实验基础。 展开更多
关键词 碱性成纤维细胞生长因子1型受体 pcdna3.1a载体 真核表达质粒 心血管疾病
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质粒pcDNA3.1-IL-24的制备和纯化
7
作者 韩依辰 殷玉和 +2 位作者 孙博 刘新涛 吴丛梅 《长春工业大学学报》 CAS 2010年第1期81-84,共4页
探索基因治疗用质粒pcDNA3.1-IL-24的规模化制备和纯化工艺。碱性裂解提取质粒后,以异丙醇和LiCl沉淀法去除大分子RNA。然后,使用DEAE Sepharose FF离子交换层析去除染色体DNA、小分子RNA、蛋白质等杂质。经本工艺纯化的质粒pcDNA3.1-IL... 探索基因治疗用质粒pcDNA3.1-IL-24的规模化制备和纯化工艺。碱性裂解提取质粒后,以异丙醇和LiCl沉淀法去除大分子RNA。然后,使用DEAE Sepharose FF离子交换层析去除染色体DNA、小分子RNA、蛋白质等杂质。经本工艺纯化的质粒pcDNA3.1-IL-24浓度为727μg/mL,纯度为1.87,蛋白质含量为0.007μg/mL质粒DNA,未检测到RNA、抗生素残留。此工艺避免使用动物源性酶类及有毒试剂,有效去除质粒DNA制备过程中产生的杂质,可实现药剂水平质粒DNA的规模制备。 展开更多
关键词 pcdna3.1-IL-24 纯化 质量检测
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质粒pcDNA3.1-asHpa的构建及意义
8
作者 阮绪芝 黄立英 +1 位作者 李瑞明 陈霞平 《陕西医学杂志》 CAS 北大核心 2005年第2期138-140,共3页
目的 :构建乙酰肝素酶信号密码的反义基因真核表达载体 ,探索恶性肿瘤基因治疗的新途径。方法 :以质粒 pc DNA3.1为载体 ,将乙酰肝素酶信号密码的 DNA片段反向插入其多克隆位点得到反义乙酰肝素酶信号密码真核表达载体 ( pc DNA3.1 - as... 目的 :构建乙酰肝素酶信号密码的反义基因真核表达载体 ,探索恶性肿瘤基因治疗的新途径。方法 :以质粒 pc DNA3.1为载体 ,将乙酰肝素酶信号密码的 DNA片段反向插入其多克隆位点得到反义乙酰肝素酶信号密码真核表达载体 ( pc DNA3.1 - as Hpa)。结果 :经过 PCR扩增鉴定、电泳证实获得的重组基因的大小和插入方向正确。结论 :成功的构建了乙酰肝素酶信号密码的反义基因真核表达载体 。 展开更多
关键词 pcdna3 乙酰肝素酶 反义基因 质粒 治疗 瘤基因 真核表达载体 DNA片段 克隆 电泳
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真核表达质粒pcDNA3.1-asHpa的构建及意义
9
作者 阮绪芝 黄立英 +1 位作者 李瑞明 陈霞萍 《郧阳医学院学报》 2004年第3期135-137,共3页
目的 :构建乙酰肝素酶信号密码的反义基因真核表达载体 ,探索恶性肿瘤基因治疗的新途径。方法 :以质粒pcDNA3.1为载体 ,将乙酰肝素酶信号密码的DNA片段反向插入其多克隆位点得到反义乙酰肝素酶信号密码真核表达载体 (pcDNA3.1-asHpa)。... 目的 :构建乙酰肝素酶信号密码的反义基因真核表达载体 ,探索恶性肿瘤基因治疗的新途径。方法 :以质粒pcDNA3.1为载体 ,将乙酰肝素酶信号密码的DNA片段反向插入其多克隆位点得到反义乙酰肝素酶信号密码真核表达载体 (pcDNA3.1-asHpa)。 结果 :经过PCR扩增鉴定、电泳证实获得的重组基因插入方向和插入序列大小正确。结论 :成功的构建了乙酰肝素酶信号密码的反义基因真核表达载体 。 展开更多
关键词 真核表达质粒 pcdna3.1-asHpa 乙酰肝素酶 信号密码 反义基因 恶性肿瘤 基因治疗
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波形蛋白过表达质粒pcDNA3.1b-Vim的构建及鉴定
10
作者 邵晓婷 施倩雯 王凯旋 《齐齐哈尔医学院学报》 2019年第12期1453-1455,共3页
目的以波形蛋白(vimentin)基因为靶基因,构建波形蛋白过表达质粒pc DNA3.1b-Vim。方法在PC12H细胞中抽提RNA,进行逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR),得到c DNA,设计引物将目的基因扩增并进行胶回收,将空载质粒pc DNA3.1b与目的基因片段进行... 目的以波形蛋白(vimentin)基因为靶基因,构建波形蛋白过表达质粒pc DNA3.1b-Vim。方法在PC12H细胞中抽提RNA,进行逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR),得到c DNA,设计引物将目的基因扩增并进行胶回收,将空载质粒pc DNA3.1b与目的基因片段进行双酶切(分别为EcoRI/Xba I)、连接,构建重组过表达质粒,转化到Top10感受态细胞,经氨苄青霉素筛选挑取阳性克隆,扩大培养,提取质粒,凝胶电泳鉴定并进行测序分析。结果凝胶电泳鉴定及DNA测序分析显示重组质粒pc DNA3.1b-Vim构建成功。结论成功构建波形蛋白过表达质粒pc DNA3.1b-Vim,为研究波形蛋白的生物学功能打下基础。 展开更多
关键词 波形蛋白 pcdna3.1b质粒
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PcDNA3.1(+)/CYP11B2真核表达质粒的构建及其在NCI-H295R细胞中的表达 被引量：1
11
作者 蔡辉 黄文利 孙朝辉 《中国现代医药杂志》 2019年第9期21-25,共5页
目的构建人醛固酮合成酶基因(CYP11B2)的真核表达质粒,并在人肾上腺上皮细胞(NCI-H295R)中表达,为下一步定点突变研究奠定基础。方法从人的肾上腺组织中提取总的RNA,采用RT-PCR扩增法扩增人的CYP11B2全长cDNA并克隆到PMD18-T载体中,然... 目的构建人醛固酮合成酶基因(CYP11B2)的真核表达质粒,并在人肾上腺上皮细胞(NCI-H295R)中表达,为下一步定点突变研究奠定基础。方法从人的肾上腺组织中提取总的RNA,采用RT-PCR扩增法扩增人的CYP11B2全长cDNA并克隆到PMD18-T载体中,然后再亚克隆于PcDNA3.1(+)真核表达载体,通过菌液PCR和酶切鉴定重组真核表达质粒,并以DNA测序证实。利用阳离子脂质体介导体外转染技术瞬时转染NCI-H295R,RT-PCR和放射免疫法(RIA)检测CYP11B2基因的表达。结果菌液PCR扩增和酶切证实真核表达质粒构建成功,测序表明CYP11B2基因cDNA全长(1 509bp)和GenBank上公布的序列(D13752)相比较,存在一个碱基差异A3323G,这个变异使得第173位的赖氨酸变为精氨酸,核苷酸序列的同源性为99.9%,氨基酸序列的同源性为99.8%。真核表达质粒转染人肾上腺上皮细胞后CYP11B2 mRNA表达增加,细胞上清中的醛固酮含量显著增加。结论①通过查阅国外SNP数据库得知K173R为一个SNP位点,编号为rs4539。②成功构建了人CYP11B2基因的真核表达质粒,阳离子脂质体是NCI-H295R有效的体外转染体系,本实验为进一步研究该基因的结构与功能关系奠定了基础。 展开更多
关键词 pcdna3.1(+)/CYP11B2 NCI-H295R 转染
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重组质粒PcDNA3.1-P30-P22-CTXA_2/B在Hela细胞中表达的研究
12
作者 江渊 古钦民 《热带病与寄生虫学》 2004年第4期202-204,F003,共4页
目的观察重组质粒 pcDNA3.1-P30-P22-CTXA_2/B 在 Hela 细胞中的表达情况,并检测其表达的融合蛋白 P30-P22-CTXA_2/B 免疫学活性。方法脂质体介导重组真核表达质粒 pcDNA3.1-P30-P22-CTXA_2/B 转染 Hela 细胞,G418筛选稳定转染的细胞株... 目的观察重组质粒 pcDNA3.1-P30-P22-CTXA_2/B 在 Hela 细胞中的表达情况,并检测其表达的融合蛋白 P30-P22-CTXA_2/B 免疫学活性。方法脂质体介导重组真核表达质粒 pcDNA3.1-P30-P22-CTXA_2/B 转染 Hela 细胞,G418筛选稳定转染的细胞株,收集蛋白行 SDS-PAGE 和 Westem-Blot 分析,检测融合蛋白的免疫学活性。结果经重组质粒 pcDNA3.1-P30-P22-CTXA_2/B 稳定转染的 Hela 细胞表达了分子量约64KD 的融合蛋白,经 Western-Blot 检测证实该融合蛋白具有 P30免疫原性。结论在HeLa 细胞中成功表达了具有 P30免疫原性的融合蛋白 P30-P22-CTXA_2/B,为下一步动物实验奠定了基础。 展开更多
关键词 HELA细胞 A2/B 重组质粒 pcdna3 表达的研究 pcdna3 WESTEM 融合蛋白 免疫学活性 真核表达质粒 BLOT检测 HELA细胞 稳定转染 免疫原性 脂质体介导 P30 表达情况 细胞表达 动物实验 CTX P22 细胞株 分子量
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PcDNA3.1/hTM质粒对真核细胞转染表达的实验研究
13
作者 乔正荣 俞慎林 +1 位作者 戴毅 郭颖 《中国普通外科杂志》 CAS CSCD 2006年第12期917-919,共3页
目的探讨含有人血栓调节蛋白(hTM)基因的真核表达质粒pcDNA 3.1/hTM转染脐静脉内皮细胞(HUVECs)的抗凝效应。方法由阳离子脂质体介导将pcDNA 3.1/hTM质粒转入内皮细胞中,以RT-PCR法检测hTMmRNA的表达;免疫组化法检测hTM分子的表达。结... 目的探讨含有人血栓调节蛋白(hTM)基因的真核表达质粒pcDNA 3.1/hTM转染脐静脉内皮细胞(HUVECs)的抗凝效应。方法由阳离子脂质体介导将pcDNA 3.1/hTM质粒转入内皮细胞中,以RT-PCR法检测hTMmRNA的表达;免疫组化法检测hTM分子的表达。结果转染重组质粒的HUVECs表达的hTMmRNA约为载体质粒组及未转染组的1.7倍。免疫组化显示有平均1 0%的HUVECs获得转染,阳性细胞较阴性细胞hTM的表达强度有明显提高。结论pcDNA 3.1/hTM质粒能被导入HUVECs中表达,而且外源性hTM分子具有完全的抗凝生物学活性。 展开更多
关键词 pcdna3.1/hTM质粒 真核细胞 基因表达 转染 血栓形成/治疗
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hGPR177/PCDNA3.1(+)重组质粒的构建及其在A549肺癌细胞中的表达
14
作者 林贯川 《广东医学院学报》 2012年第5期477-481,共5页
目的构建hGPR177/PCDNA3.1(+)重组质粒,并在A549肺癌细胞中表达hGPR177蛋白。方法利用生物分析软件DNAMAN6.0选取合适的穿梭载体PCDNA3.1(+)和酶切位点。用质粒提取试剂盒对穿梭载体PCDNA3.1(+)及含有hGPR177基因pReceive-B04质粒进行抽... 目的构建hGPR177/PCDNA3.1(+)重组质粒,并在A549肺癌细胞中表达hGPR177蛋白。方法利用生物分析软件DNAMAN6.0选取合适的穿梭载体PCDNA3.1(+)和酶切位点。用质粒提取试剂盒对穿梭载体PCDNA3.1(+)及含有hGPR177基因pReceive-B04质粒进行抽提,并对其进行双酶切。使用DNA连接酶把hGPR177基因与PCDNA3.1(+)酶切片段连接,重新构建hGPR177/PCDNA3.1(+)重组质粒。将重组质粒通过电转的方式转导进A549肺癌细胞。运用细胞培养技术,培养已电转hGPR177/PCDNA3.1(+)重组质粒的A549肺癌细胞。结果利用0.8%琼脂糖凝胶电泳检测hGPR177/PCDNA3.1(+)重组质粒的质量为6999bp。经过机械破碎后获取细胞提取物,电泳鉴定出现GPR177蛋白带。结论成功构建了hGPR177/PCDNA3.1(+)重组质粒,并在A549肺癌细胞表达系统中表达出人GPR177蛋白。 展开更多
关键词 人GPR177蛋白 hGPR177 pcdna3 1(+)重组质粒 A549肺癌细胞 蛋白表达
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pcDNA3.1(+)-NPM1真核表达质粒构建
15
作者 孟倩 雷婷 张曼 《标记免疫分析与临床》 CAS 2018年第4期560-564,共5页
目的构建pc DNA3.1(+)-NPM1真核表达质粒,体外转染人膀胱移行细胞癌pumc-91细胞并观察其表达情况。方法设计引物,采用PCR扩增核仁磷蛋白1(Nucleophosmin,npm1)基因编码序列;运用基因重组方法对其进行双酶切,插入pc DNA3.1(+)载体,经菌液... 目的构建pc DNA3.1(+)-NPM1真核表达质粒,体外转染人膀胱移行细胞癌pumc-91细胞并观察其表达情况。方法设计引物,采用PCR扩增核仁磷蛋白1(Nucleophosmin,npm1)基因编码序列;运用基因重组方法对其进行双酶切,插入pc DNA3.1(+)载体,经菌液PCR、测序对重组质粒进行鉴定。将成功构建的质粒经脂质体介导转染至pumc-91细胞,Western blot验证蛋白表达情况。结果经菌液PCR、测序鉴定表明成功构建pc DNA3.1(+)-NPM1质粒,将成功构建的质粒转染至pumc-91细胞,Western blot证实转染pc DNA3.1(+)-NPM1表达质粒的pumc-91细胞npm1蛋白过表达。结论成功构建pc DNA3.1(+)-NPM1重组质粒,为进一步研究NPM1蛋白的功能奠定基础。 展开更多
关键词 核仁磷蛋白1 质粒构建 pcdna3.1(+)
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蛛网膜下腔注射pcDNA3.1(+)-hPPE对大鼠神经病理性痛的镇痛效应 被引量：12
16
作者 徐玉英 张宏伟 +2 位作者 赵青赞 任秀花 臧卫东 《解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期218-221,262,共5页
目的:观察蛛网膜下腔注射重组质粒pcDNA3.1(+)-hPPE对大鼠神经痛的镇痛作用。方法:SD大鼠随机分为坐骨神经慢性压迫(CCI)组、CCI假手术组、实验组和空质粒组。CCI组和CCI假手术组,用于观察疼痛持续时间;实验组和空质粒组分别于CCI术后... 目的:观察蛛网膜下腔注射重组质粒pcDNA3.1(+)-hPPE对大鼠神经痛的镇痛作用。方法:SD大鼠随机分为坐骨神经慢性压迫(CCI)组、CCI假手术组、实验组和空质粒组。CCI组和CCI假手术组,用于观察疼痛持续时间;实验组和空质粒组分别于CCI术后第15天蛛网膜下腔注射重组质粒pcDNA3.1(+)-hPPE和空质粒pcDNA3.1(+)。测定各组注射质粒前后CCI模型鼠双后肢热痛阈(PWTL),观察纳洛酮对镇痛效应的影响,用放射免疫法检测脑脊液灌流液中脑啡肽(L-ENK)的含量,同时采用免疫组织化学方法测定两组大鼠脊髓背角N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体2B亚基(NR2B)表达的变化。结果:CCI术后7～33d,术侧PWTL明显低于对照侧。空质粒组注射前后热痛阈未见明显变化;与空质粒组相比,实验组大鼠蛛网膜下腔注射重组质粒pcDNA3.1(+)-hPPE后的第3天产生明显的抗伤害效应(PTWL升高),持续镇痛长达18d,且镇痛效应能被纳洛酮翻转。实验组脑脊液灌流液L-ENK含量显著高于空质粒组。与空质粒组比较,实验组大鼠脊髓背角NR2B阳性蛋白表达明显受到抑制。结论:蛛网膜下腔注射重组质粒pcDNA3.1(+)-hPPE能够减轻大鼠神经病理性疼痛的热痛敏行为。 展开更多
关键词 神经病理性疼痛 蛛网膜下腔注射 脑啡肽 NMDA受体2B亚单位 重组质粒pcdna3.1(+)-hPPE
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pcDNA3.1-Egr.1p-p16基因联合放射治疗对裸鼠肿瘤的作用 被引量：3
17
作者 马红兵 王西京 +7 位作者 胡海涛 狄政莉 夏辉 王铮 李琤 韩志楷 马洁 吴丛梅 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期7-10,15,共5页
目的:探讨pcDNA3.1 Egr.1p p16基因联合放射治疗移植人胰腺癌细胞JF 305裸鼠的抗肿瘤作用的 适宜照射剂量和质粒注入量。方法:不同剂量X射线照射(2,10,20Gy)及瘤内不同量脂质体包裹的pcDNA3.1 Egr.1p p16质粒(10,20,30μg)注入接种... 目的:探讨pcDNA3.1 Egr.1p p16基因联合放射治疗移植人胰腺癌细胞JF 305裸鼠的抗肿瘤作用的 适宜照射剂量和质粒注入量。方法:不同剂量X射线照射(2,10,20Gy)及瘤内不同量脂质体包裹的pcDNA3.1 Egr.1p p16质粒(10,20,30μg)注入接种JF305胰腺癌细胞的裸鼠体内,测定各组裸鼠体积以观察各种处理抑瘤效 应的差异,并用RT PCR检测放射治疗后48h各组肿瘤局部p16mRNA水平。结果:质粒注入后接受20GyX射线 照射组照射后4～28d,肿瘤生长速率明显低于2Gy和10Gy照射组(P<0.05)。质粒注入量为20μg或30μg的 联合治疗组照射后4～28d,肿瘤生长速率明显低于注入量为10μg的联合治疗组(P<0.05)。单纯接种 pcDNA3.1 Egr.1p p16质粒组和接种pcDNA3.1 Egr.1p p16质粒照射组小鼠的肿瘤组织内有p16mRNA表达,且 pcDNA3.1 Egr.1p p16质粒照射组的p16mRNA水平明显高于单纯pcDNA3.1 Egr.1p p16质粒组(P<0.05)。结 论:pcDNA3.1 Egr.1p p16基因联合放射治疗小鼠体内抗肿瘤作用的适宜射线照射剂量为20Gy,质粒注入量为20 μg;pcDNA3.1 Egr.1p p16基因联合放射治疗的抗肿瘤作用明显优于单纯放射治疗或单纯基因治疗,这可能与辐射 激活Egr.1p基因后增强抑瘤基因p16的表达有关。 展开更多
关键词 pcdna3.1-Egr.1p-p16重组质粒 基因联合放射治疗 X射线 抗肿瘤作用 剂量 质粒注入量
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重组体pcDNA3.1(+)-tyr的构建及在小鼠NIH3T3细胞中的表达 被引量：2
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作者 吉琼梅 朱振宇 +4 位作者 张海涛 李秀英 岳滔 李茜 马涧泉 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期358-362,共5页
[目的]克隆酪氨酸酶基因(tyr),构建pcDNA3.1(+)-tyr真核表达重组体,并导入NIH3T3细胞表达。[方法]用RT-PCR法从小鼠B16黑色素瘤细胞中克隆tyr全长cDNA片段,利用DNA重组技术将其定向插入真核表达质粒pcDNA3.1(+)的T7启动子下游,并用脂质... [目的]克隆酪氨酸酶基因(tyr),构建pcDNA3.1(+)-tyr真核表达重组体,并导入NIH3T3细胞表达。[方法]用RT-PCR法从小鼠B16黑色素瘤细胞中克隆tyr全长cDNA片段,利用DNA重组技术将其定向插入真核表达质粒pcDNA3.1(+)的T7启动子下游,并用脂质体法导入NIH3T3细胞,RT-PCR,酪氨酸酶活性测定及多巴染色法检测tyr的表达。[结果]成功克隆1.74kb的全长tyr cDNA片段,经测序证实与GenBank所报道的序列完全一致,tyr准确克隆入pcDNA3.1(+)的多克隆位点,RT-PCR及酪氨酸酶活性测定等方法检测到转染了重组体的NIH3T3细胞中有tyr的表达。[结论]本实验成功构建了pcDNA3.1(+)-tyr真核表达重组体,并成功导入NIH3T3细胞中表达。 展开更多
关键词 黑色素瘤 酪氨酸酶基因 基因表达 pcdna3.1(+)质粒 RT-PCR法
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pcDNA3.1/hTSHR真核表达载体的构建及其在COS-7细胞中的表达 被引量：6
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作者 詹升华 张徽 刘纯 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期390-393,共4页
目的 :构建pcDNA3.1(+)人促甲状腺激素受体 (hTSHR)基因真核表达载体 ,并在COS 7细胞中进行表达。方法 :以限制性内切酶EcoRI和XbaI双酶切pBluescriptSK(- ) /hTSHR ,获得hTSHRcDNA的全长片段 ,在以低熔点琼脂糖回收纯化后 ,定向插入真... 目的 :构建pcDNA3.1(+)人促甲状腺激素受体 (hTSHR)基因真核表达载体 ,并在COS 7细胞中进行表达。方法 :以限制性内切酶EcoRI和XbaI双酶切pBluescriptSK(- ) /hTSHR ,获得hTSHRcDNA的全长片段 ,在以低熔点琼脂糖回收纯化后 ,定向插入真核表达载体pcDNA3.1(+)的多克隆酶切位点中 ,构建重组体pcDNA3.1/hTSHR ,进行酶切、PCR及测序鉴定。通过脂质体介导 ,转染COS 7细胞进行瞬时表达 ,并用RT PCR和免疫细胞化学染色法检测hTSHR的表达。结果 :双酶切pBluescriptSK(- ) /hTSHR得到约 2 70 0bp含TSHR全长cD NA的片段 ,同预期片段的大小相符。所构建的pcDNA3.1/hT SHR经双酶切及PCR鉴定同预期大小相符 ;测序结果与Gen Bank中收录的hTSHR全长序列一致 ,表明真核表达质粒构建正确。以脂质体转染COS 7细胞后 ,用RT PCR和免疫细胞化学染色法检测表明 ,细胞可表达hTSHR。结论 :成功地构建真核重组表达质粒pcDNA3.1/hTSHR ,为进一步研究TSHR的功能 ,以及利用hTSHR真核表达载体建立Graves实验动物模型奠定了基础。 展开更多
关键词 人促甲状腺激素受体 pcdna3.1 COS-7细胞 转染 动物模型
原文传递
日本血吸虫pcDNA3.1(+)/MLP核酸疫苗的构建及其对家兔保护性免疫作用的研究 被引量：4
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作者 刘彦 肖建华 +2 位作者 廖力 张愉快 曾谷清 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2004年第4期299-302,314,共5页
目的　体外扩增日本血吸虫中国大陆株粘蛋白样蛋白抗原的部分基因序列 ,构建日本血吸虫pcDNA3 1(+) /MLP核酸疫苗 (SJP) ,免疫新西兰家兔 ,观察它在肌肉组织中的表达、及其对家兔的保护性免疫作用。方法　分子克隆常规操作构建SJP疫苗 ... 目的　体外扩增日本血吸虫中国大陆株粘蛋白样蛋白抗原的部分基因序列 ,构建日本血吸虫pcDNA3 1(+) /MLP核酸疫苗 (SJP) ,免疫新西兰家兔 ,观察它在肌肉组织中的表达、及其对家兔的保护性免疫作用。方法　分子克隆常规操作构建SJP疫苗 ,免疫家兔 ,家兔肌肉组织体外扩增查MLP基因 ,并通过免疫组化观察重组蛋白在局部肌组织中的表达 ;做血清抗体及细胞因子分析 ,计算减虫率及减卵率。结果　经酶切、PCR及测序鉴定表明所构建的SJP中含有目的基因序列 ;免疫家兔 8周后可以在免疫家兔肌肉中检测到MLP基因 ,免疫组化结果阳性 ;可诱导IgA、IgG1及INF -γ变化 ,减虫率为2 4 10 % ,减卵率为 2 8 10 %。结论　成功地构建了含目的基因的核酸疫苗SJP ,SJP免疫家兔后 ,肌组织有重组蛋白的表达 ,并可产生一定的免疫保护性作用。 展开更多
关键词 日本血吸虫 pcdna3.1(+)/MLP 核酸疫苗 构建 兔 保护性免疫 粘蛋白样蛋白基因
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