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鸡pro-IL-1β表达、多克隆抗体制备与初步应用
1
作者 许萌萌 黄萌萌 +12 位作者 牛鑫鑫 王国栋 于航博 张玉龙 韩京哲 韩金泽 刘润杭 吴子文 于晓雪 王笑梅 高玉龙 李留安 祁小乐 《中国家禽》 北大核心 2024年第10期89-96,共8页
为研究禽类疫病病原触发炎症的分子机制,试验克隆和分析鸡源白细胞介素-1β前体(Interleukin-1β precursors,pro-IL-1β)基因,原核表达和纯化pro-IL-1β蛋白,用纯化的pro-IL-1β蛋白免疫小鼠制备pro-IL-1β多克隆抗体,对该抗体进行ELIS... 为研究禽类疫病病原触发炎症的分子机制,试验克隆和分析鸡源白细胞介素-1β前体(Interleukin-1β precursors,pro-IL-1β)基因,原核表达和纯化pro-IL-1β蛋白,用纯化的pro-IL-1β蛋白免疫小鼠制备pro-IL-1β多克隆抗体,对该抗体进行ELISA效价检测和鉴定,并初步测试了该抗体在间接免疫荧光试验和Western blot试验中的应用效果。结果显示:重组蛋白pro-IL-1β成功表达,分子量约37 ku,能与His标签抗体发生特异性结合反应;获得了ELISA效价高于1∶32 000的鼠抗pro-IL-1β多克隆抗体,该抗体可通过间接免疫荧光试验(IFA)检测到pro-IL-1β真核表达蛋白,也可通过Western blot试验检测到pro-IL-1β原核表达蛋白和真核表达蛋白,还可通过Western blot和IFA检测到传染性法氏囊病病毒(IBDV)诱发的巨噬细胞HD11内源性pro-IL-1β蛋白的表达。研究表明,试验成功制备鸡pro-IL-1β多克隆抗体,为进一步研究禽病病原诱发炎症的分子机制提供了重要工具。 展开更多
关键词 鸡 pro-il-1β 克隆 表达 多克隆抗体 炎症
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猪IL-1β与IL-18 SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法的建立 被引量：2
2
作者 汪伟 倪艳秀 +10 位作者 温立斌 吕立新 周俊明 俞正玉 茅爱华 张雪寒 李彬 郭容利 王小敏 范红结 何孔旺 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2011年第6期1289-1294,共6页
IL-1β和IL-18是重要的促炎症细胞因子,在介导机体炎症反应中起重要作用。为了建立在体外定量检测猪细胞因子IL-1β和IL-18 mRNA表达水平的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法,依据GenBank中登录的猪细胞因子基因IL-1β、IL-18及管家基因β-ac... IL-1β和IL-18是重要的促炎症细胞因子,在介导机体炎症反应中起重要作用。为了建立在体外定量检测猪细胞因子IL-1β和IL-18 mRNA表达水平的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法,依据GenBank中登录的猪细胞因子基因IL-1β、IL-18及管家基因β-actin核苷酸序列,设计特异性引物,经RT-PCR从3D4猪肺泡巨噬细胞系中克隆和扩增了上述3个因子核苷酸片段,构建含有各自引物扩增序列的重组质粒作为阳性模板,建立了检测IL-1β、IL-18及β-actin SYBR GREEⅠ荧光定量PCR方法。该方法起始模板数与Ct值之间线性关系好,相关系数达到0.990以上;特异性强,扩增产物形成单一的特异性熔解峰;敏感性高,初始模板的检出下限达到了1μl 1.0×102拷贝;重复性好,组内变异系数均小于4%。 展开更多
关键词 猪 促炎症细胞因子 IL-1β IL-18 荧光定量PCR
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IL-1β反义RNA真核表达载体的构建
3
作者 宋淑亚 崔研因 《潍坊医学院学报》 2007年第3期222-223, Ⅳ,共3页
目的通过构建IL-1β反义RNA真核表达载体,为进一步研究IL-1β奠定了基础。方法采用RT-PCR法分别获取IL-1β的两段基因序列,利用基因工程方法构建IL-1β反义RNA真核表达载体,并对其进行反复PCR鉴定、单酶切鉴定和DNA序列分析。结果经最终... 目的通过构建IL-1β反义RNA真核表达载体,为进一步研究IL-1β奠定了基础。方法采用RT-PCR法分别获取IL-1β的两段基因序列,利用基因工程方法构建IL-1β反义RNA真核表达载体,并对其进行反复PCR鉴定、单酶切鉴定和DNA序列分析。结果经最终DNA序列分析证实,成功构建了人IL-1β反义RNA真核表达载体。结论本研究为IL-1β尤其是肿瘤微环境中IL-1β作用的研究提供了证据。 展开更多
关键词 IL-1β 反义RNA 促炎性细胞因子
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“杜仲-当归”调控NLPR3炎症小体对骨关节炎大鼠改善作用的研究 被引量：7
4
作者 王鑫昱 陈亦鹏 +1 位作者 马永力 何君妃 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2023年第7期751-757,共7页
目的:探究药对“杜仲-当归”对骨关节炎(osteoarthritis,OA)大鼠膝组织的改善效果及对NLPR3炎症小体的调控。方法:24只雄性SD大鼠随机挑选18只采用前交叉韧带切断术(ACLT)进行OA造模,随后将大鼠分为正常组、OA模型组、杜仲-当归组和阳... 目的:探究药对“杜仲-当归”对骨关节炎(osteoarthritis,OA)大鼠膝组织的改善效果及对NLPR3炎症小体的调控。方法:24只雄性SD大鼠随机挑选18只采用前交叉韧带切断术(ACLT)进行OA造模,随后将大鼠分为正常组、OA模型组、杜仲-当归组和阳性药物组,每组6只,后两组分别给与“杜仲-当归”或西乐葆和奥泰灵混合液治疗8周。收集大鼠外周血,ELISA测定IL-1β、IL-6、IL-18、TNF-α水平;另取大鼠膝关节软骨组织,HE染色观察病理改变,番红-固绿染色观察软骨钙化情况并行OARSI评分,免疫组化和TUNEL染色分别检测膝关节软骨组织Caspase1、CollagenⅡ表达和软骨细胞凋亡情况,Western blot检测基质金属蛋白酶-13(MMP-13)、基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)、p53、p21、NLPR3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、Pro-Caspase-1蛋白表达。结果:与正常组相比,OA模型组大鼠血清IL-1β、IL-6、IL-18、TNF-α水平均显著上升(P<0.01),膝关节损伤明显,OARSI评分显著升高(P<0.01),软骨细胞凋亡显著增加(P<0.01),组织Caspase1含量、MMP-13、p53、p21、NLPR3、ASC、Pro-Caspase-1蛋白表达均显著升高(P<0.01),而CollagenⅡ含量和TIMP-1蛋白表达显著降低(P<0.01)。与OA模型组相比,杜仲-当归组和阳性药物组大鼠血清IL-1β、IL-6、IL-18、TNF-α水平显著下降(P<0.05),膝关节损伤改善,OARSI评分降低(P<0.01),软骨细胞凋亡显著减少(P<0.01),组织Caspase1含量,MMP-13、p53、NLPR3、Pro-Caspase-1蛋白表达显著降低(P<0.05)、CollagenⅡ含量和TIMP-1蛋白表达显著增加(P<0.05),杜仲-当归组大鼠p21、ASC蛋白表达显著降低(P<0.01)。结论:“杜仲-当归”可改善OA大鼠软骨病变,其作用可能与介导NLPR3/ASC/Pro-Caspase-1炎性体通路,下调IL-1β及相关炎性因子水平、抑制软骨细胞凋亡有关。 展开更多
关键词 骨关节炎 杜仲-当归 前交叉韧带切断术 NLPR3/ASC/Pro-Caspase-1炎症小体通路 IL-1β p53/p21蛋白
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高浓度胆汁诱导单核细胞前炎症反应 被引量：2
5
作者 陈振勇 冯贤松 +2 位作者 杨鹏 黄文广 周有生 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期433-436,共4页
目的探讨高浓度胆汁在触发早期炎症反应中的作用。方法 20只Wistar大鼠随机分为体外培养组和阻塞性黄疸(阻黄)体内培养组,体外组为正常大鼠,阻黄体内组开腹结扎切断胆总管。明胶法提取外周血单核细胞(PBMCs)体外培养。体外组的PBMCs体... 目的探讨高浓度胆汁在触发早期炎症反应中的作用。方法 20只Wistar大鼠随机分为体外培养组和阻塞性黄疸(阻黄)体内培养组,体外组为正常大鼠,阻黄体内组开腹结扎切断胆总管。明胶法提取外周血单核细胞(PBMCs)体外培养。体外组的PBMCs体外与不同浓度的胆汁共同培养,分别于1、6、24、48 h后用Western blot和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测培养上清液内前炎症因子IL-1β和前IL-1β表达的变化,并与加入细菌内毒素(LPS)的PBMCs相比较。阻黄体内组于术后1、6、24、48、168 h提取PBMCs同法检测两者的变化。结果阻黄动物术后1 h和6 h提取的PBMCs内可见IL-1β和前IL-1β表达,其中术后1 h和6 h前IL-1β的浓度分别为(834.0±111.1)pg/mL和(785.0±102.2)pg/mL,IL-1β的浓度是(681.0±82.5)pg/mL和(602.0±78.2)pg/mL,较其它时间段明显增高(P<0.05)。正常大鼠来源的PBMCs体外培养在高浓度胆汁(5%)刺激下早期(1 h)可以检测到IL-1β(612.0±70.5)pg/mL和前IL-1β(467.0±63.2)pg/mL表达增高(均P<0.05)。同时与LPS共同培养,5%胆汁刺激后1 h、6 h及2%、1%胆汁刺激1 h后可见IL-1β和前IL-1β表达增加。结论进入血循环的高浓度胆汁能触发早期炎症反应,合并细菌感染后作用更强。 展开更多
关键词 阻塞性黄疸 胆汁 单核细胞 前IL-1β IL-1β
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中晚期非小细胞肺癌常见中医证型与血清前炎症因子水平相关性研究 被引量：28
6
作者 陈万灵 欧阳学农 +6 位作者 余宗阳 房文铮 王文武 张霞 邓水秋 叶志桥 林静璎 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期1718-1720,共3页
目的:探讨中晚期非小细胞肺癌常见中医证型与血清前炎症因子水平的关系。方法:选择符合条件的中晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者90例及正常人30名,其中符合中医证型诊断标准的虚证、痰证、血瘀证患者各30例,所有入选受检者采用酶联免疫吸... 目的:探讨中晚期非小细胞肺癌常见中医证型与血清前炎症因子水平的关系。方法:选择符合条件的中晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者90例及正常人30名,其中符合中医证型诊断标准的虚证、痰证、血瘀证患者各30例,所有入选受检者采用酶联免疫吸附双抗体夹心法(ELISA)检测前炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量。组间血清前炎症因子水平比较采用单因素方差分析。结果:NSCLC患者不同中医证型血清IL-1β、IL-6和TNF-α水平均以痰证组最高,血瘀证组次之,虚证组最低。虚证组、痰证组、血瘀证组血清IL-1β、IL-6和TNF-α均高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05);虚证组IL-1β、IL-6和TNF-α及痰证组IL-1β水平低于血瘀证组,差异均有统计学意义(P<0.05);虚证组IL-1β、IL-6和TNF-α水平也低于痰证组,差异也有统计学意义(P<0.05)。结论:中晚期NSCLC虚证、痰证、血瘀证与血清前炎症因子表达程度存在一定相关性。 展开更多
关键词 非小细胞肺癌 中医证型 前炎症因子 肿瘤坏死因子Α 白细胞介素1β 白细胞介素6
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肺炎克雷伯菌肺炎对小鼠NLRP3炎症通路的影响 被引量：6
7
作者 张国荣 刘楠 刘莉 《世界临床药物》 CAS 2019年第2期95-100,共6页
目的建立肺炎克雷伯菌肺炎小鼠模型,并探究肺炎克雷伯菌感染对核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症通路的影响。方法给小鼠气管内接种肺炎克雷伯菌,观察小鼠死亡率;接种肺炎克雷伯菌48 h后,取小鼠肺部匀浆涂板检查菌落数;取... 目的建立肺炎克雷伯菌肺炎小鼠模型,并探究肺炎克雷伯菌感染对核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症通路的影响。方法给小鼠气管内接种肺炎克雷伯菌,观察小鼠死亡率;接种肺炎克雷伯菌48 h后,取小鼠肺部匀浆涂板检查菌落数;取小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)离心,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测无细胞上清中白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子(TNF-α)、IL-6、趋化因子配体1(KC)的水平,迈格林华-姬姆萨染色计数细胞沉淀中的中性粒细胞数;取肺部病理切片并进行苏木精-伊红(HE)染色观察肺部病变;提取肺部总蛋白,蛋白质印迹法检测NLRP3、核因子(NF)-κB p65、凋亡相关微粒蛋白(ASC)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白水解酶(caspase-1)、人白介素-1β前体(pro-IL-1β)表达水平。结果成功建立肺炎克雷伯菌肺炎小鼠模型,小鼠在144 h内死亡率达到百分之百,肺部有大量细菌负载,肺部中性粒细胞浸润增加,支气管肺泡灌洗液中IL-1β、TNF-α、IL-6、KC分泌升高,肺组织IL-1β、p-p65表达升高。结论通过将肺炎克雷伯菌液接种到小鼠肺部的方法所建立的肺炎小鼠模型稳定性高、可重复性好,肺部NLRP3炎症通路反应强烈。 展开更多
关键词 肺炎克雷伯菌肺炎 核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症通路 核因子(NF)-κB P65 凋亡相关微粒蛋白 天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白水解酶 人白介素-1β前体
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