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绵羊肺炎支原体核糖体蛋白30S rpsE基因的原核表达及多克隆抗体的制备
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作者 刘晓艳 王永飞 +3 位作者 邓博文 哈尔勒哈·阿曼太 蔡江 李有文 《畜牧与兽医》 CAS 北大核心 2024年第7期78-84,共7页
旨在了解绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae)30S rpsE蛋白的生物学特性及其蛋白免疫原性。用在线分析软件预测30S rpsE蛋白的理化性质、B细胞抗原表位、糖基化位点、二级结构及三级结构等;采用PCR方法从病羊鼻拭子样品中扩增得到... 旨在了解绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae)30S rpsE蛋白的生物学特性及其蛋白免疫原性。用在线分析软件预测30S rpsE蛋白的理化性质、B细胞抗原表位、糖基化位点、二级结构及三级结构等;采用PCR方法从病羊鼻拭子样品中扩增得到30S rpsE基因片段,经NdeⅠ、XhoⅠ酶切纯化后,将其连接到pET-42b载体上,构建原核表达载体pET-42b-30S rpsE,使用不同浓度IPTG诱导蛋白在大肠杆菌BL21中表达;重组蛋白通过SDS-PAGE和Western blot进行鉴定,用镍层析法纯化蛋白后,与弗氏佐剂1∶1混合注射免疫家兔,然后采取全血,检测血清抗体效价及特异性。结果:经预测30S rpsE蛋白是亲水无信号肽的膜外蛋白,无跨膜结构域,有一个糖基化位点;成功构建了原核表达载体pET-42b-30S rpsE,表达的重组蛋白分子量约为25.9 ku,以包涵体和可溶性的形式存在;免疫家兔后血清抗体效价为1∶25 600,证实30S rpsE蛋白具有较好的免疫原性。 展开更多
关键词 肺炎支原体 30S rpse基因 原核表达 多克隆抗体
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淋球菌rpsE基因突变与大观霉素耐药性的研究 被引量:1
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作者 朱文 蒋法兴 +2 位作者 苏晓红 乐文静 王娜 《中华皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期611-614,共4页
目的 探讨淋球菌rpsE基因突变与淋球菌大观霉素耐药的相关性.方法 对临床分离的4株大观霉素耐药的淋球菌株(MIC128 μg/ml、256 μg/ml)的rpsE基因进行PCR扩增测序分析,寻找可能的突变位点,通过DNA转化技术将含有突变基因的细菌基因组... 目的 探讨淋球菌rpsE基因突变与淋球菌大观霉素耐药的相关性.方法 对临床分离的4株大观霉素耐药的淋球菌株(MIC128 μg/ml、256 μg/ml)的rpsE基因进行PCR扩增测序分析,寻找可能的突变位点,通过DNA转化技术将含有突变基因的细菌基因组DNA转化入敏感的淋球菌株,检测转化成功的淋球菌的MIC并进行PCR扩增测序,分析发现的突变位点与淋球菌大观霉素耐药的相关性.结果 4株大观霉素耐药的菌株均发现rpsE基因A70C(Thr24Pro)突变,而16S rRNA大观霉素耐药决定区(SRDR)未发现任何突变;大观霉素敏感菌株的16S rRNA和rpsE基因均未发现突变.转化后获得的大观霉素耐药淋球菌中亦发现了同样的rpsE基因突变.结论 rpsE基因单点突变与淋球菌对大观霉素耐药相关. 展开更多
关键词 淋病奈瑟球菌 点突变 大观霉素 抗药性
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