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RT-RAPD技术分析高温诱导双孢蘑菇相关基因片段 被引量：7
1
作者 陈兰芬 宋思扬 +4 位作者 郑忠辉 苏文金 陈美元 廖健华 王泽生 《厦门大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期103-107,共5页
应用RT RAPD技术 ,以 6bp随机引物反转录双孢蘑菇 (Agaricusbisporus) 0 2菌株常温培养和高温诱导菌丝体的总RNA ,10bp随机引物PCR扩增 ,得到几个高温诱导差异片段 ,对OPU13引物的差异片段 0 2U13克隆并测序 ,发现该片段可能编码tRNAVal... 应用RT RAPD技术 ,以 6bp随机引物反转录双孢蘑菇 (Agaricusbisporus) 0 2菌株常温培养和高温诱导菌丝体的总RNA ,10bp随机引物PCR扩增 ,得到几个高温诱导差异片段 ,对OPU13引物的差异片段 0 2U13克隆并测序 ,发现该片段可能编码tRNAVal(密码子GUC)基因 .推测GUC可能是稀有密码子 ,在某些耐温基因中出现频率较高 .识别该稀有密码子的tRNAVal在常温条件下不表达或表达量很少 ,而在高温诱导下引发一定的调控机制促使它们大量的合成 。 展开更多
关键词 双孢蘑菇 RT-RAPD 耐温相关基因 tRNA^Val 食用菌 高温诱导 稀有密码子 调控机制
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介导RNAi的tRNA^(Val)启动子质粒载体的建立 被引量：1
2
作者 鲁晓春 袁振华 +3 位作者 彭建强 马鑫 吴小兵 李小鹰 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期358-360,共3页
目的 构建以tRNAVal启动子控制shRNA转录引发RNAi的质粒载体。方法 从人基因组中用PCR方法扩增出tRNAVal基因片段,人工突变去除3’末端数个碱基,连以Linker序列,用此经过改造的tRNAVal启动子,构建控制针对荧光素酶的shRNA转录载体pUC-tR... 目的 构建以tRNAVal启动子控制shRNA转录引发RNAi的质粒载体。方法 从人基因组中用PCR方法扩增出tRNAVal基因片段,人工突变去除3’末端数个碱基,连以Linker序列,用此经过改造的tRNAVal启动子,构建控制针对荧光素酶的shRNA转录载体pUC-tRNAVal lucRi,与pMAMneoLuc共转染BHK-21细胞,观察对荧光素酶表达的影响。结果pUC-tRNAVal lucRi可以高效特异性抑制pMAMneoLuc中荧光素酶的表达,效率达97.1％-99.5％。结论tRNAVal启动子载体可以高效转录shRNA,引发哺乳动物细胞RNAi现象。 展开更多
关键词 RNAI tRNA^Val 子质粒载体 荧光素酶 短发夹样RNA 基因片段
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系统发育与古细菌Val-tRNA合成酶耐热性的关系 被引量：1
3
作者 丁彦蕊 李成渊 +2 位作者 傅毅 蔡宇杰 须文波 《计算机与应用化学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期492-496,501,共6页
嗜热古细菌和常温古细菌的氨基酰-tRNA合成酶在生物合成蛋白质中都起着至关重要的作用,它们的功能相似而耐热性相差很大。为了阐明氨基酰-tRNA合成酶的耐热机制,本文从进化角度研究了具有全基因组的8种超高温古细菌、3种高温古细菌和2... 嗜热古细菌和常温古细菌的氨基酰-tRNA合成酶在生物合成蛋白质中都起着至关重要的作用,它们的功能相似而耐热性相差很大。为了阐明氨基酰-tRNA合成酶的耐热机制,本文从进化角度研究了具有全基因组的8种超高温古细菌、3种高温古细菌和2种常温古细菌的Val-tRNA合成酶耐热性的差异。从构建的进化树可知,不同的微生物依据其耐热性而严格的分开;进化关系较近的4种微生物,都是产甲烷的古细菌;序列比对结果表明,耐热Val-tRNA合成酶中的带电荷氨基酸随着进化,突变为疏水性氨基酸,表明常温Val-tRNA合成酶中缺乏像耐热Val-tRNA合成酶中形成盐桥的氨基酸。这表明盐桥是氨基酰-tRNA合成酶耐热的主要因素。 展开更多
关键词 Val-tRNA合成酶 系统发育法 耐热性
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