目的探讨甲状腺癌相关基因1(thyroid cancer gene-1,TC-1)在喉癌组织中的表达及对喉癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法采用免疫组织化学方法检测48例喉癌患者的喉癌组织及对应癌旁正常喉黏膜中TC-1的表达水平。Lenti-GFP-Puro(对...目的探讨甲状腺癌相关基因1(thyroid cancer gene-1,TC-1)在喉癌组织中的表达及对喉癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法采用免疫组织化学方法检测48例喉癌患者的喉癌组织及对应癌旁正常喉黏膜中TC-1的表达水平。Lenti-GFP-Puro(对照质粒)、Lenti-TC-1-GFP-Puro、siRNA N-CTL(阴性对照)及siRNA TC-1转染喉癌细胞,分别命名为Control组、TC-1组、siRNA-Control组及siRNA-TC-1组。采用CCK-8法、划痕实验及Transwell实验检测喉癌细胞的增殖、迁移及侵袭能力。采用Western blot检测β-catenin、c-Myc及MMP-7蛋白表达的变化。结果TC-1在喉癌组织中的阳性表达率高于正常喉黏膜组织(χ^(2)=15.875,P<0.001)。喉癌组织中TC-1的表达强度与肿瘤部位(χ^(2)=8.261,P=0.041)、TNM临床分期(χ^(2)=8.308,P=0.040)及病理分级(χ^(2)=15.808,P=0.015)相关。与Control组比较,TC-1组喉癌细胞的增殖、迁移及侵袭能力增强(t=-4.671、-8.179、-26.130,P<0.001、P=0.004、P<0.001),c-Myc与MMP-7蛋白表达升高(t=-7.391、-4.793,P=0.018、0.041)。与siRNA-Control组比较,siRNA-TC-1组喉癌细胞的增殖、迁移及侵袭能力减弱(t=9.144、4.213、6.684,P<0.001、P=0.015、P=0.004),c-Myc与MMP-7蛋白表达降低(t=15.989、13.021,P=0.004、0.006)。结论TC-1在喉癌组织中呈高表达,其表达强度与肿瘤发生部位、TNM临床分期及病理分级相关。过表达TC-1或干扰TC-1的表达能增强或减弱喉癌细胞的增殖、迁移及侵袭能力,其机制可能为TC-1调节Wnt/β-catenin信号通路靶基因的表达有关。展开更多
目的:构建甲状腺癌基因-1(TC-1)真核表达质粒,观察TC-1癌蛋白高表达对人乳腺癌细胞迁移的影响。方法:用蛋白质印迹方法检测TC-1癌蛋白在培养的人MCF-7和BT549乳腺癌细胞中表达;从MCF-7细胞中提取总RNA,通过实时PCR(RT-PCR)扩增人TC-1 c ...目的:构建甲状腺癌基因-1(TC-1)真核表达质粒,观察TC-1癌蛋白高表达对人乳腺癌细胞迁移的影响。方法:用蛋白质印迹方法检测TC-1癌蛋白在培养的人MCF-7和BT549乳腺癌细胞中表达;从MCF-7细胞中提取总RNA,通过实时PCR(RT-PCR)扩增人TC-1 c DNA全长开放读码框架(ORF),并插入真核表达载体Flag-pc DNA3.0中构建Flag-TC-1-pc DNA3.0重组质粒;经限制性内切酶和DNA测序鉴定后,该重组质粒用于转染BT549细胞,进行蛋白质印迹分析鉴定Flag-TC-1融合蛋白表达;进行细胞划痕实验,观察TC-1对BT549细胞迁移的影响。结果:TC-1蛋白在人MCF-7乳腺癌细胞中显著表达,而BT549细胞中表达极低;人MCF-7乳腺癌细胞TC-1全长ORF的RT-PCR产物为337 bp;重组质粒Flag-TC-1-pc DNA3.0经Bam HⅠ和XhoⅠ双酶切出现特征性的327 bp片段;DNA测序证实TC-1全长ORF序列正确无误,以正确的阅读框架插入Flag-pc DNA3.0载体中。蛋白质印迹结果显示该重组质粒转染的BT549细胞表达的FlagTC-1融合蛋白可被抗Flag抗体特异性识别,分子质量约为13.6 k Da,符合预期;划痕实验结果显示,高表达TC-1的BT549细胞迁移性增加。结论:内源性TC-1蛋白在人BT549乳腺癌细胞中表达极低,Flag-TC-1融合蛋白高表达促进BT549细胞迁移。展开更多
