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Fluorescence Tracking of Exogenous DNA in Genetic Transformation of the Chinese Oak Silkmoth Antheraea Pernyi via Sperm-Mediated Gene Transfer 被引量:1
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作者 刘丹梅 李文利 《Journal of Donghua University(English Edition)》 EI CAS 2014年第4期391-395,共5页
Exogenous DNA expressing green fluorescent protein( GFP) and labeled with fluorescein isothiocyanate( FITC) was used to transform the Chinese oak silkmoth Antheraea pernyi( A. pernyi)via sperm-mediated gene transfer( ... Exogenous DNA expressing green fluorescent protein( GFP) and labeled with fluorescein isothiocyanate( FITC) was used to transform the Chinese oak silkmoth Antheraea pernyi( A. pernyi)via sperm-mediated gene transfer( SMGT). Sperms entry into the female reproductive system and eggs were observed using fluorescence microscopy. The ability of A. pernyi sperms to uptake exogenous DNA was confirmed,and transfer of the exogenous DNA was shown by GFP expression in the transgenic eggs. Our result suggested that SMGT could also be used to directly generate transgenic A. pernyi expressing functional genes of interest. 展开更多
关键词 Antheraea pernyi(A.pernyi) exogenous DNA fluorescein isothiocyanate(FITC) label green fluorescent protein(GFP) sperm-mediated gene transfer(smgt)
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精子介导转基因动物的制备 被引量:1
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作者 秦洁 李碧春 +1 位作者 蔡琳琳 季从亮 《生物技术通报》 CAS CSCD 2005年第1期34-38,共5页
近年来 ,通过显微注射DNA至孵育的卵母细胞原核或外源基因转染后的胚胎干细胞进行转基因动物的生产已取得了令人瞩目的成就。在过去的 1 0年中 ,以精子作载体制备转基因哺乳动物或脊椎动物也取得了一些不同程度的进展。这些技术主要包... 近年来 ,通过显微注射DNA至孵育的卵母细胞原核或外源基因转染后的胚胎干细胞进行转基因动物的生产已取得了令人瞩目的成就。在过去的 1 0年中 ,以精子作载体制备转基因哺乳动物或脊椎动物也取得了一些不同程度的进展。这些技术主要包括 :直接将外源DNA与精子共孵育至成熟 ;提取分离的精子DNA或进行预处理至精子发育成熟 ;以及在辅助受精前分离精子细胞等。此外 ,一些显微注射技术 ,如在输精管内进行体内直接转染雄性生殖细胞 ;将体内转染的雄性生殖细胞植入已分离的雄性生殖细胞 ,再显微注射至受体的睾丸 ,这些技术也逐渐成熟起来。研究表明 ,通过体内、体外转染外源DNA的显微操作技术只需将雄性受体与野生型雌性交配就可产生出转基因的后代个体 ,同时也避免了辅助受精和胚胎操作带来的机械损伤 ,因此具有一定的优势。本文综述了精子介导转基因 (SMGT)技术的发展历程、研究现状及前沿进展。 展开更多
关键词 精子 体内 转染 介导 辅助 受体 显微操作 转基因 成熟 外源DNA
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精子介导法制备转基因猪的研究 被引量:1
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作者 刘羞菲 苗向阳 +1 位作者 白林 张红涛 《中国农学通报》 CSCD 2007年第7期19-22,共4页
主要简述了应用转基因猪的研究概况,介绍了几种以精子作为载体的转基因方法,分析了外源DNA进入精子的影响因素,展望了利用精子为载体生产转基因猪的应用前景。
关键词 精子介导法 转基因
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转基因鸡的制备方法探讨
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作者 张红涛 苗向阳 +1 位作者 白林 刘羞菲 《生物技术通报》 CAS CSCD 2007年第5期79-83,共5页
由于鸡本身的众多优点,转基因鸡的研究逐渐受到了研究者的重视,简要介绍了转基因鸡的发展史,对各种转基因技术方法进行了比较和分析,提出了每种方法的优缺点,尤其在精子介导法上作了较为详细的论述,并展望了转基因鸡的应用前景。
关键词 转基因 精子介导法 禽类 显微注射
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阳离子多聚物PEI结合电穿孔实现小鼠精子的核内转染
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作者 黄吴键 袁进 +1 位作者 安靓 李进 《中国比较医学杂志》 CAS 2008年第6期35-38,I0005,共5页
目的联合运用阳离子多聚物PEI和方波电穿孔两种不同机制的转染手段,以期克服精子难转染的问题。方法采用FITC标记的线性阳离子多聚物JetPEI-FluoF与适量的质粒pCX-EGFP形成复合物作为转染示踪物质进行转染,通过激光共聚焦显微镜,检测复... 目的联合运用阳离子多聚物PEI和方波电穿孔两种不同机制的转染手段,以期克服精子难转染的问题。方法采用FITC标记的线性阳离子多聚物JetPEI-FluoF与适量的质粒pCX-EGFP形成复合物作为转染示踪物质进行转染,通过激光共聚焦显微镜,检测复合物在细胞的分布情况。结果与对照组单纯使用PEI转染相比较,联合使用组虽然精子活力和活率有一定程度的下降,但是无论胞质还是胞核荧光物质的携带量都有很大程度的提高,实现了对精子的核内转染。结论本实验为我们以后开展大动物精子载体法的研究提供了一个成功的模式。 展开更多
关键词 电穿孔 JetPEI-FluoF 小鼠精子 核内转染 精子载体法
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胞质内精子注射法介导外源DNA生产转基因动物
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作者 王荣祥 刘国辉 +2 位作者 徐旭俊 陈建泉 成国祥 《上海交通大学学报(农业科学版)》 2012年第2期60-65,共6页
通过胞质内精子注射法介导转基因已经成为生产转基因动物的一种有效手段。然而传统的ICSI介导法用冻融精子或Triton X-100处理的精子作为携带外源DNA的载体,经胚胎移植后生产转基因后代的效率很低,主要原因为这些处理方式在提高转染效... 通过胞质内精子注射法介导转基因已经成为生产转基因动物的一种有效手段。然而传统的ICSI介导法用冻融精子或Triton X-100处理的精子作为携带外源DNA的载体,经胚胎移植后生产转基因后代的效率很低,主要原因为这些处理方式在提高转染效率的同时对精子染色体造成了较大程度的损伤。最近研究者们提出了一种使用高浓度碱液对精子进行简单的预处理,高效地生产转基因后代的方法。这些精子完全失去了质膜与顶体,但仍保留有核的完整性,并且可以高效的将外源基因插入宿主基因组,比传统的精子处理方法获得了更理想的转基因动物的生产效率。 展开更多
关键词 胞质内精子注射 精子介导的转基因 转基因效率 DNA损伤
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精子介导法制备GHRH转基因猪的研究 被引量:4
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作者 丁景华 吴珍芳 +7 位作者 习欠云 刘小龙 蔡伟光 孟繁民 束刚 王松波 江青艳 张永亮 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期693-697,共5页
以eGFP为报告基因,生长激素释放激素(GHRH)为目的基因,利用精子介导的基因转移方法,将构建慢病毒载体质粒LV-EGFP-GHRH直接和猪精子孵育,再通过体外人工受精建立GHRH转基因猪模型。经PCR检测,52头后代中发现7头阳性个体,转基因效率为7.... 以eGFP为报告基因,生长激素释放激素(GHRH)为目的基因,利用精子介导的基因转移方法,将构建慢病毒载体质粒LV-EGFP-GHRH直接和猪精子孵育,再通过体外人工受精建立GHRH转基因猪模型。经PCR检测,52头后代中发现7头阳性个体,转基因效率为7.42%。本研究探索了应用精子介导的转基因方法将GHRH转移到动物体内,为猪的转基因育种提供了新的依据。 展开更多
关键词 转基因 精子介导 GHRH
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CD_4分子结构和功能研究新进展 被引量:1
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作者 赵博渊 徐菊梅 +1 位作者 任天武 赵永聚 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第6期35-37,共3页
CD4分子属于免疫球蛋白超家族,其胞外区由4个免疫球蛋白样的结构域组成,在胸腺细胞发育的过程中,CD4分子的表达受多种因素的影响。由于该分子在T淋巴细胞发育、信号转导、细胞间通讯、细胞免疫应答和体液免疫应答的过程中发挥着重要作用... CD4分子属于免疫球蛋白超家族,其胞外区由4个免疫球蛋白样的结构域组成,在胸腺细胞发育的过程中,CD4分子的表达受多种因素的影响。由于该分子在T淋巴细胞发育、信号转导、细胞间通讯、细胞免疫应答和体液免疫应答的过程中发挥着重要作用,而被深入研究,对其功能有了初步的了解。成熟人类Th细胞表面表达的CD4(T4)受体,具有调控并识别抗原的能力,最新研究发现,CD4分子在精子介导转基因过程的外源DNA内化机制中还扮演着不可或缺的角色。 展开更多
关键词 CD4 结构 功能 人类免疫缺陷病毒(HIV) 精子介导(smgt)
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