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Tn5转座诱变选育冠菌素耐高温生产菌株及其发酵条件研究 被引量:9
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作者 吴慧玲 焦睿 +1 位作者 章家长 李召虎 《中国农业科技导报》 CAS CSCD 2009年第1期62-67,共6页
利用双亲接合的方法将含有Tn5转座子的质粒pRL1063 a导入丁香假单胞菌大豆致病变种(Pseudo-m onas syingaepv.glycinea)PG4180中,在含有卡那霉素和链霉素的MG平板上筛选抗性接合子。通过诱变,从874个突变株中筛选得到2株高温下产生冠菌... 利用双亲接合的方法将含有Tn5转座子的质粒pRL1063 a导入丁香假单胞菌大豆致病变种(Pseudo-m onas syingaepv.glycinea)PG4180中,在含有卡那霉素和链霉素的MG平板上筛选抗性接合子。通过诱变,从874个突变株中筛选得到2株高温下产生冠菌素的突变株MFB132和MFB141。进而对菌株MFB141的发酵条件进行了优化,其最佳发酵条件为:2%葡萄糖为碳源,0.1%氯化铵为氮源,培养基初始pH为6.8,装液量为50 mL/500mL,接种量为2%,发酵温度由原来的18℃上升到28℃,而发酵时间由原来的168 h缩短到108 h。在最优化条件下,出发菌株28℃下冠菌素产量仅为1.8 mg/L,而突变株MFB141在28℃下的产量达到37.66 mg/L,大约是出发菌株的21倍。 展开更多
关键词 冠菌素 丁香假单胞菌 tn5转座子 发酵条件
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Tn5-Mob系统诱导根瘤菌属之间耐盐和共生性状的转移 被引量:8
2
作者 杨苏声 吴拙如 +1 位作者 高为民 李季伦 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1993年第3期193-197,共5页
本实验通过质粒pSUP5011及其辅助质粒RP4将Tn5-Mob随机插入苜蓿根瘤菌(Rhizobium meliloti 042B)的基因组中,得到86株接合子SR。随机选取4株SR,通过辅助质粒R68.45的三亲本杂交,将它们的DNA片段引入慢生型大豆根瘤菌(Bradyrhizobium,jap... 本实验通过质粒pSUP5011及其辅助质粒RP4将Tn5-Mob随机插入苜蓿根瘤菌(Rhizobium meliloti 042B)的基因组中,得到86株接合子SR。随机选取4株SR,通过辅助质粒R68.45的三亲本杂交,将它们的DNA片段引入慢生型大豆根瘤菌(Bradyrhizobium,japonicum USDA 110),获得106株接合子BSR。大部分BSR菌株获得了生长快速的特性和耐盐性,一般能耐0.3—0.5mol/L NaCl,其中有些菌株能产生黑色素。将90株BSR回接大豆和苜蓿植株,发现47株能在大豆和苜蓿植株结瘤,但在苜蓿上无固氮活性;26株只能在大豆植株结瘤固氮;13株只能在苜蓿植株结瘤而不固氮;4株在大豆和苜蓿植株均不结瘤。其中,获得了4株耐盐性和固氮酶活性强的接合子。 展开更多
关键词 根瘤菌属 tn5-Mob系统 共生 耐盐性
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高效离子交换色谱法分析青枯雷尔氏菌Tn5转座子突变菌株的异质性 被引量:3
3
作者 郑雪芳 刘波 +2 位作者 朱育菁 陈德局 陈小强 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期268-278,共11页
【目的】研究青枯雷尔氏菌(Ralstonia solanacearum)Tn5转座子突变菌株的异质性,筛选出无致病力高效生防菌株。【方法】利用已构建的青枯雷尔氏菌致病力参考指标"弱化指数(attenuation index,AI)"和接种番茄植株的生物测定法... 【目的】研究青枯雷尔氏菌(Ralstonia solanacearum)Tn5转座子突变菌株的异质性,筛选出无致病力高效生防菌株。【方法】利用已构建的青枯雷尔氏菌致病力参考指标"弱化指数(attenuation index,AI)"和接种番茄植株的生物测定法对60株供试的青枯雷尔氏菌Tn5转座子突变菌株进行致病力测定;利用高效离子交换色谱法研究不同致病力突变菌株的色谱行为异质性;构建色谱效价指数(chromatography titer index,CTIi),CTIi=Si/(S1+S2+S3)×100%(i=1、2或3;S1、S2和S3分别对应P1、P2和P3的峰面积),测定不同致病力青枯雷尔氏菌突变菌株的CTIi值,用皮尔逊相关系数(Pearson correlation coefficient,PCC)分析色谱效价指数与突变菌株的致病力和青枯病害防治效果的相互关系。【结果】基于AI值和生物测定结果,青枯雷尔氏菌Tn5转座子突变菌株具有3种不同致病力类型:强致病力、无致病力和中间型。强致病力菌株共33株,其AI值介于0.49—0.63,接种番茄15 d,植株发病率为66.33%—100%;无致病力菌株共有20株,其AI值介于0.78—0.89,接种番茄15 d,植株发病率为0;中间型菌株共有7株,其AI值介于0.68—0.73,接种番茄15 d,植株发病率为24.17%—45.92%。20株无致病力突变菌株对番茄青枯病的防治效果测定结果显示,防治效果介于16.68%—92.45%,菌株T831防治效果最好,达91.74%,其次是菌株T780,防治效果为87.51%,菌株T497防治效果最差,为16.68%。不同致病力青枯雷尔氏菌的高效离子交换色谱分离结果显示,青枯雷尔氏菌经高效离子交换色谱可以分离出P1(出峰时间为0.6 min)、P2(出峰时间为4.4或4.5 min)和P3峰(出峰时间为5.9或6.0 min);强致病力菌株和无致病力菌株均具有3种不同峰类型:单峰、双峰和3个峰,强致病力菌株的主峰为P3峰,无致病力菌株的主峰为P1峰,中间型菌株有双峰和3个色谱峰两种类型;强致病力菌株中CTI3为100%的菌株,致病力最强,诱导番茄植株发病率均达85%以上,CTI3<100%的菌株,接种后番茄植株发病率介于66.33%—84.14%;无致病力菌株中CTI1达100%的菌株,其防治效果高,均达到80%以上,CTI1<90%的菌株,其防治效果低,介于16.68%—63.62%;CTI3与突变菌株致病力呈极显著正相关,相关系数PCC值为0.62;CTI1与无致病力突变菌株的防治效果呈极显著正相关,相关系数PCC值为0.80。【结论】青枯雷尔氏菌Tn5转座子突变菌株具有3种致病力类型,不同致病力菌株的色谱行为不同。构建的色谱效价指数CTI1可用于快速筛选出无致病力高效生防菌株,CTI3可作为青枯雷尔氏菌致病力的参考指标。 展开更多
关键词 高效离子交换色谱 青枯雷尔氏菌 青枯病 tn5转座子 突变菌株
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粪产碱菌的Tn5转座诱变及吲哚乙酸生物合成特性的研究 被引量:11
4
作者 李法峰 平淑珍 +1 位作者 苏宝林 林敏 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第5期551-555,共5页
粪产碱菌 (Alcaligenesfaecalis)A1 50 1的吲哚乙酸 (IAA)合成需要外源色氨酸参与。在不含色氨酸的限制性培养基中 ,A1 50 1能良好生长 ,但不能合成IAA ,表明在A1 50 1中存在一条依赖于色氨酸的IAA合成途径。A1 50 1的IAA合成具有菌体... 粪产碱菌 (Alcaligenesfaecalis)A1 50 1的吲哚乙酸 (IAA)合成需要外源色氨酸参与。在不含色氨酸的限制性培养基中 ,A1 50 1能良好生长 ,但不能合成IAA ,表明在A1 50 1中存在一条依赖于色氨酸的IAA合成途径。A1 50 1的IAA合成具有菌体密度依赖特性。采用Tn5转座诱变技术构建A1 50 1的突变库 ,从 350 0多株Tn5转染子中分离到一株色氨酸营养缺陷型突变株AT63。该Tn5突变株在不含色氨酸的限制性培养基上不能生长 ,但仍能进行IAA的生物合成 ,每毫升菌体密度等于 1 0的突变株菌体的IAA合成量为 2 2 4 μg。对突变株AT63的研究表明在A1 50 1中至少存在两条IAA合成途径 :一条以色氨酸为合成前体 ,另一条以吲哚 - 3-磷酸甘油为前体。southern杂交结果表明突变株中Tn5插入位点可能位于编码色氨酸合成酶基因上。 展开更多
关键词 粪产碱菌A1501 tn5诱变 吲哚乙酸
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烟草青枯菌Tn5突变体库的构建及突变位点分析 被引量:2
5
作者 李小杰 李淑君 +4 位作者 李成军 陈玉国 王海涛 邱睿 胡亚静 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2017年第4期80-83,94,共5页
为了从烟草青枯菌全基因组范围内发掘致病性相关基因,采用电转化法构建了一个EzTn5转座子介导的烟草青枯菌TXLLJ14-3菌株插入突变体库,该突变体库包含1.2万个突变子,经烟草上的致病性检测,共得到216个无致病力或弱致病力突变菌株。利用T... 为了从烟草青枯菌全基因组范围内发掘致病性相关基因,采用电转化法构建了一个EzTn5转座子介导的烟草青枯菌TXLLJ14-3菌株插入突变体库,该突变体库包含1.2万个突变子,经烟草上的致病性检测,共得到216个无致病力或弱致病力突变菌株。利用TAIL-PCR扩增获得其中15个无致病力烟草青枯菌的Tn5侧翼序列,并对其插入位点进行了分析,结果表明,15个突变菌株的插入位点分别位于核苷酸水解酶、糖基转移酶、转座酶和合成酶等具有不同功能的基因上,这些基因受到干扰或破坏后,可能会抑制致病相关物质的表达或分泌,或者诱导烟草对病原菌产生抗性,从而表现出无致病力特征。 展开更多
关键词 烟草青枯菌 tn5插入突变 无致病力菌株 TAIL-PCR 突变位点
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荧光假单胞菌Tn5转座诱变及对青枯病生防特性 被引量:1
6
作者 李姣清 夏枫耿 +5 位作者 王彦 杜少平 张玲华 明飞平 程庆 徐臣超 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期4-6,共3页
目的:利用Tn5转座诱变荧光假单胞菌PF20001,研究所获得的突变株对青枯病的生防效果。方法:利用三亲本杂交方式,将带有转座子Tn5的Tn5-102(含luxAB)的质粒pTR102成功地转入PF20001,利用平板相互拮抗法分析突变株对青枯病致病菌的拮抗作... 目的:利用Tn5转座诱变荧光假单胞菌PF20001,研究所获得的突变株对青枯病的生防效果。方法:利用三亲本杂交方式,将带有转座子Tn5的Tn5-102(含luxAB)的质粒pTR102成功地转入PF20001,利用平板相互拮抗法分析突变株对青枯病致病菌的拮抗作用。结果:通过诱导Tn5转座,得到荧光假单胞菌PF20001的Tn5插入突变库。经平板相互拮抗实验发现,菌株PF20001-lux-48拮抗圈明显大于野生型(半径达0.35cm)。用Tn5-lux特异引物进行PCR扩增,结果显示只有以该突变株的DNA为模板才能得到300bp的扩增产物,证实该菌株基因组中有Tn5插入。结论:Tn5的插入使菌株PF20001对青枯病生物防治能力增强。 展开更多
关键词 荧光假单胞菌 tn5 转座 青枯病
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利用Tn5 gusA5对大豆慢生根瘤菌lrp基因的诱变 被引量:1
7
作者 唐咸来 武波 +4 位作者 柏学亮 唐东阶 吕安国 唐纪良 马庆生 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2000年第4期18-21,共4页
通过对重组质粒pGXN300中的 2.3kb EcoRI片段测序分析发现,其上有一完整的lrp基因和部分 putA基因,与 King ND等[1]报道的 B.japonicum的lrp基因DNA序列有 88%同源性。利用 T... 通过对重组质粒pGXN300中的 2.3kb EcoRI片段测序分析发现,其上有一完整的lrp基因和部分 putA基因,与 King ND等[1]报道的 B.japonicum的lrp基因DNA序列有 88%同源性。利用 Tn5 gusA5定位 诱变方法,对质粒pGXN300进行插入诱变,得到2.3kb EcoRI片段上有Tn5gusA5插入位点的质粒pGXN300- T38,将pGXN300-T38转移到大豆馒生根瘤苗(B.japonicum)GX201中,得到的GX201转移接合子与不相容 质粒pPH1JI发生同源双交换。通过抗性及gusA活性检测,筛选到一lrp基因突变株。Southem杂交分析证 明这突变株的 Tn5 gusA5插入确实是同源交换而不是转座产生,表明 Tn5 gusA5 诱变可以应用于大豆慢生根 瘤菌中的突变林筛选。 展开更多
关键词 tn5grsA5诱变 LRP基因 大豆慢生根瘤菌
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用Tn5-mob-sacB转座子对华癸中生根瘤菌HN3015质粒进行定向标记、消除或缺失 被引量:1
8
作者 胡国元 李伟伟 周俊初 《化学与生物工程》 CAS 2006年第7期33-36,共4页
采用Tn5-mob-sacB转座子对Mesorhizobium huakuiiHN3015菌株含有的3条大质粒(pMhHN3015a,150kb;pMhHN3015b,294 kb和pMhHN3015c,390 kb)进行定向标记,获得各个质粒标记菌株。利用sacB基因对蔗糖的敏感性,对标记质粒进行消除实验,获得HN3... 采用Tn5-mob-sacB转座子对Mesorhizobium huakuiiHN3015菌株含有的3条大质粒(pMhHN3015a,150kb;pMhHN3015b,294 kb和pMhHN3015c,390 kb)进行定向标记,获得各个质粒标记菌株。利用sacB基因对蔗糖的敏感性,对标记质粒进行消除实验,获得HN3015质粒消除或缺失的突变株。并对HN3015及其突变菌株的培养特征、生长速度和共生结瘤能力进行了研究,结果表明:质粒消除或缺失的突变株的培养特征和生长速度与出发菌株基本一致,但是,pMhHN3015a与固氮有关,pMhHN3015b消除的菌株则失去结瘤能力,只有pMhHN3015c消除或缺失菌株不影响结瘤与固氮能力。 展开更多
关键词 华癸中生根瘤菌 tn5-sacB 质拉 标记 消除 缺失
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转座子Tn5对葡萄根癌病生防菌MI15的诱变 被引量:1
9
作者 董江丽 张鹤龄 朱景奇 《内蒙古大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期58-61,共4页
以含自杀性质粒pMO75::Tn5的铜绿假单胞菌PAO1826和含自杀性质粒pSUP2021::Tn5的大肠杆菌S17-1为供体菌,以葡萄根癌病生防菌MI15为受体菌,进行接合杂交.当供体菌和受体菌菌体数量比例为1∶1和1∶5时可以产生转移接合子,而当菌体数量比例... 以含自杀性质粒pMO75::Tn5的铜绿假单胞菌PAO1826和含自杀性质粒pSUP2021::Tn5的大肠杆菌S17-1为供体菌,以葡萄根癌病生防菌MI15为受体菌,进行接合杂交.当供体菌和受体菌菌体数量比例为1∶1和1∶5时可以产生转移接合子,而当菌体数量比例为5∶1时不能产生转移接合子.共筛选了117株转移接合子,获得了3株不产细菌素的MI15突变株,用光敏生物素标记的Tn5DNA探针与突变株染色体DNA进行斑点杂交,3株突变株均呈阳性反应,证明Tn5转座子已插入到MI15菌株的染色体上引起插入突变并抑制了细菌素的产生. 展开更多
关键词 转座子tn5 生防菌MI15 葡萄根癌病 细菌素 植物病害 根癌土壤杆菌 生物防治
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城市污水处理厂二级出水深度脱氮(TN≤5mg/L)试验研究 被引量:6
10
作者 刘雷斌 戴前进 +3 位作者 方先金 高守有 黄鸥 李艺 《水工业市场》 2012年第7期48-51,共4页
以某城市污水处理厂二沉池出水作为研究对象,分别进行生物滤池、深床滤池、活性砂滤池三种不同反硝化工艺的深度脱氮试验研究,摸索出水TN≤5mg/L的工艺参数。研究结果表明:三种工艺对TN、NO3--N均有良好的去除效果;进水TN平均为14.3mg/L... 以某城市污水处理厂二沉池出水作为研究对象,分别进行生物滤池、深床滤池、活性砂滤池三种不同反硝化工艺的深度脱氮试验研究,摸索出水TN≤5mg/L的工艺参数。研究结果表明:三种工艺对TN、NO3--N均有良好的去除效果;进水TN平均为14.3mg/L,NO3--N平均为9.7mg/L,NH3-N≤1.5mg/L,甲醇投加量为32mg/L时,生物滤池、深床滤池、活性砂滤池对TN平均去除量分别为10.39mg/L、10.61mg/L、11.12mg/L,对NO3--N的平均去除量分别为8.63mg/L、8.99mg/L、9.36mg/L;三种工艺均对有机污染物有一定的去除效果,生物滤池、深床滤池、活性砂滤池对CODCr的平均去除率分别为18%、16%、13%。 展开更多
关键词 反硝化生物滤池 深度脱氮 tn5mg/L 提标改造
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洋葱伯克霍尔德菌T1828和ZWL15-Tn5转座子插入突变体库的构建及相关突变体的筛选初探
11
作者 刘好桔 钟义军 +2 位作者 饶志强 葛岚 吴晓玉 《中国农学通报》 CSCD 2014年第9期242-247,共6页
采用双亲结合法将含有Tn5转座子的质粒pRLl063a导入洋葱伯克霍尔德菌T1828和ZWL15中,在含有卡那霉素和链霉素的抗性平板上筛选抗性接合子。通过随机插入诱变后,共获得300个突变株。PCR检测随机挑选的6株突变株,结果显示为阳性;且6株突... 采用双亲结合法将含有Tn5转座子的质粒pRLl063a导入洋葱伯克霍尔德菌T1828和ZWL15中,在含有卡那霉素和链霉素的抗性平板上筛选抗性接合子。通过随机插入诱变后,共获得300个突变株。PCR检测随机挑选的6株突变株,结果显示为阳性;且6株突变株发酵后高效液相色谱检测不能合成冠毒素。研究结果表明,6株突变株均已被Tn5插入染色体基因组且丧失冠毒素合成的能力。本研究为今后转座子插入位点侧翼序列的克隆与测序,并进行功能回复试验提供了基础。 展开更多
关键词 洋葱伯克霍尔德菌 冠毒素 tn5转座子 突变体库
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应用Tn5-1uxAB-sacB基因盒对根瘤菌巨型质粒进行定向标记、缺失或消除
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作者 莫才清 郭先武 +1 位作者 周俊初 李阜棣 《微生物学杂志》 CAS CSCD 1997年第3期6-9,共4页
pHNC3, a suicide plasmid encoding luxAB and scaB genes in Tn5,can be transfered into Rhizobium through tri-parental mating and thenthe Rhizobium is labelled by luxAB. Since the levansucrasc activitycoded by sacB gene ... pHNC3, a suicide plasmid encoding luxAB and scaB genes in Tn5,can be transfered into Rhizobium through tri-parental mating and thenthe Rhizobium is labelled by luxAB. Since the levansucrasc activitycoded by sacB gene can cause the sucrose sensitivity on Gram-negativebacteria,the sacB gene allowed direct selection for the deletion or curingof plasmide, because only strains which no longer contain an activesacB gene are able to grow on media containing sucrose. This negativeselecting model can be used for direct labelling the mega-plasmid ofRhizobium,or even getting Rhizobium deriyatives partial deleted or curedtheir mega-plasmids. 展开更多
关键词 根瘤菌 巨型质粒 定向标 tn5-1uxAB-scaB 基因盒
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以转座子Tn5作弗氏中华根瘤菌的可识别生态学标记的研究──Tn5的水平转移及其对R.fredii Tn5突变株运动的影响 被引量:7
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作者 蔺继尚 崔明学 +3 位作者 靳素英 李明祺 李宁 赵巍 《应用生态学报》 CAS CSCD 1994年第3期292-298,共7页
将一株弗氏中华根瘤菌(R.fredii)QB1130的Tn5插入突变株ON-2用于生态学研究,以评估Tn5在自然环境中的水平转移以及各种水势下Tn5对突变株ON-2在土壤中运动的影响.试验表明,在自然潮湿的土壤中,T... 将一株弗氏中华根瘤菌(R.fredii)QB1130的Tn5插入突变株ON-2用于生态学研究,以评估Tn5在自然环境中的水平转移以及各种水势下Tn5对突变株ON-2在土壤中运动的影响.试验表明,在自然潮湿的土壤中,Tn5本身的水平转移频率很低,且与Tn5插入相关的突变株卡那霉素抗性表型标记在非选择性平板上连续传40代后仍然稳定.突变株ON-2与相对应的野生型菌株QB1130在各种相同水势的土壤中的运动无明显差异(P=0.01),表明Tn5的插入不影响突变株的运动.因此,Tn5可作为研究R.fredii基因工程菌大回应用的一个稳定有效的生态学标记. 展开更多
关键词 生态学 标记 根瘤菌 转座子
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高温胁迫对根瘤菌Tn5在土壤中的存活及其表型表达的影响 被引量:4
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作者 蔺继尚 崔明学 +4 位作者 靳素英 李宁 李明祺 赵巍 张晓东 《应用生态学报》 CAS CSCD 1995年第4期411-416,共6页
研究了3株弗氏中华根瘤菌(Rhizobiumfredii)Tns突变株于适宜温度和高温胁迫两种条件下在土壤中的存活和Tns表型的表达.在适宜温度(28℃)条件下的灭菌和未灭菌土壤中的存活研究表明生物因素抑制了突变株和... 研究了3株弗氏中华根瘤菌(Rhizobiumfredii)Tns突变株于适宜温度和高温胁迫两种条件下在土壤中的存活和Tns表型的表达.在适宜温度(28℃)条件下的灭菌和未灭菌土壤中的存活研究表明生物因素抑制了突变株和野生型的生长.但野生型和突变株的存活种群密度之间无显著差异(P=0.01).在高温胁迫(40℃)条件下,土壤中野生型和突变株的种群密度迅速下降,其中部分ON-2和ON-3细胞丢失了Tns表型,说明部分细菌的Tn5表型在高温胁迫条件下不能表达. 展开更多
关键词 根瘤菌 土壤 转座子tn5 高温胁迫 表型表达
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水稻基腐细菌Tn5插入突变体库的构建及其致病相关突变体的筛选 被引量:3
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作者 谭秀明 陈雪风 +1 位作者 林敏怡 刘琼光 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期193-198,共6页
采用转座子Tn5插入突变技术,共获得5 261个接合子。通过马铃薯软腐快速筛选和PCR检测验证,获得267个使马铃薯软腐能力丧失或下降的Tn5插入突变体,并测定其在水稻上的致病力和烟草上的过敏性坏死反应(HR)。结果表明:在267个突变体菌株中... 采用转座子Tn5插入突变技术,共获得5 261个接合子。通过马铃薯软腐快速筛选和PCR检测验证,获得267个使马铃薯软腐能力丧失或下降的Tn5插入突变体,并测定其在水稻上的致病力和烟草上的过敏性坏死反应(HR)。结果表明:在267个突变体菌株中,对水稻无致病力的有71个,其中在烟草上无HR反应的有59个,产生HR反应的有12个;对水稻致病力下降的有68个,其余突变体菌株对水稻致病力与野生菌株差异不明显。另外,267个突变体菌株中有146个无HR反应,其中有90个对水稻无致病力或者致病力下降。致病力的分析结果表明,获得的突变体是由Tn5插入Dickeya zeae染色体上不同的致病相关基因位点导致的。 展开更多
关键词 水稻基腐菌 tn5转座子 致病性 突变体 致病力
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利用电转化法构建烟草野火病菌的Tn5插入突变体 被引量:1
16
作者 陈红 李江利 +1 位作者 焦伟 蒋士君 《河南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期322-325,共4页
采用电转化法将含有kanr基因标记的EZ::Tn5转座子插入到烟草野火病菌(Pseudomonas syringae pv. tabaci)的基因组中.结果表明,在电压为2 400 V条件下,供试的烟草野火病菌菌株SMX 006及WT4的电转化效率分别为0.8×103,4.2×103c... 采用电转化法将含有kanr基因标记的EZ::Tn5转座子插入到烟草野火病菌(Pseudomonas syringae pv. tabaci)的基因组中.结果表明,在电压为2 400 V条件下,供试的烟草野火病菌菌株SMX 006及WT4的电转化效率分别为0.8×103,4.2×103cfu.μg-1DNA.转化电压下降至1 800 V时,WT4菌株的转化效率也随之下降至1.64×103cfu.μg-1DNA.对转化子进行kanr筛选以及特异性PCR鉴定,表明Tn 5可以稳定地插入到受体菌的基因组中.对烟草野火病菌SMX 006的Tn 5插入突变体进行了多次致病性、运动性和胞外蛋白酶活性测定,从中获得了2个致病力明显减弱的突变株(H028,H029)、1个运动能力明显减弱的突变株(H028)、1个运动能力丧失的突变株(H029)、1个产胞外蛋白酶能力明显减弱的突变株(H046),以及1个胞外蛋白酶缺失的突变株(H045). 展开更多
关键词 烟草野火病菌 电转化 tn5插入突变 功能突变体
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苯甲酸钠降解菌的分离及Tn5诱变 被引量:2
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作者 谢旗 郭海鸿 +1 位作者 简浩然 岑英华 《环境科学学报》 CAS CSSCI CSCD 北大核心 1990年第3期333-337,共5页
采用富集法从柴油污染的土壤中分离到一株能以苯甲酸钠为唯一碳源而生长的产水溶性荧光色素的Pseudomonas sp,其荧光色素在121℃、30min不被破坏.通过转座子Tn5插入诱变,再次证明Tn5所携km^Rsm^R基因可在革兰氏阴性菌Pseudomonas sp中表... 采用富集法从柴油污染的土壤中分离到一株能以苯甲酸钠为唯一碳源而生长的产水溶性荧光色素的Pseudomonas sp,其荧光色素在121℃、30min不被破坏.通过转座子Tn5插入诱变,再次证明Tn5所携km^Rsm^R基因可在革兰氏阴性菌Pseudomonas sp中表达,其Sm^Rkm^R双抗突变频率为10^(-6)-10^(-7)/受体细胞,从上述双抗子中可再选出功能突变菌落,频率约0.5%.其中有2株为荧光消失型,2株为荧光增强型,1株为苯甲酸钠利用能力缺陷型,1株为营养缺陷型,2株为生长缓慢型. 展开更多
关键词 苯甲酸钠 降解菌 分离 tn5诱变
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Tn5转座子介导表达猪瘟E2蛋白和EGFP重组伪狂犬病毒的构建 被引量:2
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作者 高博 范志强 +7 位作者 韩乃君 张念 张锦霞 王颖 白安斌 黄红梅 扈荣良 吴健敏 《中国动物传染病学报》 CAS 2011年第3期14-18,共5页
为构建猪瘟重组伪狂犬疫苗,以Tn5转座子为介导,采用体外转座的方法将猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)E2基因和增强绿色荧光蛋白(enhanced green fluoresce protein,EGFP)的表达盒随机插入伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV... 为构建猪瘟重组伪狂犬疫苗,以Tn5转座子为介导,采用体外转座的方法将猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)E2基因和增强绿色荧光蛋白(enhanced green fluoresce protein,EGFP)的表达盒随机插入伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)基因组中,随后将转座产物转染BHK-21细胞,获得表达E2蛋白和EGFP的病毒库,并对E2蛋白和EGFP在细胞上的表达效果进行PCR鉴定和间接免疫荧光分析。试验结果表明,运用体外转座的方法可以将外源基因插入PRV基因组中,并且外源基因可以在细胞中表达。本研究为重组病毒的研究提供了新思路,并为新型重组猪瘟疫苗的研制进一步奠定了基础。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 E2基因 tn5转座子 绿色荧光蛋白 伪狂犬病毒
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维生素C生产用菌系2980产酸菌基因转移的筛选模型及转座子Tn5诱变 被引量:1
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作者 赵巍 张成刚 刘宏迪 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第2期202-206,共5页
维生素C的生产目前国内广泛采用由产酸菌(Gluconobacteroxydans)与伴生菌(Bacilusmegaterium)组成的2980菌系,在2980中G.oxydans单独生长传代困难,其生长和产酸需要B... 维生素C的生产目前国内广泛采用由产酸菌(Gluconobacteroxydans)与伴生菌(Bacilusmegaterium)组成的2980菌系,在2980中G.oxydans单独生长传代困难,其生长和产酸需要B.megaterium参与。以BacilussubtilisKi2132(pUB110)作为伴生菌与原2980的G.oxydans组合,获得稳定产酸的新菌系。在此基础上建立了适合我国混菌发酵产酸菌外源基因(Kanr)转移的筛选模型。同时报道了以携带有自杀性载体P1::Tn5的大肠杆菌E.coliW3110为供体菌对G.oxydans进行Tn5诱变的条件和结果。 展开更多
关键词 维生素C 生产用菌系2980 筛选模型 tn5诱变
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百脉根根瘤菌MAFF303099 Tn5转座子插入突变体库的构建及筛选 被引量:3
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作者 周向珍 朱辉 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期16-22,共7页
以百脉根根瘤菌MAFF303099为材料,利用转座子Tn5-sacB转座技术得到了约10 000个MAFF303099的转座接合子,构建随机插入突变体库进行保藏;同时建立了一套能从突变体库中快速筛选突变菌株的方法,且鉴定到共同结瘤基因nodB的突变体。结果表... 以百脉根根瘤菌MAFF303099为材料,利用转座子Tn5-sacB转座技术得到了约10 000个MAFF303099的转座接合子,构建随机插入突变体库进行保藏;同时建立了一套能从突变体库中快速筛选突变菌株的方法,且鉴定到共同结瘤基因nodB的突变体。结果表明:组成突变体库的接合子基因组中均有Tn5-sacB插入,三亲本转化效率为3.75×10^(-5);与野生型相比,MAFF303099 nodB的突变体在表型上不能使其宿主百脉根形成根瘤。 展开更多
关键词 MESORHIZOBIUM LOTI MAFF303099 tn5转座子 突变体 nodB
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