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Trim31对肝癌细胞索拉非尼耐药的影响及相关机制研究
1
作者 李小康 胡斌 +3 位作者 季盟烜 张国威 张雪 施恒亮 《徐州医科大学学报》 CAS 2024年第7期477-486,共10页
目的 探讨三基序蛋白31(Trim31)对肝癌细胞索拉非尼耐药的影响及相关机制。方法 采用GEPIA数据库分析肝癌中Trim31 mRNA表达水平,采用Western blot检测肝癌组织中Trim31蛋白的表达水平。构建过表达Trim31的肝癌细胞系,采用CCK-8实验、... 目的 探讨三基序蛋白31(Trim31)对肝癌细胞索拉非尼耐药的影响及相关机制。方法 采用GEPIA数据库分析肝癌中Trim31 mRNA表达水平,采用Western blot检测肝癌组织中Trim31蛋白的表达水平。构建过表达Trim31的肝癌细胞系,采用CCK-8实验、集落形成实验和EdU实验评估过表达Trim31对肝癌细胞增殖的影响,采用蛋白富集分析及Western blot筛选验证Trim31下游信号通路。筛选Trim31下调质粒,并构建稳定沉默Trim31的肝癌细胞系,采用Western blot、CCK-8实验、集落形成实验和EdU实验评估沉默Trim31对肝癌细胞增殖的影响。在过表达Trim31的基础上进一步过表达P38,观察其对肝癌细胞增殖的影响,明确Trim31与P38通路之间的调控关系。用索拉非尼处理过表达Trim31的肝癌细胞系,采用CCK-8实验、集落形成实验、EdU实验和Western blot评估过表达Trim31对索拉非尼处理后肝癌细胞增殖的影响及机制。构建索拉非尼耐药肝癌细胞株,并在此基础上构建沉默Trim31的肝癌细胞系,采用CCK-8实验、集落形成实验、EdU实验和Western blot评估沉默Trim31对索拉非尼耐药细胞株增殖的影响及机制。结果 Trim31 mRNA在肝癌组织中呈高表达。过表达Trim31能促进肝癌细胞的增殖,而沉默Trim31可抑制肝癌细胞的增殖;过表达P38可抑制过表达Trim31对肝癌细胞的促增殖作用;Trim31与P38通路之间可能存在负调控作用。过表达Trim31可减弱索拉非尼对肝癌细胞增殖的抑制作用。索拉非尼并不影响肝癌耐药细胞株的增殖,但沉默Trim31后索拉非尼肝癌耐药细胞株的增殖受到显著抑制。结论 Trim31 mRNA在肝癌中呈高表达,沉默Trim31可减弱肝癌细胞对索拉非尼的耐药性,其机制可能与激活P38通路有关。 展开更多
关键词 肝癌 三基序蛋白31 P38 索拉非尼 耐药 增殖
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miR-30a-5p靶向调控TRIM31表达对结直肠癌细胞5-氟尿嘧啶耐药的逆转作用及其机制 被引量：4
2
作者 卢瑞云 谷敬锋 +2 位作者 张建 张新 徐菲 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期714-723,共10页
目的:探讨miR-30a-5p靶向三结构域蛋白31(TRIM31)基因对结直肠癌(CRC)细胞5-氟尿嘧啶(5-FU)耐药的影响,并阐明其作用机制。方法:收集27例5-FU化疗敏感(5-FU/S组)CRC患者和23例5-FU化疗耐药(5-FU/R组)CRC癌患者的CRC组织,实时荧光定量PCR... 目的:探讨miR-30a-5p靶向三结构域蛋白31(TRIM31)基因对结直肠癌(CRC)细胞5-氟尿嘧啶(5-FU)耐药的影响,并阐明其作用机制。方法:收集27例5-FU化疗敏感(5-FU/S组)CRC患者和23例5-FU化疗耐药(5-FU/R组)CRC癌患者的CRC组织,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测癌组织中miR-30a-5p和TRIM31 mRNA表达水平,Pearson相关分析法分析miR-30a-5p和TRIM31 mRNA表达的相关性。体外培养人CRC 5-FU耐药细胞HT-29/5-FU细胞及其亲本HT-29细胞,MTT法检测2种细胞增殖活性并计算半数抑制浓度(IC50)和耐药指数(RI),RT-qPCR法检测2种细胞中miR-30a-5p和TRIM31 mRNA表达水平,Western blotting法检测2种细胞中TRIM31蛋白表达水平。将HT-29/5-FU细胞分为空白对照组、mimics NC组(转染miR-30a-5p阴性对照mimics NC)、miR-30a-5p mimics组(转染miR-30a-5p mimics)、miR-30a-5p mimics+vector组(转染miR-30a-5p mimics和阴性对照空载体)和miR-30a-5p mimics+TRIM31组(转染miR-30a-5p mimics和TRIM31过表达载体)。RT-qPCR法检测各组HT-29/5-FU细胞中miR-30a-5p和RTIM31 mRNA表达水平,Western blotting法检测各组HT-29/5-FU细胞中TRIM31蛋白表达水平,MTT法检测各组HT-29/5-FU细胞增殖活性,流式细胞术检测各组HT-29/5-FU细胞凋亡率,双荧光素酶报告基因系统验证miR-30a-5p与TRIM31的靶向关系。结果:与5-FU/S组比较,5-FU/R组患者CRC组织中miR-30a-5p表达水平降低(P<0.01),TRIM31 mRNA表达水平升高(P<0.01),miR-30a-5p和TRIM31 mRNA表达水平呈负相关关系(R2=0.885,P<0.01)。与HT-29细胞比较,HT-29/5-FU细胞中miR-30a-5p表达水平降低(P<0.01),TRIM31 mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.01)。HT-29/5-FU细胞和HT-29细胞的IC50值分别为(104.41±0.22)和(9.82±0.31)mg·L^(-1),RI值为12.42。与空白对照组和mimics NC组比较,miR-30a-5p mimics组HT-29/5-FU细胞中miR-30a-5p表达水平升高(P<0.01),TRIM31蛋白表达水平降低(P<0.01),HT-29/5-FU细胞增殖活性明显降低(P<0.01),HT-29/5-FU细胞凋亡率明显升高(P<0.01)。与miR-30a-5p mimics组比较,miR-30a-5p mimics+TRIM31组HT-29/5-FU细胞中TRIM31蛋白表达水平升高(P<0.01),HT-29/5-FU细胞增殖活性明显升高(P<0.01),HT-29/5-FU细胞凋亡率明显降低(P<0.01)。双荧光素酶报告基因系统证实TRIM31是miR-30a-5p的靶基因。结论:miR-30a-5p通过靶向TRIM31基因表达增强CRC耐药细胞对5-FU的敏感性。 展开更多
关键词 miR-30a-5p 三结构域蛋白31 结直肠肿瘤 5-氟尿嘧啶 化疗耐药
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TRIM31沉默抑制胰腺癌侵袭和迁移 被引量：4
3
作者 蔡坤 喻超 +4 位作者 田舍 张乙凡 陈世裕 潘耀振 孙诚谊 《贵州医科大学学报》 CAS 2018年第8期869-873,共5页
目的:探讨三结构域蛋白31(TRIM31)对胰腺癌侵袭转移的影响及其机制。方法:利用基因表达数据库(GEO)获得TRIM31在胰腺癌组织、癌旁组织以及正常胰腺组织中的表达,选取两株胰腺癌细胞Panc-1及MIAPa Ca-2分别分为TRIM31沉默组(实验组)和空... 目的:探讨三结构域蛋白31(TRIM31)对胰腺癌侵袭转移的影响及其机制。方法:利用基因表达数据库(GEO)获得TRIM31在胰腺癌组织、癌旁组织以及正常胰腺组织中的表达,选取两株胰腺癌细胞Panc-1及MIAPa Ca-2分别分为TRIM31沉默组(实验组)和空载体组(阴性对照组),通过Transwell小室细胞迁移和划痕实验观察TRIM31对胰腺癌细胞侵袭和迁移能力的影响,Western blot实验检测上皮-间充质细胞转化(EMT)相关钙黏附蛋白E(E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)的表达水平。结果:正常胰腺组织中TRIM31 mRNA相对表达量明显低于胰腺癌组织,癌旁组织中TRIM31 mRNA相对表达量明显低于癌组织,差异有统计学意义(P<0.05);小室细胞迁移和侵袭实验显示,实验组Panc-1及MIA Pa Ca-2迁移和侵袭细胞数明显低于阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.05);沉默TRIM31表达后,Panc-1及MIAPa Ca-2细胞中E-cadherin蛋白表达量明显升高,Vimentin蛋白表达量明显降低。结论:沉默TRIM31的表达可能通过抑制胰腺癌细胞的EMT过程,进而抑制其侵袭迁移。 展开更多
关键词 胰腺肿瘤 癌 三结构域蛋白31 上皮-间充质细胞转化 侵袭 迁移 钙黏附蛋白E 波形蛋白
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