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以结果验证为导向的中医学八年制Western Blot实践教学
1
作者 林玩福 梁淑芳 +2 位作者 杜娟 翟笑枫 程彬彬 《科教导刊》 2023年第6期29-31,共3页
“实验中医学”是海军军区大学中医学八年制学员的主干课程。其中Western Blot是研究蛋白水平的基本方法,也是学员所必须掌握的实验研究方法。本课程以结果验证为导向的教学方式革新,最大限度压缩每个步骤的操作时间,聚焦于让学员完成... “实验中医学”是海军军区大学中医学八年制学员的主干课程。其中Western Blot是研究蛋白水平的基本方法,也是学员所必须掌握的实验研究方法。本课程以结果验证为导向的教学方式革新,最大限度压缩每个步骤的操作时间,聚焦于让学员完成最多的实验步骤,力求实验的完整性。该方法可在一堂课完成实验,展示结果并进行分析讨论。该教学方式有助于在最短时间内掌握完整的Western Blot实验技术,值得进一步推广应用。 展开更多
关键词 实践教学 western blot 实验中医学
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免疫组化、Western blot蛋白印迹和免疫荧光染色观察磷酸鞘氨醇受体2大鼠海马中的表达变化 被引量：2
2
作者 王柳毅 王乐 +1 位作者 董治燕 钟红平 《脑与神经疾病杂志》 2020年第2期101-104,共4页
目的观察磷酸鞘氨醇受体2(S1PR2)基因在颞叶癫痫大鼠海马中的表达变化。方法将72只健康雄性Wistar大鼠随机均分为实验组(36例)和对照组(36例)。实验组使用氯化锂—匹罗卡品进行颞叶癫痫诱导制模,成功后持续大发作1h终止待检,对照组以相... 目的观察磷酸鞘氨醇受体2(S1PR2)基因在颞叶癫痫大鼠海马中的表达变化。方法将72只健康雄性Wistar大鼠随机均分为实验组(36例)和对照组(36例)。实验组使用氯化锂—匹罗卡品进行颞叶癫痫诱导制模,成功后持续大发作1h终止待检,对照组以相同剂量生理盐水注射,然后以进行免疫组化、Western blot印迹和免疫荧光染色检测并进行统计学分析。结果免疫组化检测结果显示,两组1d、3d、7d、28d、56d海马S1PR2阳性细胞计数相比有统计学意义(P<0.05);Western blot检测结果显示,两组3d、7d、28d、56d海马S1PR2蛋白表达水平相比有统计学意义(P<0.05);免疫荧光染色检测显示,S1PR2蛋白表达阳性为红色,星形胶质细胞为绿色,细胞核为蓝色。结论颞叶癫痫大鼠海马中S1PR2表达水平显著下降,说明颞叶癫痫发病机制可能与神经元功能、星形胶质细胞增生受到S1PR2影响有关。 展开更多
关键词 磷酸鞘氨醇受体2 海马 免疫组化 western blot 免疫荧光染色
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一个Western Blot与DNA电泳定量自动分析系统
3
作者 丘文峰 李彩虹 《电脑知识与技术（过刊）》 2012年第6X期4222-4224,4230,共4页
针对Western Blot以及DNA电泳等实验研究结果定量分析主要应用凝胶成像系统完成,定量分析软件操作流程繁琐的特点,设计出一个适用于Western Blot及DNA电泳等结果定量分析系统。介绍系统中图像处理的问题:图像二值化、分割与感兴趣区域... 针对Western Blot以及DNA电泳等实验研究结果定量分析主要应用凝胶成像系统完成,定量分析软件操作流程繁琐的特点,设计出一个适用于Western Blot及DNA电泳等结果定量分析系统。介绍系统中图像处理的问题:图像二值化、分割与感兴趣区域提取、定量分析中的面积计算,着重从计算机图像处理的角度说明定量分析的解决方案。实验证明,系统能够减少实验员人工干预操作,定量分析结果能够满足Western Blot及DNA电泳等实验研究定量分析的应用需要。 展开更多
关键词 western blot DNA电泳 凝胶成像 图像处理 图像分割
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新孢子虫和弓形虫ELISA及western blot检测方法的建立及应用 被引量：7
4
作者 陈亮 闫双 +3 位作者 刘启生 曹雯丽 王真 巴音查汗 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期558-562,共5页
为建立牛新孢子虫和弓形虫的免疫学检测方法,并调查新疆部分地区牛新孢子虫和弓形虫的感染情况,本研究应用纯化的新孢子虫重组蛋白SRS2(NcSRS2)和弓形虫重组蛋白SAG2(TgSAG2)作为包被抗原,分别建立新孢子虫和弓形虫的ELISA和western blo... 为建立牛新孢子虫和弓形虫的免疫学检测方法,并调查新疆部分地区牛新孢子虫和弓形虫的感染情况,本研究应用纯化的新孢子虫重组蛋白SRS2(NcSRS2)和弓形虫重组蛋白SAG2(TgSAG2)作为包被抗原,分别建立新孢子虫和弓形虫的ELISA和western blot血清学检测方法,并进行特异性和重复性试验,以其检测662份疑似样品,并与商品化试剂盒检测结果比较验证。特异性和重复性试验结果表明,建立的方法特异性强、重复性良好。采用建立的两种ELISA方法对662份临床样品的检测结果表明,新孢子虫和弓形虫的抗体阳性率分别为13.44%(89/662)和5.29%(35/662);与IDEXX试剂盒和永辉试剂盒的符合率分别为94.11%和95.92%。此外,western blot检测的新孢子虫和弓形虫抗体阳性率分别为5.14%(34/662)和3.17%(21/662);与建立的ELISA检测方法的符合率分别为91.69%和97.89%。本研究为分析奶牛流产的原因提供了一定的依据。 展开更多
关键词 流产奶牛 重组蛋白 ELISA 蛋白印记 检测
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定量PCR和Western blot结合检测回药爱康方对肺癌细胞EGFR、NF-κB的表达影响 被引量：4
5
作者 马科 陈丽军 +4 位作者 姬秀娥 戴永福 陈文 孙媛 林颖 《中华中医药学刊》 CAS 北大核心 2016年第12期2831-2835,I0018,共6页
目的:探讨定量PCR和Western blot结合检测对Lewis肺癌C57小鼠瘤细胞表皮生长因子受体(EGFR)、NF-κB表达影响,观察该方对调节癌细胞信号转导作用机制。方法:小鼠自接种瘤株细胞24 h后称重、编号,随机分为8组,每组5只,分别为:1回药高剂量... 目的:探讨定量PCR和Western blot结合检测对Lewis肺癌C57小鼠瘤细胞表皮生长因子受体(EGFR)、NF-κB表达影响,观察该方对调节癌细胞信号转导作用机制。方法:小鼠自接种瘤株细胞24 h后称重、编号,随机分为8组,每组5只,分别为:1回药高剂量组(AKH);2荷瘤模型组(对照组);3回药中剂量组(AKM);4单纯化疗药组(CTX组);5回药中剂量组加化疗组(AKM+CTX);6回药低剂量加化疗药组(AKL+CTX);7回药低剂量组(AKL);8回药高剂量加化疗药组(AKH+CTX)。采用RT-PCR和western blot方法检测小鼠组织样本中EGFR、NF-κBm RNA转录水平和蛋白质表达的变化情况。结果:实时荧光定量PCR结果显示:与模型组小鼠比较,给予回药爱康方,高、中、低剂量干预后,小鼠瘤细胞中EGFR m RNA表达水平显著下调(P<0.01),而低剂量对NF-κBm RNA的表达水平无统计学差异(P>0.05),给予回药爱康方,高+CTX、中+CTX、低+CTX、CTX后,小鼠瘤细胞中EGFR表达水平显著下调(P<0.01),小鼠瘤细胞中NF-κBm RNA表达水平显著上调(P<0.01);与模型组比较,给予回药爱康方高、中、低剂量干预后,Lewis肺癌C57小鼠EGFR、NF-κB蛋白表达水平无统计学差异性(P>0.05),给予回药爱康方高+CTX、中+CTX、低+CTX、CTX干预后,Lewis肺癌C57小鼠EGFR蛋白表达水平显著下调、NF-κB蛋白表达水平显著上调(P<0.01或P<0.05)。结论:回药爱康方高、中、低与回药开康方高+CTX、中+CTX、低+CTX、CTX均对EGFRm RNA的表达水平有影响,仅低剂量对NF-κBm RNA的表达水平无影响,同时回药爱康方高、中、低剂量均对EGFR、NF-κB蛋白表达无影响。 展开更多
关键词 PCR western blot 回药爱康方 EGFR NF-ΚB
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快慢转法及不同滤膜和显色检测法在Western blotting中的应用分析 被引量：4
6
作者 孔令泉 蒲莹晖 +2 位作者 马仕坤 涂刚 任国胜 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期26-29,共4页
目的探讨快、慢转法及不同滤膜和显色检测法在Western blotting中的应用及各实验环节分析。方法采用MDA-MB-231细胞制备细胞蛋白,应用不同印迹膜[硝酸纤维素膜、聚偏乙烯二氟(PVDF)膜和阳离子尼龙膜]分别采用快转法和慢转法进行增强化... 目的探讨快、慢转法及不同滤膜和显色检测法在Western blotting中的应用及各实验环节分析。方法采用MDA-MB-231细胞制备细胞蛋白,应用不同印迹膜[硝酸纤维素膜、聚偏乙烯二氟(PVDF)膜和阳离子尼龙膜]分别采用快转法和慢转法进行增强化学发光法(ECL)和DAB化学显色法检测,并对Western blotting的各实验环节进行了分析。结果(1)在快、慢转法中硝纤膜的蛋白预染marker条带略强于尼龙膜,而尼龙膜又略强于PVDF膜;PVDF膜和尼龙膜的正反面易于混淆,而硝纤膜的正反面不易混淆。(2)在快、慢转法中,PVDF膜的DAB化学显色法图像略强于尼龙膜和硝纤膜,而尼龙膜和硝纤膜无明显差异;与慢转法相比,快转的硝纤膜和尼龙膜中的蛋白条带略呈波浪状。(3)在慢转法中三种膜化学发光法的图像无明显背景,但在快转法中尼龙膜的背景较明显,而硝纤膜和PVDF膜亦无明显背景。结论应根据实验需要选用不同的印迹膜;慢转法通常优于快转法,增强化学发光法优于DAB化学显色法;增强化学发光法特异胜强、灵敏度高,是分析蛋白质表达较为理想的方法。 展开更多
关键词 western印迹 增强化学发光法 DAB化学显色法 印迹膜 快转法 慢转法
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小麦TaBS1转录因子基因的克隆、原核表达及Western blot检测 被引量：4
7
作者 邱志刚 刘沛 +4 位作者 翟朝增 徐兆师 李连城 陈明 马有志 《麦类作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期189-193,共5页
转录因子在提高植物抗性中起着重要的作用。本实验从小麦中克隆得到一个新的具有DUF822保守域的转录因子基因TaBS1。为进一步研究该转录因子在参与植物胁迫信号调控中的作用以及蛋白本身的结构、功能和活性等,将TaBS1基因构建到原核表... 转录因子在提高植物抗性中起着重要的作用。本实验从小麦中克隆得到一个新的具有DUF822保守域的转录因子基因TaBS1。为进一步研究该转录因子在参与植物胁迫信号调控中的作用以及蛋白本身的结构、功能和活性等,将TaBS1基因构建到原核表达载体pET-28a(+)上。在终浓度为1mmol·L-1IPTG诱导2h的条件下,得到融合蛋白His-TaBS1,并用Western blot确定所表达的蛋白确实为融合蛋白His-TaBS1。 展开更多
关键词 小麦 转录因子 原核表达 westernblot
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组织细胞中胶原蛋白的提取及ECL-Western blot分析 被引量：3
8
作者 刘德莉 徐蓉 +2 位作者 吴娟娟 夏万尧 商庆新 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期290-291,297,共3页
目的建立一种可简便、有效的胶原蛋白提取、纯化及型别分析的测定方法。方法用破碎、酶解和盐析3步法提纯胶原,用ECL-Westernblot测定细胞基质胶原(200例)、正常组织及工程化修复组织中的胶原(30例)。结果该法提取胶原的时间周期短,得... 目的建立一种可简便、有效的胶原蛋白提取、纯化及型别分析的测定方法。方法用破碎、酶解和盐析3步法提纯胶原,用ECL-Westernblot测定细胞基质胶原(200例)、正常组织及工程化修复组织中的胶原(30例)。结果该法提取胶原的时间周期短,得率高于传统方法的2.5倍,纯度达到了PAGE纯化的水平。结论该法具有简便、快速、灵敏和无放射性污染等优点,为组织工程胶原的深入研究提供了有价值的测试手段。 展开更多
关键词 Ⅰ型胶原 Ⅱ型胶原 胶原提取 ECL-western blot
原文传递
疯牛病和羊痒病Western blotting检测方法的建立 被引量：3
9
作者 王辉暖 赵德明 +6 位作者 宁章勇 杨建民 吴常德 郝俊峰 白玉 王传武 孟丽平 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期66-69,73,共5页
以朊蛋白单抗AH6和碱性磷酸酶标记的马抗鼠酶标二抗建立了疯牛病和羊痒病的Western blotting检测方法。对Western blotting各种反应条件进行摸索,并确定了最佳工作条件,结果表明:匀浆缓冲液为RIPA时的最佳反应条件包括浓缩胶电泳电压为... 以朊蛋白单抗AH6和碱性磷酸酶标记的马抗鼠酶标二抗建立了疯牛病和羊痒病的Western blotting检测方法。对Western blotting各种反应条件进行摸索,并确定了最佳工作条件,结果表明:匀浆缓冲液为RIPA时的最佳反应条件包括浓缩胶电泳电压为恒压90V,分离胶电泳电压为恒压160V,转印的最佳电压和时间为恒压100V1.5h;封闭液为3%BSA时,封闭15min,封闭效果最好;AH6的最佳稀释度为1∶4000,4℃下孵育过夜,马抗鼠二抗的最佳稀释度1∶1000,室温下孵育30min。采用已确立的反应条件对样品进行检测并与Prionics-Check WEST-ERN进口试剂盒的检测结果比较,发现其敏感性为100%,特异性为99.4%,与进口试剂盒(100%,100%)无显著差异,这为国产试剂盒研制提供了条件。 展开更多
关键词 疯牛病 羊痒病 western blotTING
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Western blot检测家兔动脉组织蛋白质表达条件的优化 被引量：7
10
作者 马艳琴 孙子龙 +2 位作者 王彬 郭超 陈鹏晓 《农学学报》 2011年第4期52-56,共5页
蛋白质免疫印记技术是研究和分析蛋白质的重要手段,由于其步骤繁杂、影响因素众多,常出现背景噪音高、非特异条带多、拖尾等问题,严重影响后续蛋白质定量分析。为建立最佳的检测家兔动脉组织中蛋白质表达的蛋白质免疫印记技术实验条件,... 蛋白质免疫印记技术是研究和分析蛋白质的重要手段,由于其步骤繁杂、影响因素众多,常出现背景噪音高、非特异条带多、拖尾等问题,严重影响后续蛋白质定量分析。为建立最佳的检测家兔动脉组织中蛋白质表达的蛋白质免疫印记技术实验条件,以家兔动脉组织血管细胞粘附分子-1为目标蛋白,从电泳条件、抗体浓度、抗体孵育时间、温度及方法、免疫显色方法等方面进行了改良,成功建立了快速、灵敏、特异的蛋白质免疫印记技术体系;并比较了3种常用的酶免疫显色技术:3,3’-二氨基联苯胺(3,3’-diaminobenzidine,DAB)显色、增强化学发光法(enhanced chemil luminescence,ECL)X光片曝光及ECL化学发光冷却电感耦合成像系统(cooled charged-coupled device,CCD)成像的敏感性。结果表明ECL化学发光法比DAB显色法敏感性高出2～10倍,其中CCD系统敏感性高于X光片4倍,且操作简便,是最理想的检测方法。 展开更多
关键词 蛋白质免疫印记技术 聚丙烯酰胺凝胶电泳 增强化学发光法 冷却电感耦合成像系统
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免疫组化、明胶酶谱、Western Blot检测涎腺肿瘤中基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9表达的比较与评价 被引量：10
11
作者 田鲲 彭敏 +1 位作者 陈宇 耿宁 《实用医院临床杂志》 2010年第5期17-21,共5页
目的评价免疫组化、明胶酶谱、Western blot检测涎腺良恶性肿瘤中基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9表达的优点与局限性。方法分别运用免疫组化、明胶酶谱、Western blot对34例涎腺良恶性肿瘤进行MMP-2、MMP-9定位、半定量、定量检测和活性酶... 目的评价免疫组化、明胶酶谱、Western blot检测涎腺良恶性肿瘤中基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9表达的优点与局限性。方法分别运用免疫组化、明胶酶谱、Western blot对34例涎腺良恶性肿瘤进行MMP-2、MMP-9定位、半定量、定量检测和活性酶含量的分析,比较各方法检测结果的差异。结果免疫组化方法能定位、半定量检测出基质金属蛋白酶在良恶性肿瘤间的差异;Western blot能定量说明基质金属蛋白酶在良恶性肿瘤间的差异;明胶酶谱法能检测出MMP-2、MMP-9酶原和活性酶在良恶性肿瘤间的差异。结论免疫组化、Western blot、明胶酶谱三种方法结合,既发挥免疫组化细胞定位的优势,又克服了免疫组化法非精确定量的弱点,并打破其不能辨别酶原与活性酶的局限性,更加客观准确反映各型肿瘤组织中MMP-2、MMP-9的实际表达。 展开更多
关键词 免疫组化 明胶酶谱 westernblot 涎腺肿瘤 基质金属蛋白酶
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采用Western blotting的方法分析蚕蛹致敏原成份 被引量：3
12
作者 赵绮华 李文 +2 位作者 陈丽金 王锡忠 刘永平 《广西医学》 CAS 2006年第1期43-45,共3页
目的 应用Western blotting的方法检测蚕蛹（silkworm chrysalis）浸出液中致敏原的成份，为蚕蛹致敏原的研究和临床诊断提供依据。方法取蚕蛹浸出液，经SDS-聚丙烯酰胺凝胶分离，再转印到PVDF膜上，封闭后将血清与膜条共同孵育，后与... 目的 应用Western blotting的方法检测蚕蛹（silkworm chrysalis）浸出液中致敏原的成份，为蚕蛹致敏原的研究和临床诊断提供依据。方法取蚕蛹浸出液，经SDS-聚丙烯酰胺凝胶分离，再转印到PVDF膜上，封闭后将血清与膜条共同孵育，后与辣根过氧化物酶标记的羊抗人IgE抗体反应，显色底物用对氨基联苯胺。结果SDS-PAGE显示蚕蛹可辨条带有12条，分子量在14～94kD之间，其中主带有8条，分子量依次为80kD、68kD、62kD、50kD、29kD、23KD、18kD、16kD。Western blotting结果表明，22例蚕蛹过敏患者血清全部呈阳性反应，浸出液中共有6条致敏条带，其中分子量68kD和29kD是主要致敏组份，阳性反应率均为100％。结论蚕蛹分子量68KD和29kD的组份为主要致敏组份，结果可为开发适舍我国特色的蚕蛹变应原提供依据。 展开更多
关键词 蚕蛹 致敏组份 十二烷基硫酸钠 聚丙烯酰胺凝胶电泳 免疫印迹分析 致敏原
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不同乳腺癌细胞株雌激素和孕激素受体的Western blot检测 被引量：1
13
作者 陶德定 高纯 +3 位作者 江敏 吴剑宏 冯永东 龚建平 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期602-605,共4页
目的　建立人类雌激素受体 (estrogenreceptor,ER)和孕激素受体 (progesteronereceptor,PR)Westernblot检测方法 ,并对不同乳腺癌细胞株ER、PR表达情况进行测定。方法　取不同乳腺癌细胞株对数生长期细胞提取总蛋白 ,分别用ERα单克隆抗... 目的　建立人类雌激素受体 (estrogenreceptor,ER)和孕激素受体 (progesteronereceptor,PR)Westernblot检测方法 ,并对不同乳腺癌细胞株ER、PR表达情况进行测定。方法　取不同乳腺癌细胞株对数生长期细胞提取总蛋白 ,分别用ERα单克隆抗体 1D5和PR单克隆抗体PgR6 36以Westernblot方法对ER、PR的表达情况进行检测 ,并与同期固定细胞的流式细胞术 (FCM)检测结果进行比较。结果　T 4 7d、MCF 7、ZR 75 1细胞ERα的Westernblot检测可得到清晰且分子量正确的条带 ,T 4 7d、ZR 75 1细胞可见清晰且分子量正确的PR条带 ,同期固定细胞ER、PR阳性表达的FCM检测结果与Westernblot检测结果一致。结论　Westernblot检测ER、PR的方法是可行的。 展开更多
关键词 PR ER 乳腺癌细胞株 孕激素受体 雌激素 检测结果 FCM 表达 人类 分子量
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Western Blot和流式细胞术检测磷酸化STAT3的比较 被引量：2
14
作者 李玲 魏大鹏 +2 位作者 张平 章崇杰 蔡美英 《中国实验诊断学》 北大核心 2011年第2期209-211,共3页
目的对Western Blot和流式细胞术(Flowcytometry,FCM)这两种磷酸化STAT3的检测方法进行比较。方法用不同浓度的白细胞介素5(interleukin 5,IL-5)刺激人早幼粒细胞白血病细胞株HL-60,活化细胞内的STAT3,然后分别用Western Blot和流式细... 目的对Western Blot和流式细胞术(Flowcytometry,FCM)这两种磷酸化STAT3的检测方法进行比较。方法用不同浓度的白细胞介素5(interleukin 5,IL-5)刺激人早幼粒细胞白血病细胞株HL-60,活化细胞内的STAT3,然后分别用Western Blot和流式细胞术进行检测。结果 Western Blot与流式细胞术的检测结果一致。结论 Western Blot与流式细胞术用于磷酸化STAT3的检测各有优势,可以互为补充。 展开更多
关键词 信号转导 信号转导及转录活化因子 流式细胞术 western blot HL-60细胞株
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拟南芥DBB1a(double B-box 1a)蛋白的表达、纯化及Western blotting检测 被引量：1
15
作者 屠小菊 汪启明 +5 位作者 李秀山 邓克勤 唐东英 罗泽宇 赵小英 刘选明 《激光生物学报》 CAS CSCD 2010年第2期224-228,共5页
PCR扩增拟南芥(Arabidopsis thaliana)DBB1a cDNA的保守区段(GenBank登录号:AT2G21320),转化到冷诱导表达载体pCold TF上,构建pCold-DBB1a重组质粒,转化大肠杆菌DH5a。15℃下IPTG诱导表达融合蛋白,并通过SDS-PAGE检测。证实目的蛋白以... PCR扩增拟南芥(Arabidopsis thaliana)DBB1a cDNA的保守区段(GenBank登录号:AT2G21320),转化到冷诱导表达载体pCold TF上,构建pCold-DBB1a重组质粒,转化大肠杆菌DH5a。15℃下IPTG诱导表达融合蛋白,并通过SDS-PAGE检测。证实目的蛋白以可溶形式在约20 kD处高效表达,与预期蛋白大小相吻合。表达蛋白经Ni琼脂糖凝胶亲和层析纯化,SDS-PAGE及Western blotting检测证实纯化后获得高纯度融合蛋白,这为进一步研究DBBl a功能奠定了基础。 展开更多
关键词 DBBla 原核表达 蛋白纯化 western blotTING
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利用正交设计优选NR2A的Western Blot成像条件 被引量：2
16
作者 高岚岳 苑洁 姜泓 《化学研究》 CAS 2014年第1期82-85,共4页
采用L9(34)正交设计法,测定了不同光圈、焦距、曝光时间下成像的条带和背景灰度值,探讨了光圈、焦距、曝光时间对NR2A的Western Blot成像效果的影响.结果表明,光圈和曝光时间的影响具有显著性,NR2A的最佳成像条件是光圈为4mm、焦距为30m... 采用L9(34)正交设计法,测定了不同光圈、焦距、曝光时间下成像的条带和背景灰度值,探讨了光圈、焦距、曝光时间对NR2A的Western Blot成像效果的影响.结果表明,光圈和曝光时间的影响具有显著性,NR2A的最佳成像条件是光圈为4mm、焦距为30mm、曝光时间为60s. 展开更多
关键词 正交设计 NR2A western blot CCD成像
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微量肌肉组织蛋白提取及Western blot在肌营养不良诊断中的应用 被引量：1
17
作者 吴冬燕 陈琳 +8 位作者 赵燕环 任海涛 关鸿志 魏妍平 刘智 钱敏 郭玉璞 崔丽英 焦劲松 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期705-710,共6页
目的通过改进肌肉组织蛋白的提取方法,利用微量组织进行Western blot(WB)方法诊断肌营养不良。方法比较不同的样品缓冲液和处理方式对鼠骨骼肌蛋白提取量的影响,采用筛选出的最佳方法对待检病例的微量肌肉组织进行蛋白提取和蛋白分析。... 目的通过改进肌肉组织蛋白的提取方法,利用微量组织进行Western blot(WB)方法诊断肌营养不良。方法比较不同的样品缓冲液和处理方式对鼠骨骼肌蛋白提取量的影响,采用筛选出的最佳方法对待检病例的微量肌肉组织进行蛋白提取和蛋白分析。结果将筛选出的样品缓冲液加入冰冻切片肌肉组织,通过振荡溶解,提取蛋白量多且损失小。从62例疑似肌营养不良病例的肌肉组织中提取足量蛋白,WB结果显示所检蛋白带清晰,部分病例存在蛋白带的异常。免疫组织化学染色显示Dys-R、Dys-C、Dys-N均重度表达异常的标本中,WB检测均未发现相应的目标蛋白带。免疫组织化学显示Dys轻度表达异常的标本中,WB检测显示目标蛋白带位置异常、带浅或正常。结论应用改进的蛋白提取方法可以节省组织标本用量,并进行蛋白分析诊断肌营养不良。临床高度疑诊疑似抗肌萎缩蛋白病的病例,免疫组织化学染色显示轻度缺失或正常,需要进一步行WB检测抗肌萎缩蛋白。 展开更多
关键词 免疫印迹 肌营养不良 微量肌肉组织
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Western blot鉴定背肩胛棕色脂肪黑皮质素4型受体的研究 被引量：1
18
作者 范奎奎 李强 +3 位作者 杨文雅 潘登 李海军 杜晨光 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期841-846,共6页
旨在探究Western blot检测低丰度蛋白表达及试验过程对检测结果的影响。本试验以6~8周龄C57/BL6小鼠背肩甲棕色脂肪组织(Brown adipose tissue,BAT)为试验材料,以低丰度表达的黑皮质素4型受体(Melanocortin-4-receptor,MC4R)为检测蛋白... 旨在探究Western blot检测低丰度蛋白表达及试验过程对检测结果的影响。本试验以6~8周龄C57/BL6小鼠背肩甲棕色脂肪组织(Brown adipose tissue,BAT)为试验材料,以低丰度表达的黑皮质素4型受体(Melanocortin-4-receptor,MC4R)为检测蛋白,不同蛋白处理方法及电转膜液的组分、pH为试验对照条件,探究蛋白提取方法、电转液的组分与pH对转膜效率的影响。结果显示,转膜初始电压及功率与转膜液中十二烷基磺酸钠(SDS)含量及pH极显著相关,恒流转膜时,转膜液中SDS含量与转膜电压及功率呈反比,pH为8.0时的转膜电压及功率极显著高于pH 7.6(P<0.01)和8.6的转膜电压及功率(P<0.001);MC4R及相关蛋白在醇类物混合裂解液(20%Methanol+1%Triton+1%SDS+RIPA)的蛋白处理组的表达显著优于单独RIPA的蛋白处理组(P<0.05),极显著优于Trizol的蛋白处理组(P<0.01)。综上,于MC4R蛋白而言,在裂解液的基础上添加增强剂(Triton和SDS),可促进蛋白提取的效率,提高抗体检测的灵敏性。上述结果有助于相关操作人员对主要细节的认识,提高试验的灵敏及重复性。 展开更多
关键词 蛋白印迹 背肩胛骨棕色脂肪组织 转膜液 黑皮质素-4型受体
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运用FQ RT-PCR和Western blot检测Claudin-1在人类大肠癌细胞株的表达 被引量：1
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作者 陈琳 姜泊 +3 位作者 张亚历 张宏权 龚伟 卢青 《广西医科大学学报》 CAS 北大核心 2007年第2期205-207,共3页
目的:探讨密连接蛋白Claudin-1与人类大肠癌进展的关系。方法:采用实时荧光定量RT-PCR(FQRT-PCR)和Western blot,检测Claudin-1在3株不同分期人类大肠癌细胞株中的表达。结果:Claudin-1在大肠癌Dukes'type C期细胞株SW620强表达,Duk... 目的:探讨密连接蛋白Claudin-1与人类大肠癌进展的关系。方法:采用实时荧光定量RT-PCR(FQRT-PCR)和Western blot,检测Claudin-1在3株不同分期人类大肠癌细胞株中的表达。结果:Claudin-1在大肠癌Dukes'type C期细胞株SW620强表达,Dukes'type B期细胞株SW480次之,Dukes'type A期细胞株SW1116最弱。结论:Claudin-1在人类大肠癌细胞株中有表达,其表达量与大肠癌分期有关。 展开更多
关键词 大肠癌Claudin-1 实时荧光定量RT-PCR western blot
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显微切割联合全自动Western blot在小鼠大脑标记神经元微量蛋白定量中的应用 被引量：1
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作者 杨楠 谭思维 +2 位作者 彭艳 周元国 宁亚蕾 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第20期1846-1850,共5页
目的构建及评价收集特定部位的标记神经元,对这类神经元的微量蛋白水平采用定量的方法,并将此方法初步应用于小鼠颅脑创伤后海马亚区神经元中。方法硫堇染色未固定处理的冰冻切片脑组织神经元,激光显微切割收集海马CA1区和DG区神经元,... 目的构建及评价收集特定部位的标记神经元,对这类神经元的微量蛋白水平采用定量的方法,并将此方法初步应用于小鼠颅脑创伤后海马亚区神经元中。方法硫堇染色未固定处理的冰冻切片脑组织神经元,激光显微切割收集海马CA1区和DG区神经元,全自动毛细管Western blot检测收集细胞的磷酸化蛋白激酶A(p-PKA)蛋白水平。结果全自动毛细管Western blot对低浓度蛋白的检测下限低于传统Western blot 1个数量级,其线性相关系数为98. 85%,日内和日间精密度分别为2. 50%和4. 09%。本方法应用于颅脑创伤小鼠脑组织,发现伤后1 d海马DG区神经元p-PKA显著增高(P <0. 01),CA1区无变化。结论本方法基于激光显微切割和全自动毛细管Western blot,能够实现精确收集指定神经元并准确定量微量蛋白,成功应用于目标神经元蛋白定量,具有在细胞类型众多且混杂分布的组织中进行细胞和分子水平研究的应用前景。 展开更多
关键词 激光显微切割 全自动毛细管western blot 蛋白质定量
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