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小鼠骨髓间充质干细胞分离方法的比较与探讨 被引量:1
1
作者 廖新爱 蔡丹妮 +1 位作者 游若兰 黄慧芳 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期1-9,共9页
目的探讨可高效分离小鼠骨髓间充质干细胞(mBMSCs)的技术方法。方法分别采用骨片消化爬片法、全骨髓贴壁法、骨片消化液上清法和骨片消化研钵法等四种方法分离7~9周龄雄性C57BL/6小鼠的mBMSCs;于倒置显微镜下观察原代mBMSCs形态;运用流... 目的探讨可高效分离小鼠骨髓间充质干细胞(mBMSCs)的技术方法。方法分别采用骨片消化爬片法、全骨髓贴壁法、骨片消化液上清法和骨片消化研钵法等四种方法分离7~9周龄雄性C57BL/6小鼠的mBMSCs;于倒置显微镜下观察原代mBMSCs形态;运用流式细胞术检测mBMSCs特征性免疫表型;采用多向分化诱导检测mBMSCs成骨分化能力与成脂分化能力。结果分离获得的原代细胞首次换液后于倒置显微镜下观察:骨片消化爬片法分离的细胞,仅见大量骨碎片和杂细胞,该法所分离细胞不再进行后续检测评估;全骨髓贴壁法分离的细胞,仅可见少量多角形贴壁细胞,夹杂大量杂细胞;骨片消化液上清法分离的细胞也可见较多长梭形、三角形贴壁细胞,但杂细胞较多;骨片消化研钵法分离的细胞,可见较多长梭形、多角形贴壁细胞,杂细胞少。分离细胞经培养传代到第3代(P3代)时,一方面采用流式细胞术分析mBMSCs特征性免疫表型,结果表明骨片消化液上清法和骨片消化研钵法分离的mBMSCs纯度均较高,全骨髓贴壁法不理想;另一方面,进行成骨分化诱导与成脂分化诱导,结果表明与全骨髓贴壁法分离的细胞相比,骨片消化液上清法和骨片消化研钵法所分离出的细胞具有较强的多向分化潜能。结论骨片消化液上清法和骨片消化研钵法分离获得的mBMSCs纯度较高、质量较好。 展开更多
关键词 小鼠骨髓间充质干细胞 骨片消化爬片法 骨髓贴壁法 骨片消化液上清法 骨片消化研钵法
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Bellidifolin对小鼠的急性毒性及对小鼠骨髓细胞的微核效应 被引量:1
2
作者 丁莉 文莉 +2 位作者 汪晖 陈家春 Jia-chun 《内科》 2006年第2期145-146,共2页
目的研究紫红獐芽菜中单体提取物Bellidifolin的急性毒性及遗传毒性。方法采用急性毒性实验,小鼠骨髓嗜多染红细胞微核实验,以经口灌胃方式给药。结果小鼠Bellidifolin最大耐受量MTD为15g/kg,小鼠骨髓嗜多染红细胞微核发生率结果显示紫... 目的研究紫红獐芽菜中单体提取物Bellidifolin的急性毒性及遗传毒性。方法采用急性毒性实验,小鼠骨髓嗜多染红细胞微核实验,以经口灌胃方式给药。结果小鼠Bellidifolin最大耐受量MTD为15g/kg,小鼠骨髓嗜多染红细胞微核发生率结果显示紫红獐芽菜单体提取物Bellidifolin高、中、低剂量组与阴性对照组比较均无显著性差异(P>0.01)。结论Bellidifolin为无毒类物质,无致突变作用。 展开更多
关键词 小鼠骨髓细胞 急性毒性实验 微核效应 小鼠骨髓嗜多染红细胞 无显著性差异 提取物 最大耐受量 致突变作用 微核发生率 紫红 遗传毒性 芽菜 微核实验 结果 中单体 灌胃方 对照组 低剂量 阴性 物质
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猪蹄甲与穿山甲抗小鼠骨髓微循环障碍作用的实验研究 被引量:6
3
作者 张东伟 付敏 +4 位作者 彭贤文 李健 宋鹏 崔瑛 侯士良 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2005年第9期1364-1367,共4页
关键词 穿山甲 猪蹄甲 微循环障碍 小鼠骨髓 实验研 野生资源 猪科动物 其临床应用 临床疗效
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采用高速离心及ExoQuick-TC法提取小鼠骨髓间充质干细胞来源外泌体比较及鉴定 被引量:9
4
作者 韩金秀 李宏远 +2 位作者 撒亚莲 严丹 贺继刚 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2017年第4期611-614,共4页
比较及鉴定超高速离心法及ExoQuick-TC法提取小鼠骨髓间充质干细胞来源外泌体。采用BCA蛋白检测可见ExoQuick-TC法提取的外泌体蛋白含量高于超高速离心法提取的蛋白含量。Exosome Antibodies,Array&ELISA Kits检测可见ExoQuick-TC... 比较及鉴定超高速离心法及ExoQuick-TC法提取小鼠骨髓间充质干细胞来源外泌体。采用BCA蛋白检测可见ExoQuick-TC法提取的外泌体蛋白含量高于超高速离心法提取的蛋白含量。Exosome Antibodies,Array&ELISA Kits检测可见ExoQuick-TC法提取外泌体的纯度优于超高速离心法提取的纯度。两种方法提取的外泌体电镜下形状无差异,随机选取3个电镜视野进行计数可见ExoQuick-TC法提取外泌体数量多于超高速离心法提取外泌体。ExoQuick-TC法提取的外泌体具有更高的产量及纯度。 展开更多
关键词 外泌体 小鼠骨髓间充质干细胞 超高速离心 ExoQuick-TC法
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细胞密度和血清对小鼠骨髓基质细胞体外生长的影响 被引量:7
5
作者 王改琴 杜小丽 吴宏 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2007年第11期1178-1181,1222,共5页
目的:研究不同细胞接种密度、血清浓度及种类对小鼠骨髓基质细胞体外生长的影响。方法:设置不同细胞密度、不同种类血清及血清量的培养体系,观察细胞贴壁情况,细胞80%贴壁时间,用台盼蓝排斥试验检测活细胞率,MTT法检测细胞增殖情况,HE... 目的:研究不同细胞接种密度、血清浓度及种类对小鼠骨髓基质细胞体外生长的影响。方法:设置不同细胞密度、不同种类血清及血清量的培养体系,观察细胞贴壁情况,细胞80%贴壁时间,用台盼蓝排斥试验检测活细胞率,MTT法检测细胞增殖情况,HE染色光镜下观察细胞形态。结果:原代全血培养的小鼠骨髓基质细胞适宜接种密度为1~4×106/ml;细胞最适生长的血清浓度为10%~20%;与胎牛血清相比马血清对小鼠骨髓基质细胞的促增殖作用更好(P<0.05);不同种类血清培养的小鼠骨髓基质细胞类型有一定差异(P<0.05)。结论:不同细胞接种密度及血清浓度和血清种类对小鼠骨髓基质细胞体外生长有一定影响。 展开更多
关键词 小鼠骨髓基质细胞 生长 体外培养
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泰和乌骨鸡活性肽对小鼠骨髓有核细胞的增殖作用 被引量:3
6
作者 刘建华 王勇 +3 位作者 黄丹菲 田颖刚 聂少平 谢明勇 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期172-177,共6页
采用MTT法测定活性肽对正常小鼠骨髓有核细胞的增殖作用,利用高效液相色谱-2,4-二硝基氟苯柱前衍生法测定4个活性肽组分的氨基酸组成。结果表明:小鼠骨髓细胞培养时间为24 h,泰和乌骨鸡活性肽质量浓度为0.1、1、10、100μg/mL,组分7、8... 采用MTT法测定活性肽对正常小鼠骨髓有核细胞的增殖作用,利用高效液相色谱-2,4-二硝基氟苯柱前衍生法测定4个活性肽组分的氨基酸组成。结果表明:小鼠骨髓细胞培养时间为24 h,泰和乌骨鸡活性肽质量浓度为0.1、1、10、100μg/mL,组分7、8、9、10可极显著(P<0.01)促进小鼠骨髓有核细胞增殖,增殖率达130%以上。在低质量浓度(0.1μg/mL)条件下,组分7能显著促进小鼠骨髓有核细胞增殖(P<0.01)且重现性较好,组分8可刺激小鼠骨髓有核细胞增殖298%。氨基酸组成分析表明,组分7、8、9、10均含有丰富的酪氨酸、甘氨酸、谷氨酸、天冬氨酸和丙氨酸,可以推测该5种氨基酸组成了刺激小鼠骨髓有核细胞增殖活性成分的物质基础。 展开更多
关键词 泰和乌骨鸡活性肽 小鼠骨髓有核细胞 MTT法 氨基酸组成
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垃圾填埋场渗滤液诱发小鼠骨髓细胞微核效应 被引量:17
7
作者 李广科 赵由才 《中国环境科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2004年第1期37-40,共4页
研究了垃圾填埋场渗滤液诱发小鼠骨髓嗜多染红细胞(PCE)微核(MN)效应.结果表明,渗滤液可诱发微核的形成,且呈明确的浓度(渗滤液CODCr)-效应关系.在亚急性染毒条件下,渗滤液CODCr为10mg/L时,可诱发微核率和微核细胞率显著高于阴性对照(n=... 研究了垃圾填埋场渗滤液诱发小鼠骨髓嗜多染红细胞(PCE)微核(MN)效应.结果表明,渗滤液可诱发微核的形成,且呈明确的浓度(渗滤液CODCr)-效应关系.在亚急性染毒条件下,渗滤液CODCr为10mg/L时,可诱发微核率和微核细胞率显著高于阴性对照(n=16,P<0.001);在亚慢性染毒条件下,渗滤液CODCr为5mg/L时,即可诱发微核率和微核细胞率显著高于阴性对照(n=16,P<0.001).这一结果从整体水平上证明了垃圾填埋场渗滤液对哺乳动物具有遗传损伤效应,同时提示可以以小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验结果作为渗滤液生物监测指标.渗滤液处理时间越长,引起细胞遗传损伤所需的最低浓度越低,意味着长期接触环境低浓度渗滤液污染有引起体内细胞遗传物质损伤的潜在危险. 展开更多
关键词 垃圾填埋场渗滤液 小鼠骨髓嗜多染红细胞 微核
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Oct-4在小鼠骨髓间充质干细胞定向诱导分化中的甲基化状态 被引量:3
8
作者 王菊 符毓豪 +2 位作者 王维山 王端明 周宗瑶 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期275-280,共6页
目的研究Oct-4在小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)定向诱导分化中的甲基化状态。方法全骨髓贴壁筛选法培养小鼠BMSCs,通过形态学观察及免疫细胞化学进行鉴定。骨块接种培养法培养小鼠成骨细胞,采用碱性磷酸酶(AKP)及茜素红进行鉴定。诱导小... 目的研究Oct-4在小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)定向诱导分化中的甲基化状态。方法全骨髓贴壁筛选法培养小鼠BMSCs,通过形态学观察及免疫细胞化学进行鉴定。骨块接种培养法培养小鼠成骨细胞,采用碱性磷酸酶(AKP)及茜素红进行鉴定。诱导小鼠BMSCs向成骨细胞分化,采用间接免疫荧光染色和RT-PCR法观察Oct-4在小鼠BMSCs诱导分化前后的表达情况,甲基化特异性PCR检测Oct-4在小鼠BMSCs诱导分化前后的甲基化状态。结果分离培养的小鼠BMSCs在体外能大量增殖,形成形态均一的细胞集落,培养细胞的CD29、c-Kit和CD44呈阳性表达,CD34呈阴性表达。诱导10d后的细胞及从小鼠颅骨中分离、培养出的成骨细胞,AKP及茜素红染色呈阳性。间接免疫荧光染色和RT-PCR结果显示,Oct-4在小鼠BMSCs定向诱导分化中表达下调。小鼠BMSCs定向诱导分化中Oct-4基因启动子区的CpG岛出现了甲基化。结论成功在体外培养了小鼠BMSCs及小鼠成骨细胞,Oct-4基因可能参与了成体干细胞多潜能性的维持,Oct-4基因在小鼠BMSCs定向诱导分化中的表达下调可能是其启动子区CpG岛甲基化的缘故。 展开更多
关键词 OCT-4 小鼠骨髓间充质干细胞 分化 甲基化
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不同状态p53小鼠骨髓间质干细胞分泌外泌体的差异 被引量:4
9
作者 毛佳慧 梁照锋 +4 位作者 田伊卿 潘昭吉 李霞 钱晖 许文荣 《江苏大学学报(医学版)》 CAS 2017年第2期103-106,共4页
目的:比较3种p53状态(p53^(+/+)、p53^(+/-)和p53^(-/-))的小鼠骨髓间质干细胞(mouse bone marrow mesenchymal stem cells,m BMMSC)分泌的外泌体(exosome)是否存在差异。方法:采用透射电镜及蛋白质印迹鉴定和分析p53不同状态m BMMSC分... 目的:比较3种p53状态(p53^(+/+)、p53^(+/-)和p53^(-/-))的小鼠骨髓间质干细胞(mouse bone marrow mesenchymal stem cells,m BMMSC)分泌的外泌体(exosome)是否存在差异。方法:采用透射电镜及蛋白质印迹鉴定和分析p53不同状态m BMMSC分泌的外泌体的形态及膜表面特异性标志蛋白CD9和CD63,采用Nanosight纳米颗粒跟踪分析仪比较外泌体浓度和大小的差异。结果:3种m BMMSC分泌的外泌体均为圆形或椭圆形的膜性囊泡,直径均在100 nm左右。p53^(-/-)m BMMSC和p53^(+/-)m BMMSC分泌的外泌体浓度明显高于p53^(+/+)m BMMSC,p53^(-/-)m BMMSC与p53^(+/-)m BMMSC分泌的外泌体浓度无显著性差异。3种细胞来源的外泌体均表达膜表面特异性标志蛋白CD9、CD63。结论:p53缺失的m BMMSC能分泌更多的外泌体。 展开更多
关键词 P53 小鼠骨髓间质干细胞 外泌体
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慢病毒介导的GFP转染对小鼠骨髓间充质干细胞表型、增殖和分化能力的影响 被引量:3
10
作者 李燕 陆伟 +4 位作者 竺丽梅 邵燕 陈诚 刘巧 韩晓冬 《南京大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期883-889,共7页
运用慢病毒(Lentivirus)载体构建绿色荧光蛋白(GFP)在小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)中的转染体系,检测转染后MSCs的表型和增殖能力,并诱导其向成肌细胞分化,检测此转染体系对MSCs细胞表型、增殖和分化能力的影响.骨髓细胞悬液破红后贴壁... 运用慢病毒(Lentivirus)载体构建绿色荧光蛋白(GFP)在小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)中的转染体系,检测转染后MSCs的表型和增殖能力,并诱导其向成肌细胞分化,检测此转染体系对MSCs细胞表型、增殖和分化能力的影响.骨髓细胞悬液破红后贴壁法培养MSCs,采用流式细胞术鉴定细胞表面标记,鉴定MSCs纯度;Lentivirus-GFP以1、10、50和100的感染复数(MOI)转染MSCs,作用48h后流式细胞术及免疫荧光法检测转染效率和表达的荧光强度;MTT法检测转染后MSCs的细胞活力.诱导MSCs-GFP向成肌细胞分化,蛋白印记法(WB)检测成肌细胞特异性蛋白desmin和α-SMA的表达.流式细胞术检测结果显示,培养的MSCs表达CD44、CD90和CD105,不表达CD34、CD45和CD188,符合干细胞特性.MOI为1、10、50和100的转染效率分别为23.45%、93.51%、95.44%和95.55%,MOI为10时,转染效率较高,且对MSCs活力无明显影响.MSCs-GFP体外经成肌细胞诱导分化后,表达特异性抗原desmin和α-SMA.表明本研究成功构建了小鼠骨髓来源MSCs的Lentivirus-GFP转染体系,有效标记了MSCs细胞,且此标记对MSCs的表型、增殖和分化能力等细胞生物学特性无明显影响. 展开更多
关键词 慢病毒(Lentivirus) 绿色荧光蛋白(GFP) 小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs) 转染 组织工程 green fluorescent protein (GFP) MESENCHYMAL stem cells (MSC)
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葛根在减少烟焦油诱发小鼠骨髓细胞微核的研究 被引量:3
11
作者 曹能 敖新宇 +2 位作者 唐继红 田文华 牟智蜀 《癌变.畸变.突变》 CAS CSCD 2004年第2期104-106,共3页
背景与目的 :本实验以出现微核的小鼠骨髓嗜多染红细胞频率为指标 ,检测葛根减少烟焦油毒害的作用。 材料与方法 :将小鼠分组用各受试物处理 ,常规法制片观察 ,统计学方法分析各组小鼠微核细胞率。结果 :在注射等量烟焦油的小鼠中 ,服... 背景与目的 :本实验以出现微核的小鼠骨髓嗜多染红细胞频率为指标 ,检测葛根减少烟焦油毒害的作用。 材料与方法 :将小鼠分组用各受试物处理 ,常规法制片观察 ,统计学方法分析各组小鼠微核细胞率。结果 :在注射等量烟焦油的小鼠中 ,服用葛根组小鼠中微核细胞率明显低于对非服用组小鼠。结论 :葛根在减少香烟毒害方面有积极作用 。 展开更多
关键词 葛根 烟焦油 小鼠骨髓嗜多染红细胞 微核
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小鼠骨髓间充质干细胞SCA-1^+/CD45^+/CD31^+亚群在心肌梗死中的作用 被引量:3
12
作者 贺继刚 沈振亚 +4 位作者 滕小梅 余云生 叶文学 黄浩岳 丁英龙 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2012年第22期3706-3708,共3页
目的:探讨小鼠骨髓间充质干细胞(mBMSCs)亚群SCA-1+/CD45+/CD31+在心肌修复中作用。方法:以小鼠心脏干细胞表面分化抗原检测mBMSCs后以CD45、CD31为标准分选得到四个亚群。各亚群及未分选群和心肌细胞共培养后检测α-actin、Cx43、Desmi... 目的:探讨小鼠骨髓间充质干细胞(mBMSCs)亚群SCA-1+/CD45+/CD31+在心肌修复中作用。方法:以小鼠心脏干细胞表面分化抗原检测mBMSCs后以CD45、CD31为标准分选得到四个亚群。各亚群及未分选群和心肌细胞共培养后检测α-actin、Cx43、Desmin、cTnI的表达。将SCA-1+/CD45+/CD31+注入心梗小鼠体内完成心功能测定及心脏DIR成像检查。结果:各组均表达心肌特异性分化抗原。SCA-1+/CD45+/CD31+表达的量更多。心脏彩超及心脏DIR成像提示SCA-1+/CD45+/CD31+改善心功能方面优于其他亚群及未分选群。结论:mBMSCs为一多克隆的细胞群体。SCA-1+/CD45+/CD31+向心肌定向分化及改善心功能方面优于其他亚群。 展开更多
关键词 心肌梗死 小鼠骨髓间充质干细胞 亚群
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叶酸代谢抑制剂对小鼠骨髓基质细胞增殖和分化的影响 被引量:2
13
作者 王鸿超 刘媛 +4 位作者 顾震南 陈海琴 张灏 陈卫 陈永泉 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2016年第15期215-220,共6页
采用四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法、细胞形态分析法及诱导分化法结合油红O染色法研究叶酸代谢中二氢叶酸还原酶抑制剂甲氨喋呤(methotrexate,MTX)、甲氨苄啶(trimethoprim,TMP)和乙胺嘧啶(pyrimethamine,... 采用四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法、细胞形态分析法及诱导分化法结合油红O染色法研究叶酸代谢中二氢叶酸还原酶抑制剂甲氨喋呤(methotrexate,MTX)、甲氨苄啶(trimethoprim,TMP)和乙胺嘧啶(pyrimethamine,PTM)对OP9小鼠骨髓基质细胞增殖和分化的影响,探讨叶酸代谢与脂质合成的关系。MTT实验结果显示,在一定浓度范围内,3种叶酸抑制剂均能抑制OP9细胞增殖,并呈现一定的剂量-效应依赖关系。且3种叶酸抑制剂在高浓度时对OP9细胞有毒性作用。倒置显微镜观察和油红O染色检测结果显示,TMP在500~1 000μmol/L浓度范围内对OP9细胞分化为脂肪细胞具有抑制作用。荧光定量聚合酶链式反应分析表明,TMP会使叶酸代谢途径中二氢叶酸还原酶和亚甲基四氢叶酸脱氢酶的转录水平发生下调,这可能是TMP抑制脂肪细胞诱导分化的原因。 展开更多
关键词 二氢叶酸还原酶抑制剂 OP9小鼠骨髓基质细胞 脂质合成 增殖 分化
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运用单细胞凝胶电泳研究稀土元素钬对小鼠骨髓细胞DNA的损伤 被引量:4
14
作者 屈艾 汪承润 +3 位作者 薄军 吴薇 张永 高宽埸 《癌变.畸变.突变》 CAS CSCD 2004年第6期328-331,F003,共5页
背景与目的:探讨稀土元素钬对小鼠骨髓细胞DNA的损伤。材料与方法:给小鼠灌胃氧化钬的盐酸溶液,24 h后取股骨骨髓细胞进行单细胞凝胶电泳,观察有无染色体损伤和DNA损伤。 结果:试验表明在20-80 mg/kg剂量范围内,彗星细胞的尾长随剂量的... 背景与目的:探讨稀土元素钬对小鼠骨髓细胞DNA的损伤。材料与方法:给小鼠灌胃氧化钬的盐酸溶液,24 h后取股骨骨髓细胞进行单细胞凝胶电泳,观察有无染色体损伤和DNA损伤。 结果:试验表明在20-80 mg/kg剂量范围内,彗星细胞的尾长随剂量的增加而增长,而头长则随剂量的递增而缩短,并且在40-80 mg/kg剂量范围内与阴性组差异存在显著性;同时,拖尾率与DNA损伤率也随剂量的增加而升高。结论:稀土元素钬对小鼠骨髓细胞DNA具有一定的损伤作用。 展开更多
关键词 氧化钬 单细胞凝胶电泳 小鼠骨髓细胞 DNA损伤
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小鼠骨髓间充质干细胞的分离、培养新方法 被引量:7
15
作者 徐丽娟 张云巍 +1 位作者 王淑芳 阎丽 《肝脏》 2017年第3期252-255,共4页
目的探讨一种新的小鼠骨髓间充质干细胞的分离、培养方法。方法分离小鼠3 d乳鼠双后肢,剔除肌肉筋膜组织,剪碎后接种于含10%胎牛血清的α-MEM中,观察细胞形态学变化,采用CCK8检测细胞增殖能力,绘制细胞生长曲线,采用流式细胞技术鉴定细... 目的探讨一种新的小鼠骨髓间充质干细胞的分离、培养方法。方法分离小鼠3 d乳鼠双后肢,剔除肌肉筋膜组织,剪碎后接种于含10%胎牛血清的α-MEM中,观察细胞形态学变化,采用CCK8检测细胞增殖能力,绘制细胞生长曲线,采用流式细胞技术鉴定细胞表面抗原,并进行多向分化潜能鉴定。结果原代分离培养的小鼠骨髓间充质干细胞呈长梭形,从骨片周围爬出,传代后,细胞形态一致,生长良好;绘制的细胞生长曲线呈"S"型,流式细胞表型鉴定结果显示,培养的细胞高表达CD90、CD29,低表达CD11b、CD45,成脂油红O染色和成骨茜素红染色均呈阳性。结论采用小鼠3 d乳鼠骨片法能够成功培养出骨髓间充质干细胞,骨髓间充质干细胞可作为肝脏组织工程的种子细胞。 展开更多
关键词 小鼠骨髓间充质干细胞 分离 培养 肝脏组织工程
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Tet-off系统调控人IFNγ基因在小鼠骨髓基质细胞中的表达 被引量:1
16
作者 谭银多 吕跃 +2 位作者 徐海鹏 陈晓勤 李晓青 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2006年第12期1573-1576,共4页
背景与目的:Tet-off系统是一个高效、低毒、具有严密开关功能的基因调控系统,本研究构建质粒pTre-IFNγ,初步探讨Tet-off系统调控人干扰素γ(interferon-gamma,IFNγ)基因在小鼠骨髓基质细胞中的表达。方法:SacⅡ、XbaⅠ双酶切载体pTre... 背景与目的:Tet-off系统是一个高效、低毒、具有严密开关功能的基因调控系统,本研究构建质粒pTre-IFNγ,初步探讨Tet-off系统调控人干扰素γ(interferon-gamma,IFNγ)基因在小鼠骨髓基质细胞中的表达。方法:SacⅡ、XbaⅠ双酶切载体pTre及目的基因,T4连接酶连接,重组体经双酶切、测序鉴定;脂质体介导pTet-off及pTre-IFNγ共转染小鼠骨髓基质细胞;RT-PCR法检测IFNγmRNA,ELISA法检测分泌到培养液中的IFNγ蛋白,分析共转染后IFNγ的分泌规律、共转染后48h中不同浓度盐酸四环素对IFNγ蛋白分泌的影响及在共转染后第48h加入盐酸四环素在不同时间阶段对IFNγ蛋白分泌的影响。结果:双酶切及测序证实质粒pTre-IFNγ构建成功;共转染后48hRT-PCR检测到IFNγmRNA表达;ELISA法示IFNγ蛋白分泌持续6天,第3天的分泌高峰为每1×106个细胞(720.09±241.51)pg;共转染后48h中蛋白分泌量随四环素浓度增加逐渐减少,10~100ng/ml四环素存在时蛋白分泌接近零;第48h时添加盐酸四环素后8h即能明显抑制IFNγ蛋白表达,延长作用时间,抑制效应加重。结论:Tet-off系统能迅速而高效地下调人IFNγ基因在小鼠骨髓基质细胞中的表达。 展开更多
关键词 pTre—IFNγ 构建 小鼠骨髓基质细胞 tet—off 调控
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小鼠骨髓来源巨噬细胞的SILAC代谢标记及生物质谱分析 被引量:1
17
作者 王通 郭嘉慧 +3 位作者 陈智鹏 银兴峰 马文心 崔毅峙 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期881-884,共4页
目的作为模型细胞之一,小鼠骨髓来源巨噬细胞(BMM)是药理学、药效学研究的重要工具和对象。然而,由于巨噬细胞增殖能力较弱,代谢标记细胞内蛋白一直是巨噬细胞生物学中的一个难题。因此,本研究以SILAC(stable i-sotope labeling with am... 目的作为模型细胞之一,小鼠骨髓来源巨噬细胞(BMM)是药理学、药效学研究的重要工具和对象。然而,由于巨噬细胞增殖能力较弱,代谢标记细胞内蛋白一直是巨噬细胞生物学中的一个难题。因此,本研究以SILAC(stable i-sotope labeling with amino acids in cell culture)方法标记BMM。方法小鼠骨髓细胞的分离,以M-CSF诱导6 d并制备BMM,同时,SILAC标记细胞内蛋白;进而,裂解细胞并收集蛋白质,以SDS-PAGE进行初步分离,经胶内酶解成肽段,再通过质谱分析测定,统计得其标记效率。结果小鼠骨髓细胞在分化6 d时点成熟BMM可占细胞总数的0.965。以70 ku条带为研究对象,d 6、8和d 10鉴定到重链赖氨酸标记蛋白数分别为18、12和13个。其中,有8个蛋白在该3个时点中均被检出。统计结果表明3个时点的重链赖氨酸蛋白标记效率分别为(90.62±0.03)%、(90.23±0.03)%和(90.40±0.02)%,达到了SILAC研究的要求。结论该方法解决了BMM的SILAC标记问题,可为以巨噬细胞为研究对象的药理学研究提供有效的研究手段。 展开更多
关键词 小鼠骨髓来源巨噬细胞(BMM) SILAC 质谱 标记效率 蛋白质组 定量
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环磷酰胺诱发小鼠骨髓嗜多染红细胞微核方法的探讨 被引量:4
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作者 沈其萍 杨萍 +2 位作者 秦光和 唐庆国 何丽芳 《中国食品卫生杂志》 2000年第4期17-19,共3页
关键词 环磷酰胺 诱发 小鼠骨髓 微核细胞 染色体损伤
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G-CSF刺激荷瘤小鼠骨髓中性粒细胞产生中性粒细胞胞外陷阱促进U14小鼠宫颈癌细胞成瘤作用的研究 被引量:1
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作者 颜彬 李艳丽 +5 位作者 马全富 周志刚 郭玉琳 戴璇 高晗 吴绪峰 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期388-392,共5页
目的研究粒细胞集落刺激因子(G-CSF)作用下荷瘤小鼠骨髓中性粒细胞(TBM-PMN)产生中性粒细胞胞外陷阱(NETs)对U14宫颈癌细胞成瘤、血管生成及凋亡的作用。方法 Percoll密度梯度离心法分离获取TBM-PMN,在体外实验中用G-CSF刺激TBM-PMN产生... 目的研究粒细胞集落刺激因子(G-CSF)作用下荷瘤小鼠骨髓中性粒细胞(TBM-PMN)产生中性粒细胞胞外陷阱(NETs)对U14宫颈癌细胞成瘤、血管生成及凋亡的作用。方法 Percoll密度梯度离心法分离获取TBM-PMN,在体外实验中用G-CSF刺激TBM-PMN产生NETs,用流式细胞术检测NETs的生成。体内实验研究U14肿瘤细胞与TBM-PMN混合成瘤后,用G-CSFR干扰G-CSF作用或DNA酶Ⅰ抑制NETs形成,研究其对U14肿瘤细胞成瘤的影响,免疫组织化学法检测其对肿瘤组织中血管生成的影响。在体外实验中将U14肿瘤细胞与TBM-PMN共培养,用anti-G-CSF阻断G-CSF作用或DNA酶Ⅰ抑制NETs形成,流式细胞术检测其对U14肿瘤细胞凋亡的影响。结果 G-CSF刺激TBM-PMN产生NETs。在体内实验中TBM-PMN有促进肿瘤生长的作用,加入G-CSFR或DNA酶Ⅰ后其促肿瘤生长作用及促血管生成作用减弱。在体外TBM-PMN与U14肿瘤细胞共培养体系中,用anti-G-CSF阻断G-CSF作用或者用DNA酶Ⅰ抑制NETs形成后其抑制凋亡的能力可部分恢复。结论 G-CSF作用下小鼠TBM-PMN能够产生NETs,其对U14小鼠宫颈癌细胞株具有促瘤作用。 展开更多
关键词 宫颈癌 粒细胞集落刺激因子 小鼠骨髓中性粒细胞 中性粒细胞胞外陷阱 促瘤作用
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小鼠骨髓间充质干细胞SCA-1^+/CD45^+/CD31^+亚群自身抗凋亡基因研究 被引量:1
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作者 贺继刚 李洪荣 +3 位作者 桂龙升 李永武 严丹 王平 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2015年第12期1757-1761,共5页
目的探讨小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)亚群SCA-1^+/CD45^+/CD31^+抗凋亡的分子基础。方法以小鼠心脏干细胞表面分化抗原检测BMSCs后以CD45、CD31为标准分选得到4个亚群。体外将4个亚群采用无血清低氧(5%)培养,流式细胞术检测各组的凋亡... 目的探讨小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)亚群SCA-1^+/CD45^+/CD31^+抗凋亡的分子基础。方法以小鼠心脏干细胞表面分化抗原检测BMSCs后以CD45、CD31为标准分选得到4个亚群。体外将4个亚群采用无血清低氧(5%)培养,流式细胞术检测各组的凋亡率。分别将细胞注入心梗48 h小鼠体内于注射后48 h完成心功能测定。可见SCA-1^+/CD45^+/CD31^+组抗凋亡能力最强,心脏彩超提示心功能恢复亦优于其他各组。采用基因芯片完成Agilent小鼠全基因4×44K芯片从分子水平对SCA-1^+/CD45^+/CD31^+亚群抗凋亡能力进行探讨。结果将SCA-1^+/CD45^+/CD31^+与其他组有关于凋亡基因进行聚类分析及Network结果共同比较可见两者无交集,以上述差异基因4倍表达为标准,因而以Network结果为主。可见NFk B1、RB1、E2F1为感兴趣基因。结论小鼠BMSCs为一多克隆的细胞群体。SCA-1^+/CD45^+/CD31^+抗凋亡及改善心功能方面优于其他亚群;其分子机制在于NFk B1、RB1、E2F1基因表达较其他亚组多见。 展开更多
关键词 小鼠骨髓间充质干细胞 亚群 基因
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