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丁酸钠通过G蛋白偶联受体41介导蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路刺激牛乳腺上皮细胞增殖
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作者 张静 卜丽君 +4 位作者 郎姣姣 刘亚鹏 夏呈强 霍文婕 刘强 《动物营养学报》 CAS CSCD 2024年第3期1878-1891,共14页
本试验旨在研究丁酸钠(SB)刺激牛乳腺上皮细胞(BMECs)增殖的分子机制。采用单因素设计,以含不同浓度(0、15、30、45、60和75μmol/L)SB的DMEM/F12培养基(含10%新生胎牛血清)培养BMECs,通过细胞计数试剂盒(CCK⁃8)检测细胞活性,确定适宜S... 本试验旨在研究丁酸钠(SB)刺激牛乳腺上皮细胞(BMECs)增殖的分子机制。采用单因素设计,以含不同浓度(0、15、30、45、60和75μmol/L)SB的DMEM/F12培养基(含10%新生胎牛血清)培养BMECs,通过细胞计数试剂盒(CCK⁃8)检测细胞活性,确定适宜SB浓度。然后以对照(0μmol/L)和适宜SB浓度培养BMECs,并采用蛋白激酶B(Akt)阻断剂(AKT⁃IN⁃1)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)阻断剂雷帕霉素(Rap)或小干扰RNA(siR⁃NA)沉默G蛋白偶联受体41(GPR41)对信号通路及受体进行处理,检测BMECs细胞增殖、凋亡以及GPR41和Akt/mTOR信号通路相关基因和蛋白表达的变化。结果表明:1)与对照组相比,60μmol/L的SB显著提高了BMECs细胞活力(P<0.05),75μmol/L的SB显著抑制了BMECs细胞活力(P<0.05);60μmol/L的SB极显著增加了增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白A2(CCNA2)和细胞周期蛋白D1(CCND1)的mRNA相对表达量(P<0.01),显著增加了PCNA和细胞周期蛋白A1(CCNA1)的蛋白相对表达量(P<0.05)。2)与对照组相比,60μmol/L SB显著或极显著提高了B细胞淋巴瘤2(BCL2)的mRNA和蛋白相对表达量及BCL2/B细胞淋巴瘤2相关X蛋白(BAX)比值(P<0.05或P<0.01),显著或极显著降低了BAX、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase⁃3)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(Caspase⁃9)的mRNA和蛋白相对表达量(P<0.05),同时显著或极显著提高了磷酸化蛋白激酶B(p⁃Akt)/Akt和磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p⁃mTOR)/mTOR比值(P<0.05或P<0.01)。60μmol/L的SB对Akt和mTOR信号通路的激活被AKT⁃IN⁃1极显著阻断(P<0.01),而Rap抑制mTOR完全逆转了60μmol/L SB对BMECs增殖的促进作用以及增殖基因和蛋白表达的改变(P<0.05或P<0.01),但不影响与凋亡和SB激活的Akt信号通路相关的mRNA或蛋白表达(P>0.05)。3)与对照组相比,60μmol/L的SB极显著提高了GPR41的mRNA相对表达量(P<0.01),显著提高了GPR41蛋白相对表达量(P<0.05)。GPR41 siRNA沉默GPR41后完全逆转了60μmol/L SB对BMECs增殖的促进作用以及Akt/mTOR信号通路相关的增殖基因和蛋白的mRNA或蛋白表达(P<0.05或P<0.01)。由此可见,60μmol/L SB可通过GPR41介导Akt/mTOR信号通路促进BMECs增殖。 展开更多
关键词 Akt mTOR 信号通路 牛乳腺上皮细胞 增殖 丁酸钠
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缺氧状态下has-miR-215-5p通过抑制BLCAP的表达调控子宫内膜腺上皮细胞增殖和迁移
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作者 张婉玉 王含必 邓成艳 《生殖医学杂志》 CAS 2024年第4期494-500,共7页
目的探究缺氧状态下的子宫内膜腺上皮细胞(EEC)增殖和迁移的可能机制。方法分别提取缺氧(1%氧浓度,缺氧组)和常氧(21%氧浓度,常氧组)条件下EEC的RNA进行高通量测序(RNA-sequence),分析两组细胞中微小RNA(microRNA,miRNA)的差异表达。利... 目的探究缺氧状态下的子宫内膜腺上皮细胞(EEC)增殖和迁移的可能机制。方法分别提取缺氧(1%氧浓度,缺氧组)和常氧(21%氧浓度,常氧组)条件下EEC的RNA进行高通量测序(RNA-sequence),分析两组细胞中微小RNA(microRNA,miRNA)的差异表达。利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)的方法对差异表达的miRNA即has-miR-215-5p进行鉴定,通过miRNA靶基因数据库网站(Target Scan)分析has-miR-215-5p的靶基因。Western Blot检测两组细胞中靶基因膀胱癌相关蛋白(BLCAP)的蛋白表达水平,细胞计数实验检测两组EEC的增殖情况,划痕实验检测两组EEC的迁移能力。结果测序结果显示,缺氧组EEC中has-miR-215-5p表达显著上升(P<0.001),RT-qPCR验证结果与测序结果一致。miRNA Target Scan数据库检索结果显示,BLCAP是has-miR-215-5p的下游靶基因,双荧光素酶报告基因实验结果显示has-miR-215-5p与BLCAP-3’-UTR结合,结合位点突变后结合活性消失。Western Blot结果显示,与常氧组相比,缺氧组EEC中的BLCAP蛋白表达显著下降(P<0.001)。CCK-8及划痕实验分别提示与常氧组相比,缺氧组的EEC增殖能力显著降低、迁移能力显著增强(P<0.001)。结论缺氧条件下EEC中has-miR-215-5p可能通过与BLCAP-3’-UTR结合,抑制BLCAP的表达活性,导致EEC的增殖降低与迁移增强。 展开更多
关键词 子宫内膜腺上皮细胞 缺氧 has-miR-215-5p 膀胱癌相关蛋白 细胞增殖 细胞迁移
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IGFBP5增龄性表达促进胸腺上皮细胞线粒体自噬和凋亡
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作者 陈禧禅 曾继涛 +2 位作者 瞿思铭 高维武 吴玉章 《陆军军医大学学报》 CAS CSCD 2024年第6期567-577,共11页
目的 探讨在胸腺上皮细胞中随年龄增长而上调表达的胰岛素样生长因子结合蛋白5(Insulin Like Growth Factor Binding Protein 5,IGFBP5)在胸腺衰退中的作用和机制。方法 使用基因差异表达分析方法从已发表人胸腺基质细胞单细胞数据集(GS... 目的 探讨在胸腺上皮细胞中随年龄增长而上调表达的胰岛素样生长因子结合蛋白5(Insulin Like Growth Factor Binding Protein 5,IGFBP5)在胸腺衰退中的作用和机制。方法 使用基因差异表达分析方法从已发表人胸腺基质细胞单细胞数据集(GSE147520)中筛选出随年龄增长表达上调程度最高的基因IGFBP5;Mfuzz趋势分析筛选出与IGFBP5具有相同表达趋势的基因;富集分析注释与IGFBP5共趋势基因集;使用蛋白序列比对工具研究IGFBP5蛋白氨基酸序列的人鼠同源性;使用NIH基因数据库研究IGFBP5在人鼠器官组织中表达模式;免疫组化研究IGFBP5在不同年龄C57/BL6小鼠胸腺中的表达模式;构建IGFBP5过表达胸腺上皮细胞系;透射电镜观察IGFBP5过表达胸腺上皮细胞系中线粒体的形态变化;免疫蛋白印记(Western Blot, WB)对线粒体及全细胞组分线粒体自噬标志物微管相关蛋白1B(Microtubule Associated Protein 1 Light Chain 3 Beta, LC3B)、PTEN诱导激酶1(Pten Induced Kinase 1, PINK1)、Parkin泛素蛋白连接酶(Parkin Rbr E3 Ubiquitin Protein Ligase, Parkin)、BCL2互作蛋白3(BCL2 Interacting Protein 3, BNIP3),细胞凋亡标记物活化型胱天蛋白酶3 (Cleaved-Caspase3)表达水平进行检测;细胞双重免疫荧光对线粒体标志物与线粒体探针(MitoTracker)胞内定位进行检测;使用流式细胞术(Flow Cytometry, FCM)对细胞系凋亡水平进行检测。结果 IGFBP5是人胸腺上皮细胞中随年龄增长表达上调程度最大的基因,与其具有共同表达模式的基因集显著富集在线粒体相关通路上。人与小鼠IGFBP5蛋白序列高度保守,其在人、小鼠多器官组织中表达模式相近,且IGFBP5在人、小鼠胸腺中均呈现中等表达水平;此外,IGFBP5在人和小鼠胸腺上皮中随年龄增长表达升高;在IGFBP5过表达小鼠胸腺上皮细胞系中,透射电镜结果表明线粒体自噬体增多,WB结果表明线粒体组分和细胞组分LC3B、PINK1、Parkin蛋白表达水平上调,BNIP3无明显差异;细胞双重免疫荧光结果表明LC3B、PINK1、Parkin蛋白胞质表达增多且与线粒体共定位;WB表明IGFBP5过表达鼠胸腺上皮细胞系中细胞凋亡标志物Cleaved-Caspase3水平升高;FCM表明IGFBP5过表达细胞系凋亡细胞比例增加。结论 人、小鼠胸腺上皮细胞中随年龄增长而表达升高的IGFBP5促进线粒体自噬和细胞凋亡,从而导致胸腺上皮细胞减少和胸腺功能衰退,因此,IGFBP5可成为干预胸腺衰老、重构人体免疫力的潜在靶标。 展开更多
关键词 腺上皮细胞 胰岛素样生长因子结合蛋白5 线粒体自噬 凋亡 衰退
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缺氧环境下HIF-1调控PAD4介导的H3cit促进子宫内膜腺上皮细胞凋亡
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作者 黄勇 罗书 +1 位作者 廖源 王开举 《河北医学》 CAS 2023年第9期1432-1438,共7页
目的:探究缺氧环境下HIF-1以及PAD4对子宫内膜腺上皮细胞凋亡的作用及其相关机制。方法:常氧和缺氧环境培养宫内膜腺上皮细胞CM-H058,qRT-PCR和Western blot检测HIF-1、PAD4、H3cit、Caspase3、Caspase7表达,流式细胞术检测细胞凋亡水... 目的:探究缺氧环境下HIF-1以及PAD4对子宫内膜腺上皮细胞凋亡的作用及其相关机制。方法:常氧和缺氧环境培养宫内膜腺上皮细胞CM-H058,qRT-PCR和Western blot检测HIF-1、PAD4、H3cit、Caspase3、Caspase7表达,流式细胞术检测细胞凋亡水平。通过慢病毒转染法将sh-NC、sh-HIF-1、oe-NC、oe-PAD4转染至CM-H058,缺氧环境培养并分组为:sh-NC组、sh-HIF-1组、sh-HIF-1+oe-NC组和sh-HIF-1+oe-PAD4组,检测各组细胞HIF-1、PAD4、H3cit、Caspase3、Caspase7表达和细胞凋亡水平;检测PAD4、H3cit和H3K27ac在Caspase3、Caspase7 TSS富集水平。结果:与常氧组比较,缺氧组HIF-1、PAD4、H3cit、Caspase3、Caspase7表达升高(P<0.05),细胞凋亡水平升高(P<0.05)。与sh-NC组比较,sh-HIF-1组HIF-1、PAD4、H3cit、Caspase3、Caspase7表达降低(P<0.05),细胞凋亡水平降低(P<0.05),HIF-1在PAD4 TSS富集水平降低(P<0.05)。与sh-HIF-1+oe-NC组比较,sh-HIF-1+oe-PAD4组PAD4、H3cit、Caspase3、Caspase7表达升高(P<0.05),细胞凋亡水平升高(P<0.05)。结论:缺氧环境下HIF-1促进PAD4表达。PAD4及其催化的H3cit进一步在Caspase3、Caspase7 TSS富集,促进Caspase3、Caspase7转录和表达,最终诱导子宫内膜腺上皮细胞凋亡。 展开更多
关键词 缺氧环境 缺氧诱导因子1 精氨酸脱亚胺酶4 子宫内膜腺上皮细胞 凋亡
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黄曲霉毒素B1激活核转录因子-κB信号通路引起牛乳腺上皮细胞发生炎性反应 被引量:1
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作者 任晓丽 皇甫和平 +3 位作者 王军 靳双星 王俊东 石冬梅 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第7期4587-4595,共9页
本试验旨在研究不同浓度黄曲霉毒素B1(AFB1)对牛乳腺上皮细胞(MAC-T细胞)中核转录因子-κB(NF-κB)信号通路介导的炎症反应的影响。向MAC-T细胞中分别加入不同浓度的AFB1处理培养液培养24 h,分析AFB1对MAC-T细胞活力、乳酸脱氢酶(LDH)... 本试验旨在研究不同浓度黄曲霉毒素B1(AFB1)对牛乳腺上皮细胞(MAC-T细胞)中核转录因子-κB(NF-κB)信号通路介导的炎症反应的影响。向MAC-T细胞中分别加入不同浓度的AFB1处理培养液培养24 h,分析AFB1对MAC-T细胞活力、乳酸脱氢酶(LDH)活性、促炎细胞因子含量和基因表达以及NF-κB信号通路相关蛋白表达的影响。结果显示:1)与对照组相比,2.5、5.0、10.0和20.0μmol/L AFB1处理MAC-T细胞均能显著或极显著降低细胞活力(P<0.05或P<0.01),显著或极显著升高培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活性(P<0.05或P<0.01),且呈剂量依赖性。2)与对照组(0μmol/L AFB1)相比,5.0、10.0和20.0μmol/L AFB1处理MAC-T细胞使上清液中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量显著或极显著升高(P<0.05或P<0.01);5.0μmol/L AFB1处理使MAC-T细胞中IL-1β、IL-8和TNF-αmRNA的相对表达量显著或极显著升高(P<0.05),10.0μmol/L AFB1处理使MAC-T细胞中IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-αmRNA的相对表达量显著或极显著升高(P<0.01),20.0μmol/L AFB1处理使MAC-T细胞中IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-αmRNA的相对表达量极显著升高(P<0.01)。3)与对照组相比,10.0和20.0μmol/L AFB1处理使MAC-T细胞中磷酸化P65(p-P65)、磷酸化核转录因子-κB抑制因子α(p-IκBα)蛋白的相对表达量极显著升高(P<0.01)。上述结果提示,AFB1通过促进炎症相关因子表达和激活NF-κB信号通路,引起MAC-T细胞发生炎性反应。 展开更多
关键词 黄曲霉毒素B1 牛乳腺上皮细胞 NF-ΚB信号通路 炎性反应
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小鼠发育过程中胸腺上皮细胞的动力学变化
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作者 杨书平 郑仲 +3 位作者 刘相邑 豆晓婕 刘国红 柴玉荣 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2023年第1期55-61,共7页
目的:探究小鼠发育过程中胸腺上皮细胞的动力学变化。方法:取2月龄、6月龄、12月龄雌性昆明小鼠各5只,采用颈椎脱臼法处死小鼠,取胸腺组织,制作石蜡切片,HE染色观察小鼠胸腺皮质和髓质的变化,免疫组化染色检测胸腺上皮细胞的分子标记(... 目的:探究小鼠发育过程中胸腺上皮细胞的动力学变化。方法:取2月龄、6月龄、12月龄雌性昆明小鼠各5只,采用颈椎脱臼法处死小鼠,取胸腺组织,制作石蜡切片,HE染色观察小鼠胸腺皮质和髓质的变化,免疫组化染色检测胸腺上皮细胞的分子标记(角质蛋白5、角质蛋白8)、胸腺上皮细胞成熟有关的自身免疫调节因子(Aire)、胸腺上皮祖细胞的标志物[上皮细胞黏附分子(EpCAM)]、干细胞转录因子[性别决定区Y框蛋白2(Sox2)],免疫印迹法检测FoxN1、EpCAM的蛋白表达,qRT-PCR检测FoxN1、Aire的mRNA的表达。结果:2月龄小鼠胸腺的皮质和髓质结构较为完整,边界清晰;6月龄小鼠胸腺的皮质和髓质结构逐渐融合;12月龄小鼠胸腺的皮质和髓质结构较紊乱,皮髓质交界处不清楚,皮质变薄;随着月龄增加,小鼠胸腺组织的结构完整性逐渐丧失。随着月龄的增加,小鼠胸腺中K5、K8、Aire、EpCAM和Sox2阳性细胞逐渐减少,FoxN1蛋白和mRNA、EpCAM蛋白和Aire mRNA的表达量逐渐降低。结论:小鼠胸腺上皮细胞以及上皮干细胞/祖细胞随发育逐渐减少,提示胸腺正常组织结构逐渐丧失,导致胸腺衰老和免疫功能衰退。 展开更多
关键词 腺上皮细胞 细胞 小鼠 衰老
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胸腺上皮细胞特异性敲除GSK-3β基因小鼠模型的鉴定及免疫学特征观察
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作者 李喜 曾艳 +6 位作者 陈昌蓉 李论 余祥 周永芹 王德成 邓亚光 宋银宏 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期279-286,共8页
目的构建并鉴定胸腺上皮细胞(thymic epithelial cells,TECs)特异性敲除GSK-3β基因小鼠模型,评价其免疫学特征。方法采用小鼠胚胎干细胞(ES细胞,embryonic stem cells)打靶基因敲除技术,得到F0代的GSK-3β^(flox/flox)(GSK-3β^(f/f))... 目的构建并鉴定胸腺上皮细胞(thymic epithelial cells,TECs)特异性敲除GSK-3β基因小鼠模型,评价其免疫学特征。方法采用小鼠胚胎干细胞(ES细胞,embryonic stem cells)打靶基因敲除技术,得到F0代的GSK-3β^(flox/flox)(GSK-3β^(f/f))小鼠;再采用Cre-LoxP系统进行小鼠的繁殖;PCR鉴定,筛选出基因型为GSK-3β^(f/f)FoxN1-Cre^(+/-)(GSK-3β^(-/-))小鼠,即为在TECs特异性敲除GSK-3β基因的小鼠。观察基因敲除鼠的一般生物学特征、繁殖能力和子代存活率。应用HE染色、流式细胞术及免疫荧光技术,比较基因敲除鼠和野生型小鼠免疫器官结构、胸腺、脾及外周血中免疫细胞比例及增殖能力差异。结果成功构建TECs特异性敲除GSK-3β基因小鼠模型。与野生型(wild type,WT)小鼠相比,GSK-3β^(-/-)小鼠一般生物学特征无明显差异,子代存活率>90%;衰老进程中GSK-3β^(-/-)小鼠胸腺比WT小鼠体积大,胸腺指数高,胸腺细胞数量多;脾中的初始T细胞及近期迁移细胞数量也显著多于WT小鼠。结论成功构建了TECs特异性敲除GSK-3β基因小鼠模型。为研究GSK-3β基因在TECs的功能和作用机制提供了很好的研究模型。 展开更多
关键词 腺上皮细胞 特异性敲除 GSK-3Β 免疫学特征
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脂多糖对牛乳腺上皮细胞自噬和凋亡的影响
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作者 张兴 高英魁 +8 位作者 郝中华 刘静静 张华强 归荣 张珂菲 周广薇 邓立新 王学兵 童超 《动物医学进展》 北大核心 2023年第9期69-75,共7页
为探究脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对牛乳腺上皮细胞(MAC-T)自噬和凋亡的影响,以MAC-T细胞为试验对象,用CCK-8和乳酸脱氢酶(LDH)法检测不同浓度LPS(100、150、200、250μg/mL),检测细胞的存活率和损伤,从上述分组中挑选浓度为0(对照... 为探究脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对牛乳腺上皮细胞(MAC-T)自噬和凋亡的影响,以MAC-T细胞为试验对象,用CCK-8和乳酸脱氢酶(LDH)法检测不同浓度LPS(100、150、200、250μg/mL),检测细胞的存活率和损伤,从上述分组中挑选浓度为0(对照)、50、100、200μg/mL的LPS建立试验组,Hoechst33342检测细胞核形态,qPCR法检测MAC-T细胞中自噬和凋亡基因(LC3B、p62、BAX、BCL-2、ATG5、ATG7、Beclin-1、caspase-3)mRNA的表达量,Western blot检测MAC-T细胞中自噬和凋亡(LC3B、p62、BAX、BCL-2、ATG5、ATG7、Beclin-1、caspase-3)相关蛋白表达。结果显示,MAC-T细胞的活力会随着LPS的浓度和时间的推移下降,细胞上清中的LDH随着LPS浓度上升而增加,Hoechst33342染色后可以发现细胞核形态出现异型性,染色质碎裂、固缩。qPCR和Western blot检测结果显示LPS在50~100μg/mL浓度下可引起MAC-T细胞自噬,200μg/mL可抑制此过程,同时细胞凋亡随着LPS浓度上升而加剧。说明LPS可引起MAC-T细胞自噬同时诱导细胞凋亡,为大肠埃希氏菌诱导牛乳腺炎发生机制的研究提供参考。 展开更多
关键词 牛乳腺上皮细胞 脂多糖 自噬 凋亡
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牛乳腺上皮细胞的分离培养及其生物学特性 被引量:47
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作者 多曙光 吴应积 +1 位作者 罗奋华 旭日干 《Zoological Research》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期299-305,共7页
采用胶原酶消化法和胰蛋白酶选择性消化法分离、培养和纯化牛乳腺上皮细胞。形态学观察表明,培养的细胞具有典型的上皮细胞形态特征;染色体分析结果表明,培养的细胞具有正常的染色体数目。通过荧光免疫细胞染色方法鉴定了培养的细胞表... 采用胶原酶消化法和胰蛋白酶选择性消化法分离、培养和纯化牛乳腺上皮细胞。形态学观察表明,培养的细胞具有典型的上皮细胞形态特征;染色体分析结果表明,培养的细胞具有正常的染色体数目。通过荧光免疫细胞染色方法鉴定了培养的细胞表达上皮细胞特异的角蛋白5和8。该细胞在添加胰岛素、氢化可的松以及羊催乳素的无血清培养液中诱导培养时,用RT-PCR方法检测到了β-酪蛋白基因的转录。这些结果表明,分离培养的细胞是乳腺上皮细胞,这些细胞在诱导培养的条件下能够转录表达β-酪蛋白。 展开更多
关键词 牛乳腺上皮细胞 细胞培养 核型分析 β-酪蛋白转录
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山羊子宫内膜腺上皮细胞的分离培养和鉴定 被引量:13
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作者 丰艳妮 吴庆侠 +2 位作者 吴瑞 楚元奎 靳亚平 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期12-14,共3页
为了探讨山羊子宫内膜腺上皮细胞的分离、生长条件以及纯度鉴定,通过2g/L的Ⅰ型胶原酶置于水浴消化4h,200目的滤网过滤后进行低速离心,收集沉淀物,沉降洗涤3~5次,将细胞移至24孔培养板置37℃细胞培养箱中进行培养。12h后开始贴... 为了探讨山羊子宫内膜腺上皮细胞的分离、生长条件以及纯度鉴定,通过2g/L的Ⅰ型胶原酶置于水浴消化4h,200目的滤网过滤后进行低速离心,收集沉淀物,沉降洗涤3~5次,将细胞移至24孔培养板置37℃细胞培养箱中进行培养。12h后开始贴壁生长,腺团开始向外部扩散,生长2~3d,细胞扩散并出现明显的铺路石状,4~5d腺团基本扩散开来并呈一定走向继续生长。经免疫组织化学方法进行细胞染色,细胞表达角蛋白的阳性率达90%以上。 展开更多
关键词 子宫内膜 腺上皮细胞 免疫组织化学 鉴定 山羊
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游离亚麻酸对奶牛乳腺上皮细胞脂肪酸代谢相关基因mRNA转录的影响 被引量:12
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作者 胡菡 王加启 +3 位作者 李发弟 卜登攀 李喜艳 周凌云 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期1342-1349,共8页
本研究以体外培养的奶牛乳腺上皮细胞为模型,研究外源添加不同浓度游离α-亚麻酸(LNA)对细胞脂肪酸代谢相关靶基因mRNA转录水平的影响。体外培养的奶牛乳腺上皮细胞,以牛血清白蛋白(BSA)代替胎牛血清为对照组,BSA与不同浓度LNA为试验组... 本研究以体外培养的奶牛乳腺上皮细胞为模型,研究外源添加不同浓度游离α-亚麻酸(LNA)对细胞脂肪酸代谢相关靶基因mRNA转录水平的影响。体外培养的奶牛乳腺上皮细胞,以牛血清白蛋白(BSA)代替胎牛血清为对照组,BSA与不同浓度LNA为试验组,试验培养36h,采用RT-qPCT对目的基因进行定量,检测其表达丰度。结果显示:1)0.625~5.000μmol/LLNA极显著上调了脂肪酸转运基因中CD36的表达(P<0.01),而较高浓度(≥5μmol/L)的LNA下调了另2种转运蛋白,即长链酰基辅酶A合成酶-1基因(ACSL1)和脂肪酸结合蛋白-3(FABP3)基因的表达(P<0.01);2)LNA对奶牛乳腺上皮细胞脂肪酸合成相关基因表达丰度的影响具有剂量效应,较高浓度(≥5μmol/L)的LNA极显著降低脂肪酸合成酶(FASN)基因和硬脂酰去饱和酶(SCD)基因mRNA转录水平(P<0.01);3)LNA的浓度对过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPARG)基因的mRNA转录水平没有显著影响(P>0.05),但所有浓度的LNA均极显著降低了固醇调节元件结合蛋白-1(SREBF1)基因的mRNA转录水平(P<0.01)。本试验结果证实,长链脂肪酸LNA对乳腺上皮细胞脂肪酸关键合成酶的基因转录具有抑制作用,而CD36在长链脂肪酸转运进入奶牛乳腺上皮细胞的过程中具有重要作用。 展开更多
关键词 牛乳腺上皮细胞 亚麻酸 脂肪酸 摄取与转运 内源合成 硬脂酰去饱和酶
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人在位和异位子宫内膜腺上皮细胞和间质细胞的原代培养 被引量:8
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作者 石书芳 俞超芹 +2 位作者 刘玉环 崔英 惠宁 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第11期1228-1231,共4页
目的 :探讨在位和异位子宫内膜腺上皮细胞和间质细胞分离培养方法 ,为研究子宫内膜异位症的发病机制提供体外细胞模型。方法 :通过消化、过滤、沉降等方法 ,分离培养正常对照子宫内膜以及子宫内膜异位症在位、异位子宫内膜腺上皮细胞和... 目的 :探讨在位和异位子宫内膜腺上皮细胞和间质细胞分离培养方法 ,为研究子宫内膜异位症的发病机制提供体外细胞模型。方法 :通过消化、过滤、沉降等方法 ,分离培养正常对照子宫内膜以及子宫内膜异位症在位、异位子宫内膜腺上皮细胞和间质细胞 ,模拟人体内雌激素水平研究促进细胞生长的方法 ,光学显微镜观察离体细胞形态。结果 :正常对照子宫内膜细胞分离培养成功率达 91.7% (11/ 12 ) ,子宫内膜异位症在位子宫内膜细胞成功率为 93.8% (15 / 16 ) ,子宫内膜异位症异位子宫内膜细胞成功率为 75 .0 % (12 / 16 )。间质细胞传代 2次后 ,生长缓慢 ,经雌激素作用后 ,生长明显改善 ;腺上皮细胞不能传代 ,经雌激素作用后 ,生长改善不明显。结论 :体外分离培养的人子宫内膜细胞比子宫内膜异位动物模型更接近于人体的特点 ,在位和异位子宫内膜腺上皮细胞和间质细胞分离培养可作为研究子宫内膜异位症的体外细胞模型之一。 展开更多
关键词 子宫内膜异位症 子宫内膜 腺上皮细胞 间质细胞 细胞培养
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玉米赤霉烯酮对小鼠胸腺上皮细胞的毒性作用 被引量:9
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作者 梁梓森 许利娜 +5 位作者 马勇江 邓衔柏 李英 范小龙 李玉谷 宁章勇 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期894-897,共4页
采用台盼蓝计数、流式细胞仪分析等方法,离体研究玉米赤霉烯酮对小鼠胸腺上皮细胞增殖与细胞周期的影响,结果发现:不同质量浓度(1~25mg/L)玉米赤霉烯酮对小鼠胸腺上皮细胞的增殖均具有显著抑制作用(P〈0.05),并表现出与剂量... 采用台盼蓝计数、流式细胞仪分析等方法,离体研究玉米赤霉烯酮对小鼠胸腺上皮细胞增殖与细胞周期的影响,结果发现:不同质量浓度(1~25mg/L)玉米赤霉烯酮对小鼠胸腺上皮细胞的增殖均具有显著抑制作用(P〈0.05),并表现出与剂量和处理时间依赖性关系。高剂量(10~25mg/L)ZEA使小鼠胸腺上皮细胞细胞周期显著阻滞于G2/M期(P〈0.05),并存在剂量依赖性关系。这些结果表明,玉米赤霉烯酮对小鼠胸腺上皮细胞有直接毒害作用。 展开更多
关键词 玉米赤霉烯酮 细胞增殖 细胞周期 腺上皮细胞 小鼠
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人子宫内膜腺上皮细胞原代培养方法的改进 被引量:10
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作者 王欣 成娅 +3 位作者 程湘 刘萍 王智 林桂兰 《重庆医学》 CAS CSCD 2005年第5期702-703,705,共3页
目的改进子宫内膜腺上皮细胞原代培养的方法,以使其可作为功能失调性子宫出血(功血,DysfunctionalUterine Bleeding,DUB)的体外实验模型之一。方法在取材、培养条件和细胞纯化等方面对子宫内膜腺上皮细胞原代培养的方法作了改进。结果3... 目的改进子宫内膜腺上皮细胞原代培养的方法,以使其可作为功能失调性子宫出血(功血,DysfunctionalUterine Bleeding,DUB)的体外实验模型之一。方法在取材、培养条件和细胞纯化等方面对子宫内膜腺上皮细胞原代培养的方法作了改进。结果34份标本,23份获得成功。培养时间为4~22d,无1例发生污染。接种后的5~6d为进行实验的最佳时间。结论改进后的子宫内膜腺上皮细胞原代培养法克服了污染问题,增加了可获得的细胞数。子宫内膜腺上皮细胞的分离、培养可作为功血的体外实验模型之一。 展开更多
关键词 功能失调性子官出血 子宫内膜 腺上皮细胞 细胞原代培养
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牛乳腺上皮细胞的分离培养 被引量:31
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作者 李震 王英 +1 位作者 刘惠莉 张德福 《上海农业学报》 CSCD 2000年第3期25-28,共4页
比较了几种乳腺细胞分离培养方法的特点。实验证明 :胶原酶消化法和组织块种植法均可用于培养牛原代乳腺细胞。其中 ,胶原酶消化法容易得到均匀的乳腺细胞 ,且上皮细胞所占比例也比较高 ;组织块培养法不容易丢失、损伤上皮细胞 ,但上皮... 比较了几种乳腺细胞分离培养方法的特点。实验证明 :胶原酶消化法和组织块种植法均可用于培养牛原代乳腺细胞。其中 ,胶原酶消化法容易得到均匀的乳腺细胞 ,且上皮细胞所占比例也比较高 ;组织块培养法不容易丢失、损伤上皮细胞 ,但上皮细胞长出较晚 ,且占比例较低 ,然而 ,用于培养小动物乳腺组织具有优势 ,并且可结合组织块转移、胰蛋白酶消化纯化上皮细胞 ,用此方法本实验获得了牛乳腺上皮细胞富集的细胞系 ;同时讨论了乳腺上皮细胞增殖与分化的关系 。 展开更多
关键词 牛乳腺上皮细胞 分离培养 胶原酶消化法 组织块种植法 细胞增殖 细胞分化
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牛奶中乳腺上皮细胞的分离培养及鉴定 被引量:7
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作者 崔新洁 王婷 +2 位作者 刘秉春 陶林 王潇 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期107-113,共7页
旨在建立简便、经济、纯净的牛乳腺上皮细胞的体外培养方法,并对所培养细胞进行鉴定。以新鲜牛奶为材料,离心收集细胞进行原代培养并传代,通过测定生长曲线、乳腺上皮细胞骨架蛋白-角蛋白8和18、β-酪蛋白、核型等对所培养细胞进行鉴定... 旨在建立简便、经济、纯净的牛乳腺上皮细胞的体外培养方法,并对所培养细胞进行鉴定。以新鲜牛奶为材料,离心收集细胞进行原代培养并传代,通过测定生长曲线、乳腺上皮细胞骨架蛋白-角蛋白8和18、β-酪蛋白、核型等对所培养细胞进行鉴定,以确定其为乳腺上皮细胞。离心收集到的细胞原代培养3 d后形成多个单克隆,细胞呈典型的铺路石状,同时伴随少量的吞噬细胞,继续培养至单克隆汇合时,细胞表层产生大小不等的乳滴,吞噬细胞大多转移到乳滴中,传代后,得到纯净的乳腺上皮细胞,吞噬细胞随传代而消失;细胞生长曲线呈"S"型,RT-PCR法扩增到了乳腺上皮细胞的骨架蛋白8、18以及β-酪蛋白,细胞免疫组化检测到了细胞角蛋白8,核型为29对端着丝粒常染色体,1对近端着丝粒性染色体。通过以上试验证明,乳汁分离法可以培养纯净的、具有正常分裂增生能力的牛乳腺上皮细胞,建立了乳腺上皮细胞的体外培养模型。 展开更多
关键词 乳汁 牛乳腺上皮细胞 细胞骨架蛋白 泌乳
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卡介苗诱导人肺腺上皮细胞hBD-1mRNA的增强表达 被引量:11
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作者 冯云 黄宁 +1 位作者 吴琦 王伯瑶 《华西医科大学学报》 CAS CSCD 2000年第3期285-288,共4页
使用热灭活的卡介苗刺激培养的人肺腺上皮细胞(SPC-A-1),利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法和Northern杂交分析,证实了卡介苗能诱导SPC-A-1细胞β-防御素-1基因(hBD-1)的增强表达。卡介苗菌量和刺激时间与SPC-A-1细胞hBD... 使用热灭活的卡介苗刺激培养的人肺腺上皮细胞(SPC-A-1),利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法和Northern杂交分析,证实了卡介苗能诱导SPC-A-1细胞β-防御素-1基因(hBD-1)的增强表达。卡介苗菌量和刺激时间与SPC-A-1细胞hBD-1基因表达量的关系曲线显示,hBD-1 mRNA 在人肺腺上皮细胞的增强表达在一定范围内表现为具刺激剂量和时间依赖关系。实验为开发增强粘膜抗菌肽基因表达的免疫增强剂以防治粘膜感染的研究打下了基础。 展开更多
关键词 卡介苗 β-防御素-1 腺上皮细胞 hBD-1mRNA
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金黄色葡萄球菌诱导牛原代乳腺上皮细胞的凋亡 被引量:7
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作者 崔新洁 胡庆亮 +5 位作者 李奕平 陶琳 修磊 刘秉春 陈媛 王潇 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第15期3212-3219,共8页
【目的】观察金黄色葡萄球菌能否诱导牛原代乳腺上皮细胞发生凋亡。【方法】先以新鲜牛奶为材料分离培养牛乳腺上皮细胞并鉴定,然后用金黄色葡萄球菌侵染牛乳腺上皮细胞,采用普通光镜和扫描电子显微镜观察金黄色葡萄球菌诱导牛乳腺上皮... 【目的】观察金黄色葡萄球菌能否诱导牛原代乳腺上皮细胞发生凋亡。【方法】先以新鲜牛奶为材料分离培养牛乳腺上皮细胞并鉴定,然后用金黄色葡萄球菌侵染牛乳腺上皮细胞,采用普通光镜和扫描电子显微镜观察金黄色葡萄球菌诱导牛乳腺上皮细胞凋亡的形态学变化;用流式细胞仪(Annexin V/PI双染法)定量检测金黄色葡萄球菌感染对牛乳腺上皮细胞凋亡的诱导作用;RT-PCR检测细胞凋亡通路中关键蛋白caspase 3和caspase 8的变化情况。【结果】从乳汁中分离的细胞经原代培养后,细胞呈典型的铺路石状,细胞表层可产生大小不等的乳滴,RT-PCR法扩增出乳腺上皮细胞的骨架蛋白8特异性条带;免疫荧光细胞染色法结果显示分离培养的牛乳腺上皮细胞表达角蛋白8;金黄色葡萄球菌感染牛乳腺上皮细胞3 h后,可诱导牛乳腺上皮细胞发生凋亡,表现为细胞核皱缩,染色质边缘化和细胞浆内空泡增多等典型凋亡特征;Annexin V/PI双染法检测后发现,与对照组相比,感染组细胞凋亡率明显升高,差异极显著(P﹤0.01);与对照组相比,感染组细胞caspase3及caspase 8表达量明显增高。【结论】金黄色葡萄球菌可以诱导牛原代乳腺上皮细胞凋亡,具有细胞凋亡的典型形态特征和生化特性,凋亡通路可能涉及caspase 3和caspase 8参与的外源性凋亡途径。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 牛乳腺上皮细胞 细胞凋亡
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水牛子宫内膜腺上皮细胞和基质细胞的分离·培养和生物学特性研究(英文) 被引量:5
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作者 庄新杰 段亚苹 +2 位作者 黄怡 宁淑芳 张明 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2009年第3期39-42,71,共5页
[Objective] The experiment aimed to set up a method for isolating and culturing endometrial stromal cells (BESC) and endometrial glandular epithelial cells(BEGEC) of buffalo as well as laid foundation for studying bio... [Objective] The experiment aimed to set up a method for isolating and culturing endometrial stromal cells (BESC) and endometrial glandular epithelial cells(BEGEC) of buffalo as well as laid foundation for studying biological mechanism of embryo implantation and uterine diseases. [Method] The enzymatic digestion method, scraping method, serial filtration and differential velocity adherent technique were used to isolate BESC and BEGEC, then immunocytochemical method and TRYPAN-Blue assay were used to determine the purity and survival rate of isolated cells. [Result] The BESC and BEGEC were successfully isolated and cultured while immunocytochemical method and cell count method demonstrated that the purity was over 90%. The result of TRYPAN-Blue assay shown that survival rate of BESC and BEGEC was 91% and 78% respectively. [Conclusion] The enzymatic digestion method, scraping method, serial filtration and differential velocity adherent technique could isolate BESC and BEGEC with high purity. 展开更多
关键词 水牛 子宫内膜 腺上皮细胞 基质细胞 生物学特性
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水牛子宫内膜腺上皮细胞和基质细胞的分离·培养和生物学特性研究 被引量:5
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作者 庄新杰 段亚苹 +2 位作者 黄怡 宁淑芳 张明 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第18期8512-8514,8517,共4页
[目的]建立一种高效的水牛子宫内膜腺上皮细胞和基质细胞分离培养方法,为胚胎着床和子宫内膜相关疾病的分子生物学机制研究奠定基础。[方法]采用酶消化、刮取、系列过滤和差速贴壁相结合的方法分离水牛子宫内膜腺上皮细胞和基质细胞,用... [目的]建立一种高效的水牛子宫内膜腺上皮细胞和基质细胞分离培养方法,为胚胎着床和子宫内膜相关疾病的分子生物学机制研究奠定基础。[方法]采用酶消化、刮取、系列过滤和差速贴壁相结合的方法分离水牛子宫内膜腺上皮细胞和基质细胞,用免疫细胞化学法和台盼兰染色法检测分离细胞的纯度和活率。[结果]成功分离培养出子宫内膜腺上皮细胞和基质细胞;免疫荧光染色和细胞计数表明上皮细胞和基质细胞的纯度均达90%以上;台盼兰染色结果显示,上皮细胞的活率为91%,基质细胞的活率为78%。[结论]采用酶消化、刮取、过滤和差速贴壁相结合的方法可分离出高纯度的水牛子宫内膜腺上皮细胞和基质细胞。 展开更多
关键词 水牛 子宫内膜腺上皮细胞 基质细胞 免疫细胞化学
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