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锯缘青蟹(Scylla serrata)特异性过敏原的研究 被引量：13
1
作者 宋益银 林蕾 +2 位作者 苏秀榕 王春琳 张春丹 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期62-67,共6页
采用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳方法,对锯缘青蟹肌肉中可溶性蛋白质进行分离,以过敏患者阳性血清和正常人阴性血清作对照,通过Western blot鉴定出分子量为14.3kDa的蛋白为锯缘青蟹的特异性过敏原。然后用Sephadex G75凝胶过滤层析和DEAE-52... 采用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳方法,对锯缘青蟹肌肉中可溶性蛋白质进行分离,以过敏患者阳性血清和正常人阴性血清作对照,通过Western blot鉴定出分子量为14.3kDa的蛋白为锯缘青蟹的特异性过敏原。然后用Sephadex G75凝胶过滤层析和DEAE-52离子交换层析纯化出该过敏原,再经MALDI-TOF/TOF-MS检测,利用Blastz在线分析。结果表明,锯缘青蟹特异性过敏原为血蓝蛋白亚基,经ClustalW分析该蛋白的多肽片段序列与可口美青蟹、邓杰内斯蟹、加州龙虾、艾氏真蟹的血蓝蛋白亚基序列有很高的同源性,经Prosite数据库检索后发现肽段1和肽段2有酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点和蛋白激酶C磷酸化位点,是过敏原参与机体反应的重要活性位点。 展开更多
关键词 锯缘青蟹过敏原 SDS-PAGE 蛋白免疫印迹 层析 质谱分析
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镉胁迫对大弹涂鱼(Boleophthalmus pectinirostris)血细胞遗传损伤的研究 被引量：13
2
作者 金春华 李明云 +4 位作者 刘伟成 张春丹 陈炯 史雨红 朱爱意 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期80-84,共5页
以大弹涂鱼为研究对象,应用单细胞凝胶电泳技术并结合外周血基因组DNA琼脂糖凝胶电泳,研究了镉胁迫对大弹涂鱼外周血细胞的遗传损伤。结果表明:(1)镉对大弹涂鱼外周血细胞是遗传毒性而非细胞毒性,并且产生的遗传损伤存在显著(P<0.01... 以大弹涂鱼为研究对象,应用单细胞凝胶电泳技术并结合外周血基因组DNA琼脂糖凝胶电泳,研究了镉胁迫对大弹涂鱼外周血细胞的遗传损伤。结果表明:(1)镉对大弹涂鱼外周血细胞是遗传毒性而非细胞毒性,并且产生的遗传损伤存在显著(P<0.01或P<0.05)的剂量效应,染毒1h的大弹涂鱼的全长和尾长与浓度的相关方程分别是y=29.592x-10.576(r2=0.9786),y=28.417x-14.859(r2=0.9857),染毒2h的大弹涂鱼的全长和尾长与浓度的相关方程分别是y=32.044x-5.0235(r2=0.941),y=29.911x-9.539(r2=0.9635)。(2)DNA的损伤程度和污染胁迫之间存在着时间效应。以上结果表明,DNA损伤可作为大弹涂鱼受镉胁迫时的生物指标。 展开更多
关键词 镉 单细胞凝胶电泳(彗星试验) DNA凝胶电泳 大弹涂鱼
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泥蚶(Tegillarca granosa)cDNA文库的构建及铁结合蛋白基因(Ferritin)序列分析 被引量：14
3
作者 贺静静 李晔 +6 位作者 李太武 苏秀榕 王孟前 李松伟 周军 马斌 李强芳 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期289-295,共7页
取正常泥蚶肌肉组织获得总RNA,纯化mRNA后,利用含SfiⅠ酶切位点的CDSⅢ引物逆转录合成cDNA第一链,通过LD-PCR合成cDNA双链,经胶回收除去短片段,与pDNR-LIB载体进行连接,电转化到大肠杆菌DH10B中,构建形成原始文库,进行滴度测试和重组率... 取正常泥蚶肌肉组织获得总RNA,纯化mRNA后,利用含SfiⅠ酶切位点的CDSⅢ引物逆转录合成cDNA第一链,通过LD-PCR合成cDNA双链,经胶回收除去短片段,与pDNR-LIB载体进行连接,电转化到大肠杆菌DH10B中,构建形成原始文库,进行滴度测试和重组率鉴定。结果表明原始文库的滴度为3.17×105cfu/ml,重组率为86.3%,插入片段多在500—2500bp间。随机挑选458个克隆测序,经分析获得94种已知基因及87种未知基因。其中包括铁结合蛋白(Ferritin)的全长cDNA序列。该基因序列全长895bp,5'-端非编码区为163bp,3'-非编码区为213bp,开放阅读框为519bp,编码172个氨基酸。推测其蛋白分子量和等电点分别为20kDa和4.89。氨基酸序列与皱纹盘鲍、太平洋牡蛎、血红扇头蜱、文昌鱼、中华蟾蜍、非洲爪蟾、小家鼠以及人等的同源性有62%—82%。比对结果表明,铁结合蛋白基因在动物进化中高度保守。 展开更多
关键词 CDNA文库 序列分析 泥蚶 铁结合蛋白基因
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可口革囊星虫(Phascolosoma esculenta)卵子发生的组织学研究 被引量：15
4
作者 顾晓英 竺俊全 +2 位作者 许式见 尤仲杰 王伟 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期283-288,共6页
采用组织学方法研究了可口革囊星虫卵巢结构及卵子发生过程的形态学变化,以探究可口革囊星虫卵子发生过程及特征。结果表明,可口革囊星虫的卵巢位于收吻肌基部,由小叶组成的带状或块状组织。卵原细胞在卵巢中发育至早期卵母细胞时期单... 采用组织学方法研究了可口革囊星虫卵巢结构及卵子发生过程的形态学变化,以探究可口革囊星虫卵子发生过程及特征。结果表明,可口革囊星虫的卵巢位于收吻肌基部,由小叶组成的带状或块状组织。卵原细胞在卵巢中发育至早期卵母细胞时期单个或成团脱离卵巢入体腔液中,卵母细胞团细胞很快分离为单个细胞;卵母细胞在体腔液中发育成熟后进入肾管;生发泡破裂是卵母细胞成熟的标志;体腔中卵母细胞无滤泡膜,卵黄膜的形成与发育靠卵母细胞本身;卵径小于60μm的卵母细胞呈圆形,卵径大于60μm的卵母细胞为卵圆形,形态上成熟的卵母细胞短径约115—120μm、长径约140—145μm、卵黄膜厚7—9μm。以卵原细胞与卵母细胞发育的形态学特征为依据,将可口革囊星虫的卵子发生过程划分为:卵原细胞增殖期(卵径<10μm)、卵母细胞小生长期(卵径10—20μm)、卵母细胞大生长期Ⅰ(卵径20—60μm)、卵母细胞大生长期Ⅱ[大小为(60μm×70μm)—(120μm×145μm)]、卵母细胞成熟期及退化期6个阶段,反映了可口革囊星虫卵子发生过程的动态变化。 展开更多
关键词 可口革囊星虫 卵子发生 组织学
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泥蚶(Tegillarca granosa)6个微卫星引物的分离和鉴定 被引量：13
5
作者 顾晓英 曾庆国 +1 位作者 尤仲杰 林志华 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期661-664,共4页
应用6个微卫星标记在奉化泥蚶种群上进行扩增,以检测其遗传信息。扩增结果表明,引物所扩增出的等位基因数目变化从3个到7个,平均等位基因数目为5.4。引物的多态性信息含量范围为0.111—0.814。最大的观察杂合度Ho为0.690,最小为0.121。... 应用6个微卫星标记在奉化泥蚶种群上进行扩增,以检测其遗传信息。扩增结果表明,引物所扩增出的等位基因数目变化从3个到7个,平均等位基因数目为5.4。引物的多态性信息含量范围为0.111—0.814。最大的观察杂合度Ho为0.690,最小为0.121。期望杂合度He范围为0.117—0.848。位点TMP22显著偏离了哈代-温伯格平衡。6个引物在18个马来西亚泥蚶上进行扩增,结果只有TMP18和TMP36在马来西亚模板上有扩增产物。 展开更多
关键词 泥蚶 微卫星 等位基因
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饵料对毛蚶(Scapharca subcrenata)不同发育期幼虫脂肪酸组成的影响 被引量：2
6
作者 顾晓英 尤仲杰 +1 位作者 沈伟良 施祥元 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期48-55,共8页
通过投喂不同藻类饵料,利用GC-MS法,研究饵料对毛蚶浮游幼虫体内脂肪酸组成变化的影响。结果表明,不同饵料对幼虫生长和附着变态速度的影响存在差异,混合饵料组效果最佳;饵料种类和脂肪酸含量对幼虫体内脂肪酸组成和其生长存在显著影响... 通过投喂不同藻类饵料,利用GC-MS法,研究饵料对毛蚶浮游幼虫体内脂肪酸组成变化的影响。结果表明,不同饵料对幼虫生长和附着变态速度的影响存在差异,混合饵料组效果最佳;饵料种类和脂肪酸含量对幼虫体内脂肪酸组成和其生长存在显著影响,且体内不饱和脂肪酸含量随着幼虫发育呈下降趋势。在众多脂肪酸中,DHA和EPA对幼虫存活有直接关系,而AA及饱和脂肪酸含量对幼虫生长存在显著影响,ω-3与ω-6脂肪酸含量比值也能反映幼虫生长和变态速度。 展开更多
关键词 GC/MS 脂肪酸 毛蚶 幼虫
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锦鲤保护性组织RNA提取及引物扩增研究 被引量：1
7
作者 王亚军 刘必谦 +1 位作者 吴立山 洪松柏 《水生态学杂志》 北大核心 2008年第6期116-119,共4页
从养殖锦鲤各种组织中提取完整的RNA,是分子生物学研究锦鲤应激表达、体色变异、生长发育等功能基因表达的关键实验。在不伤害养殖锦鲤个体健康的情况下,取用鱼体的鳍条、鳞片、鳃丝、血液4种保护性组织,可以最大程度地减少对珍贵锦鲤... 从养殖锦鲤各种组织中提取完整的RNA,是分子生物学研究锦鲤应激表达、体色变异、生长发育等功能基因表达的关键实验。在不伤害养殖锦鲤个体健康的情况下,取用鱼体的鳍条、鳞片、鳃丝、血液4种保护性组织,可以最大程度地减少对珍贵锦鲤个体的损伤,并达到研究相关基因表达的目的。本研究利用TRizol法提取RNA,获得的各样品RNA条带完整、纯度高。结果表明,4种保护性组织提取的RNA经过逆转录反应,得到了高质量的CDNA。内标基因(β-actin)、热激蛋白基因(hsp70)、金属硫蛋白基因(MT)扩增得到清晰的条带,通过NCBI数据上的BLAST比对证明,各序列的同源性在95%以上。利用本研究的方法,可以充分保护养殖锦鲤个体的完好性,用于进一步的分子生物学研究。 展开更多
关键词 锦鲤 保护性组织 RNA提取 引物扩增
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