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牙龈素提取物对口腔鳞癌细胞HN6生物学特性的影响
1
作者 李虎虓 李笑甜 +3 位作者 赵旭日 张桓瑜 周薇 宋忠臣 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期161-168,共8页
目的·观察牙龈素提取物对口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)细胞HN6生物学特性的影响。方法·选取人OSCC细胞系HN6,加入牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis)牙龈素提取物进行培养。根据... 目的·观察牙龈素提取物对口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)细胞HN6生物学特性的影响。方法·选取人OSCC细胞系HN6,加入牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis)牙龈素提取物进行培养。根据牙龈素提取物的蛋白浓度不同分为对照组(control组),及牙龈素提取物蛋白浓度3.125μg/mL组、6.25μg/mL组、12.5μg/mL组、25μg/mL组、50μg/mL组和100μg/mL组,培养24、48 h后,采用细胞计数试剂盒8(cell counting kit-8,CCK-8)检测牙龈素提取物对HN6细胞增殖活性的影响。后续其他实验,分为control组、25μg/mL组和50μg/mL组进行。通过流式细胞术检测牙龈素提取物对细胞周期的影响,划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,实时荧光定量PCR(real-time PCR,RT-PCR)和Western blotting检测细胞E-cadherin和N-cadherin蛋白和基因的表达。结果·在牙龈素提取物刺激HN6细胞24 h时,相比较control组,牙龈素提取物蛋白浓度25μg/mL组(P=0.025),50μg/mL组(P=0.000)和100μg/mL组(P=0.049)的HN6细胞增殖活性显著增加;当刺激48 h时,6.25μg/mL组(P=0.024)、12.5μg/mL组(P=0.006)、25μg/mL组(P=0.000)、50μg/mL组(P=0.000)和100μg/mL组(P=0.000)均较control组HN6细胞增殖活性有显著增加。细胞周期检测结果显示,与control组相比,经牙龈素提取物刺激24 h,HN6细胞G1期比例下降,S+G2期比例显著性上升(25μg/mL组:P=0.024;50μg/mL组:P=0.001)。细胞迁移实验结果显示,与control组相比,随着牙龈素提取物浓度升高,划痕愈合的百分比显著增加(P=0.001)。细胞Transwell侵袭实验结果显示,与control组相比,随着牙龈素提取物浓度升高,细胞穿过小室底部的数量显著性增加。RT-PCR和Western blotting实验结果显示,与control组相比,随着牙龈素提取物浓度增加,HN6细胞中N-cadherin mRNA和蛋白表达量显著性增加,E-cadherin mRNA和蛋白表达量显著性减少。结论·牙龈素提取物对OSCC细胞HN6的增殖、迁移和侵袭有促进作用。 展开更多
关键词 牙龈素 牙周炎 口腔鳞状细胞癌 细胞增殖 细胞迁移 细胞侵袭
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盐皮质激素受体与代谢相关心血管疾病的研究进展
2
作者 段胜仲 《巴楚医学》 2024年第1期1-7,共7页
盐皮质激素受体(MR)通过与醛固酮结合发挥多种生理作用,参与全身多种系统性疾病的发病过程。MR可在多种细胞中表达,如免疫细胞、代谢细胞等,在这些细胞中MR可通过参与炎症、氧化应激及内皮细胞功能障碍等过程调节机体免疫、代谢和应激... 盐皮质激素受体(MR)通过与醛固酮结合发挥多种生理作用,参与全身多种系统性疾病的发病过程。MR可在多种细胞中表达,如免疫细胞、代谢细胞等,在这些细胞中MR可通过参与炎症、氧化应激及内皮细胞功能障碍等过程调节机体免疫、代谢和应激反应。本文就MR与代谢相关心血管疾病之间的关系进行简要回顾,研究免疫细胞和代谢细胞MR参与调节心肌肥厚、心肌纤维化、动脉粥样硬化、肝脏脂肪变性、胰岛素抵抗、心肌重构及高血压等的关键作用及机制,以期为代谢相关心血管疾病的防治提供证据和思路。 展开更多
关键词 盐皮质激素受体 代谢相关心血管疾病 免疫细胞 代谢细胞
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口腔微生物与全身系统性疾病的关系
3
作者 周陆军 陈柏延 +1 位作者 李雨霖 段胜仲 《四川大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期1-6,共6页
口腔微生物组作为人体种类最为丰富的微生物群体之一,是维持人体健康的重要组成部分。口腔的不同部位具有差异明显的微生物组成,通过与外部环境、口腔局部以及远端器官的交流实现动态平衡。研究表明,口腔微生物稳态失衡与全身多种系统... 口腔微生物组作为人体种类最为丰富的微生物群体之一,是维持人体健康的重要组成部分。口腔的不同部位具有差异明显的微生物组成,通过与外部环境、口腔局部以及远端器官的交流实现动态平衡。研究表明,口腔微生物稳态失衡与全身多种系统性疾病的发生或进展显著相关。本文基于口腔微生物与全身系统性疾病关系的研究进展,针对口腔微生物与全身健康之间的相互作用、病理机制进行综述,为全身系统性疾病的早期预防及临床诊疗提供新的思路。 展开更多
关键词 口腔微生物 稳态失衡 系统性疾病
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小胶质细胞Stat3基因条件性敲除小鼠的构建及鉴定
4
作者 朱晓晨 谢欣宜 +3 位作者 赵旭日 徐丽娜 何智妍 周薇 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期689-698,共10页
目的·基于Cre-Loxp系统构建小胶质细胞Stat3基因条件性敲除小鼠并验证其敲除效率。方法·将Cx3cr1^(creERT2)与Stat3^(fl/fl)基因型小鼠多代交配繁育,直到获得足够数量的Stat3^(fl/fl);Cx3cr1^(creERT2)基因型小鼠,即条件敲除... 目的·基于Cre-Loxp系统构建小胶质细胞Stat3基因条件性敲除小鼠并验证其敲除效率。方法·将Cx3cr1^(creERT2)与Stat3^(fl/fl)基因型小鼠多代交配繁育,直到获得足够数量的Stat3^(fl/fl);Cx3cr1^(creERT2)基因型小鼠,即条件敲除小鼠(conditional knockout,CKO);同窝Stat3^(fl/fl)基因型小鼠,即对照小鼠(wild type,WT)。利用小鼠组织提取DNA后通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR),结合特异性引物分别扩增的结果来判断小鼠基因型。在CKO及WT小鼠6周龄时通过腹腔注射他莫昔芬诱导小胶质细胞中Stat3基因的敲除;2周后,随机选取CKO小鼠(n=4)及WT小鼠(n=4),利用磁珠分选法(magnetic activated cell sorting,MACS)分选出小胶质细胞后通过实时荧光定量PCR(real-time PCR,RT-PCR)技术从基因水平检测基因敲除效率;通过脑组织切片免疫荧光染色标记小胶质细胞和STAT3蛋白观察小胶质细胞中STAT3的表达情况;利用流式细胞术分别检测STAT3在小胶质细胞及脾巨噬细胞中的变化。通过尼氏染色检测神经元细胞的情况;通过脑组织切片荧光染色标记小胶质细胞,观察皮层和海马区域小胶质细胞的情况;通过流式细胞术检测小胶质细胞表型。结果·成功繁育出CKO小鼠和WT小鼠。MACS后脑细胞中小胶质细胞的占比从10%提升到85%。RT-PCR结果显示,相对于WT小鼠,CKO小鼠小胶质细胞中Stat3的mRNA相对表达量为0.3317±0.0414,mRNA水平下调(P=0.001)。脑组织免疫荧光染色结果显示,CKO小鼠小胶质细胞中STAT3蛋白的荧光强度较WT小鼠弱。脑组织流式细胞术显示:WT小鼠小胶质细胞中STAT3的阳性细胞占比为(85.30±5.69)%;CKO小鼠小胶质细胞中STAT3的阳性细胞占比为(39.70±3.88)%,STAT3表达率下降(P=0.001)。脾组织流式细胞术显示,CKO小鼠与WT小鼠脾巨噬细胞中STAT3的阳性细胞占比的差异无统计学意义(P>0.05)。尼氏染色显示,CKO小鼠与WT小鼠神经元细胞无显著差异。脑组织切片荧光染色结果显示,CKO小鼠与WT小鼠的小胶质细胞在形态上无明显差异。小胶质细胞流式细胞术显示CKO小鼠与WT小鼠小胶质细胞表型无显著差别。结论·成功构建小胶质细胞Stat3基因条件性敲除小鼠,为后续相关研究提供动物模型。 展开更多
关键词 小胶质细胞 信号转导和转录激活因子3(STAT3) 他莫昔芬 小鼠 CRE重组酶
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牙龈素提取物对小鼠脑神经炎症的影响 被引量：1
5
作者 张桓瑜 江旖婷 +3 位作者 朱晓晨 何智妍 周薇 宋忠臣 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期570-577,共8页
目的·观察牙龈素提取物对小鼠脑神经炎症的影响。方法·采用超声破膜结合低温超速离心,并通过超滤浓缩的方法从牙龈卟啉单胞菌ATCC33277获得牙龈素提取物。对牙龈素提取物进行蛋白定量后行SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳,经湿转法转移... 目的·观察牙龈素提取物对小鼠脑神经炎症的影响。方法·采用超声破膜结合低温超速离心,并通过超滤浓缩的方法从牙龈卟啉单胞菌ATCC33277获得牙龈素提取物。对牙龈素提取物进行蛋白定量后行SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳,经湿转法转移至聚偏二氟乙烯(polyvinylidene fluoride,PVDF)膜,封闭后分别使用赖氨酸特异性牙龈素(lysine-gingipain,Kgp)抗体和精氨酸特异性牙龈素(arginine-gingipain,Rgp)抗体对样本进行孵育,以检测提取物中的牙龈素免疫原性。通过向C57BL/6N小鼠腹腔注射牙龈素提取物建立小鼠牙龈素急性感染模型。在小鼠腹腔注射牙龈素提取物后的不同时间点,分别采用针对Kgp和Rgp的特异性荧光底物Z-His-Glu-Lys-MCA和Boc-Phe-Ser-Arg-MCA检测小鼠血浆中2种牙龈素的活性。将40只C57BL/6N小鼠随机分为4组,分别为对照组、牙龈素组、牙龈素+Kgp抑制剂(COR388)组和COR388组。预先给予COR388处理1 h后,再腹腔注射牙龈素提取物,24 h后麻醉下取材,脑组织经固定、脱水、包埋、切片等步骤后,分别使用离子钙适配分子1(ionized calcium binding adapter molecule 1,Iba1)抗体和神经胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)抗体标记小鼠大脑皮层小胶质细胞和星形胶质细胞,采用免疫组织化学技术观察上述4组小鼠大脑皮层小胶质细胞及星形胶质细胞的激活情况。采用酶联免疫吸附测定检测大脑皮层肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)的表达水平。结果·蛋白质印迹分析显示,该牙龈素提取物在截留分子量50000和70000附近有较清晰的条带,表明该提取物具有牙龈素免疫原性。此牙龈素提取物具有生物活性,腹腔注射牙龈素提取物后,小鼠血浆牙龈素活性呈现先升后降的趋势。腹腔注射牙龈素提取物后4~8 h,小鼠血浆牙龈素活性达到峰值,随后逐渐下降。免疫组织化学结果显示,小鼠大脑皮层的小胶质细胞和星形胶质细胞体积增大,且具有不规则突起,提示腹腔注射牙龈素提取物可激活小鼠脑内小胶质细胞和星形胶质细胞。酶联免疫吸附测定结果表明小鼠大脑皮层炎症因子TNF-α和IL-1β表达水平升高。结论·急性感染牙龈素提取物可促进小鼠脑神经炎症。 展开更多
关键词 牙龈卟啉单胞菌 精氨酸特异性牙龈素 赖氨酸特异性牙龈素 神经炎症 炎症因子
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牙周炎加重主动脉弓缩窄诱导的小鼠心肌肥厚
6
作者 李露 李雨霖 +1 位作者 柳燕 段胜仲 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2022年第9期1275-1287,共13页
目的·研究牙周炎(periodontitis,PD)对主动脉弓缩窄(transverse aortic constriction,TAC)诱导的小鼠心肌肥厚的作用和机制。方法·将25只C57BL/6J小鼠随机分为假手术(Sham)组、TAC组及TAC+PD组。用丝线结扎加涂抹龈下菌斑的... 目的·研究牙周炎(periodontitis,PD)对主动脉弓缩窄(transverse aortic constriction,TAC)诱导的小鼠心肌肥厚的作用和机制。方法·将25只C57BL/6J小鼠随机分为假手术(Sham)组、TAC组及TAC+PD组。用丝线结扎加涂抹龈下菌斑的方法诱导PD模型,并在PD模型建立后做TAC手术。在假手术或TAC手术后4周,用心脏超声评估心脏功能,然后处死小鼠并取材,其样本用于实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)、免疫组织化学检测、免疫荧光检测、16S rRNA基因测序。结果·TAC+PD组小鼠的牙槽骨吸收和牙龈组织炎症相关基因的表达均高于Sham组和TAC组,表明在TAC小鼠中成功建立了PD模型。与TAC组相比,TAC+PD组小鼠的左心室射血分数(EF)、左心室缩短分数(FS)值都显著降低,表明PD加重TAC导致的心功能受损。与TAC组相比,TAC+PD组小鼠的心脏质量/体质量比率(HW/BW)和心脏质量/胫骨长度比率(HW/TL)升高、肺质量/体质量比率(LW/BW)升高、心肌细胞横截面积增大、心肌肥厚相关的基因表达水平也显著升高,表明PD加重TAC诱导的心肌肥厚和心力衰竭。与TAC组相比,TAC+PD组小鼠的心肌纤维化程度上升、纤维化相关基因上调、脾脏胫骨长度比率(SW/TL)上升、炎症相关基因上调,表明PD加重了TAC诱导心肌细胞的纤维化和炎症反应。16S rRNA基因测序结果表明,TAC+PD组小鼠的口腔结扎丝线中链球菌属(Streptococcus)和韦荣球菌属(Veillonella)的相对丰度显著高于TAC组;TAC+PD组小鼠的心脏中罗尔斯通菌属(Ralstonia)和嗜糖假单胞菌属(Pelomonas)的相对丰度显著高于TAC组;而且TAC+PD组小鼠的心脏中罗尔斯通菌属和嗜糖假单胞菌属的相对丰度显著高于其口腔结扎丝线。结论·PD能够加重TAC术后小鼠心脏功能损害、心肌肥厚和心肌纤维化,并在一定程度上加重心脏的炎症反应,其作用机制可能与罗尔斯通菌属、嗜糖假单胞菌属等口腔微生物相关。 展开更多
关键词 牙周炎 主动脉弓缩窄术 心肌肥厚 口腔微生物
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高盐饮食对小鼠口腔菌群的改变
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作者 李露 柳燕 段胜仲 《国际生物制品学杂志》 CAS 2023年第5期253-257,共5页
目的研究高盐饮食(high salt diet,HSD)对小鼠口腔菌群的作用。方法将8只C57BL/6J小鼠随机分为正常盐饮食(normal salt diet,NSD)组和HSD组。用含0.4%NaCl的正常盐饲料或含8.0%NaCl的高盐饲料喂养小鼠构建NSD或HSD模型。在NSD或HSD后2周... 目的研究高盐饮食(high salt diet,HSD)对小鼠口腔菌群的作用。方法将8只C57BL/6J小鼠随机分为正常盐饮食(normal salt diet,NSD)组和HSD组。用含0.4%NaCl的正常盐饲料或含8.0%NaCl的高盐饲料喂养小鼠构建NSD或HSD模型。在NSD或HSD后2周,取口腔结扎丝线进行16S核糖体RNA基因测序。结果与NSD组相比,HSD组小鼠的口腔微生态在物种丰富度和多样性方面都有明显的改变。16S核糖体RNA基因测序结果表明,相对于NSD组,HSD组小鼠的口腔结扎丝线中乳酸菌属和链球菌属的相对丰度较低,戴尔福特菌属则相对丰度较高。结论HSD能够影响小鼠的口腔微生态,特别是降低了乳酸菌属、链球菌属的相对丰度,增加了戴尔福特菌属的相对丰度。 展开更多
关键词 高盐饮食 口腔微生物区系 乳酸菌 链球菌
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