血清双调蛋白、间皮素对乳腺癌辅助诊断的价值 被引量：1

1

作者 刘泊含 刘鷖雯 +6 位作者 何怡青 卢仁泉 杜艳 张国良 郭倩 高锋 杨翠霞 《检验医学》 CAS 2024年第1期26-30,共5页

目的 探讨血清双调蛋白(AREG)和间皮素(MSLN)水平在乳腺癌辅助诊断中的价值。方法选取2018年12月—2019年5月就诊于复旦大学附属肿瘤医院的女性乳腺癌患者54例(乳腺癌组)、乳腺良性病变患者38例(良性病变组)和表观健康者35名(健康对照组... 目的 探讨血清双调蛋白(AREG)和间皮素(MSLN)水平在乳腺癌辅助诊断中的价值。方法选取2018年12月—2019年5月就诊于复旦大学附属肿瘤医院的女性乳腺癌患者54例(乳腺癌组)、乳腺良性病变患者38例(良性病变组)和表观健康者35名(健康对照组)。采用酶联免疫吸附试验检测血清AREG和MSLN水平。分析乳腺癌患者血清AREG和MSLN水平与临床病理特征的关系。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估AREG、MSLN单独和联合癌胚抗原(CEA)、糖类抗原(CA)15-3检测辅助诊断乳腺癌的效能。结果 与健康对照组比较,乳腺癌组血清AREG、MSLN水平均显著升高(P<0.05)。AREG、MSLN检测诊断乳腺癌的曲线下面积(AUC)分别为0.582、0.637,而血清AREG、MSLN联合CEA、CA15-3检测的AUC为0.757。乳腺癌组血清AREG、MSLN水平与病理类型和淋巴转移有关(P<0.05)。结论 血清AREG、MSLN联合CEA和CA15-3检测可在乳腺癌辅助诊断中具有一定作用。 展开更多

关键词 双调蛋白 间皮素 乳腺癌

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肿瘤相关巨噬细胞模型建立的实验研究 被引量：2

2

作者 张国良 刘鹥雯 +4 位作者 何怡青 杨翠霞 王文涓 杜艳 高锋 《检验医学》 CAS 2014年第9期897-902,共6页

目的建立肿瘤相关巨噬细胞(TAM)的体外分化模型。方法分离健康人外周血单核细胞进行体外培养;经白细胞介素4(IL-4)、白细胞介素13(IL-13)刺激后,利用流式细胞术检测细胞表面标志物CD14、CD204、CD206的表达改变;利用酶联免疫吸附试验(EL... 目的建立肿瘤相关巨噬细胞(TAM)的体外分化模型。方法分离健康人外周血单核细胞进行体外培养;经白细胞介素4(IL-4)、白细胞介素13(IL-13)刺激后,利用流式细胞术检测细胞表面标志物CD14、CD204、CD206的表达改变;利用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测单核细胞白细胞介素10(IL-10)分泌量的改变;继而将刺激后的单核细胞与肿瘤细胞共培养,采用Hoechst染色观察其对肿瘤细胞的杀伤情况。结果经IL-4和IL-13刺激后,单核细胞表面CD14的表达率未发生明显变化,而CD204和CD206的表达显著增高,同时IL-10的分泌量也显著增高;与肿瘤细胞共培养结果显示,经IL-4/IL-13刺激的单核细胞对肿瘤细胞的杀伤能力显著下降。结论 IL-4/IL-13可在体外诱导单核细胞呈现TAM的表型和功能,适用于TAM分化模型的建立,该模型可应用于针对TAM的相关研究。 展开更多

关键词 肿瘤相关巨噬细胞 白细胞介素4 白细胞介素13 单核细胞 M2型巨噬细胞

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兔外周血内皮祖细胞种植支架的实验研究 被引量：1

3

作者 赵清 魏盟 +2 位作者 赵炳辉 刘一文 何怡青 《中国介入心脏病学杂志》 2009年第2期92-95,共4页

目的体外制备兔内皮祖细胞(EPC)种植支架,并评价其可行性。方法采用密度梯度离心法分离兔外周血单个核细胞,接种于人纤维连接蛋白包被的培养板上,予含内皮细胞生长添加剂30μg/mL的M199培养基培养。培养2周后进行免疫荧光染色和免疫细... 目的体外制备兔内皮祖细胞(EPC)种植支架,并评价其可行性。方法采用密度梯度离心法分离兔外周血单个核细胞,接种于人纤维连接蛋白包被的培养板上,予含内皮细胞生长添加剂30μg/mL的M199培养基培养。培养2周后进行免疫荧光染色和免疫细胞化学法鉴定EPC,检测其增殖、迁移、黏附和分泌血管内皮生长因子(VEGF)、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)和一氧化氮(NO)的能力。培养的EPC消化后,将其浇注到有人纤维连接蛋白包被和无包被的裸支架上,6 d后行扫描电镜和荧光显微镜检查,观察其表面细胞的生长情况。结果单个核细胞培养14 d后,出现大量梭形细胞,免疫荧光染色显示细胞可同时摄取Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白和结合FITC标记的凝集素者,表明为正在分化的EPC,同时证实其表达内皮细胞的特异标志vWF。培养2周后的EPC数量呈指数增加;EPC的黏附率为96.7%±3.2%;迁移为15±4细胞/×400视野;可分泌VEGF、G-CSF和NO。与无包被的裸支架组相比,有纤维连接蛋白包被的支架组,EPC黏附多(27.80±4.26细胞/×400视野比6.10±3.07细胞/×400视野,P<0.05),内皮化完全。结论EPC可向内皮细胞方向分化,并且具有高增殖、高迁移和高黏附的能力。采用EPC在体外制备细胞种植支架是可行的,而纤维连接蛋白可加速其黏附。 展开更多

关键词 兔 干细胞 支架

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肿瘤相关巨噬细胞诱导乳腺癌耐药的实验研究 被引量：4

4

作者 何林燕 杨翠霞 +4 位作者 王文涓 杜艳 刘鷖雯 何怡青 高锋 《检验医学》 CAS 2014年第9期903-908,共6页

目的探索肿瘤相关巨噬细胞(TAM)在乳腺肿瘤细胞耐药中的作用及其耐药机制。方法通过佛波酯(PMA)、白细胞介素4(IL-4)、白细胞介素13(IL-13)刺激人单核细胞白血病细胞系THP-1,建立TAM模型在体外与乳腺癌细胞共培养,运用流式细胞术(FCM)检... 目的探索肿瘤相关巨噬细胞(TAM)在乳腺肿瘤细胞耐药中的作用及其耐药机制。方法通过佛波酯(PMA)、白细胞介素4(IL-4)、白细胞介素13(IL-13)刺激人单核细胞白血病细胞系THP-1,建立TAM模型在体外与乳腺癌细胞共培养,运用流式细胞术(FCM)检测TAM表面分子CD14、CD204;使用噻唑蓝(MTT)比色法检测紫杉醇对乳腺癌细胞系T47D、BT-549的有效杀伤浓度和时间,以及乳腺癌细胞单独培养、乳腺癌细胞与TAM/TAM上清共培养下乳腺癌细胞的杀伤;运用Western blot检测肿瘤细胞的磷酸化信号转导与转录激活因子3(p-STAT3)、磷酸化c-jun氨基末端激酶(p-JNK)信号通路变化。结果 THP-1细胞经PMA、IL-4、IL-13诱导分化为TAM,其细胞表面表达CD14、CD204(表达率分别为31.52%±9.39%、48.21%±8.76%)。TAM/TAM上清与肿瘤细胞共培养均可显著削弱紫杉醇对肿瘤细胞的杀伤(T47D相对存活率由43.52%±9.40%提高至92.68%±2.32%/92.20%±2.10%,BT-549相对存活率由63.08%±2.71%提高至77.96%±2.64%/79.55%±2.35%,P<0.05),明显下调其凋亡信号p-JNK(P<0.05),同时显著上调p-STAT3(P<0.05)。结论成功建立TAM模型,TAM介导乳腺肿瘤细胞耐药,其机制可能与TAM分泌的细胞因子影响肿瘤细胞STAT3、JNK信号分子磷酸化有关。 展开更多

关键词 肿瘤相关巨噬细胞 乳腺癌 耐药 紫杉醇

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实时荧光定量PCR检测CD44和RHAMM在胃肠肿瘤中的表达研究 被引量：6

5

作者 王颖智 杨翠霞 +4 位作者 刘鷖雯 何怡青 杨思 崔练 高锋 《检验医学》 CAS 北大核心 2008年第4期338-343,共6页

目的探讨CD44和透明质酸介导运动的受体（RHAMM）在胃肠肿瘤组织中的表达，研究其在肿瘤诊断中的价值。方法收集病理分期为Ⅱ～Ⅲ级胃肠道恶性肿瘤样本30例，并通过实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）对CD44和RHAMM进行定量分析。结果CD44... 目的探讨CD44和透明质酸介导运动的受体（RHAMM）在胃肠肿瘤组织中的表达，研究其在肿瘤诊断中的价值。方法收集病理分期为Ⅱ～Ⅲ级胃肠道恶性肿瘤样本30例，并通过实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）对CD44和RHAMM进行定量分析。结果CD44和RHAMM在癌组织中相对于管家基因GAPDH的表达中位数分别为1．587和1．074，正常组织中分别为0．704和0．098；肿瘤组织中，区域淋巴结转移组的CD44拷贝数／GAPDH拷贝数的中位数为1．650，未转移组相应的均值为1．431；区域淋巴结转移组的RHAMM拷贝数／GAPDH拷贝数的中位数为1．301，未转移组的中位数为1．064。区域淋巴结转移样本其CD44和RHAMM表达同步增高，肿瘤组织中CD44和RHAMM之间的相关系数（r）为0．96。结论胃肠肿瘤中的CD44和RHAMM表达高于正常组织，且两者表达具相关性。CD44和RHAMM的表达量增加的多少不足以判断肿瘤是否有区域淋巴转移，CD44和RHAMM同时增高可能预示肿瘤的淋巴转移。 展开更多

关键词 透明质酸受体 CD44 实时荧光定量聚合酶链反应 胃肠肿瘤

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改良反相高效液相色谱法监测血清中甲氨喋呤浓度及临床应用 被引量：7

6

作者 崔练 何怡青 +1 位作者 刘鷖雯 高锋 《检验医学》 CAS 北大核心 2006年第5期445-448,共4页

目的 建立一种反相高效液相色谱法（RP—HPLC）检测肿瘤患者血清中甲氨喋呤（MTX）浓度的方法。方法 色谱柱为反相柱C18（150．00mm×4．60mm），柱温35℃。流动相为0．15mol/L乙酸钠：乙腈：89：11（体积比），流速1．5ml／min。... 目的 建立一种反相高效液相色谱法（RP—HPLC）检测肿瘤患者血清中甲氨喋呤（MTX）浓度的方法。方法 色谱柱为反相柱C18（150．00mm×4．60mm），柱温35℃。流动相为0．15mol/L乙酸钠：乙腈：89：11（体积比），流速1．5ml／min。进样量为10μl，检测波长303nm，用高氯酸沉淀血清标本的蛋白。结果 血清中MTX的检测范围为0．25～100．00mg／L，决定系数（r^2）=0．999，线性关系良好，平均回收率100．95％，日内及日间相对标准差（RSD）均〈5％。结论 RP—HPLC适用于临床对血药浓度的监测。 展开更多

关键词 甲氨喋呤 反相高效液相色谱法 肿瘤

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外周血M2/M1单核细胞比例在乳腺癌诊断中的临床价值 被引量：5

7

作者 杜艳 刘华 +5 位作者 张波克 刘鷖雯 何怡青 杨翠霞 张国良 高锋 《检验医学》 CAS 2018年第5期421-424,共4页

目的比较外周血M2/M1单核细胞比例在乳腺癌患者和体检健康者间的差异,初步探讨外周血M2/M1单核细胞比例作为循环肿瘤标志物的临床意义。方法采用流式细胞术检测89例乳腺癌患者、53名体检健康者外周血M2/M1单核细胞比例,并与癌胚抗原(CEA... 目的比较外周血M2/M1单核细胞比例在乳腺癌患者和体检健康者间的差异,初步探讨外周血M2/M1单核细胞比例作为循环肿瘤标志物的临床意义。方法采用流式细胞术检测89例乳腺癌患者、53名体检健康者外周血M2/M1单核细胞比例,并与癌胚抗原(CEA)和糖类抗原15-3(CA15-3)进行比较分析。结果乳腺癌患者外周血M2/M1单核细胞比例明显高于体检健康者(P<0.001)。外周血M2/M1单核细胞比例诊断乳腺癌的受试者工作特征(ROC)曲线的曲线下面积大于CEA和CA15-3。结论应用流式细胞术检测的外周血M2/M1单核细胞比例具有较高的乳腺癌诊断价值,其可能成为新的用于乳腺癌诊断的循环肿瘤标志物。 展开更多

关键词 M2/M1单核细胞比例 肿瘤相关巨噬细胞 循环肿瘤标志物 乳腺癌

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狗种植体周围炎模型IL-8含量的测定 被引量：4

8

作者 朱红 邹德荣 +1 位作者 刘翳雯 瞿晓辉 《中国临床医学》 北大核心 2005年第2期321-323,共3页

目的:通过自身对照的方法研究实验狗种植体周围炎IL- 8水平和临床指标的变化。方法:通过丝线栓结法建立狗的种植体周围炎的动物模型,采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ABC ELISA法)测定5 条狗的种植体周围炎28 颗、自身对照的健康种植体27... 目的:通过自身对照的方法研究实验狗种植体周围炎IL- 8水平和临床指标的变化。方法:通过丝线栓结法建立狗的种植体周围炎的动物模型,采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ABC ELISA法)测定5 条狗的种植体周围炎28 颗、自身对照的健康种植体27颗的龈沟液中IL- 8含量、IL- 8总量。同时测量临床病理指标(菌斑指数PI,探诊龈袋深度PD,牙龈指数GI,松动度MOB)。运用SPSS12.0统计软件进行Mann Whitney U显著性检验。结果:在种植体周围炎模型组和自身对照的健康种植体模型组之间IL- 8含量、IL- 8总量、GCF量均存在着统计学差异(P<0.01),并且发现GCF、IL- 8含量与临床病理指标之间有着显著正相关(P<0.01)。结论:IL- 8参与种植体周围组织炎症的免疫调节,并且有可能作为评价种植体组织健康程度的指标。 展开更多

关键词 种植体周围炎 IL-8含量 双抗体夹心酶联免疫吸附法 测定 临床病理指标 种植体周围组织 狗 IL-8水平 自身对照 ELISA法 显著性检验 统计学差异 临床指标 动物模型 菌斑指数 同时测量 龈袋深度 牙龈指数 统计软件 免疫调节

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熊果酸对兔外周血内皮祖细胞数量和功能的影响 被引量：4

9

作者 赵清 魏盟 +2 位作者 赵炳辉 何怡青 刘一文 《世界临床药物》 CAS 2006年第12期713-717,共5页

目的观察熊果酸对兔外周血内皮祖细胞(EPC)数量和功能的影响并探讨其可能的作用机制。方法以密度梯度离心法分离兔外周血单个核细胞,并接种于纤连蛋白包被的培养板上,予含内皮细胞生长添加剂(ECGS)的M199培养基培养14天,应用免疫荧光染... 目的观察熊果酸对兔外周血内皮祖细胞(EPC)数量和功能的影响并探讨其可能的作用机制。方法以密度梯度离心法分离兔外周血单个核细胞,并接种于纤连蛋白包被的培养板上,予含内皮细胞生长添加剂(ECGS)的M199培养基培养14天,应用免疫荧光染色及流式细胞仪检测、鉴定内皮祖细胞,分别以MTT法、改良的Boyden小室、黏附能力测试、ELISA法观察不同浓度(5,10,50,100mmol/L)熊果酸对培养的EPC增殖、迁移、黏附及分泌功能的影响;同时观察糖皮质激素受体拮抗剂RU486预作用的效果。结果熊果酸可浓度依赖性减少兔EPC的数量,并减弱其增殖、迁移、黏附和分泌能力;RU486可部分逆转熊果酸的上述抑制作用。结论熊果酸可能部分通过糖皮质激素受体的介导影响EPC的数量和功能,而这种抑制作用可能使其在抗动脉粥样硬化和抗再狭窄的应用中受限。 展开更多

关键词 熊果酸 内皮祖细胞 兔 血管内皮生长因子 糖皮质激素受体

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透明质酸与其受体CD44在肿瘤研究中的意义 被引量：7

10

作者 杨翠霞 高锋 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期206-209,共4页

透明质酸(hyaluronic acid,HA)是一种体内广泛存在的糖胺多糖,在维持细胞外基质结构及调节细胞内活动方面都起着重要的作用。CD44是细胞表面最重要的透明质酸受体,是与HA结合的主要部位。HA通过与CD44相互作用而促进细胞移动,诱导信号转... 透明质酸(hyaluronic acid,HA)是一种体内广泛存在的糖胺多糖,在维持细胞外基质结构及调节细胞内活动方面都起着重要的作用。CD44是细胞表面最重要的透明质酸受体,是与HA结合的主要部位。HA通过与CD44相互作用而促进细胞移动,诱导信号转导,进而促进肿瘤发生发展。CD44选择性地与多种癌基因信号转导分子或(和)细胞骨架蛋白结合,是促进肿瘤细胞异常移动的关键步骤之一。 展开更多

关键词 肿瘤 透明质酸 抗原 CD44

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血清 HER-2、CD44 联合检测在结直肠癌中的临床价值 被引量：3

11

作者 陈思 刘华 +5 位作者 刘鷖雯 何怡青 张国良 杨翠霞 杜艳 高锋 《检验医学》 CAS 2022年第4期336-341,共6页

目的探讨血清人表皮生长因子受体2(HER-2)和分化抗原簇44(CD44)水平在结直肠癌中的临床价值。方法采用酶联免疫吸附试验检测38例结直肠癌患者(结直肠癌组)术前及术后2~3 d、35例结直肠良性病变患者(良性病变组)和36名健康体检者(正常对... 目的探讨血清人表皮生长因子受体2(HER-2)和分化抗原簇44(CD44)水平在结直肠癌中的临床价值。方法采用酶联免疫吸附试验检测38例结直肠癌患者(结直肠癌组)术前及术后2~3 d、35例结直肠良性病变患者(良性病变组)和36名健康体检者(正常对照组)的血清HER-2和CD44水平。收集所有对象的一般资料。采用Pearson相关分析评估HER-2与CD44的相关性。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估各项指标单项检测及联合检测辅助诊断结直肠癌的效能。结果结直肠癌组术前血清HER-2水平高于良性病变组和正常对照组(P<0.05、P<0.0001)。结直肠癌组术前血清CD44水平高于正常对照组(P<0.05),与良性病变组差异无统计学意义(P>0.05)。血清HER-2水平与结直肠癌患者RAS基因突变及周围神经侵犯有关(P<0.05),CD44水平与Ras基因突变及周围神经侵犯无关(P>0.05);血清HER-2及CD44水平与年龄、性别、肿瘤类型、肿瘤大小、TNM分期、淋巴结转移及脉管侵犯均无关(P>0.05)。ROC曲线分析结果显示,HER-2、CD44、癌胚抗原(CEA)、糖类抗原(CA19)-9单项检测及联合检测诊断结直肠癌的曲线下面积(AUC)分别为0.779、0.692、0.620、0.634及0.837。结直肠癌患者术后血清CD44水平显著低于手术前(P<0.0001),而血清HER-2水平术前、术后差异无统计学意义(P>0.05)。结论结直肠癌患者HER-2与CD44显著相关,二者联合检测或可用于结直肠癌的辅助诊断及疗效评估。 展开更多

关键词 人表皮生长因子受体2 分化抗原簇44 结直肠癌

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Src-MAPK信号通路参与透明质酸寡糖片段诱导PIEC细胞的增殖 被引量：2

12

作者 杨翠霞 刘鹥雯 +1 位作者 何怡青 高锋 《分子细胞生物学报》 CSCD 北大核心 2006年第6期495-501,共7页

探讨透明质酸小片段(Hyaluronan oligosaccharides,o-HA)对血管内皮细胞生长的影响及机制。采用细胞计数、流式细胞术、Western blot等方法,检测o-HA作用于内皮细胞后,Src激酶、丝裂原活化蛋白激酶MAPK(ERK-1/2)的磷酸化程度及细胞周期... 探讨透明质酸小片段(Hyaluronan oligosaccharides,o-HA)对血管内皮细胞生长的影响及机制。采用细胞计数、流式细胞术、Western blot等方法,检测o-HA作用于内皮细胞后,Src激酶、丝裂原活化蛋白激酶MAPK(ERK-1/2)的磷酸化程度及细胞周期蛋白D1的表达水平。o-HA在10μg/ml浓度时可明显地促进血管内皮细胞的增殖,包括细胞周期水平及细胞数量。继续增加o-HA的浓度及延长培养时间均未出现进一步的变化；细胞增殖在12h开始出现,72h达到高峰。1μg/ml的o-HA作用于细胞2min后,胞内Src激酶、ERK-1/2的磷酸化程度即增强,并在3h后检测到周期蛋白D1的表达水平增高。o-HA具有促进血管内皮细胞增殖的作用,其机制可能是通过激活Src激酶及细胞内MAPK信号通路,从而促进血管内皮细胞生长；该作用也可能与上调周期蛋白D1的表达有关。 展开更多

关键词 MAPK信号通路 透明质酸寡糖片段(o-HA) PIEC细胞 细胞增殖

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黏附因子CD44的活化状态及其在肿瘤靶向治疗中的研究进展 被引量：2

13

作者 侯利丹 高锋 《重庆医学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第27期3313-3315,共3页

CD44（clusterofdifferentiation44）指白细胞分化抗原簇第44号，是一类重要的黏附分子，广泛分布于细胞表面，如淋巴细胞、单核细胞、成纤维细胞、内皮细胞等口]。不同细胞表面CD44与透明质酸（HA）结合活性不同，活化状态存在很大差... CD44（clusterofdifferentiation44）指白细胞分化抗原簇第44号，是一类重要的黏附分子，广泛分布于细胞表面，如淋巴细胞、单核细胞、成纤维细胞、内皮细胞等口]。不同细胞表面CD44与透明质酸（HA）结合活性不同，活化状态存在很大差异。许多正常细胞表面CD44处于相对静止状态，而许多肿瘤细胞表面CD44处于高度活化状态，能与其主要配体HA结合，参与肿瘤的发生、发展及转移等。 展开更多

关键词 肿瘤 CD44 透明质酸

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透明质酸寡糖片段促进血管内皮细胞增殖的研究 被引量：1

14

作者 曹曼林 白跃宏 +2 位作者 杨翠霞 刘鹥雯 何怡青 《中国康复》 2006年第6期368-370,共3页

目的:研究分离纯化的透明质酸寡糖片段(o-HA)对血管内皮细胞增殖的作用。方法:选用猪髂总动脉内皮细胞(PIEC)做为靶细胞,人胚肾293细胞做为对照细胞,应用本实验室分离纯化的o-HA(4-12-mer)配成一系列浓度(0、1、3、5、10及20μg/ml),加... 目的:研究分离纯化的透明质酸寡糖片段(o-HA)对血管内皮细胞增殖的作用。方法:选用猪髂总动脉内皮细胞(PIEC)做为靶细胞,人胚肾293细胞做为对照细胞,应用本实验室分离纯化的o-HA(4-12-mer)配成一系列浓度(0、1、3、5、10及20μg/ml),加入靶细胞及对照细胞继续培养不同时间(0、6、12、24、48、72及96 h),从细胞计数、细胞周期分布和单层血管内皮细胞损伤修复来观察血管内皮细胞的增殖情况。结果:10μg/ml o-HA作用于PIEC时能显著促进增殖,继续增加o-HA的浓度,增殖作用未随之增强;o-HA刺激培养12 h PIEC即明显增生,至72 h达高峰(P<0.05);o-HA对PIEC损伤模型也有显著的促愈合作用。结论:o-HA能显著促进血管内皮细胞的增殖。 展开更多

关键词 透明质酸寡糖片段 血管内皮细胞 增殖

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高胆固醇血症兔外周血内皮祖细胞的体外培养特性

15

作者 赵清 魏盟 +2 位作者 赵炳辉 何怡青 张春旭 《上海医学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第S1期178-178,共1页

目的研究高胆固醇血症兔外周血内皮祖细胞的分离和定向培养的方法,并对其功能进行鉴定。方法高胆固醇饮食组和正常饮食组兔各6只,用密度梯度离心法分离兔外周血单个核细胞,接种于纤连蛋白包被的培养板上,予EBM-2条件培养基培养。培养2... 目的研究高胆固醇血症兔外周血内皮祖细胞的分离和定向培养的方法,并对其功能进行鉴定。方法高胆固醇饮食组和正常饮食组兔各6只,用密度梯度离心法分离兔外周血单个核细胞,接种于纤连蛋白包被的培养板上,予EBM-2条件培养基培养。培养2周后进行免疫荧光染色鉴定内皮祖细胞和流式细胞仪检测细胞表型,MTT法检测其增殖能力,改良的Boyden小室法测定其迁移能力,硝酸酶还原法测定一氧化氮浓度。结果高胆固醇饮食组兔的总胆固醇、低密度脂蛋白-胆固醇水平较正常饮食组兔明显升高(P<0．05)。单个核细胞接种后7-8 d梭形细胞增多,第14天左右梭形细胞进一步增多,有的相互间连接成血管样结构,有的呈铺路石样分布。免疫荧光染色显示细胞可同时摄取Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白和结合FITC标记的凝集素者,表明为正在分化的内皮祖细胞,光学显微镜下计数高胆固醇血症较正常饮食组兔明显减少(14．4±1．1比24．2±1．1／视野,×400) (P<0．05);且CD34+的细胞较正常组低[(16．03±2．87)％比(36．33±6．62)％,P<0．05]。高胆固醇血症兔内皮祖细胞的增殖能力(0．24±0．06比52．00±0．03)、迁移能力(15．4±5．6比32．7±3．2)和分泌的一氧化氮[(9．24±2．06)μmol/L比(21．59±2．85)μmol几]均较正常对照组低(P<0．05)。结论高胆固醇血症时内皮祖细胞的数量减少,且功能发生减退,可有助于动脉粥样硬化的发生和发展。 展开更多

关键词 高胆固醇血症 祖细胞 体外培养 高胆固醇饮食 梭形细胞 条件培养基 密度梯度离心 细胞接种 免疫荧光染色 低密度脂蛋白

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相对分子质量透明质酸在脐静脉内皮细胞增殖及连接蛋白Ezrin磷酸化表达中的作用研究

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作者 莫薇 刘鹥雯 +1 位作者 何怡青 高锋 《检验医学》 CAS 北大核心 2009年第5期328-332,共5页

目的探讨高相对分子质量透明质酸(nHA)和低相对分子质量透明质酸(oHA)对脐静脉内皮细胞增殖能力及膜-细胞骨架连接蛋白埃兹(Ezrin)表达的影响。方法分别用nHA和oHA处理人脐静脉内皮细胞,以5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brdu)酶联免疫吸附试验(ELI... 目的探讨高相对分子质量透明质酸(nHA)和低相对分子质量透明质酸(oHA)对脐静脉内皮细胞增殖能力及膜-细胞骨架连接蛋白埃兹(Ezrin)表达的影响。方法分别用nHA和oHA处理人脐静脉内皮细胞,以5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brdu)酶联免疫吸附试验(ELISA)检测透明质酸(HA)作用后细胞增殖能力;用荧光实时定量聚合酶链反应(PCR)和蛋白免疫印迹试验(Western blot)检测HA对Ezrin mRNA和蛋白表达的影响。结果与对照组相比,72 h后oHA(10μg/mL)显著促进血管内皮细胞增殖(P<0.001),24 h后促进Ezrin基因的表达,48 h后促进Ezrin蛋白磷酸化表达。而nHA(200μg/mL)则抑制血管内皮细胞的增殖(P<0.01)和Ezrin蛋白的表达磷酸化。结论oHA能有效促进血管内皮的增殖并促进其胞内连接蛋白Ezrin的表达磷酸化,nHA则抑制内皮细胞的增殖和Ezrin蛋白的表达。 展开更多

关键词 细胞增殖 透明质酸 高相对分子质量 低相对分子质量 埃兹蛋白

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正常与乳腺肿瘤细胞表面黏附分子CD44活化状态差异分析

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作者 侯利丹 刘鹥雯 +3 位作者 何怡青 杨翠霞 杜艳 高锋 《检验医学》 CAS 2013年第5期425-429,共5页

目的检测黏附分子CD44在正常和乳腺肿瘤细胞表面的表达,并分析其活化状态差异,为以CD44为靶点的肿瘤靶向治疗提供新的理论依据。方法采用流式细胞术检测20名正常人外周血单个核细胞(PBMCs)、正常小鼠胚细胞NIH3T3及人乳腺肿瘤细胞Hs578T... 目的检测黏附分子CD44在正常和乳腺肿瘤细胞表面的表达,并分析其活化状态差异,为以CD44为靶点的肿瘤靶向治疗提供新的理论依据。方法采用流式细胞术检测20名正常人外周血单个核细胞(PBMCs)、正常小鼠胚细胞NIH3T3及人乳腺肿瘤细胞Hs578T、BT-549表面CD44表达水平;使用荧光标记透明质酸(FL-HA),通过流式细胞术分析CD44的活化状态;再运用细胞免疫荧光的方法观察HA与不同活化状态CD44的靶向结合情况。结果正常人PBMCs、NIH3T3与乳腺肿瘤细胞Hs578T、BT-549表面均高表达CD44,阳性表达率>95%。PBMCs、NIH3T3的CD44与FL-HA结合活性相对较低,分别为(3.61±2.65)%和(14.33±1.35)%,而乳腺肿瘤细胞表面CD44与FL-HA结合活性高(>90%)。细胞免疫荧光显示NIH3T3细胞表面基本无荧光,HA不靶向结合CD44,而Hs578T和BT-549细胞表面呈现强荧光,HA靶向结合CD44。结论正常细胞PBMCs、NIH3T3表面虽然高表达CD44,但与其天然配体HA结合活性较低,而乳腺肿瘤细胞表面高表达CD44且与其配体HA结合活性很高。提示CD44分子在正常和肿瘤细胞表面存在相对静止与活化2种状态,前者与HA结合活性较低,后者与HA结合活性高。提示以HA为靶向分子、CD44为靶点的抗肿瘤药物,能够选择性杀伤高表达CD44的肿瘤细胞而不影响正常细胞。 展开更多

关键词 CD44 活化状态 乳腺肿瘤 外周血单个核细胞

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荧光定量PCR检测VEGF-C、CEACAM-1在胃肠肿瘤中的表达及意义 被引量：4

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作者 周沐青 刘鷖雯 +3 位作者 王颖智 何怡青 杨翠霞 高锋 《检验医学》 CAS 北大核心 2011年第5期299-305,共7页

目的观察血管内皮生长因子C(VEGF-C)和癌胚抗原相关黏附分子1(CEACAM-1)在消化道癌组织和癌旁组织中的表达情况,探讨其表达与肿瘤分期的关系,与术前血清癌胚抗原(CEA)水平一起比较其在肿瘤诊断中的价值。方法采用实时定量聚合酶链反应(P... 目的观察血管内皮生长因子C(VEGF-C)和癌胚抗原相关黏附分子1(CEACAM-1)在消化道癌组织和癌旁组织中的表达情况,探讨其表达与肿瘤分期的关系,与术前血清癌胚抗原(CEA)水平一起比较其在肿瘤诊断中的价值。方法采用实时定量聚合酶链反应(PCR)检测53例消化道肿瘤及相应癌旁对照组织中VEGF-C、CEACAM-1 mRNA表达水平;用全自动免疫发光分析仪测量患者术前血中CEA水平。结果 VEGF-C mRNA在癌组织中的表达显著高于相应癌旁对照组织(P<0.05),均值分别为2.65E-03和1.63E-03;CEACAM-1 mRNA在癌组织和癌旁组织中表达差异无统计学意义(P>0.05),均值分别为0.036 2和0.066 4;VEGF-C、CEACAM-1mRNA在癌组织及癌旁对照组织中均有显著相关性(P<0.001);癌组织中肿瘤侵润较深组其CEACAM-1 mRNA显著高于肿瘤侵润较浅组(P<0.05);癌组织VEGF-C mRNA诊断消化道恶性肿瘤的符合率较血清CEA高(P<0.001)。结论胃肠道肿瘤中CEACAM-1和VEGF-C的表达量与肿瘤分期有关;VEGF-C mRNA在癌组织中的表达水平可作为胃肠恶性肿瘤的预测指标,也可在分子水平上作为判断胃肠肿瘤临床分期的辅助指标。 展开更多

关键词 血管内皮生长因子C 癌胚抗原相关黏附分子1 胃肠肿瘤 实时荧光定量聚合酶链反应

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血浆HA与外周血M2型单核细胞/M1型单核细胞比值联合检测在乳腺癌中的临床应用价值 被引量：4

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作者 张波克 黄宜 +5 位作者 刘鷖雯 何怡青 杨翠霞 杜艳 张国良 高锋 《检验医学》 CAS 2019年第2期116-121,共6页

目的探讨血浆透明质酸(HA)与外周血M2型单核细胞/M1型单核细胞比值(简称M2/M1比值)联合检测在乳腺癌中的临床应用价值。方法选取98例乳腺癌患者(乳腺癌组)、37例乳腺良性疾病患者(乳腺良性疾病组)和41名体检健康者(正常对照组)。采用化... 目的探讨血浆透明质酸(HA)与外周血M2型单核细胞/M1型单核细胞比值(简称M2/M1比值)联合检测在乳腺癌中的临床应用价值。方法选取98例乳腺癌患者(乳腺癌组)、37例乳腺良性疾病患者(乳腺良性疾病组)和41名体检健康者(正常对照组)。采用化学发光法检测血浆HA和糖类抗原(CA)15-3水平;采用流式细胞术检测外周血M1型(CD14+CD163-CD86+)和M2型(CD14+CD163+CD204+)单核细胞的表达,并计算M2/M1比值。各项指标之间的相关性分析采用Spearman相关分析。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析各项指标的诊断效能。结果乳腺癌组血浆HA、CA15-3水平及M2型单核细胞比例、M2/M1比值均明显高于乳腺良性疾病组及正常对照组(P<0.05),而乳腺良性疾病组与正常对照组之间差异均无统计学意义(P>0.05)。HA与M2/M1比值、M2型单核细胞比例、M1型单核细胞比例均相关(rs值分别为0.401、0.393、-0.189,P<0.05)。M2/M1比值诊断乳腺癌的曲线下面积(AUC)、敏感性和特异性均高于其他指标,且HA与M2/M1比值联合检测可提高对乳腺癌的诊断效能。血浆HA与乳腺癌组织学分化情况有关(P<0.05),M2/M1比值与乳腺癌TNM分期、淋巴结转移、组织学分化情况及雌激素受体(ER)均有关(P<0.05),CA15-3与乳腺癌临床病理特征均无关(P>0.05)。结论 HA与M2/M1比值联合检测对辅助诊断乳腺癌具有一定的临床价值。 展开更多

关键词 透明质酸 肿瘤相关巨噬细胞 糖类抗原15-3 乳腺癌

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血清HA、HAS2在骨肿瘤辅助诊断及疗效监测中的价值 被引量：2

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作者 盛雨梦 许静 +7 位作者 刘鷖雯 何怡青 刘华 黄宜 胡嘉捷 崔练 高锋 杨翠霞 《检验医学》 CAS 2021年第2期162-166,共5页

目的探究血清透明质酸(HA)及透明质酸合成酶(HAS)2在骨肿瘤辅助诊断中的应用价值。方法检测35例骨肿瘤患者(骨肿瘤组)手术前、后以及40例骨感染性炎症患者(骨感染性炎症组)、60名体检健康者(正常对照组)的血清HA、HAS2水平和血清HAS2 m... 目的探究血清透明质酸(HA)及透明质酸合成酶(HAS)2在骨肿瘤辅助诊断中的应用价值。方法检测35例骨肿瘤患者(骨肿瘤组)手术前、后以及40例骨感染性炎症患者(骨感染性炎症组)、60名体检健康者(正常对照组)的血清HA、HAS2水平和血清HAS2 mRNA相对表达量,采用受试者工作特征(ROC)曲线评估各项指标诊断骨肿瘤的效能。结果骨肿瘤组术前、术后血清HA、HAS2水平及HAS2 mRNA相对表达量均明显高于正常对照组(P<0.05),骨肿瘤组术前、术后血清HAS2水平和HAS2 mRNA相对表达量均明显高于骨感染性炎症组(P<0.05),而骨肿瘤组术前、术后血清HA水平与骨感染性炎症组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。骨肿瘤组术后血清HA、HAS2水平及HAS2 mRNA相对表达量均低于术前(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,以正常对照组为对照,HA、HAS2及HAS2 mRNA单项检测及三者联合检测诊断骨肿瘤的曲线下面积(AUC)分别为0.888、0.651、0.747、0.956;以骨感染性炎症组为对照,HA、HAS2及HAS2 mRNA单项检测及三者联合检测诊断骨肿瘤的AUC分别为0.485、0.782、0.630、0.798。结论血清HA、HAS2及HAS2 mRNA在骨肿瘤的辅助诊断及疗效监测中有一定价值。 展开更多

关键词 透明质酸 透明质酸合成酶2 骨肿瘤

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