早熟艾美耳球虫上海株的分离鉴定及生物学特性观察

1

作者 陈兆国 米荣升 +6 位作者 于慧珠 郝言明 胡义彬 黄燕 李正锋 李艳 林矫矫 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期529-533,共5页

为分离和鉴定早熟艾美尔球虫(Eimeria praecox),观察其主要生物学特性,本研究采用单卵囊感染技术分离单一虫株,通过卵囊形态学、PCR技术和18SrRNA基因检测,对其进行性状观察、虫种鉴定和系统发生关系分析。在获得的5株单一虫株中,对其... 为分离和鉴定早熟艾美尔球虫(Eimeria praecox),观察其主要生物学特性,本研究采用单卵囊感染技术分离单一虫株,通过卵囊形态学、PCR技术和18SrRNA基因检测,对其进行性状观察、虫种鉴定和系统发生关系分析。在获得的5株单一虫株中,对其中一株的卵囊形态、寄生部位、最短孢子化时间和最短潜在期进行观察。结果表明:该株球虫具有E. praecox的主要生物学特征;分离自肠道的卵囊明显小于分离自粪便的卵囊;最短潜在期为81h;经PCR鉴定为E. praecox,命名为E. praecox上海株。测序结果显示,其18SrRNA基因序列长1747bp,与GenBank登录的相关基因序列同源性为99.4%;该虫株对雏鸡呈轻度致病性。该虫株的分离和鉴定为丰富我国鸡球虫虫种资源,开展球虫病防治研究提供了依据。 展开更多

关键词 早熟艾美尔球虫 分离 鉴定 生物学性状 18S RRNA基因

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血吸虫反向疫苗学理论与技术的研究现状与展望 被引量：5

2

作者 冯新港 隋传宇 +3 位作者 苑纯秀 邵东华 陈进新 林矫矫 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期237-247,共11页

近年发展起来的反向疫苗学,以“序列-结构-功能”思想为依据,以免疫信息学、计算机预测设计以及高通量的各种组学(包括基因组学、转录本组学、蛋白质组学等)综合集成技术为核心,可能为血吸虫疫苗候选分子的发现提供一条新途径。本文简... 近年发展起来的反向疫苗学,以“序列-结构-功能”思想为依据,以免疫信息学、计算机预测设计以及高通量的各种组学(包括基因组学、转录本组学、蛋白质组学等)综合集成技术为核心,可能为血吸虫疫苗候选分子的发现提供一条新途径。本文简要介绍了反向疫苗学常用的理论预测和实验方法;概述了应用反向疫苗学理论与技术筛选和鉴定血吸虫候选疫苗分子(保护性抗原或表位)的进展情况;最后,讨论了通过模拟辐照致弱血吸虫疫苗或人群获得性免疫的效应机制等来发展血吸虫反向疫苗学的可能的研究方向。 展开更多

关键词 血吸虫病 反向疫苗学 免疫信息学 功能基因组学 辐照致弱疫苗 保护性抗原 表位

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日本血吸虫TEGT基因的cDNA克隆和生物信息学分析

3

作者 朱传刚 林矫矫 陈建秀 《热带病与寄生虫学》 2006年第1期15-19,37,共6页

目的克隆日本血吸虫新基因TEGT(Sj.TEGT)的全长序列。方法根据编码日本血吸虫大陆株的EST基因片段的序列,设计5’RACE的系列引物,扩增Sj.TEGT的5’端,测序后预测该基因的全长ORF;再以此设计引物,以日本血吸虫中国大陆株成虫mRNA为模板,... 目的克隆日本血吸虫新基因TEGT(Sj.TEGT)的全长序列。方法根据编码日本血吸虫大陆株的EST基因片段的序列,设计5’RACE的系列引物,扩增Sj.TEGT的5’端,测序后预测该基因的全长ORF;再以此设计引物,以日本血吸虫中国大陆株成虫mRNA为模板,用RT-PCR方法扩增得到Sj.TEGT的全长cDNA。结果从日本血吸虫中国大陆株成虫mRNA中克隆到1个TEGT相关基因,命名为Sj.TEGT基因。其编码的蛋白的分子质量大约为30ku;对其编码的氨基酸序列的分析显示其编码蛋白有6个跨膜螺旋区。结论Sj.TEGT是一个新基因,有必要对其功能进行深入研究。 展开更多

关键词 日本血吸虫 基因 克隆

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利用基因表达谱芯片研究东方田鼠和小鼠感染日本血吸虫前后基因的差异性表达 被引量：17

4

作者 孙军 林矫矫 +5 位作者 程国锋 李浩 石耀军 陆珂 蔡幼民 江洪波 《北京大学学报（自然科学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2004年第4期532-537,共6页

利用大、小鼠基因表达谱芯片分别研究了Balb c小鼠感染日本血吸虫 7d时肺组织、东方田鼠感染日本血吸虫 7d时肺组织、1 2d时的肺和肝组织基因差异表达方式。结果表明 ,小鼠感染日本血吸虫 7d时肺丝氨酸蛋白酶抑制剂 (Serineproteaseinhi... 利用大、小鼠基因表达谱芯片分别研究了Balb c小鼠感染日本血吸虫 7d时肺组织、东方田鼠感染日本血吸虫 7d时肺组织、1 2d时的肺和肝组织基因差异表达方式。结果表明 ,小鼠感染日本血吸虫 7d时肺丝氨酸蛋白酶抑制剂 (Serineproteaseinhibitor)基因表达上调 ,同时没有免疫相关基因的表达变化 ;与之相反 ,东方田鼠感染日本血吸虫 7d时肺丝氨酸蛋白酶抑制剂基因没有表达变化 ,非特异性免疫相关基因 ,如溶菌酶 (Lysozyme)和各类组织蛋白酶 (Cathepsin)基因表达上调 ,而且肺内特异性免疫相关基因如CD74、MHCⅡ和MHCⅠ等表达上调。这一现象得到东方田鼠感染日本血吸虫 1 2d时肺和肝中特异性免疫和非特异性免疫相关基因的上调表达的进一步证实。而且 ,东方田鼠感染日本血吸虫 1 2d时肺中丝氨酸蛋白酶抑制剂基因表达下调 ,肝组织中胰岛素样生长因子 1 (Insulin likegrowthfactor 1 ,IGF 1 )基因表达下调。提示日本血吸虫适宜性宿主小鼠和非适宜性宿主东方田鼠感染日本血吸虫前后两者有相反的基因表达方式。 展开更多

关键词 东方田鼠 基因芯片 丝氨酸蛋白酶抑制剂 溶菌酶 组织蛋白酶 CD74 MHC Ⅱ MHC Ⅰ

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日本血吸虫新基因SjPP的筛选、克隆及对小鼠的免疫效果 被引量：9

5

作者 姚利晓 林矫矫 +7 位作者 傅志强 朱传刚 李浩 陆珂 刘金明 石耀军 沈阳 蔡幼民 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第8期1659-1666,共8页

目的筛选克隆东方田鼠血清识别的日本血吸虫靶抗原基因,并研究其免疫保护效果。方法利用东方田鼠感染血清免疫筛选日本血吸虫(中国大陆株)成虫cDNA表达文库获得阳性克隆,以5′RACE技术扩增获基因全长序列,构建含目的基因的核酸疫苗并研... 目的筛选克隆东方田鼠血清识别的日本血吸虫靶抗原基因,并研究其免疫保护效果。方法利用东方田鼠感染血清免疫筛选日本血吸虫(中国大陆株)成虫cDNA表达文库获得阳性克隆,以5′RACE技术扩增获基因全长序列,构建含目的基因的核酸疫苗并研究在小鼠中的免疫保护效果。结果(1)获得4个日本血吸虫新的EST序列,即mfs-1(GenBank登录号BE974942)、mfs-3(GenBank登录号BE974944)、mfs-4(GenBank登录号BE974945)和mfs-5(GenBank登录号BE974946)。(2)mfs-5进行全长序列克隆,获得的日本血吸虫新基因SjPP(GenBank登录号AY902477)长1311bp,编码302个氨基酸,理论分子量为34.7kD,等电点为5.51;其氨基酸序列具有丝/苏氨酸蛋白磷酸酶(serine/threoninespecificproteinphosphatase,简称PP)的保守序列LRGNHE,并且含有该酶特异性抑制剂冈田酸的作用位点SAPNYC,与人的PP6、鼠PP6、果蝇PPⅤ等蛋白的氨基酸序列具有高度同源性,分别达72%、70%和70%。(3)成功构建核酸疫苗pCMV-Script/SjPP,免疫BALB/c小鼠诱导产生肝组织减卵率为23.91%,粪便减卵率为31.91%。结论(1)获得日本血吸虫新的抗原基因SjPP。(2)含SjPP基因的核酸疫苗在小鼠中诱导了部分免疫保护效果。 展开更多

关键词 日本血吸虫 东方田鼠 丝/苏氨酸蛋白磷酸酶 核酸疫苗 免疫保护

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日本血吸虫童虫部分差异表达蛋白的质谱分析 被引量：10

6

作者 赵晓宇 姚利晓 +4 位作者 孙安国 傅志强 刘金明 蔡幼民 林矫矫 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期1-6,共6页

应用蛋白质双向电泳技术和质谱技术对16日龄日本血吸虫童虫的可溶性蛋白进行分离、分析,得到了2 000±69个蛋白斑点,其中500±86个蛋白斑点与血吸虫雌虫和雄虫的蛋白所共有,童虫特异呈现的蛋白斑点有26±1个。对其中20个童... 应用蛋白质双向电泳技术和质谱技术对16日龄日本血吸虫童虫的可溶性蛋白进行分离、分析,得到了2 000±69个蛋白斑点,其中500±86个蛋白斑点与血吸虫雌虫和雄虫的蛋白所共有,童虫特异呈现的蛋白斑点有26±1个。对其中20个童虫特异呈现的蛋白斑点进行质谱和生物信息学分析的结果表明,它们代表了16种蛋白;对这些蛋白进行生物学功能预测的结果表明,它们可能与寄生虫的生物合成、能量代谢、信号传导和细胞构成等相关。 展开更多

关键词 日本血吸虫 童虫 蛋白质组 质谱

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东方田鼠抗日本血吸虫病的研究进展 被引量：4

7

作者 姚利晓 林矫矫 蔡幼民 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 2003年第6期471-473,共3页

东方田鼠(Microtus fortis)亦称米氏田鼠(MicrotusMichnoi)、长江田鼠、沼泽田鼠、苇田鼠,俗称湖鼠,属啮齿目(Rodentia)、仓鼠科(Cricitidae)、田鼠亚科(Microcinae)、田鼠属(Microcus).

关键词 东方田鼠 日本血吸虫病 米氏田鼠 湖鼠 洞庭湖 抗血吸虫病机制 防治途径 应用前景 抗病基因

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家蚕、桑叶粗提物降血糖的作用效果 被引量：9

8

作者 桂仲争 傅志强 +2 位作者 刘金明 庄大桓 蔡幼民 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期63-66,共4页

为进一步开发高效、多剂型的蚕、桑降血糖制剂,研究了不同品种的家蚕和桑叶粗提物降血糖的体外和体内实验效果。结果表明:家蚕提取物的降血糖效果明显优于桑叶粗提物;蚕品种间存在差异,桑品种间差异显著。灌胃家蚕和桑叶粗提物4周后的动... 为进一步开发高效、多剂型的蚕、桑降血糖制剂,研究了不同品种的家蚕和桑叶粗提物降血糖的体外和体内实验效果。结果表明:家蚕提取物的降血糖效果明显优于桑叶粗提物;蚕品种间存在差异,桑品种间差异显著。灌胃家蚕和桑叶粗提物4周后的动物,其餐后血糖值分别降低了33.48%和24.24%。对不同蚕、桑品种降血糖差异的作用机理进行了探讨。 展开更多

关键词 家蚕 桑叶 粗提物 降血糖

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噬菌体展示日本血吸虫SSj14单抗的模拟抗原表位及其免疫保护性研究 被引量：6

9

作者 王欣之 傅志强 +3 位作者 黄劭鹏 朱国强 蔡幼民 林矫矫 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期119-124,共6页

为获得日本血吸虫保护性单抗SSj14的模拟抗原表位,研究其对日本血吸虫的免疫保护作用。用纯化的SSj14单抗筛选噬菌体随机12肽库,对33个克隆进行ELISA验证,获得30个阳性克隆,DNA序列分析表明这30个克隆分属11个多肽序列,分析比较发现这... 为获得日本血吸虫保护性单抗SSj14的模拟抗原表位,研究其对日本血吸虫的免疫保护作用。用纯化的SSj14单抗筛选噬菌体随机12肽库,对33个克隆进行ELISA验证,获得30个阳性克隆,DNA序列分析表明这30个克隆分属11个多肽序列,分析比较发现这些多肽具有“H_NQ_X_S_PF_X_X_L_A_T”的相似基序。进而选取3个阳性单克隆及混合阳性噬菌体克隆进行Western_blotting实验,证明都有良好的抗原性。用它们免疫BALBc鼠,并攻击血吸虫尾蚴,观察免疫鼠抗血吸虫感染的保护效果和IL_12的变化,结果表明:筛选获得的噬菌体阳性克隆具有良好的免疫原性,能诱导免疫鼠产生高滴度的抗血吸虫的特异性抗体;和对照组鼠相比,免疫小鼠,分别获得13.84%～52.83%的减虫率,34.17%～65.47%的肝脏减卵率以及28.89%～73.78%的粪便减卵率;三次免疫之后,和对照组相比,免疫小鼠体内IL_12水平均有升高。为发展日本血吸虫疫苗提供了新思路、新途径。 展开更多

关键词 日本血吸虫 噬菌体展示 SSj14单抗 模拟抗原 白细胞介素12

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日本血吸虫Sj32KD抗原基因的克隆、表达及诊断应用 被引量：9

10

作者 傅志强 刘金明 +3 位作者 李浩 苑纯秀 蔡幼民 林矫矫 《中国兽医寄生虫病》 CAS 2007年第4期1-6,共6页

目的开展日本血吸虫中国大陆株Sj32KD抗原基因研究,探讨其作为诊断抗原的潜力。方法应用PCR方法克隆Sj32KD抗原基因,并在大肠杆菌系统中进行表达,利用H is亲和层析方法纯化融合蛋白,并应用重组的Sj32KD抗原检测羊日本血吸虫病。结果克隆... 目的开展日本血吸虫中国大陆株Sj32KD抗原基因研究,探讨其作为诊断抗原的潜力。方法应用PCR方法克隆Sj32KD抗原基因,并在大肠杆菌系统中进行表达,利用H is亲和层析方法纯化融合蛋白,并应用重组的Sj32KD抗原检测羊日本血吸虫病。结果克隆了ORF为1 272bP的日本血吸虫中国大陆株Sj32KD抗原基因,成功构建表达质粒Sj32-pET28 a,并在BL21(DE3)菌株中获得了分子量为47KD的特异性表达产物。应用Sj32KD重组抗原应用于检测羊日本血吸虫病,结果阴性血清的特异性为85.71%,阳性血清的敏感性为95.45%。结论成功克隆表达了日本血吸虫Sj32KD抗原,原核表达融合蛋白有一定的诊断应用潜力。 展开更多

关键词 日本血吸虫 SJ32 克隆表达 诊断

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辅助T细胞表位预测及其在抗寄生虫疫苗研发中的应用 被引量：8

11

作者 邵东华(综述) 冯新港(审校) 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期228-233,共6页

细胞免疫在防御外来病原感染、自身免疫及肿瘤等疾病中发挥重要作用。随着分子免疫学研究的不断发展,对T淋巴细胞免疫分子机制的阐释,大量T细胞表位信息以及功能基因组学资料的积累,使得基于数据驱动的预测T细胞表位的研究受到重视,可... 细胞免疫在防御外来病原感染、自身免疫及肿瘤等疾病中发挥重要作用。随着分子免疫学研究的不断发展,对T淋巴细胞免疫分子机制的阐释,大量T细胞表位信息以及功能基因组学资料的积累,使得基于数据驱动的预测T细胞表位的研究受到重视,可能成为疫苗研发的重要工具之一。本文概述辅助T细胞表位预测的理论和方法及其在寄生虫疫苗研发中的应用,并讨论未来的研究方向。 展开更多

关键词 辅助T细胞 表位预测 疫苗 寄生虫

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微小隐孢子虫子孢子表面抗原CP15/60基因的克隆与原核表达 被引量：5

12

作者 于慧珠 陈兆国 +2 位作者 岳城 米荣升 夏延富 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期670-675,共6页

提取微小隐孢子虫鼠基因型卵囊总RNA,用RT-PCR扩增微小隐孢子虫子孢子表面抗原CP15/60基因并克隆到pMD18-T载体中。将鉴定正确的序列亚克隆于原核表达载体pET-28b(+),转化大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE和Western-... 提取微小隐孢子虫鼠基因型卵囊总RNA,用RT-PCR扩增微小隐孢子虫子孢子表面抗原CP15/60基因并克隆到pMD18-T载体中。将鉴定正确的序列亚克隆于原核表达载体pET-28b(+),转化大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE和Western-blot分析,同时将重组蛋白免疫动物后检测血清抗体。结果显示,克隆的目的基因核苷酸序列与GenBank登录的序列的同源性为98.66%。目的基因在大肠杆菌中以可溶形式高效表达。表达的重组蛋白占菌体可溶性总蛋白的57.5%,纯化的重组蛋白纯度达95.2%。重组蛋白可被兔抗微小隐孢子虫血清特异性识别,用重组蛋白免疫3次后,兔血清特异性抗体达到较高水平。表明,该重组蛋白具有较好的反应原性和免疫原性。 展开更多

关键词 微小隐孢子虫 CP15/60基因 克隆 原核表达 抗原性

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抗志贺样毒素Ⅱ型变异体单克隆抗体的制备及特性鉴定 被引量：2

13

作者 杨健美 高崧 +4 位作者 林矫矫 刘金明 陈兆国 傅志强 刘秀梵 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期807-808,共2页

志贺样毒素Ⅱ变异体(SLT-Ⅱe)是猪水肿病的主要致病因子之一,为了制备SLT-Ⅱe单克隆抗体(mAb),我们从TB1菌中用多粘菌素诱导提取了SLT-Ⅱe蛋白,并且用硫酸铵盐析沉淀法对该蛋白进行了提纯,以提纯蛋白免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤细胞技术... 志贺样毒素Ⅱ变异体(SLT-Ⅱe)是猪水肿病的主要致病因子之一,为了制备SLT-Ⅱe单克隆抗体(mAb),我们从TB1菌中用多粘菌素诱导提取了SLT-Ⅱe蛋白,并且用硫酸铵盐析沉淀法对该蛋白进行了提纯,以提纯蛋白免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤细胞技术制备mAb。细胞融合后,培养上清经间接ELISA检测,共得到3株阳性杂交瘤细胞2E11、2H9和4F3,ELISA效价分别为1∶213、1∶213和1∶28,3株杂交瘤细胞培养上清分泌的mAb在Westernblot试验中均与提纯的毒素蛋白反应,在Vero细胞中和试验中均能够中和毒素对Vero细胞的毒性作用,从而为临床分离株SLT-Ⅱe产生的免疫学检测方法奠定了一定的基础。 展开更多

关键词 SLT—Ⅱe 单克隆抗体 特性鉴定

原文传递

日本血吸虫SjPP基因重组杆状病毒的构建和在昆虫细胞中的表达 被引量：3

14

作者 姚利晓 陶丽红 +3 位作者 杨冠珍 吴祥甫 蔡幼民 林矫矫 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期124-127,共4页

目的在昆虫细胞中表达获得可溶性的日本血吸虫SjPP重组蛋白。方法提取日本血吸虫成虫总RNA,通过RT-PCR扩增出SjPP基因的编码区序列,将其定向克隆到供体质粒pFastBac HT-B中,构建重组杆状病毒供体质粒pFastBac-SjPP,转化入大肠埃希菌DH10... 目的在昆虫细胞中表达获得可溶性的日本血吸虫SjPP重组蛋白。方法提取日本血吸虫成虫总RNA,通过RT-PCR扩增出SjPP基因的编码区序列,将其定向克隆到供体质粒pFastBac HT-B中,构建重组杆状病毒供体质粒pFastBac-SjPP,转化入大肠埃希菌DH10Bac进行转座,提取重组杆粒Bacmid-SjPP,用阳离子脂质体法转染粉纹夜蛾(TN5B1-4)细胞。利用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹(Western blotting)分析重组蛋白表达情况。结果构建了含日本血吸虫SjPP基因的重组杆粒Bacmid-SjPP,转染TN5B1-4细胞后,获得有感染力的重组杆状病毒,并在TN5B1-4细胞中成功表达SjPP蛋白。该重组蛋白可被抗SjPP蛋白的兔血清识别。结论成功构建SjPP基因重组杆状病毒,并在TN5B1-4细胞中表达,该蛋白具有良好的抗原性。 展开更多

关键词 日本血吸虫 SjPP Bac-to-Bac杆状病毒表达系统

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隐孢子虫鼠基因型卵囊壁蛋白CP41基因的原核表达及抗血清的制备 被引量：2

15

作者 于慧珠 岳城 +2 位作者 陈兆国 米荣升 夏延富 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期622-626,共5页

为克隆和表达编码隐孢子虫鼠基因型卵囊壁蛋白CP41基因,以隐孢子虫鼠基因型卵囊总RNA作为模板,RT-PCR扩增CP41基因,克隆到pMD18-T载体并进行序列测定,构建重组质粒pGEX-5x-3-CP41,转化BL21(DE3)感受态细胞进行诱导,表达产物SDS-PAGE检... 为克隆和表达编码隐孢子虫鼠基因型卵囊壁蛋白CP41基因,以隐孢子虫鼠基因型卵囊总RNA作为模板,RT-PCR扩增CP41基因,克隆到pMD18-T载体并进行序列测定,构建重组质粒pGEX-5x-3-CP41,转化BL21(DE3)感受态细胞进行诱导,表达产物SDS-PAGE检测目的蛋白,westernblot分析该重组蛋白的免疫活性。结果显示,克隆的目的基因核苷酸序列与GenBank登录中的序列比较,同源性为90.5%,氨基酸序列同源性为87.57%。重组质粒转化菌在IPTG诱导下以包涵体形式高效表达,表达的融合蛋白大小约为46ku,westernblot分析显示,纯化复性后的重组蛋白可被辣根过氧化物酶标记的抗谷胱甘肽巯基转移酶(GST)单克隆抗体、隐孢子虫兔基因型感染兔血清特异性识别。ELISA检测结果表明,该蛋白3次免疫无特征病原体新西兰白兔后,兔血清特异性抗体达到较高水平,表明表达的重组蛋白具有较好的反应原性和免疫原性。 展开更多

关键词 隐孢子虫鼠基因型 卵囊壁蛋白 CP41 克隆 原核表达

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应用重组日本血吸虫组织蛋白酶L诊断日本血吸虫病的研究 被引量：2

16

作者 肖西志 于三科 +4 位作者 林矫矫 顾越星 刘金明 张亮 沈阳 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期387-389,共3页

在大肠杆菌BL2 1中表达日本血吸虫组织蛋白酶L基因 ,经镍离子亲和层析柱纯化得到重组日本血吸虫组织蛋白酶L ;以间接ELISA法 ,检测血吸虫病因牛血清 10 4份 ,阳性检出率为 6 7 31% ;以血吸虫感染小鼠、兔、绵羊血清做阻断试验 ,得到的O... 在大肠杆菌BL2 1中表达日本血吸虫组织蛋白酶L基因 ,经镍离子亲和层析柱纯化得到重组日本血吸虫组织蛋白酶L ;以间接ELISA法 ,检测血吸虫病因牛血清 10 4份 ,阳性检出率为 6 7 31% ;以血吸虫感染小鼠、兔、绵羊血清做阻断试验 ,得到的OD值与阴性血清相当。结果表明 ,以重组日本血吸虫组织蛋白酶L作为诊断抗原检测日本血吸虫病牛感染情况 ,有一定的应用前景。 展开更多

关键词 重组日本血吸虫组织蛋白酶L 间接ELISA 诊断

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应用发酵罐高密度生产日本血吸虫重组蛋白Sj28GST工艺的研究 被引量：1

17

作者 沈阳 林矫矫 +1 位作者 姚利晓 刘金明 《中国动物传染病学报》 CAS 2009年第4期52-56,共5页

为了大量表达日本血吸虫重组蛋白Sj28GST,本文采用葡萄糖作为碳源,在不同的培养温度、种子液接种量I、PTG浓度I、PTG诱导时间等培养条件下进行高密度发酵表达日本血吸虫重组蛋白Sj28GST,分别用Bradford法和比浊法分析重组蛋白Sj28GST的... 为了大量表达日本血吸虫重组蛋白Sj28GST,本文采用葡萄糖作为碳源,在不同的培养温度、种子液接种量I、PTG浓度I、PTG诱导时间等培养条件下进行高密度发酵表达日本血吸虫重组蛋白Sj28GST,分别用Bradford法和比浊法分析重组蛋白Sj28GST的浓度和重组大肠杆菌的密度。优化应用发酵罐高密度发酵表达日本血吸虫重组蛋白Sj28GST的培养温度、种子液接种量I、PTG浓度I、PTG诱导时机等培养条件。研究结果表明,在培养温度37℃、种子液接种量7%、溶解氧浓度保持20%以上、pH7.2左右、用0.7mmol/L IPTG在重组大肠杆菌TB1开始培养后5h进行诱导,细菌密度明显提高,获得的重组蛋白Sj28GST的表达产量最高,为74.32mg/L发酵液,菌体密度达到13OD左右。 展开更多

关键词 高密度发酵 Sj28GST 重组大肠杆菌TB1

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日本血吸虫中国大陆株Sj23抗原基因在家蚕细胞中的表达及鉴定 被引量：1

18

作者 肖西志 林矫矫 +9 位作者 于三科 张亮 程国峰 顾越星 金亚美 沈阳 苑纯秀 刘金明 付志强 张福来 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期43-46,共4页

将日本血吸虫 2 30 0 0膜蛋白 (Sj2 3抗原 )基因从原核表达载体 p ET2 8(c)中亚克隆入转移载体 p Bac PAK- His1,构建了 p Bac PAK- his1- Sj2 3转移载体 ,并与线性化家蚕杆状病毒共转染家蚕细胞 ;经 PCR鉴定得到重组病毒 ,经过蓝、白... 将日本血吸虫 2 30 0 0膜蛋白 (Sj2 3抗原 )基因从原核表达载体 p ET2 8(c)中亚克隆入转移载体 p Bac PAK- His1,构建了 p Bac PAK- his1- Sj2 3转移载体 ,并与线性化家蚕杆状病毒共转染家蚕细胞 ;经 PCR鉴定得到重组病毒 ,经过蓝、白斑筛选得到纯化的重组病毒 ;SDS- PAGE显示日本血吸虫 2 30 0 0膜蛋白基因在家蚕细胞中实现表达 ,蛋白的相对分子质量为 2 6 0 0 0 ;重组 Sj2 3经 Western- 展开更多

关键词 日本血吸虫 Sj23抗原基因 家蚕细胞 原核表达

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血吸虫受发育调节的相关蛋白及其功能的研究 被引量：2

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作者 苑纯秀 蔡幼民 林矫矫 《国外医学（寄生虫病分册）》 2003年第3期102-108,共7页

血吸虫生活史各阶段可作为血吸虫疫苗和药物介入的靶阶段。对血吸虫不同发育阶段蛋白分子和基因表达的动态变化的了解 ,有助于探索其生长发育的机制 ,为研制有效的阻断传播的疫苗和新的药物提供科学指导。

关键词 血吸虫 发育调节 阶段性 表膜蛋白 热休克蛋白70 钙结合蛋白 14-3-3蛋白 肌肉结构蛋白 弹性蛋白酶 抗氧化酶 半胱氨酸蛋白酶

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影响家蚕表达外源基因效率的几个重要因子的比较研究 被引量：1

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作者 刘金明 傅志强 +4 位作者 林矫矫 蔡幼民 桂仲争 庄大桓 吴祥甫 《中国兽医寄生虫病》 2005年第1期5-7,共3页

本研究以重组病毒rSj14NPV为感染病毒,通过比较纯化蛋白的产量,对家蚕作为生物反应器生产基因工 程产品的适宜蚕品种与相关的重组病毒接种技术进行了比较研究。研究结果表明:871×872、秋风×白玉为表达 Sj14的适宜蚕品种;... 本研究以重组病毒rSj14NPV为感染病毒,通过比较纯化蛋白的产量,对家蚕作为生物反应器生产基因工 程产品的适宜蚕品种与相关的重组病毒接种技术进行了比较研究。研究结果表明:871×872、秋风×白玉为表达 Sj14的适宜蚕品种;重组病毒接种量与蛋白表达量有关,适宜接种量为4～5μL/蚕;适宜接种时间以5龄2日龄为 优;以家蚕表达外源基因,最好将重组病毒以家蚕细胞复苏后再接种家蚕以保证获得较高的表达效果。 展开更多

关键词 家蚕 重组病毒 蚕品种 外源基因 接种量 日龄 接种时间 表达 适宜 再接种

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