目的:研究冻干对BMP-2重组慢病毒载体(Lenti-BMP-2)生物学效应的影响。方法:利用基因重组技术构建lenti-BMP-2。以感染复数(multiplicity of infection,MOI)10、25、50、100、200转染大鼠骨髓基质细胞(BMSCs),X-gal染色确定最佳MOI值。...目的:研究冻干对BMP-2重组慢病毒载体(Lenti-BMP-2)生物学效应的影响。方法:利用基因重组技术构建lenti-BMP-2。以感染复数(multiplicity of infection,MOI)10、25、50、100、200转染大鼠骨髓基质细胞(BMSCs),X-gal染色确定最佳MOI值。在适宜条件下,将lenti-BMP-2与10%海藻糖配比的冻干保护剂混合制成冻干剂型。采用MTS试剂盒观察冻干前、后lenti-BMP-2对BMSCs增殖的影响。应用ELISA法检测冻干lenti-BMP-2转染大鼠BMSCs后细胞中BMP-2蛋白的表达变化,实时定量PCR检测冻干对lenti-BMP-2转染BMSCs后成骨标志物Runx-2、Col1、OCN、OPN表达水平的影响。采用SPSS13.0软件包对数据进行统计学分析。结果:X-gal染色显示,MOI为100 pfu/细胞时,转染效率趋于稳定,冻干前、后lenti-BMP-2对BMSCs增殖无显著影响(P>0.05)。ELISA法检测显示,利用冻干后的lenti-BMP-2转染BMSCs,可持续稳定地分泌BMP-2蛋白,冻干不会影响BMP-2蛋白的分泌活性。实时定量PCR检测结果显示,冻干前和冻干后组被转染的BMSCs细胞中,Runx-2、Col1、OCN、OPN表达水平无显著差异,说明冻干不会影响BMP-2促进成骨标志物的表达(P>0.05)。结论:海藻糖冻干剂型的lenti-BMP-2能够长期保持lenti-BMP-2的高生物活性,是一种有效可靠的储存方法。展开更多
文摘目的:研究冻干对BMP-2重组慢病毒载体(Lenti-BMP-2)生物学效应的影响。方法:利用基因重组技术构建lenti-BMP-2。以感染复数(multiplicity of infection,MOI)10、25、50、100、200转染大鼠骨髓基质细胞(BMSCs),X-gal染色确定最佳MOI值。在适宜条件下,将lenti-BMP-2与10%海藻糖配比的冻干保护剂混合制成冻干剂型。采用MTS试剂盒观察冻干前、后lenti-BMP-2对BMSCs增殖的影响。应用ELISA法检测冻干lenti-BMP-2转染大鼠BMSCs后细胞中BMP-2蛋白的表达变化,实时定量PCR检测冻干对lenti-BMP-2转染BMSCs后成骨标志物Runx-2、Col1、OCN、OPN表达水平的影响。采用SPSS13.0软件包对数据进行统计学分析。结果:X-gal染色显示,MOI为100 pfu/细胞时,转染效率趋于稳定,冻干前、后lenti-BMP-2对BMSCs增殖无显著影响(P>0.05)。ELISA法检测显示,利用冻干后的lenti-BMP-2转染BMSCs,可持续稳定地分泌BMP-2蛋白,冻干不会影响BMP-2蛋白的分泌活性。实时定量PCR检测结果显示,冻干前和冻干后组被转染的BMSCs细胞中,Runx-2、Col1、OCN、OPN表达水平无显著差异,说明冻干不会影响BMP-2促进成骨标志物的表达(P>0.05)。结论:海藻糖冻干剂型的lenti-BMP-2能够长期保持lenti-BMP-2的高生物活性,是一种有效可靠的储存方法。
