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Studies on Pattern of Producing Transgenic Fish II. Several Elements Related to the Establishment of Transgenic Fish
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作者 刘春巧 张永忠 +2 位作者 庄贵洵 孙效文 李云龙 《Developmental and Reproductive Biology》 1997年第2期21-27,共7页
A recombinant plasmid (pcMTsGH) containing the common carp methlothionein promoter (cMT) and salmon growth hormone gene (sGH) was microinjected into common carp fertilized eggs and embryos to optimize the conditions f... A recombinant plasmid (pcMTsGH) containing the common carp methlothionein promoter (cMT) and salmon growth hormone gene (sGH) was microinjected into common carp fertilized eggs and embryos to optimize the conditions for producing transgenic fish. Several key elements were found to have significant effects on the integration of exogenous gene. These elements include forms and doses of pcMTsGH gene microinjected, stages of embryo at which microinjection conducted and pretreatment of fertilized eggs for microinjection. The results show that, in producing transgenic fish, (1) the best time for microinjection is late onecell stage, (2) the most appropriate dose of pcMTsGH gene for microinjection is around 106~107 copies; (3) the hatching rate rises up when the gene is microinjected into the eggs whose chorions are removed, but the integration rate has no significant changes before and after the removal of egg chorions. 展开更多
关键词 transgenic fish integration rate hatching rate
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转基因鱼构建模式的研究 I.cMT—sGH全鱼基因鱼的构建与检测
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作者 刘春巧 曹梦芝 《Developmental and Reproductive Biology》 1997年第1期57-62,共6页
转基因鱼工作的开展被用于水产科学基础与应用研究的各个领域。应用方面的一顶重要研究利用转生长激素基因来提高鱼的增长速度。需要解决两个问题:一是转基因鱼所使用的基因元件;二是外源基因的高整和率与高表达,已有许多报道认为:... 转基因鱼工作的开展被用于水产科学基础与应用研究的各个领域。应用方面的一顶重要研究利用转生长激素基因来提高鱼的增长速度。需要解决两个问题:一是转基因鱼所使用的基因元件;二是外源基因的高整和率与高表达,已有许多报道认为:不同种动物的生长激素不一定相互促进生长。我们通过显微注射,将鲤鱼金属硫蛋白启动子(cMT)与大巴哈鱼生长激素基因(sGH)的融合基因(cMT-sGH)导入鲤鱼半日细胞后期的早期胚胎,构建了全鱼基因鲤鱼。通过斑点杂交、Southern blot结合PCR-Southern blot,对外源sGH的整和进行了精确的检测和分析。实验选取性成熟鲤鱼,收集卵子和精子,湿法受精获得受精卵。经过转基因注射,孵化后的鱼苗放入水族。待鱼平游,提取总DNA进行检测。以PstI酶切质粒pcMTsGH(Fig.4)分离3.4KbsGH片段,用随机引物标记,作为杂交探针。同时,设计并合成sGH基因的PCR特异引物。Fig.1的斑点杂交结果与Fig.2的PCR-Southern结果相比较(Table1),说明斑眯杂交存在着高的假阳性。而PCR-Southen将PCR的快速、方便与Southern的准确性相结合,排除了PCR本身可能的非特异,大大提高了检测效率,同时也检验了引物的设计是否成功。Table1的结果表明:我们所构建的基因鱼达到了37.7%的高整和率,且稳定性好。高整和率的原因与所使用的基因元件有很大关系。Fig.3基因组的Southern行为-PstI和BglII酶切的杂交信号条带多、共迁移,说明基因的整和方式为多拷贝,可能伴有碱基修饰。这可能是表达率降低的重要原因。 展开更多
关键词 转基因鱼 cMT-sGH 融合基因 构建模式 检测
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