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早熟艾美耳球虫上海株的分离鉴定及生物学特性观察
1
作者 陈兆国 米荣升 +6 位作者 于慧珠 郝言明 胡义彬 黄燕 李正锋 李艳 林矫矫 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期529-533,共5页
为分离和鉴定早熟艾美尔球虫(Eimeria praecox),观察其主要生物学特性,本研究采用单卵囊感染技术分离单一虫株,通过卵囊形态学、PCR技术和18SrRNA基因检测,对其进行性状观察、虫种鉴定和系统发生关系分析。在获得的5株单一虫株中,对其... 为分离和鉴定早熟艾美尔球虫(Eimeria praecox),观察其主要生物学特性,本研究采用单卵囊感染技术分离单一虫株,通过卵囊形态学、PCR技术和18SrRNA基因检测,对其进行性状观察、虫种鉴定和系统发生关系分析。在获得的5株单一虫株中,对其中一株的卵囊形态、寄生部位、最短孢子化时间和最短潜在期进行观察。结果表明:该株球虫具有E. praecox的主要生物学特征;分离自肠道的卵囊明显小于分离自粪便的卵囊;最短潜在期为81h;经PCR鉴定为E. praecox,命名为E. praecox上海株。测序结果显示,其18SrRNA基因序列长1747bp,与GenBank登录的相关基因序列同源性为99.4%;该虫株对雏鸡呈轻度致病性。该虫株的分离和鉴定为丰富我国鸡球虫虫种资源,开展球虫病防治研究提供了依据。 展开更多
关键词 早熟艾美尔球虫 分离 鉴定 生物学性状 18S RRNA基因
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日本血吸虫童虫部分差异表达蛋白的质谱分析 被引量：10
2
作者 赵晓宇 姚利晓 +4 位作者 孙安国 傅志强 刘金明 蔡幼民 林矫矫 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期1-6,共6页
应用蛋白质双向电泳技术和质谱技术对16日龄日本血吸虫童虫的可溶性蛋白进行分离、分析,得到了2 000±69个蛋白斑点,其中500±86个蛋白斑点与血吸虫雌虫和雄虫的蛋白所共有,童虫特异呈现的蛋白斑点有26±1个。对其中20个童... 应用蛋白质双向电泳技术和质谱技术对16日龄日本血吸虫童虫的可溶性蛋白进行分离、分析,得到了2 000±69个蛋白斑点,其中500±86个蛋白斑点与血吸虫雌虫和雄虫的蛋白所共有,童虫特异呈现的蛋白斑点有26±1个。对其中20个童虫特异呈现的蛋白斑点进行质谱和生物信息学分析的结果表明,它们代表了16种蛋白;对这些蛋白进行生物学功能预测的结果表明,它们可能与寄生虫的生物合成、能量代谢、信号传导和细胞构成等相关。 展开更多
关键词 日本血吸虫 童虫 蛋白质组 质谱
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微小隐孢子虫子孢子表面抗原CP15/60基因的克隆与原核表达 被引量：5
3
作者 于慧珠 陈兆国 +2 位作者 岳城 米荣升 夏延富 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期670-675,共6页
提取微小隐孢子虫鼠基因型卵囊总RNA,用RT-PCR扩增微小隐孢子虫子孢子表面抗原CP15/60基因并克隆到pMD18-T载体中。将鉴定正确的序列亚克隆于原核表达载体pET-28b(+),转化大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE和Western-... 提取微小隐孢子虫鼠基因型卵囊总RNA,用RT-PCR扩增微小隐孢子虫子孢子表面抗原CP15/60基因并克隆到pMD18-T载体中。将鉴定正确的序列亚克隆于原核表达载体pET-28b(+),转化大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE和Western-blot分析,同时将重组蛋白免疫动物后检测血清抗体。结果显示,克隆的目的基因核苷酸序列与GenBank登录的序列的同源性为98.66%。目的基因在大肠杆菌中以可溶形式高效表达。表达的重组蛋白占菌体可溶性总蛋白的57.5%,纯化的重组蛋白纯度达95.2%。重组蛋白可被兔抗微小隐孢子虫血清特异性识别,用重组蛋白免疫3次后,兔血清特异性抗体达到较高水平。表明,该重组蛋白具有较好的反应原性和免疫原性。 展开更多
关键词 微小隐孢子虫 CP15/60基因 克隆 原核表达 抗原性
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隐孢子虫鼠基因型卵囊壁蛋白CP41基因的原核表达及抗血清的制备 被引量：2
4
作者 于慧珠 岳城 +2 位作者 陈兆国 米荣升 夏延富 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期622-626,共5页
为克隆和表达编码隐孢子虫鼠基因型卵囊壁蛋白CP41基因,以隐孢子虫鼠基因型卵囊总RNA作为模板,RT-PCR扩增CP41基因,克隆到pMD18-T载体并进行序列测定,构建重组质粒pGEX-5x-3-CP41,转化BL21(DE3)感受态细胞进行诱导,表达产物SDS-PAGE检... 为克隆和表达编码隐孢子虫鼠基因型卵囊壁蛋白CP41基因,以隐孢子虫鼠基因型卵囊总RNA作为模板,RT-PCR扩增CP41基因,克隆到pMD18-T载体并进行序列测定,构建重组质粒pGEX-5x-3-CP41,转化BL21(DE3)感受态细胞进行诱导,表达产物SDS-PAGE检测目的蛋白,westernblot分析该重组蛋白的免疫活性。结果显示,克隆的目的基因核苷酸序列与GenBank登录中的序列比较,同源性为90.5%,氨基酸序列同源性为87.57%。重组质粒转化菌在IPTG诱导下以包涵体形式高效表达,表达的融合蛋白大小约为46ku,westernblot分析显示,纯化复性后的重组蛋白可被辣根过氧化物酶标记的抗谷胱甘肽巯基转移酶(GST)单克隆抗体、隐孢子虫兔基因型感染兔血清特异性识别。ELISA检测结果表明,该蛋白3次免疫无特征病原体新西兰白兔后,兔血清特异性抗体达到较高水平,表明表达的重组蛋白具有较好的反应原性和免疫原性。 展开更多
关键词 隐孢子虫鼠基因型 卵囊壁蛋白 CP41 克隆 原核表达
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日本血吸虫SjPP基因原核表达蛋白的酶活性
5
作者 姚利晓 王欣之 +2 位作者 傅志强 陶丽红 林矫矫 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期555-558,共4页
分别以磷酸苏氨酸多肽（K-R-pT-I—R—R）和4-硝基苯基磷基二钠盐（pNPP）为底物，研究原核表达的日本血吸虫丝／苏氨酸蛋白磷酸酶重组蛋白rSjPP的酶活性，检测二价金属阳离子（Mn^2＋、Ni^2＋、Mg^2＋、Ca^2＋）、温度、pH值对rSjPP酶... 分别以磷酸苏氨酸多肽（K-R-pT-I—R—R）和4-硝基苯基磷基二钠盐（pNPP）为底物，研究原核表达的日本血吸虫丝／苏氨酸蛋白磷酸酶重组蛋白rSjPP的酶活性，检测二价金属阳离子（Mn^2＋、Ni^2＋、Mg^2＋、Ca^2＋）、温度、pH值对rSjPP酶活性的影响。结果显示，rSjPP重组蛋白可以有效地水解磷酸苏氨酸多肽，具有丝／苏氨酸蛋白磷酸酶活性。rSjPP酶活性的最适温度为60℃，最适pH值为8．0。1～4mmol／L Ni^2＋对rSjPP酶活力有促进作用，但Mn^2＋、Mg^2＋、Ca^2＋等阳离子对rSjPP的酶活力影响不大。 展开更多
关键词 日本血吸虫 丝/苏氨酸蛋白磷酸酶 酶活性 影响因子
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