国产转基因抗虫棉研究回顾与展望 被引量：39

1

作者 张锐 王远 +2 位作者 孟志刚 孙国清 郭三堆 《中国农业科技导报》 CAS CSCD 2007年第4期32-42,共11页

棉花是我国最重要的经济作物之一,抗虫棉的研制成功与大规模产业化在保障我国植棉业的稳步发展、促进棉纺工业的快速增长、保护环境、增加农民收入和促进农业可持续发展方面作出了重要贡献。作者回顾了国产转基因抗虫棉从单价、双价到... 棉花是我国最重要的经济作物之一,抗虫棉的研制成功与大规模产业化在保障我国植棉业的稳步发展、促进棉纺工业的快速增长、保护环境、增加农民收入和促进农业可持续发展方面作出了重要贡献。作者回顾了国产转基因抗虫棉从单价、双价到融合研究的重要历程,介绍了国产抗虫棉产业化的突出成绩,并对抗虫棉的深化研究、育种技术等作出展望。 展开更多

关键词 国产 抗虫棉 研究 产业化

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棉花抗逆相关基因GhDr1的克隆及生物信息学分析 被引量：3

2

作者 丁忠涛 张锐 郭三堆 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期99-106,共8页

通过TAIL-PCR的方法从棉花中克隆到未知功能的新基因GhDr1,生物信息学分析结果表明,GhDr1的预测蛋白含有酪氨酸激酶和蛋白酶C磷酸化位点、潜在的锌指类功能模块、MAPK磷酸化位点及MAPK相互作用识别位点;与GhDr1同源基因位于同一基因簇... 通过TAIL-PCR的方法从棉花中克隆到未知功能的新基因GhDr1,生物信息学分析结果表明,GhDr1的预测蛋白含有酪氨酸激酶和蛋白酶C磷酸化位点、潜在的锌指类功能模块、MAPK磷酸化位点及MAPK相互作用识别位点;与GhDr1同源基因位于同一基因簇的基因多为参与逆境信号转导的蛋白。推测GhDr1基因可能在逆境信号转导途径的磷酸化级联反应中被调节,参与棉花逆境应答的生理过程。 展开更多

关键词 生物信息学 棉花 GhDr1基因 TAIL-PCR 抗逆

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优化TAIL-PCR方法克隆棉花抗逆相关转录因子编码基因 被引量：9

3

作者 梁成真 张锐 +4 位作者 孙国清 孟志刚 周焘 丁忠涛 郭三堆 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2010年第3期195-201,共7页

ABF/AREB/ABI5/DPBF类转录因子属于碱性亮氨酸类蛋白,在依赖ABA的逆境信号传导途径中起重要的作用。本研究结合该类转录因子的结构特点,利用3′RACE技术和优化的TAIL-PCR技术成功获得棉花中三个该家族成员编码基因。进一步验证结果表明... ABF/AREB/ABI5/DPBF类转录因子属于碱性亮氨酸类蛋白,在依赖ABA的逆境信号传导途径中起重要的作用。本研究结合该类转录因子的结构特点,利用3′RACE技术和优化的TAIL-PCR技术成功获得棉花中三个该家族成员编码基因。进一步验证结果表明两步PCR成功获得基因完整的ORF、3′UTR以及部分5′UTR序列。本研究所获基因为棉花抗逆基因工程提供了候选基因源,优化后的TAIL-PCR技术为克隆棉花中目的基因提供了一种简便高效的方法。 展开更多

关键词 棉花 ABF/AREB/ABI5/DPBF 转录因子 TAIL-PCR 抗逆相关基因

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染色体步移技术研究进展 被引量：16

4

作者 梁成真 张锐 郭三堆 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期75-82,87,共9页

染色体步移技术是一种常用的克隆已知片段旁侧序列的技术。综述了近年来染色体步移技术的发展情况,介绍了结合基因组文库的染色体步移技术和基于PCR的染色体步移技术。同时总结了物理剪切法和限制性内切酶法构建亚克隆文库的优化步骤,... 染色体步移技术是一种常用的克隆已知片段旁侧序列的技术。综述了近年来染色体步移技术的发展情况,介绍了结合基因组文库的染色体步移技术和基于PCR的染色体步移技术。同时总结了物理剪切法和限制性内切酶法构建亚克隆文库的优化步骤,以及连接成环PCR法、外源接头介导PCR法和半随机引物PCR法的原理,并且比较分析了他们之间的优缺点,以期对实际操作起到借鉴作用。 展开更多

关键词 染色体步移 侧翼序列 BAC克隆反向PCR 外源接头介导PCR 半随机引物PCR

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枯草芽孢杆菌B111中性蛋白酶基因BS2在毕赤酵母中的表达 被引量：6

5

作者 白玮 张锐 郭三堆 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期876-883,共8页

【目的】为开发抗病基因和生物农药新资源,纯化鉴定枯草芽孢杆菌B111分泌的抗棉花黄萎病菌蛋白质,克隆其编码基因,并分析在毕赤酵母中的表达特性。【方法】通过超滤浓缩、90%硫酸铵沉淀、葡聚糖凝胶QAE-A50强阴离子交换柱洗脱及冻干等步... 【目的】为开发抗病基因和生物农药新资源,纯化鉴定枯草芽孢杆菌B111分泌的抗棉花黄萎病菌蛋白质,克隆其编码基因,并分析在毕赤酵母中的表达特性。【方法】通过超滤浓缩、90%硫酸铵沉淀、葡聚糖凝胶QAE-A50强阴离子交换柱洗脱及冻干等步骤,分离纯化抗菌蛋白。采用联机反相毛细管柱液相色谱电喷雾串联质谱,鉴定抗菌蛋白种类。克隆包含前导区序列在内的抗菌蛋白基因序列,构建表达载体pPIC9K-PT,转化毕赤酵母GS115。转化子经PCR鉴定,甲醇诱导表达产物经中性蛋白酶活性和抗菌活性检测验证功能。【结果】纯化鉴定了一个来源于枯草芽孢杆菌B111的抗菌中性蛋白酶BS2。克隆了包含前导区序列在内的抗菌蛋白基因BS2,并在毕赤酵母中获得有效表达。重组BS2蛋白分子量约69kD,表达水平29.77mg·L-1,水解酪素酶活力27800U·g-1,并显示抗黄萎病菌活性。【结论】纯化鉴定了一个具有抗菌活性的枯草芽孢杆菌中性蛋白酶BS2,克隆其编码基因BS2,并成功实现在酵母中的有效表达。 展开更多

关键词 枯草芽孢杆菌 中性蛋白酶 抗菌活性 毕赤酵母表达

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实时荧光定量PCR法检测抗虫棉Bt基因拷贝数方法的建立 被引量：4

6

作者 闫喜中 张锐 +3 位作者 孟志刚 孙国清 周涛 郭三堆 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第26期11376-11377,共2页

[目的]建立并完善Taqman实时荧光定量PCR检测转基因抗虫棉Bt基因的方法。[方法]通过Bt基因序列,利用软件Primer5.0设计引物和探针,然后利用10倍系列稀释含有目的基因的质粒pG4AB,进行实时荧光定量PCR反应,制作标准曲线。[结果]抗虫基因... [目的]建立并完善Taqman实时荧光定量PCR检测转基因抗虫棉Bt基因的方法。[方法]通过Bt基因序列,利用软件Primer5.0设计引物和探针,然后利用10倍系列稀释含有目的基因的质粒pG4AB,进行实时荧光定量PCR反应,制作标准曲线。[结果]抗虫基因拷贝数与Ct值的关系为Ct=-3.549 632X+43.783 512,相关系数R2为0.997 867。[结论]实时荧光定量PCR检测转基因抗虫棉Bt基因的方法具有特异性好、灵敏度高的特点。 展开更多

关键词 晚基因 实时荧光定量PCR 标准曲线

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转录因子ABP9基因过表达对植物生长发育的影响分析 被引量：4

7

作者 孟慧 张霞 +2 位作者 曾日中 范云六 赵军 《中国农学通报》 CSCD 2007年第6期94-98,共5页

【研究目的】为分析玉米ABA/逆境响应转录因子ABP9基因过量表达对植物生长发育的影响以利用该基因开展抗逆分子育种。【方法】本研究构建了35S启动子驱动ABP9组成型表达的植物表达载体,获得了过表达ABP9基因的拟南芥转基因株系,并在正... 【研究目的】为分析玉米ABA/逆境响应转录因子ABP9基因过量表达对植物生长发育的影响以利用该基因开展抗逆分子育种。【方法】本研究构建了35S启动子驱动ABP9组成型表达的植物表达载体,获得了过表达ABP9基因的拟南芥转基因株系,并在正常生长条件下,比较了转基因植株和野生型在种子萌发、营养生长和生殖生长阶段的形态和生理变化,分析了可能的分子机制。【结果】结果表明,正常生长条件下,转基因植株与野生型相比表现出萌发,幼苗生长以及开花阶段的生长抑制;气孔开度减小,叶片内源ABA含量降低;ABA信号传导基因表达增强,而ABA合成基因表达降低;而且这些效应在ABP9基因表达相对较强的转基因株系中表现更明显。【结论】说明ABP9基因过量在正常生长条件下即诱导转基因植株产生耐逆反应,抑制植株的生长发育。因此,在利用ABP9基因进行转基因抗逆育种时须考虑控制ABP9基因适时适量表达。 展开更多

关键词 转录因子ABP9 ABRE 植物激素ABA 生长发育调节

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转基因抗虫棉Bt基因与nptⅡ基因的遗传与表达 被引量：1

8

作者 闫喜中 张锐 +3 位作者 孟志刚 孙国清 周涛 郭三堆 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2008年第6期161-163,共3页

采用花粉管通道法将含有Bt杀虫基因的pG4AB质粒导入受体棉花中23中,通过卡那霉素筛选,Bt免疫检测条检测,PCR扩增对转基因抗虫棉的各个自交世代进行跟踪研究。结果表明,具有卡那霉素抗性的单株能扩增出Bt基因,而且均有Bt杀虫蛋白表达。B... 采用花粉管通道法将含有Bt杀虫基因的pG4AB质粒导入受体棉花中23中,通过卡那霉素筛选,Bt免疫检测条检测,PCR扩增对转基因抗虫棉的各个自交世代进行跟踪研究。结果表明,具有卡那霉素抗性的单株能扩增出Bt基因,而且均有Bt杀虫蛋白表达。Bt基因与npt Ⅱ基因均整合进了棉花基因组中,相互之间紧密连锁遗传,均稳定表达,因此报告基因npt Ⅱ可用于研究Bt基因的遗传情况。 展开更多

关键词 BT基因 nptⅡ基因 遗传 表达

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拟南芥尿黑酸叶绿醇转移酶(HPT)基因启动子的分离及表达特性分析 被引量：6

9

作者 朱永兴 王磊 +2 位作者 张兰 张伟 范云六 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期554-559,共6页

尿黑酸叶绿醇转移酶(HPT)是催化生育酚生物合成分支途径中的关键酶,催化叶绿醇焦磷酸(phytyl-PP)与尿黑酸(HGA)缩合生成生育酚的前体。本研究从拟南芥中分离HPT基因的启动子序列946bp,构建了该启动子与GUS嵌合的重组载体,通过农杆菌介... 尿黑酸叶绿醇转移酶(HPT)是催化生育酚生物合成分支途径中的关键酶,催化叶绿醇焦磷酸(phytyl-PP)与尿黑酸(HGA)缩合生成生育酚的前体。本研究从拟南芥中分离HPT基因的启动子序列946bp,构建了该启动子与GUS嵌合的重组载体,通过农杆菌介导转化拟南芥,取正常生长条件下的拟南芥转基因植株进行GUS组织化学染色,结果表明,在HPT启动子的驱动下,GUS基因主要在转基因拟南芥的根中高表达,在成熟叶片、花丝、雌蕊中也有一些表达,而在茎、根尖、花药、种荚及发育的种子中则未表达,可见该启动子为根优势表达启动子。 展开更多

关键词 拟南芥 维生素E 生育酚 尿黑酸叶绿醇转移酶(HPT) 启动子

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多启动子驱动苘麻epsps优化基因植物表达载体的构建及其转化 被引量：4

10

作者 张莎莎 张锐 +1 位作者 周焘 郭三堆 《中国农业科技导报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期48-54,共7页

转基因抗草甘膦作物是商业化最广泛的转基因作物之一,但是棉花的雄蕊对草甘膦敏感,在四叶期后喷施草甘膦会造成抗草甘膦棉花雄性败育,不能正常授粉,最终导致产量降低。为降低草甘膦对棉花育性的不良影响,有针对性的构建了棉花生殖器官... 转基因抗草甘膦作物是商业化最广泛的转基因作物之一,但是棉花的雄蕊对草甘膦敏感,在四叶期后喷施草甘膦会造成抗草甘膦棉花雄性败育,不能正常授粉,最终导致产量降低。为降低草甘膦对棉花育性的不良影响,有针对性的构建了棉花生殖器官优势表达的arf1启动子、棉花草甘膦高效诱导表达的ag2启动子和组成型启动子CaMV35S驱动苘麻epsps优化基因的串联三表达盒植物表达载体,采用农杆菌喷花法将其转入棉花,对T0代喷施草甘膦筛选获得8株对草甘膦有较强抗性并且生殖发育正常的植株;PCR和RT-PCR分析表明外源基因已整合至棉花基因组并正确表达。为探索用不同类型启动子驱动相同基因以扩大外源基因在植物中的表达范围和培育具有自主知识产权的抗草甘膦转基因棉花打下基础。 展开更多

关键词 棉花转化 草甘膦epsps 启动子 载体构建

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转录因子ABP9基因在不同启动子驱动下对转基因拟南芥生长发育的影响 被引量：2

11

作者 陈铮 邹维华 +3 位作者 张霞 唐咏 范云六 赵军 《中国农业科技导报》 CAS CSCD 2008年第3期58-63,共6页

本研究构建了由IND(6xABRE-mini35S)和Pabp9启动子分别驱动ABP9基因的两种诱导型表达的植物表达载体,得到拟南芥转基因株系;并在正常生长的条件下,与转空载体pCHF3和转35S-ABP9的两种转基因株系在种子萌发、根系伸长、营养和生殖生长等... 本研究构建了由IND(6xABRE-mini35S)和Pabp9启动子分别驱动ABP9基因的两种诱导型表达的植物表达载体,得到拟南芥转基因株系;并在正常生长的条件下,与转空载体pCHF3和转35S-ABP9的两种转基因株系在种子萌发、根系伸长、营养和生殖生长等方面进行比较,分析转录因子ABP9基因在不同启动子的驱动下,对转基因拟南芥各生长发育时期的影响。研究结果表明,在转基因拟南芥中,利用上述两种诱导型启动子驱动ABP9基因表达能够一定程度上的解除由组成型表达ABP9基因导致的生长延迟。 展开更多

关键词 诱导型启动子 转录因子 ABP9 生长发育

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拟南芥HPT1，VTE3及VTE4基因启动子在逆境条件下的表达特性分析 被引量：3

12

作者 齐圆晖 范云六 王磊 《中国农业科技导报》 CAS CSCD 2008年第2期100-104,共5页

维生素E是一类人体所必需的脂溶性维生素,具有重要的生理功能。尿黑酸叶绿醇转移酶(HPT)、2-甲基-6-叶绿基-1,4-苯醌甲基转移酶(MPBQMT/VTE3)、γ-生育酚甲基转移酶(γ-TMT/VTE4)是维生素E生物合成途径中的关键酶。本研究对来自拟南芥的... 维生素E是一类人体所必需的脂溶性维生素,具有重要的生理功能。尿黑酸叶绿醇转移酶(HPT)、2-甲基-6-叶绿基-1,4-苯醌甲基转移酶(MPBQMT/VTE3)、γ-生育酚甲基转移酶(γ-TMT/VTE4)是维生素E生物合成途径中的关键酶。本研究对来自拟南芥的HPT1,VTE3,VTE4三个基因启动子在低温、高盐及无光等逆境条件下的表达特性进行了分析,GUS组织化学染色结果表明:低温条件下,HPT1的表达降低明显,高盐条件下,HPT1的表达仅略有降低,无光条件下HPT1在茎中的表达升高,而根中的表达则降低;低温条件下VTE3的表达没有变化,高盐条件下则明显降低,无光条件下VTE3在茎中的表达显著降低;低温条件下VTE4表达略有升高,高盐条件下其表达明显降低,无光条件下VTE4在茎中的表达有所降低。说明拟南芥维生素E合成途径中的酶的表达受外界环境条件的影响。 展开更多

关键词 拟南芥 维生素E 生育酚 启动子 表达

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玉米转ABP9基因植株的获得 被引量：1

13

作者 高建强 赵芳 +2 位作者 邹维华 梁华 赵军 《中国农业科技导报》 CAS CSCD 2010年第6期105-108,共4页

ABP9参与ABA信号传导及ROS代谢调节,增强植物抵抗非生物逆境胁迫的能力,因此该基因在作物抗逆性改良上有潜在应用价值。为了获得转ABP9基因的玉米植株,向玉米抗逆育种提供新材料,构建了由组成型启动子Ub i驱动抗逆转录因子ABP9基因的植... ABP9参与ABA信号传导及ROS代谢调节,增强植物抵抗非生物逆境胁迫的能力,因此该基因在作物抗逆性改良上有潜在应用价值。为了获得转ABP9基因的玉米植株,向玉米抗逆育种提供新材料,构建了由组成型启动子Ub i驱动抗逆转录因子ABP9基因的植物表达载体,并通过农杆菌介导对玉米自交系齐319进行了遗传转化。经草铵膦抗性筛选和用两对不同的基因特异引物进行PCR扩增检测,证明已将ABP9基因导入玉米齐319基因组中,获得转基因植株。 展开更多

关键词 玉米 转基因 抗逆 ABP9

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棉花杜松烯合成酶基因的克隆及其表达分析 被引量：1

14

作者 周婷 郭三堆 张锐 《生物技术进展》 2011年第3期207-213,共7页

杜松烯合成酶是棉酚合成途径中的关键酶,催化(E,E)-法呢基焦磷酸(FPP)环化形成(+)-δ-杜松烯。从陆地棉Y18R中克隆分离了杜松烯合成酶基因(GhCdn),该基因的基因组序列为2700bp,具有6个内含子,剪切后其ORF为1665bp,编码554个氨基酸,该基... 杜松烯合成酶是棉酚合成途径中的关键酶,催化(E,E)-法呢基焦磷酸(FPP)环化形成(+)-δ-杜松烯。从陆地棉Y18R中克隆分离了杜松烯合成酶基因(GhCdn),该基因的基因组序列为2700bp,具有6个内含子,剪切后其ORF为1665bp,编码554个氨基酸,该基因属于杜松烯合成酶C亚家族。应用Overlap PCR方法将其上的2个HindⅢ酶切位点钝化后,将GhCdn基因连接到表达载体pBI121上,构建出分别由组成型启动子CaMV 35S和绿色组织高效启动子Psbp驱动的2个植物表达载体pGBI-CaMV 35S-GhCdn和pGBI-Psbp-GhCdn。通过农杆菌介导法转化棉花下胚轴并进行组织培养,获得了9个35S转基因阳性愈伤系和2个P转基因阳性愈伤系。经检测,阳性愈伤组织中GhCdn基因的mRNA表达量和棉酚含量均有所增加,但35S系普遍高于P系。本研究为通过基因工程手段提高棉花组织器官中的棉酚含量提供了依据。 展开更多

关键词 杜松烯合成酶基因 表达载体 CaMV 35S启动子 Psbp启动子 棉酚

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植物微小RNA(microRNA)研究进展 被引量：16

15

作者 王磊 范云六 《中国农业科技导报》 CAS CSCD 2007年第3期18-23,共6页

真核细胞中存在大量的非编码RNA,～22nt的小RNA是其中一类非常重要的调控RNA,主要包括siRNA和miRNA两种类型,二者均由类似RNaseⅢ的核酸内切酶-Dicer加工产生,随后进入沉默复合体抑制靶基因表达。miRNA分子与siRNA类似,但miRNA的前体在... 真核细胞中存在大量的非编码RNA,～22nt的小RNA是其中一类非常重要的调控RNA,主要包括siRNA和miRNA两种类型,二者均由类似RNaseⅢ的核酸内切酶-Dicer加工产生,随后进入沉默复合体抑制靶基因表达。miRNA分子与siRNA类似,但miRNA的前体在基因组上具有独立的转录单位,可自身折叠成发卡结构,其靶基因主要是与器官发生及生长发育相关的转录因子以及调控蛋白。miRNA在生物生长发育的各个时期都扮演着重要的角色,调控许多重要的生物途径,处于基因调控网络的核心位置。 展开更多

关键词 小RNA 干扰小RNA(siRNA) 微小RNA(miRNA) 发育

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microRNA与植物花发育调控的研究进展 被引量：3

16

作者 徐妙云 王磊 《中国农业科技导报》 CAS CSCD 2011年第2期9-16,共8页

microRNAs(miRNAs)是约21nt的非编码RNA,主要在转录后水平调节基因的活性。miRNAs通过与靶基因的互补位点结合从而降解靶基因mRNA或抑制其翻译。miRNAs参与调控植物生长发育的多个方面,包括生长、开花、代谢、激素应答、生物与非生物胁... microRNAs(miRNAs)是约21nt的非编码RNA,主要在转录后水平调节基因的活性。miRNAs通过与靶基因的互补位点结合从而降解靶基因mRNA或抑制其翻译。miRNAs参与调控植物生长发育的多个方面,包括生长、开花、代谢、激素应答、生物与非生物胁迫。综述了miRNAs在植物花发育中的研究进展,以期为更好地了解miRNA在此过程中的作用机制,并应用于改良植物的农艺性状及培育优良品种奠定基础。 展开更多

关键词 MIRNA 植物 调控 发育 花器官发育

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非生物逆境信号转导的分子机制 被引量：5

17

作者 李昊文 赵军 《中国农业科技导报》 CAS CSCD 2008年第S1期1-6,共6页

低温、干旱、高盐作为主要的非生物环境逆境,严重影响植物的生长发育。研究植物对逆境的反应及逆境信号转导的分子机制,具有重要的理论意义和应用价值。研究表明在逆境相关基因的表达过程中,存在着ABA依赖性和ABA非依赖性调控体系。一... 低温、干旱、高盐作为主要的非生物环境逆境,严重影响植物的生长发育。研究植物对逆境的反应及逆境信号转导的分子机制,具有重要的理论意义和应用价值。研究表明在逆境相关基因的表达过程中,存在着ABA依赖性和ABA非依赖性调控体系。一些参与逆境信号的顺式作用元件和转录因子已被分离与鉴定。本文主要从顺式作用元件和转录因子相互作用的角度对非生物逆境信号网络作简要综述。 展开更多

关键词 非生物逆境 ABA 顺式作用元件 转录因子

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植物分枝发育的调控机制 被引量：18

18

作者 李亚栋 张芊 +1 位作者 孙学辉 路铁刚 《中国农业科技导报》 CAS CSCD 2009年第4期1-9,共9页

高等植物的分枝发育决定着植物地上株型系统,与植物生物量和作物产量密切相关。植物分枝发育受环境因素、遗传因素和植物激素多重调控。近年来通过对各种突变体的研究,人们对植物分枝发育调控机制的认识不断深入,克隆到了一系列重要基... 高等植物的分枝发育决定着植物地上株型系统,与植物生物量和作物产量密切相关。植物分枝发育受环境因素、遗传因素和植物激素多重调控。近年来通过对各种突变体的研究,人们对植物分枝发育调控机制的认识不断深入,克隆到了一系列重要基因。目前对于植物分枝发育调控机制的研究已成为作物分子遗传育种的重要依据。 展开更多

关键词 植物分枝发育 突变体 作物分子育种

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大豆转录因子GmWRKY57B的基因克隆及功能分析 被引量：4

19

作者 张兰 王晓萍 +3 位作者 毕影东 张春义 范云六 王磊 《科学通报》 EI CAS CSCD 北大核心 2008年第21期2604-2611,共8页

WRKY类转录调控因子在高等植物中构成一个基因超家族,它不但广泛参与了植物对非生物胁迫和生物胁迫的反应,还参与了生长发育及多种代谢途径的调控.本研究构建了一个大豆cDNA文库,采用酵母单杂交的方法,用来自AtNPR1启动子区的W-box对构... WRKY类转录调控因子在高等植物中构成一个基因超家族,它不但广泛参与了植物对非生物胁迫和生物胁迫的反应,还参与了生长发育及多种代谢途径的调控.本研究构建了一个大豆cDNA文库,采用酵母单杂交的方法,用来自AtNPR1启动子区的W-box对构建的大豆cDNA文库进行筛选,获得了GmWRKY57B基因,该基因全长1033bp,编码299个氨基酸,属于WRKY类转录因子的第Ⅲ组;酵母挽救实验及凝胶阻滞实验均表明,GmWRKY57B能够与W-box特异性结合;酵母体内的转录激活实验表明,GmWRKY57B在酵母细胞中具有转录激活功能;GmWRKY57B在大豆根、茎、叶中均有表达;GmWRKY57B基因在烟草中的过表达能够提高转基因烟草植株的抗旱性,表明GmWRKY57B基因在非生物逆境中有一定的功能. 展开更多

关键词 大豆 WRKY 转录因子 W—box 转基因 抗旱性

原文传递

陆地棉雄性不育恢复系18R的BAC文库构建 被引量：2

20

作者 周焘 郭红媛 +3 位作者 张锐 梁成真 石雅丽 郭三堆 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2009年第3期252-254,共3页

18R雄性不育恢复系农艺性状优良,恢复性状稳定,对不育系能够100%恢复,是研究棉花三系互作的重要材料。本研究以pCC1BAC(BamHI)为载体,构建了18R的细菌人工染色体(BAC)文库。建立的文库包含139,200个BAC克隆。分析结果表明,BAC文库DNA插... 18R雄性不育恢复系农艺性状优良,恢复性状稳定,对不育系能够100%恢复,是研究棉花三系互作的重要材料。本研究以pCC1BAC(BamHI)为载体,构建了18R的细菌人工染色体(BAC)文库。建立的文库包含139,200个BAC克隆。分析结果表明,BAC文库DNA插入片段为50～200 kb,91%的克隆插入片段为80～150 kb,平均102 kb,空载率<2%,覆盖6.3倍基因组。 展开更多

关键词 棉花 18R 雄性不育恢复系 细菌人工染色体文库

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