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一种用于贴壁培养细胞感染病毒检测的简易光镜-电镜联用技术 被引量：1
1
作者 冯红丽 彭宇宁 宋敬东 《电子显微学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期86-93,共8页
目的:建立一种简单易行的适用于病毒检测的光镜-电镜联用技术。方法:使用Lab-Tek腔室玻片培养细胞并接种不同类型病毒,通过光学显微镜选取目标病变细胞或通过荧光蛋白、免疫细胞化学标记、免疫荧光标记、量子点标记确定目标细胞并在腔... 目的:建立一种简单易行的适用于病毒检测的光镜-电镜联用技术。方法:使用Lab-Tek腔室玻片培养细胞并接种不同类型病毒,通过光学显微镜选取目标病变细胞或通过荧光蛋白、免疫细胞化学标记、免疫荧光标记、量子点标记确定目标细胞并在腔室玻片上标记其部位。随后将腔室玻片改造为包埋模具,最后钻取目标细胞及其包埋树脂,并对目标细胞进行靶向性超薄切片及透射电子显微镜观察。结果:光镜下选取的目标细胞在透射电子显微镜下可顺利定位并进行观察。结论:建立了一种基于腔室玻片包埋模具的可用于病毒检测的光镜-电镜联用技术。 展开更多
关键词 透射电子显微镜 光镜-电镜联用技术 病毒 检测
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医学病毒形态识别中的假象
2
作者 宋敬东 《电子显微学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期386-399,共14页
基于透射电子显微镜负染技术和超薄切片技术的病毒形态识别是病毒鉴定的重要手段,病毒的形态识别在病毒相关的科研工作及重大疫情、生物恐怖事件的病原体鉴定中均发挥重要的作用。但是,无论负染样本中还是超薄切片上有时存在类似病毒结... 基于透射电子显微镜负染技术和超薄切片技术的病毒形态识别是病毒鉴定的重要手段,病毒的形态识别在病毒相关的科研工作及重大疫情、生物恐怖事件的病原体鉴定中均发挥重要的作用。但是,无论负染样本中还是超薄切片上有时存在类似病毒结构的假象,往往导致误判。本文对负染样本、超薄切片样本中常见的医学病毒类似结构的假象结构进行列举,包括噬菌体、球形杂质颗粒、线粒体成分、支原体、网格蛋白及非网格蛋白包被囊泡、多泡体、高尔基体运输囊泡、糖原颗粒、微管、染色质周围颗粒、核孔、微绒毛、分泌泡和胶原原纤维等结构,期望为医学病毒形态判定提供一定的思路。 展开更多
关键词 透射电子显微镜技术 医学病毒 形态 假象 鉴别
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微小RNA在朊病毒病等神经退行性疾病中的研究进展 被引量：1
3
作者 魏静 高晨 《微生物与感染》 2016年第2期114-121,共8页
朊病毒病是一类具有传染性、不可逆且致命的神经退行性疾病,其致病机制为体内正常编码的细胞型朊蛋白(cellular prion protein,PrP^C)构象发生变化,形成了具有感染性的异常痒病型朊病毒(scrapie prion protein,PrP^(Sc)),但具体机制不清... 朊病毒病是一类具有传染性、不可逆且致命的神经退行性疾病,其致病机制为体内正常编码的细胞型朊蛋白(cellular prion protein,PrP^C)构象发生变化,形成了具有感染性的异常痒病型朊病毒(scrapie prion protein,PrP^(Sc)),但具体机制不清楚,目前为止尚无有效治疗方法。微小RNA(microRNA,miRNA)可在转录水平调控细胞蛋白表达,对神经系统发育及功能起重要作用。近年来,对一些特定miRNA在朊病毒病中相应调控机制、自发免疫、炎症信号转导及靶基因预测方面的研究可为治疗朊病毒病提供新的角度。本文就miRNA在朊病毒病发生中的相关研究进展进行综述,并详细探讨其中研究较为深入的miRNA。 展开更多
关键词 微小RNA 朊病毒病 调控机制 分子标记
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朊病毒病实验室生物安全风险控制特点分析
4
作者 周伟 田婵 +2 位作者 石琦 高晨 韩俊 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2014年第1期70-72,共3页
朊病毒病（prion disaese）或可传播性海绵状脑病（transmissible spongiform encephalopathies,TSEs）是一类侵袭人类及多种动物中枢神经系统的退行性脑病,潜伏期长,100％病死率.人类的朊病毒病有克-雅病（Creutzfeldt-Jacob disease,... 朊病毒病（prion disaese）或可传播性海绵状脑病（transmissible spongiform encephalopathies,TSEs）是一类侵袭人类及多种动物中枢神经系统的退行性脑病,潜伏期长,100％病死率.人类的朊病毒病有克-雅病（Creutzfeldt-Jacob disease,CJD）,包括散发型、家族遗传型、医源型、变异型CJD（variant CJD,vCJD）,另外还有库鲁病（Kuru）、GSS综合征（Gerstmann-Straussler-Scheinker syndrome）、致死性家族型失眠症（fatal familial insomnia,FFI）,其致病因子是朊病毒.朊病毒为微小的蛋白感染颗粒,不包含核酸,与常规病毒不同[1].目前认为朊病毒是由在正常哺乳动物脑组织中存在的PrP蛋白（PrPC）经过构象转变而形成,又称PrPSc.在朊病毒患者中枢神经组织中可以检出异常致病蛋白PrPSc的沉积[1],但不同的朊病毒病具有不同的特点,主要表现在临床特征、潜伏期、脑组织中prpsc的分布、脑组织损伤的特点、能否诱导淀粉样变化,以及朊病毒的分子特征等,具有明显的＆quot;毒株＆quot;差异.鉴于朊病毒不同于传统病毒,具有独特的实验室检测技术[2],因此存在独特的生物风险形式.本文从朊病毒病原学特点和常见实验检测技术方面分析朊病毒实验活动中的生物风险形式,并提出相应的预防措施. 展开更多
关键词 实验室生物安全 朊病毒病 风险控制 实验室检测技术 可传播性海绵状脑病 脑组织损伤 PrP蛋白 中枢神经系统
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G1/G3/G5型乙型脑炎病毒国家标准株实验室鉴定与评价 被引量：3
5
作者 刘升辉 姜孟楠 +11 位作者 张维嘉 付士红 宋敬东 许崇晓 聂凯 殷启凯 何英 李樊 许松涛 梁国栋 魏强 王环宇 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2023年第3期273-279,共7页
目的确定G1、G3和G5三个基因型别的乙型脑炎病毒(乙脑病毒)国家标准株实验室鉴定评价指标,评价乙脑病毒国家标准株。方法依据病原微生物菌(毒)种国家标准株评价技术标准,基于乙脑病毒研究工作中的应用,以形态学特征、生物学特征、分子... 目的确定G1、G3和G5三个基因型别的乙型脑炎病毒(乙脑病毒)国家标准株实验室鉴定评价指标,评价乙脑病毒国家标准株。方法依据病原微生物菌(毒)种国家标准株评价技术标准,基于乙脑病毒研究工作中的应用,以形态学特征、生物学特征、分子生物学特征等数据为基础,鉴定G1型(NX1889株)、G3型(P3株)和G5型(XZ0934株)三个基因型别乙脑病毒株的特征。结果乙脑病毒电镜下为球形颗粒,直径约为60 nm;感染BHK-21、Vero细胞后,细胞病变效应以细胞圆缩脱落为主,感染C6/36细胞后,表现为细胞融合和脱落;病毒滴度为10^(5)~10^(7)PFU/ml,噬斑大小存在型别差异;G1、G3和G5型乙脑病毒三周龄小鼠腹腔攻毒的半数致死量为50.51 PFU、6.98 PFU、8.13 PFU,五周龄小鼠颅内攻毒的半数致死量为3 PFU、0.3 PFU、1.35 PFU;G1、G3和G5型乙脑病毒基因组全长分别为:10967 bp、10976 bp和10983 bp。结论通过乙脑病毒电镜、细胞、动物和基因组等实验室指标的确定,鉴定与评价了三个基因型别乙脑病毒国家标准株,为其他病毒国家标准株的鉴定与评价提供了参考。 展开更多
关键词 乙型脑炎病毒 国家标准株 鉴定与评价
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我国分离的盖塔病毒衣壳蛋白基因和3′非翻译区分子特征研究 被引量：14
6
作者 翟友刚 王焕琴 +1 位作者 付士红 梁国栋 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期270-275,共6页
对我国海南省和河北省分离到的3株盖塔病毒（GETV）（M1、HB0215-3和HB0234）进行衣壳蛋白基因和3′UTR区序列测定,并分析比较该病毒的分子生物学遗传特征。首先应用逆转录聚合酶链反应扩增出病毒衣壳蛋白基因和3′UTR片段,纯化后连接... 对我国海南省和河北省分离到的3株盖塔病毒（GETV）（M1、HB0215-3和HB0234）进行衣壳蛋白基因和3′UTR区序列测定,并分析比较该病毒的分子生物学遗传特征。首先应用逆转录聚合酶链反应扩增出病毒衣壳蛋白基因和3′UTR片段,纯化后连接到载体中进行测序,然后用Clastal X和DNASTAR软件对测定的核苷酸和推测的氨基酸序列进行比较分析,用MEGA软件绘制系统发生树。3株病毒衣壳蛋白基因分别由801、804和804个核苷酸组成,分别编码267、268和268个氨基酸,3株病毒之间核苷酸和氨基酸序列同源性为97.6%-100%和97.8%-100%,与其他GETV分离株核苷酸同源性在95.4%-99.6%之间。3株病毒3′UTR分别由411、401和401个核苷酸组成,发现中国株存在10个（45-54位）核苷酸缺失和2个（64位、148位）特有的核苷酸位点。进化分析表明盖塔病毒之间的进化关系与分离年代相关,中国境内流行的盖塔病毒是相对独立的一个类群。 展开更多
关键词 盖塔病毒 衣壳蛋白基因 3′非翻译区 核苷酸序列 系统发生树
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云南腾冲县新分离乙型脑炎和盖塔病毒的分子生物学特征 被引量：11
7
作者 冯云 李胜国 +8 位作者 张海林 付士红 康显虎 寸待启 郭超 章域震 杨卫红 王环宇 梁国栋 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期353-357,363,共6页
目的分析云南省腾冲县新分离流行性乙型脑炎病毒(JEV)和盖塔病毒(GETV)的分子生物学特征。方法2007年7月在中缅边境地区腾冲县采集蚊虫标本,用BHK-21和C6/36细胞分离病毒,阳性分离物用RT-PCR方法进行鉴定,用相关生物学软件进行分子生物... 目的分析云南省腾冲县新分离流行性乙型脑炎病毒(JEV)和盖塔病毒(GETV)的分子生物学特征。方法2007年7月在中缅边境地区腾冲县采集蚊虫标本,用BHK-21和C6/36细胞分离病毒,阳性分离物用RT-PCR方法进行鉴定,用相关生物学软件进行分子生物学特征分析。结果从腾冲县采集的4属25种26 702只蚊虫中分离到20株JEV,1株GETV。系统进化分析表明,新分离20株JEV均属于基因Ⅰ型,与邻近省份和东南亚流行株亲缘关系较近;PreM和E基因核苷酸同源性和氨基酸位点分析表明,这20株JEV之间及其与国内外流行株间均存在一定差异,但它们的抗原和毒力位点未发生明显改变。本次分离的GETV的Capsid基因和E2基因与其他国内外分离株的同源性较高。结论首次证实云南省西部地区存在基因Ⅰ型JEV和GETV流行,这些流行株具有较为稳定的遗传特征和地域特征。 展开更多
关键词 流行性乙型脑炎病毒 盖塔病毒 分子生物学特征 系统进化分析 同源性分析
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盖塔病毒分子进化及其迁徙 被引量：12
8
作者 李元元 刘红 +8 位作者 李晓龙 付士红 高晓艳 雷雯雯 吕志 何英 王环宇 王桂琴 梁国栋 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期293-299,共7页
目的了解世界各地分离盖塔病毒分子进化特征及其时空迁徙。方法用Clustal X1.83、MegaAlign和Gene DOC软件对测定的核苷酸和推测的氨基酸序列进行比较分析,用MEGA 6.0软件绘制系统发生树,采用BEAST v 1.8.1软件包里的Bayesian Stochasti... 目的了解世界各地分离盖塔病毒分子进化特征及其时空迁徙。方法用Clustal X1.83、MegaAlign和Gene DOC软件对测定的核苷酸和推测的氨基酸序列进行比较分析,用MEGA 6.0软件绘制系统发生树,采用BEAST v 1.8.1软件包里的Bayesian Stochastic Search Variable Selection(BSSVS)程序进行盖塔病毒的空间动力学分析。结果盖塔病毒E2基因全长均为1 266nt,编码422aa,其核苷酸和氨基酸同源性分别为94.5%~100%和96.4%~100%。病毒分子进化分析发现,盖塔病毒不存在蚊虫,马匹和猪等宿主动物和媒介的种属和地域分布差异。生物信息学分析结果显示,盖塔病毒起源于马来西亚,此后依次传播至日本、中国、韩国以及蒙古国和俄罗斯等地。结论自1955年首次分离盖塔病毒至2014年间分离的盖塔病毒E2基因序列较为稳定,未发现病毒基因组之间存在种属及地域分布差异,并且该病毒已经从热带地区传播到欧亚大陆多个国家和地区,因此加强盖塔病毒及人畜动物感染的检测和监测至关重要。 展开更多
关键词 盖塔病毒 分子进化 时空迁徙
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在我国发现普马拉病毒新亚型 被引量：7
9
作者 唐丽华 张全福 +5 位作者 修梅红 扈光伟 沈博 杨显达 梁米芳 李德新 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期320-325,共6页
对我国东北地区捕获的157份棕背鼠平的肺组织进行普马拉病毒检测。其中免疫荧光检测出阳性标本1份,PCR检测出核苷酸阳性标本7份。对PCR产物进行测序后发现,其核苷酸的序列与报道的普马拉病毒核苷酸序列存在着差异。系统进化分析表明,我... 对我国东北地区捕获的157份棕背鼠平的肺组织进行普马拉病毒检测。其中免疫荧光检测出阳性标本1份,PCR检测出核苷酸阳性标本7份。对PCR产物进行测序后发现,其核苷酸的序列与报道的普马拉病毒核苷酸序列存在着差异。系统进化分析表明,我国发现的这株普马拉病毒,在进化树上形成了一个新的分支,为一新亚型。并且与在韩国和日本发现的普马拉病毒亲缘关系最为接近。 展开更多
关键词 普马拉病毒 S片段 M片段 核苷酸序列分析
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人源中和性抗高致病性禽流感病毒H5N1基因工程全抗体的研制 被引量：3
10
作者 孙丽娜 刘琴芝 +9 位作者 王敏 李川 李梓 胡晓芬 朱莉莉 李群 王世文 舒跃龙 梁米芳 李德新 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期165-171,共7页
运用噬菌体表面呈现技术,从禽流感病人恢复期血中获得淋巴细胞,通过基因工程手段,构建了人源抗H5N1禽流感病毒基因工程抗体文库。用纯化的人源H5N1禽流感病毒颗粒(A/Anhui/1/2005)及重组血凝素蛋白HA(A/VietNam/1203/2004)对Fab噬菌体... 运用噬菌体表面呈现技术,从禽流感病人恢复期血中获得淋巴细胞,通过基因工程手段,构建了人源抗H5N1禽流感病毒基因工程抗体文库。用纯化的人源H5N1禽流感病毒颗粒(A/Anhui/1/2005)及重组血凝素蛋白HA(A/VietNam/1203/2004)对Fab噬菌体抗体库进行富集筛选,成功地获得了抗禽流感病毒H5N1血凝素蛋白HA的人源单抗Fab段基因,并在大肠杆菌中获得有效表达。通过序列测定确定抗体轻重链型别,然后将阳性克隆的轻链和重链Fd段基因分别克隆入全抗体表达载体pAC-L-Fc后转染昆虫Sf9细胞,利用杆状病毒/昆虫细胞系统实现全抗体的分泌型表达。用ELISA、IFA和流式细胞术对所获人源单抗的功能特性进行鉴定。结果表明,我们获得了2株特异性针对H5N1禽流感病毒血凝素蛋白HA而与甲1型和甲3型人流感病毒无交叉反应的人源单抗(AVFluIgG01、AVFluIgG03)。微量中和试验结果表明,除A/Guangdong/1/2006外,AVFlu-IgG01能够广泛地中和HA基因进化上属于Clade2的中国南方、北方及中部地区的H5N1禽流感病毒分离株,同时还对属于CladeⅠ的越南H5N1分离株A/VietNam/1203/2004具有中和活性;AVFluIgG03虽然不能中和A/VietNam/1203/2004,但是对属于Clade2的所有中国H5N1分离株均具有中和作用。人源中和性抗禽流感病毒H5N1基因工程全抗体的获得不仅为高致病性禽流感病毒H5N1的预防和治疗带来了希望,同时也为其疫苗研制提供了新的思路。 展开更多
关键词 禽流感病毒 噬菌体表面呈现 基因工程抗体 FAB抗体
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用表达T7RNA聚合酶细胞系拯救麻疹病毒微复制子 被引量：3
11
作者 修梅红 王芹 +6 位作者 唐丽华 曹守春 李伟红 韦燕 陆鹏 梁米芳 李德新 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期326-330,共5页
构建稳定表达T7RNA聚合酶的细胞系,用于提高拯救麻疹病毒微复制子效率。PCR扩增T7RNA聚合酶基因,克隆到真核表达载体,转染Vero细胞,用G418筛选到稳定表达的细胞株Vero/pcDNA3-T7。用Westernblotting证明了T7RNA聚合酶在细胞中的表达。... 构建稳定表达T7RNA聚合酶的细胞系,用于提高拯救麻疹病毒微复制子效率。PCR扩增T7RNA聚合酶基因,克隆到真核表达载体,转染Vero细胞,用G418筛选到稳定表达的细胞株Vero/pcDNA3-T7。用Westernblotting证明了T7RNA聚合酶在细胞中的表达。将T7启动子控制绿色荧光蛋白表达的质粒转染该细胞后,绿色荧光蛋白在细胞株中得到表达。反向插入报告基因的微复制子转染感染麻疹病毒的Vero/pcDNA3-T7细胞后,细胞中能够检测到报告基因的表达。用细胞系取代痘苗病毒系统,可以提高拯救效率。 展开更多
关键词 T7RNA聚合酶 细胞系 反向遗传 麻疹病毒
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云南省新分离蚊浓核病毒的分子特征研究 被引量：4
12
作者 冯云 付士红 +8 位作者 张海林 李铭华 周涛 王丕玉 邓淑珍 李金梅 王静林 王环宇 梁国栋 《寄生虫与医学昆虫学报》 CAS 2011年第1期15-20,共6页
对云南省新分离的14株浓核病毒进行基因序列测定和分析,以了解浓核病毒基因组结构及特性.用浓核病毒基因组扩增引物（DNV3F,DNV3R）,RT-PCR扩增片段,PCR产物直接测序,拼接后获得基因序列.通过Clustal X（1.8）、DNAStar、GeneDoc （3.2... 对云南省新分离的14株浓核病毒进行基因序列测定和分析,以了解浓核病毒基因组结构及特性.用浓核病毒基因组扩增引物（DNV3F,DNV3R）,RT-PCR扩增片段,PCR产物直接测序,拼接后获得基因序列.通过Clustal X（1.8）、DNAStar、GeneDoc （3.2） 等生物学软件进行核苷酸序列及氨基酸序列分析和病毒的系统进化分析.结果表明,2007年7～8月,在云南省西部中缅边境地区采获蚊虫4属29种54 673只,分离到14株浓核病毒,其中来自三带喙库蚊Culex tritaeniorhynchus 10株,中华按蚊Anopheles sinensis、伪杂鳞库蚊Culex pseudovishnui、环带库蚊Culex annulus和致倦库蚊Culex pipiens quinquefasciatus各1株.新分离株与我国其他省市的分离株核苷酸同源性很高,在99.9%～100%之间;氨基酸同源性在99.7%～100%之间.基于NS1和NS2基因进行进化分析显示,云南新分离的14株浓核病毒与以往中国分离株进化关系最接近. 展开更多
关键词 浓核病毒 NS1基因组 NS2基因组 同源性分析 系统进化分析
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腺病毒载体介导密码子优化型HPV 16 L1基因在哺乳动物细胞中的高效表达及病毒样颗粒的装配 被引量：3
13
作者 周玉柏 周玲 +1 位作者 吴小兵 曾毅 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期101-106,共6页
为研究重组腺病毒载体作为HPV16预防性疫苗的可行性,构建了含密码子优化型HPV 16 L1基因的重组腺病毒,并对优化基因在哺乳动物细胞中的表达进行研究。首先按照哺乳动物密码子偏好对野生型HPV16 L1基因进行改造并合成优化基因,命名为mod.... 为研究重组腺病毒载体作为HPV16预防性疫苗的可行性,构建了含密码子优化型HPV 16 L1基因的重组腺病毒,并对优化基因在哺乳动物细胞中的表达进行研究。首先按照哺乳动物密码子偏好对野生型HPV16 L1基因进行改造并合成优化基因,命名为mod.HPV16L1。将mod.HPV16L1基因克隆到穿梭质粒PDC316上,与骨架质粒共转染293细胞,在细胞内包装重组腺病毒rAd-mod.HPV16L1。用免疫印迹法检测病毒感染的293T细胞中HPV16L1蛋白的表达。通过Optiprep密度梯度超速离心法纯化HPV16 L1病毒样颗粒(VLPs)。用磷钨酸负染,在电子显微镜下观察HPV16 L1蛋白自我装配形成的VLPs。结果显示,重组腺病毒载体可介导mod.HPV16 L1基因在哺乳动物细胞内的高效表达,L1蛋白可自我装配形成VLPs。 展开更多
关键词 腺病毒 人乳头瘤病毒16型 密码子优化 病毒样颗粒
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H7N9禽流感病毒等温扩增快速检测方法的建立 被引量：5
14
作者 董志珍 郑文杰 +7 位作者 王乃福 赵祥平 吴冬雪 王玉玲 马晶 贾润清 王建华 张晓光 《中国动物检疫》 CAS 2013年第7期72-77,共6页
目的建立H7N9禽流感病毒环介导等温扩增(LAMP)快速检测方法。方法从GISAID数据库中获得H7N9禽流感病毒血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)基因序列,应用DNAStar软件MegAlign程序分析其序列,利用PrimerExplorer V4软件在序列保守区域设计LAMP引... 目的建立H7N9禽流感病毒环介导等温扩增(LAMP)快速检测方法。方法从GISAID数据库中获得H7N9禽流感病毒血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)基因序列,应用DNAStar软件MegAlign程序分析其序列,利用PrimerExplorer V4软件在序列保守区域设计LAMP引物,即外引物、内引物,同时以所克隆的阳性质粒为模板,建立H7N9禽流感病毒等温扩增快速检测方法。结果LAMP检测方法对H7N9禽流感病毒的灵敏度达到10个拷贝,所用引物对于H1、H3、H5亚型禽流感病毒和新城疫病毒无非特异性扩增,表现出良好特异性。结论建立的H7N9禽流感病毒等温扩增快速检测方法灵敏度高、特异性强,为快速检测禽流感病毒提供了新方法。 展开更多
关键词 H7N9 禽流感病毒 等温扩增
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从人源大容量天然抗体库中筛选到抗禽流感病毒H5N1单链抗体 被引量：2
15
作者 孙丽娜 于礼 +3 位作者 张黎 李川 李德新 梁米芳 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期86-90,共5页
目的从人源大容量天然抗体库中筛选到抗禽流感病毒H5N1单链抗体。方法运用噬菌体表面呈现技术,用纯化的H5N1禽流感血凝素蛋白HA(A/Anhui/1/2005)对人源大容量天然抗体库进行富集筛选,对获得的阳性克隆进行序列分析,并将其克隆入携带人... 目的从人源大容量天然抗体库中筛选到抗禽流感病毒H5N1单链抗体。方法运用噬菌体表面呈现技术,用纯化的H5N1禽流感血凝素蛋白HA(A/Anhui/1/2005)对人源大容量天然抗体库进行富集筛选,对获得的阳性克隆进行序列分析,并将其克隆入携带人源Fc段的表达载体,实现scFv-Fc融合抗体的分泌型表达。用ELISA、IFA对所获人源单抗的功能特性进行鉴定。结果经过3轮富集筛选,共获得了82株特异性结合H5N1禽流感病毒HA的人源scFv单链抗体,分别属于5个不同的抗体序列,ELISA、IFA表明从抗体库筛选获得的5株人源单抗与禽流感病毒H5N1及其HA具有较好的特异性,而与甲1型和甲3型人流感病毒无交叉反应。结论从人源大容量天然抗体库中利用高通量的筛选策略在短时间内获得抗禽流感病毒H5N1人源单抗,对于禽流感的紧急预防和治疗具有重要意义。 展开更多
关键词 禽流感病毒 噬菌体表面呈现 人源大容量天然抗体库 单链抗体
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治疗性人源抗狂犬病毒抗体研究进展 被引量：4
16
作者 陈哲 孙丽娜 梁米芳 《中国医药生物技术》 CSCD 2010年第3期208-210,共3页
狂犬病是由狂犬病毒（rabies virus,RV）引起的人兽共患疾病,发病后死亡率几乎达百分之百。狂犬病毒属弹状病毒科（Rhabdoviridae）狂犬病毒属（Lyssavirus）,基因组编码五种结构蛋白,其中由G基因编码的糖蛋白,是病毒与宿主细胞结合的配... 狂犬病是由狂犬病毒（rabies virus,RV）引起的人兽共患疾病,发病后死亡率几乎达百分之百。狂犬病毒属弹状病毒科（Rhabdoviridae）狂犬病毒属（Lyssavirus）,基因组编码五种结构蛋白,其中由G基因编码的糖蛋白,是病毒与宿主细胞结合的配体,能诱导机体产生中和抗体,与病毒的毒力、致病性密切相关。 展开更多
关键词 抗狂犬病毒抗体 治疗性 人源 人兽共患疾病 基因组编码 弹状病毒 结构蛋白 基因编码
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柯萨奇病毒B3型感染引起HeLa细胞内源性小干扰RNA的变化 被引量：2
17
作者 姚海兰 宋娟 +4 位作者 王欣玲 王瑞芳 宋芹芹 史冰田 韩俊 《微生物与感染》 2020年第2期98-103,共6页
探究柯萨奇病毒B3型(Coxsackie virus type B3,CVB3)感染的细胞是否诱导内源性小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)的产生。以CVB3接种HeLa细胞,在细胞培养箱(5%CO 2、37℃)孵育1 h。随后加入含2%血清的细胞维持液,继续培养3 h和6 ... 探究柯萨奇病毒B3型(Coxsackie virus type B3,CVB3)感染的细胞是否诱导内源性小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)的产生。以CVB3接种HeLa细胞,在细胞培养箱(5%CO 2、37℃)孵育1 h。随后加入含2%血清的细胞维持液,继续培养3 h和6 h后收集细胞。用高通量测序(二代测序)试剂盒提取细胞RNA,并反转录合成cDNA,构建文库,上机测序。过滤数据,去除插入片段过长的序列、低质量序列、poly A序列和小片段序列,与已知的小RNA数据库比对鉴定siRNA。通过茎-环反转录-聚合酶链反应,证实内源性siRNA在感染CVB3后的表达。结果显示,感染CVB33 h和6 h后,HeLa细胞产生了多种内源性siRNA。其中内源性siRNA(novel_sir3502和novel_sir2806)在感染后3 h和6 h均可持续表达。经比对,novel_sir3502和novel_sir2806均可以识别45S和28S核糖体前体RNA。结果提示,CVB3感染可能干扰核糖体成熟。 展开更多
关键词 柯萨奇病毒B3型 HELA细胞 内源性小干扰RNA
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虫媒病毒相关出血热研究进展 被引量：1
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作者 杨杜鹃 张海林 梁国栋 《寄生虫与医学昆虫学报》 CAS 2011年第1期58-64,共7页
病毒性出血热是由不同病毒引起的以发热、出血、休克、高病死率为特征的一组自然疫源性疾病,其中与虫媒病毒有关的出血热主要有立夫特山谷热、克里米亚刚果出血热、肾综合征出血热、黄热病、登革热、科萨努尔森林病、鄂木斯克出血热、... 病毒性出血热是由不同病毒引起的以发热、出血、休克、高病死率为特征的一组自然疫源性疾病,其中与虫媒病毒有关的出血热主要有立夫特山谷热、克里米亚刚果出血热、肾综合征出血热、黄热病、登革热、科萨努尔森林病、鄂木斯克出血热、基孔肯雅热等,本文从流行特征、病原学、诊断、治疗及预防等方面对上述疾病作一综述. 展开更多
关键词 虫媒病毒 病毒性出血热 流行特征 病原学 临床学 预防
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EBV-LMP2重组腺病毒体内细胞免疫效果及分布研究 被引量：1
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作者 王湛 孙云霞 +5 位作者 周玲 吴伟娜 李洪贞 杜海军 左从林 曾毅 《中国医药指南》 2010年第16期66-69,共4页
背景与目的 EB病毒(EBV)潜伏膜抗原2是预防和治疗EBV相关肿瘤的良好靶抗原,本研究以食蟹猴为研究系统,观察携带EBV潜伏膜抗原2基因(LMP2)的重组5型腺病毒(Ad-LMP2)在动物体内引起的细胞免疫应答及病毒载体分布。方法分别使用低、中、高... 背景与目的 EB病毒(EBV)潜伏膜抗原2是预防和治疗EBV相关肿瘤的良好靶抗原,本研究以食蟹猴为研究系统,观察携带EBV潜伏膜抗原2基因(LMP2)的重组5型腺病毒(Ad-LMP2)在动物体内引起的细胞免疫应答及病毒载体分布。方法分别使用低、中、高不同剂量的Ad-LMP2,于0周、4周以肌内多点注射的方式免疫食蟹猴,应用流式细胞仪检测动物外周血CD3、CD4、CD8阳性T细胞的比值;γ干扰素酶联免疫斑点法(IFN-γ-ELISPOT法)检测Ad-LMP2诱导的LMP2特异性CTL;RT-PCR方法检测首次和末次注射后,不同时间点外周血中重组病毒的载量,以及8周后,脑、心、肺、肝、脾、肾、睾丸、卵巢和注射局部肌肉的基因分布情况。结果与同期对照组或免疫前比较,Ad-LMP2免疫的动物外周血T淋巴细胞亚群未见差异(P>0.05);低、中、高不同剂量都能够诱导产生LMP2特异性CTL,其中,中、高剂量组反应水平较高;Ad-LMP2肌内注射后15min～1h在血中浓度最高,2～8h后分布到其他脏器。1d后,病毒主要分布在注射局部的肌肉组织中,而在脑、心、肺、肝、脾、肾、卵巢或睾丸等组织内,未检测到重组病毒。结论 Ad-LMP2在食蟹猴体内能够诱导产生LMP2特异性CTL,对T淋巴细胞亚群不产生影响,重组病毒只分布在注射局部肌肉,没有潜在危险。 展开更多
关键词 EB病毒潜伏膜蛋白2 重组腺病毒 细胞免疫
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内质网应激与prion疾病 被引量：1
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作者 徐琨 楚雍烈 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期196-199,共4页
1引言内质网（endoplasmic reticulum,ER）是真核细胞中钙离子贮存库,也是调节蛋白质合成及合成后加工、折叠和聚集的场所,是一种重要的细胞器。近年来,在生物医学研究领域中出现了一个新概念-＂内质网应激＂（ER stress）,即：在饥饿。
关键词 内质网 内质网应激 朊病毒病 细胞凋亡
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