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单种及联合靶向EV71VP1～VP4基因的shRNA干扰病毒复制的研究 被引量：1
1
作者 阎岩 李世军 +3 位作者 郭军 周敬祝 唐光鹏 王定明 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期110-115,共6页
目的检测单种及2种联合靶向Ev71病毒衣壳蛋白VP1、VP2、VP3、VP4基因（VP1～VP4）的shRNA干扰病毒复制的效果。方法靶向EV71病毒的VP1～VP4基因序列设计及合成shRNA，并分别将其克隆到慢病毒质粒表达载体pLOV．CMV.EGFP中。重组表达质粒... 目的检测单种及2种联合靶向Ev71病毒衣壳蛋白VP1、VP2、VP3、VP4基因（VP1～VP4）的shRNA干扰病毒复制的效果。方法靶向EV71病毒的VP1～VP4基因序列设计及合成shRNA，并分别将其克隆到慢病毒质粒表达载体pLOV．CMV.EGFP中。重组表达质粒同psPAX2和pMD2．G共转染293T细胞，3d后收集上清中的重组病毒颗粒。用荧光定量RT—PCR法（real—timeqRT—PCR）和Westernblot检测单种及2种联合shRNA干扰EV71mRNA的表达水平及病毒蛋白的表达水平。结果靶向EV71VP1-VP4基因的shRNA对本研究的毒株（含死亡病例、重症病例、普通病例，FY0805）复制干扰差异无统计学意义（P〉0．05），对EV71病毒的抑制率分别约为：sh-VP1—1（51．6％），sh—VP1—2（85．1％），sh—VP1-3（76．4％），sh-VP2—1（57．5％），sh-VP2-2（81．4％），sh—VP2-3（79．5％），sh—VP3（68．9％），sh—VP4（56．7％），且有剂量依赖性。干扰病毒效率最高的为sh—VP1-2联合sh—VP2—2，抑制率可达96．6％，联合组均比单种加倍剂量的抑制率高。结论本研究设计的单独及联合靶向EV71病毒衣壳蛋白每个基因区均筛选到抑制率均大于50％的shRNA，且联合shRNA可以增强其干扰复制的能力。 展开更多
关键词 慢病毒 基因靶向 手足口病 EV71
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