目的:探讨活性氧自由基(ROS)在肾小管上皮细胞necroptosis中的作用。方法:构建肾小管上皮细胞HK-2细胞necroptosis模型,检测其ROS升高程度。并使用NADPH酶抑制剂Apocynin抑制HK-2细胞necroptosis模型中ROS的生成,通过流式细胞计数及检测...目的:探讨活性氧自由基(ROS)在肾小管上皮细胞necroptosis中的作用。方法:构建肾小管上皮细胞HK-2细胞necroptosis模型,检测其ROS升高程度。并使用NADPH酶抑制剂Apocynin抑制HK-2细胞necroptosis模型中ROS的生成,通过流式细胞计数及检测necroptosis的关键蛋白观察HK-2细胞necroptosis的变化。结果:使用肿瘤坏死因子α、苄氧羰酰-缬氨酰-丙氨酰-天冬氨酰-氟甲基酮及抗霉素A成功建立了HK-2细胞necroptosis模型,并观察到HK-2细胞发生necroptosis时ROS显著升高(43.29±2.49 vs 25.90±1.27,P<0.001),而使用necrostatin-1抑制necroptosis后ROS生成受到抑制(35.58±1.08 vs 43.29±2.49,P=0.002)。当对necroptosis模型使用Apocynin干预时,HK-2细胞ROS明显下降(30.71±2.82 vs 43.29±2.49,P<0.001),并且流式细胞计数结果显示坏死细胞比例减少(2.00%±0.30%vs 6.99%±2.79%,P<0.001),同时受体相关蛋白3和混合系列蛋白激酶样结构域的磷酸化水平降低。结论:ROS参与了HK-2细胞的necroptosis,并且通过抑制ROS的生成可减少necroptosis发生,提高损伤状态下HK-2细胞存活率,减轻急性肾小管坏死。展开更多
内质网是维持细胞蛋白稳态的重要细胞器,通过未折叠蛋白反应(unfolded protein response,UPR)来调节细胞蛋白合成、折叠和降解。UPR维持内质网功能和稳态,多种病理生理因素如缺血缺氧、毒物、高血糖、脂质代谢紊乱都能诱发肾脏细胞内质...内质网是维持细胞蛋白稳态的重要细胞器,通过未折叠蛋白反应(unfolded protein response,UPR)来调节细胞蛋白合成、折叠和降解。UPR维持内质网功能和稳态,多种病理生理因素如缺血缺氧、毒物、高血糖、脂质代谢紊乱都能诱发肾脏细胞内质网应激反应。发生内质网应激时,UPR相关3种不同细胞信号途径激活,一方面增加分子伴侣合成,协助蛋白分泌,另一方面减少靶蛋白合成,减轻内质网负荷;同时诱导细胞凋亡或自噬。多种肾脏疾病与UPR或内质网应激反应不足或过度有关,利用适当药物调节内质网应激可能有利于治疗或缓解某些肾脏疾病。展开更多
【目的】探讨α7烟碱乙酰胆碱受体（α7 n Ach R）激动剂对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的心肌成纤维细胞增殖和胶原合成的影响及其分子机制。【方法】培养出生2~3d大鼠心肌成纤维细胞（CF）,取传代2~4代细胞,分为1空白对照组（control）;...【目的】探讨α7烟碱乙酰胆碱受体（α7 n Ach R）激动剂对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的心肌成纤维细胞增殖和胶原合成的影响及其分子机制。【方法】培养出生2~3d大鼠心肌成纤维细胞（CF）,取传代2~4代细胞,分为1空白对照组（control）;2模型组（AngⅡ10-7 mol/L）;3ACh预处理组：ACh＋AngⅡ组（ACh 10-4 mol/L＋AngⅡ10-7 mol/L）;4α7n ACh R激动剂组：α7n ACh R激动剂＋AngⅡ组（PNU-282987 5×10-6 mol/L＋AngⅡ10-7 mol/L）;5α7n ACh R拮抗剂组：ACh＋甲基牛扁碱柠檬酸盐（MLA）＋AngⅡ组（ACh 10-4 mol/L＋AngⅡ10-7 mol/L＋MLA 1×10-6 mol/L）。干预24 h后,应用CCK-8试剂盒检测CF的增殖能力,western blot检测胶原蛋白Ι、α-SMA、α7烟碱乙酰胆碱受体（α7n ACh R）、核中p65蛋白表达;Real-time PCR检测α7n ACh R的m RNA表达。【结果】AngⅡ干预24h,CF增殖显著提高,胶原蛋白Ι、α-SMA、核中p65蛋白的表达明显升高,α7n ACh R的m RNA和蛋白水平均表达降低;Ach、α7n ACh R激动剂预处理后抑制CF增殖,胶原蛋白Ι、α-SMA和核中p65蛋白的表达降低,α7n ACh R的m RNA和蛋白水平均表达升高;Ach＋MLA预处理,CF增殖再次提高,胶原蛋白Ι、纤维化因子α-SMA、核中p65蛋白的表达再次明显升高,α7n ACh R的m RNA和蛋白水平均表达降低。【结论】α7n ACh R激动剂抑制AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞的增殖和胶原合成,其机制可能与NF-κB信号通路有关。展开更多
文摘目的:探讨活性氧自由基(ROS)在肾小管上皮细胞necroptosis中的作用。方法:构建肾小管上皮细胞HK-2细胞necroptosis模型,检测其ROS升高程度。并使用NADPH酶抑制剂Apocynin抑制HK-2细胞necroptosis模型中ROS的生成,通过流式细胞计数及检测necroptosis的关键蛋白观察HK-2细胞necroptosis的变化。结果:使用肿瘤坏死因子α、苄氧羰酰-缬氨酰-丙氨酰-天冬氨酰-氟甲基酮及抗霉素A成功建立了HK-2细胞necroptosis模型,并观察到HK-2细胞发生necroptosis时ROS显著升高(43.29±2.49 vs 25.90±1.27,P<0.001),而使用necrostatin-1抑制necroptosis后ROS生成受到抑制(35.58±1.08 vs 43.29±2.49,P=0.002)。当对necroptosis模型使用Apocynin干预时,HK-2细胞ROS明显下降(30.71±2.82 vs 43.29±2.49,P<0.001),并且流式细胞计数结果显示坏死细胞比例减少(2.00%±0.30%vs 6.99%±2.79%,P<0.001),同时受体相关蛋白3和混合系列蛋白激酶样结构域的磷酸化水平降低。结论:ROS参与了HK-2细胞的necroptosis,并且通过抑制ROS的生成可减少necroptosis发生,提高损伤状态下HK-2细胞存活率,减轻急性肾小管坏死。
文摘内质网是维持细胞蛋白稳态的重要细胞器,通过未折叠蛋白反应(unfolded protein response,UPR)来调节细胞蛋白合成、折叠和降解。UPR维持内质网功能和稳态,多种病理生理因素如缺血缺氧、毒物、高血糖、脂质代谢紊乱都能诱发肾脏细胞内质网应激反应。发生内质网应激时,UPR相关3种不同细胞信号途径激活,一方面增加分子伴侣合成,协助蛋白分泌,另一方面减少靶蛋白合成,减轻内质网负荷;同时诱导细胞凋亡或自噬。多种肾脏疾病与UPR或内质网应激反应不足或过度有关,利用适当药物调节内质网应激可能有利于治疗或缓解某些肾脏疾病。
文摘【目的】探讨α7烟碱乙酰胆碱受体（α7 n Ach R）激动剂对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的心肌成纤维细胞增殖和胶原合成的影响及其分子机制。【方法】培养出生2~3d大鼠心肌成纤维细胞（CF）,取传代2~4代细胞,分为1空白对照组（control）;2模型组（AngⅡ10-7 mol/L）;3ACh预处理组：ACh＋AngⅡ组（ACh 10-4 mol/L＋AngⅡ10-7 mol/L）;4α7n ACh R激动剂组：α7n ACh R激动剂＋AngⅡ组（PNU-282987 5×10-6 mol/L＋AngⅡ10-7 mol/L）;5α7n ACh R拮抗剂组：ACh＋甲基牛扁碱柠檬酸盐（MLA）＋AngⅡ组（ACh 10-4 mol/L＋AngⅡ10-7 mol/L＋MLA 1×10-6 mol/L）。干预24 h后,应用CCK-8试剂盒检测CF的增殖能力,western blot检测胶原蛋白Ι、α-SMA、α7烟碱乙酰胆碱受体（α7n ACh R）、核中p65蛋白表达;Real-time PCR检测α7n ACh R的m RNA表达。【结果】AngⅡ干预24h,CF增殖显著提高,胶原蛋白Ι、α-SMA、核中p65蛋白的表达明显升高,α7n ACh R的m RNA和蛋白水平均表达降低;Ach、α7n ACh R激动剂预处理后抑制CF增殖,胶原蛋白Ι、α-SMA和核中p65蛋白的表达降低,α7n ACh R的m RNA和蛋白水平均表达升高;Ach＋MLA预处理,CF增殖再次提高,胶原蛋白Ι、纤维化因子α-SMA、核中p65蛋白的表达再次明显升高,α7n ACh R的m RNA和蛋白水平均表达降低。【结论】α7n ACh R激动剂抑制AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞的增殖和胶原合成,其机制可能与NF-κB信号通路有关。
基金grants from the National Natural Science Foundation of China (No.31330037,91439205,and 81630013)National Institutes of Health of the United States (No.DK104072,HL135851, HL139689)VA Merit Review from the Department of Veterans Affairs (No.SIO1BX002817)。
