目的:探讨尿源干细胞来源的外泌体(USC-Exo)对糖尿病性勃起功能障碍(DED)大鼠海绵窦内皮功能和勃起功能的改善作用,并探讨其作用机制。方法:通过超速离心法从USC的培养基中提取USC-Exo,并进行鉴定。将SD大鼠海绵窦内皮细胞(CCEC)分为4组...目的:探讨尿源干细胞来源的外泌体(USC-Exo)对糖尿病性勃起功能障碍(DED)大鼠海绵窦内皮功能和勃起功能的改善作用,并探讨其作用机制。方法:通过超速离心法从USC的培养基中提取USC-Exo,并进行鉴定。将SD大鼠海绵窦内皮细胞(CCEC)分为4组:(1)正常组;(2)高糖组;(3)Exo组:高糖培养基中加入USC-Exo(10μg/ml);(4)3-MA组:高糖培养基中加入USC-Exo(10μg/ml)和3-MA(2 mmol/L)。将mRFP-GFP-LC3腺病毒转染CCEC后在荧光显微镜下检测细胞内自噬流的改变;通过CCK8实验检测细胞增殖能力的改变,通过Matrigel实验检测CCEC的成管能力。通过腹腔注射链脲佐菌素及阿扑吗啡实验筛选出DED大鼠,将其随机平均分为2组(n=5只/组):DED组和Exo组,另取5只同龄正常雄性大鼠作为正常组,其中正常组和DED组予阴茎海绵窦注射100μl PBS,Exo组予阴茎海绵体注射USC-Exo 100μl(浓度为1μg/μl)。治疗4周后测定大鼠最大海绵体内压(ICPmax)和平均动脉压(MAP),通过免疫荧光和Western印迹检测海绵窦内皮细胞标志物CD31,通过Western印迹检测自噬标志物Beclin1和LC3-I/II的蛋白表达,通过透射电镜检测海绵窦内皮细胞内自噬体的数量。结果:自噬流检测结果表明USC-Exo可以显著增加高糖培养CCEC内自噬体的数量(39.5±6.2 vs 12.5±5.4,P<0.05)。Western印迹结果显示Exo组CCEC的Beclin1蛋白表达水平显著高于高糖组(P<0.05)。CCK8结果显示Exo组CCEC的增殖能力较高糖组显著升高(P<0.05),而自噬抑制剂3-MA可以逆转USC-Exo对CCEC增殖能力的提升作用。Matrigel成管实验表明Exo组CCEC的成管能力较高糖组的显著提高(15.3±3.2 vs 6.3±2.1,P<0.05),同样加入3-MA后同样可以逆转这一作用。海绵体测压结果显示Exo组大鼠的ICPmax和ICPmax/MAP水平均较DED组显著升高[(86.6±12.6)mmHg vs(37.9±10.9)mmHg,89.3±14.1 vs 41.7±11.5,P<0.05]。Western印迹结果显示Exo组大鼠的海绵体内CD31、Beclin1和LC3-I/II的蛋白含量显著高于DED组大鼠(P<0.05)。透射电镜结果表明,Exo组大鼠阴茎海绵窦内皮细胞的自噬体数量显著多于DED组(3.7±0.6 vs 1.0±1.0,P<0.05)。结论:USC-Exo可以通过提高大鼠海绵窦内皮细胞的自噬水平,显著改善DED大鼠的海绵窦内皮功能和勃起功能。展开更多
文摘目的:探讨尿源干细胞来源的外泌体(USC-Exo)对糖尿病性勃起功能障碍(DED)大鼠海绵窦内皮功能和勃起功能的改善作用,并探讨其作用机制。方法:通过超速离心法从USC的培养基中提取USC-Exo,并进行鉴定。将SD大鼠海绵窦内皮细胞(CCEC)分为4组:(1)正常组;(2)高糖组;(3)Exo组:高糖培养基中加入USC-Exo(10μg/ml);(4)3-MA组:高糖培养基中加入USC-Exo(10μg/ml)和3-MA(2 mmol/L)。将mRFP-GFP-LC3腺病毒转染CCEC后在荧光显微镜下检测细胞内自噬流的改变;通过CCK8实验检测细胞增殖能力的改变,通过Matrigel实验检测CCEC的成管能力。通过腹腔注射链脲佐菌素及阿扑吗啡实验筛选出DED大鼠,将其随机平均分为2组(n=5只/组):DED组和Exo组,另取5只同龄正常雄性大鼠作为正常组,其中正常组和DED组予阴茎海绵窦注射100μl PBS,Exo组予阴茎海绵体注射USC-Exo 100μl(浓度为1μg/μl)。治疗4周后测定大鼠最大海绵体内压(ICPmax)和平均动脉压(MAP),通过免疫荧光和Western印迹检测海绵窦内皮细胞标志物CD31,通过Western印迹检测自噬标志物Beclin1和LC3-I/II的蛋白表达,通过透射电镜检测海绵窦内皮细胞内自噬体的数量。结果:自噬流检测结果表明USC-Exo可以显著增加高糖培养CCEC内自噬体的数量(39.5±6.2 vs 12.5±5.4,P<0.05)。Western印迹结果显示Exo组CCEC的Beclin1蛋白表达水平显著高于高糖组(P<0.05)。CCK8结果显示Exo组CCEC的增殖能力较高糖组显著升高(P<0.05),而自噬抑制剂3-MA可以逆转USC-Exo对CCEC增殖能力的提升作用。Matrigel成管实验表明Exo组CCEC的成管能力较高糖组的显著提高(15.3±3.2 vs 6.3±2.1,P<0.05),同样加入3-MA后同样可以逆转这一作用。海绵体测压结果显示Exo组大鼠的ICPmax和ICPmax/MAP水平均较DED组显著升高[(86.6±12.6)mmHg vs(37.9±10.9)mmHg,89.3±14.1 vs 41.7±11.5,P<0.05]。Western印迹结果显示Exo组大鼠的海绵体内CD31、Beclin1和LC3-I/II的蛋白含量显著高于DED组大鼠(P<0.05)。透射电镜结果表明,Exo组大鼠阴茎海绵窦内皮细胞的自噬体数量显著多于DED组(3.7±0.6 vs 1.0±1.0,P<0.05)。结论:USC-Exo可以通过提高大鼠海绵窦内皮细胞的自噬水平,显著改善DED大鼠的海绵窦内皮功能和勃起功能。
